本发明涉及饲料添加剂技术领域，尤其是涉及一种硒化多糖免疫增强剂制备方法。
背景技术：
近年来，随着我国养殖业的迅速发展，集约化程度的提高，国内外畜禽贸易的日益频繁，疾病传播机会大大增加，许多疾病特别是传染病普遍流行。由于免疫抑制性疾病危害加大、亚临床型感染病例增加、疾病痛原变异加快、多种类型病原混合感染、各种应激因素影响，造成畜禽机体免疫功能紊乱，抗病力下降，疫苗免疫效果不佳，容易遭受病原侵袭，发病率增高，给我国养殖业造成的损失日趋严重。因而通过各种免疫增强剂调节动物机体免疫功能，增强动物免疫应答能力，从而提高疫苗对动物的保护率、延长动物体液中高滴度抗体效价水平的持续时间，对动物疫病的预防与控制具有重要意义。
目前在禽畜养殖行业中抗生素的长期使用所导致的药物残留、耐药性等问题逐渐被业内人士所认知。中草药作为中国传统医学的重要组成部分，具有原料来源广泛、种类繁多、作用综合、安全性高、成本低廉、毒副作用小等诸多优点，我国有12000多种中草药资源，但只有10％左右为常用。因此开发以中草药为主要原料的动物免疫增强剂具有很好的市场前景及重大的现实意义。
例如，申请号为200510049847X的中国专利一种动物免疫增强剂，该增强剂的配方组分(按重量计)为：白术10～20份、山楂20～30份、麦芽10～20份和苍术5～10份。该增强剂由多种中草药直接混合而成，禽畜的吸收率低，且在饲料中添加量少，不宜混合均匀，因而导致禽畜采食的量不易准确控制，导致实际应用效果不佳。
技术实现要素：
本发明是为了解决现有技术的动物免疫增强剂制备方法所存在的上述问题，提供了一种工艺步骤简单，易实施的硒化多糖免疫增强剂制备方法，制得的硒化多糖免疫增强剂易于吸收，见效快，安全性高，能增强禽畜机体免疫能力，减少发病率。
为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
本发明的一种硒化多糖免疫增强剂制备方法，具体步骤为：
(1)制备玉米须水提物：先将玉米须超微粉碎，加蒸馏水回流提取，过滤；合并滤液、减压浓缩，并采用浓缩液10～12倍质量的90％乙醇静置过夜，得沉淀物；2～3次水提醇沉后，沉淀用无水乙醇洗涤，真空冷冻干燥后得玉米须水提物；
(2)制备蜂胶水提物：在蜂胶中加入3～5倍量的95％食用乙醇，充分搅拌使其溶解后，将上述蜂胶醇溶液边搅拌边倒入80～85℃热水中，使成40～50％乙醇终浓度的蜂胶醇溶液，搅拌10～15min后，冷却至室温，过滤，得第一滤液，将滤渣按上述步骤重新提取，得第二滤液，将第一滤液和第二滤液合并后回收乙醇，最后于70～80℃浓缩至相对密度为1.02～1.03后，冷冻干燥即得蜂胶水提物。
(3)复配：按1～5份硒化低聚氨基多糖，5～10份蜂胶水提物，5～10份玉米须水提物，1～3份绞股蓝水提物，3～5份茵陈水提物，0.5～1份何首乌水提物，0.01～0.03份大蒜素，0.1～0.5份精氨酸的重量份配比称取各组分后，将玉米须水提物、绞股蓝水提物、茵陈水提物及何首乌水提物混合，烘干至恒重，加入剩余组分混合均匀即可。本发明中的硒化多糖免疫增强剂采用多种中药提取物，并辅以硒化低聚氨基多糖、蜂胶水提物及精氨酸复配而成，工艺步骤简单，可操作性强，其中硒化低聚氨基多糖为一种多糖活性物质，能增强机体免疫细胞的活性；玉米须水提物中含有玉米须多糖等组分，具有调节猪体液免疫功能，从而能增强猪的免疫功能和抗病能力，减少发病率；蜂胶水提物具有提高动物特异性和非特异性免疫功能的作用；绞股蓝水提物、茵陈水提物、何首乌水提物共同作用，能增加动物血清中总蛋白、白蛋白的含量，促进免疫球蛋的生成；精氨酸可促进肌肉内蛋白质合成，增强机体的免疫力，同时精氨酸具促进吸收作用，有利于本发明中各组分充分发挥功效；将玉米须水提物、绞股蓝水提物、茵陈水提物及何首乌水提物混合，烘干至恒重，流动性与混合均匀性好。本发明制得的硒化多糖免疫增强剂，易于吸收，见效快，安全性高，能增强禽畜机体免疫能力，减少发病率。
作为优选，步骤(1)中，玉米须冷冻干燥后保持中心温度为-20～-18℃再进行超微粉碎。玉米须较软，易纠缠在一起不易粉碎，且超微粉碎时会使物料温度升高造成有效成分损失，因此本发明中将玉米须冷冻干燥后保持中心温度为-20～-18℃进行超微粉碎，一是冷冻干燥后玉米须变硬，更易粉碎，二是温度较低，粉碎时温度升高不会造成其中有效成分的损失，同时对提取工艺进行了优化，以兼顾提效效率与提取效果。
作为优选，步骤(1)中，玉米须与蒸馏水的料水比为1g：40～50ml，加蒸馏水回流提取1～3次。
因此，本发明具有如下有益效果：
(1)将多种中药提取物、硒化低聚氨基多糖、蜂胶水提物及精氨酸复配即可得到硒化多糖免疫增强剂，工艺步骤简单，可操作性强，对设备要求低，得到的硒化多糖免疫增强剂易于吸收，见效快，安全性高，能增强禽畜机体免疫能力，减少发病率；
(2)提供了玉米须水提物制备方法，将玉米须冷冻干燥后保持中心温度为-20～-18℃进行超微粉碎，有效解决了玉米须较软，易纠缠在一起不易粉碎，且超微粉碎时会使物料温度升高造成有效成分损失的问题。
具体实施方式
下面通过具体实施方式对本发明做进一步的描述。
实施例1
(1)制备玉米须水提物：先将玉米须冷冻干燥并保持中心温度为-18℃后超微粉碎，按料水比为1g：50ml，加蒸馏水回流提取3次，过滤；合并滤液、减压浓缩，并采用浓缩液12倍质量的90％乙醇静置过夜，得沉淀物；3次水提醇沉后，沉淀用无水乙醇洗涤，真空冷冻干燥后得玉米须水提物；
(2)制备蜂胶水提物：在蜂胶中加入5倍量的95％食用乙醇，充分搅拌使其溶解后，将上述蜂胶醇溶液边搅拌边倒入85℃热水中，使成50％乙醇终浓度的蜂胶醇溶液，搅拌15min后，冷却至室温，过滤，得第一滤液，将滤渣按上述步骤重新提取，得第二滤液，将第一滤液和第二滤液合并后回收乙醇，最后于80℃浓缩至相对密度为1.03后，冷冻干燥即得蜂胶水提物。
(3)复配：按5kg硒化低聚氨基多糖，10kg蜂胶水提物，10kg玉米须水提物，3kg绞股蓝水提物，5kg茵陈水提物，1kg何首乌水提物，0.03kg大蒜素，0.5kg精氨酸的重量配比称取各组分后，将玉米须水提物、绞股蓝水提物、茵陈水提物及何首乌水提物混合后，烘干至恒重，加入剩余组分混合均匀即可。
实施例2
(1)制备玉米须水提物：先将玉米须冷冻干燥并保持中心温度为-19℃后超微粉碎，按料水比为1g：45ml，加蒸馏水回流提取2次，过滤；合并滤液、减压浓缩，并采用浓缩液11倍质量的90％乙醇静置过夜，得沉淀物；2次水提醇沉后，沉淀用无水乙醇洗涤，真空冷冻干燥后得玉米须水提物；
(2)制备蜂胶水提物：在蜂胶中加入4倍量的95％食用乙醇，充分搅拌使其溶解后，将上述蜂胶醇溶液边搅拌边倒入82℃热水中，使成45％乙醇终浓度的蜂胶醇溶液，搅拌12min后，冷却至室温，过滤，得第一滤液，将滤渣按上述步骤重新提取，得第二滤液，将第一滤液和第二滤液合并后回收乙醇，最后于75℃浓缩至相对密度为1.025后，冷冻干燥即得蜂胶水提物。
(3)复配：按3kg硒化低聚氨基多糖，7kg蜂胶水提物，8kg玉米须水提物，2kg绞股蓝水提物，4kg茵陈水提物，0.7kg何首乌水提物，0.02kg大蒜素，0.3kg精氨酸的重量配比称取各组分后，将玉米须水提物、绞股蓝水提物、茵陈水提物及何首乌水提物混合后，烘干至恒重，加入剩余组分混合均匀即可。
实施例3
(1)制备玉米须水提物：先将玉米须冷冻干燥并保持中心温度为-20℃后超微粉碎，按料水比为1g：40ml，加蒸馏水回流提取1次，过滤；合并滤液、减压浓缩，并采用浓缩液10倍质量的90％乙醇静置过夜，得沉淀物；2～3次水提醇沉后，沉淀用无水乙醇洗涤，真空冷冻干燥后得玉米须水提物；
(2)制备蜂胶水提物：在蜂胶中加入3倍量的95％食用乙醇，充分搅拌使其溶解后，将上述蜂胶醇溶液边搅拌边倒入80℃热水中，使成40％乙醇终浓度的蜂胶醇溶液，搅拌10min后，冷却至室温，过滤，得第一滤液，将滤渣按上述步骤重新提取，得第二滤液，将第一滤液和第二滤液合并后回收乙醇，最后于70℃浓缩至相对密度为1.02后，冷冻干燥即得蜂胶水提物。
(3)复配：按1kg硒化低聚氨基多糖，5kg蜂胶水提物，5kg玉米须水提物，1kg绞股蓝水提物，3kg茵陈水提物，0.5kg何首乌水提物，0.01kg大蒜素，0.1kg精氨酸的重量配比称取各组分后，将玉米须水提物、绞股蓝水提物、茵陈水提物及何首乌水提物混合后，烘干至恒重，加入剩余组分混合均匀即可。
下面通过动物试验以验证本发明的技术效果：
试验猪：选择胎次、体重相近，血缘相同的“杜长大”三元杂交商品代仔猪80头作为试验动物，按随机区组设计分为4个组，每组20头，其中3个试验组、1个对照组。
试验方法：对照组饲料中不添加动物硒化多糖免疫增强剂；3组试验组的饲料中分别添加为饲料质量1.5％的由实施例1～3中得到的动物硒化多糖免疫增强剂，添加方式为将动物硒化多糖免疫增强剂溶于水中后均匀喷施于饲料表面拌料混合，试验组连续投喂7天。投喂第1天，试验组与对照组均进行猪瘟兔化弱毒苗接种，每头仔猪2头份。试验期间试验组和对照组饲养管理条件基本一致。
于疫苗接种前1天和疫苗接种后的15天、45天、75天分别由试验组和对照组猪只耳静脉采血5ml作成血涂片，供检测T淋巴细胞用。T淋巴细胞计数方法为：应用酸性α-醋酸萘酯酶(ANAE)染色法，检查血涂片中T淋巴细胞占淋巴细胞总数的百分率。检测结果如表1所示：
表1 T淋巴细胞的百分率(n＝20)(％)
从表1可以看出，在接种猪瘟疫苗后15天，试验组的猪只外周血液中T淋巴细胞的百分率比对照组显著增高(p＜0.05)，说明本发明制得的动物硒化多糖免疫增强剂具有促进T淋巴细胞增殖和加强T细胞免疫功能作用，能有效提高动物机体的细胞免疫水平。
以上所述的实施例只是本发明的一种较佳的方案，并非对本发明作任何形式上的限制，在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。