一种兽用冻干布氏菌病活疫苗的浓缩工艺及制备工艺的制作方法

文档序号:12075967阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种兽用冻干布氏菌病活疫苗的浓缩工艺,其特征在于,用中空纤维超滤系统浓缩发酵完成的菌液,所述中空纤维超滤系统中包含若干支中空纤维柱,其中中空纤维的孔径大于750KD,超滤温度为2~8℃,超滤时间不超过6.0h,浓缩倍数不小于5倍(尤其是浓缩5-15倍时,浓缩后得到的浓缩菌液中活菌损失率不超过4.0%;其中浓缩5倍时,浓缩后得到的浓缩菌液中活菌损失率不超过2.0%;浓缩10倍时,浓缩后得到的浓缩菌液中活菌损失率不超过3.6%;浓缩15倍时,浓缩后得到的浓缩菌液中活菌损失率不超过4.0%)。

2.根据权利要求1所述浓缩工艺,其特征在于,所述中空纤维的孔径为0.1μm,中空纤维柱的整体膜面积不小于10m2,超滤时间不超过3.0h。

3.根据权利要求2所述浓缩工艺,其特征在于,所述中空纤维柱的膜面积为2.5-5m2/支,浓缩倍数达到20倍以上(具体可为20-25倍),浓缩后得到的浓缩菌液中活菌损失率不超过4.5%。

4.根据权利要求1-3任一所述浓缩工艺,其特征在于,所述中空纤维柱为2-4支(优选3支),膜面积为4.4m2/支,所述浓缩菌液中活菌数为(2-10)×1011CFU/mL。

5.根据权利要求1-4任一所述浓缩工艺,其特征在于,具体为:先用生理盐水冲洗中空纤维超滤系统至中性,再将发酵完成的菌液注入中空纤维超滤系统中进行浓缩,浓缩至所需的体积,即得到浓缩菌液。

6.一种兽用冻干布氏菌病活疫苗的制备工艺,包括培养菌种、发酵、浓缩、配苗、冻干,其特征在于,所述浓缩为权利要求1-5任一所述浓缩工艺。

7.根据权利要求6所述制备工艺,其特征在于,具体包括以下步骤:

一、培养菌种

(1)、开菌种静止培养

取菌种,用1wt%无菌蛋白胨水溶解后接种于大管胰蛋白胨大豆琼脂斜面培养基上,37℃恒温静止贴壁培养72~120h;所述1wt%无菌蛋白胨水优选由1g蛋白胨、0.5g氯化钠加入100g水中溶解后灭菌所得;

(2)、菌种扩繁

培养完毕后,用1wt%无菌蛋白胨水洗下大管胰蛋白胨大豆琼脂斜面培养基上的菌苔得到菌悬液,转移至扁瓶胰蛋白胨大豆琼脂培养基上进行扩增繁殖,37℃恒温静止贴壁培养72~120h(优选31~36h),扩繁至活菌浓度≥4×109CFU/ml,菌悬液不少于300mL时结束扩繁;

二、发酵

1)、50L种子罐通气培养

用1wt%无菌蛋白胨水洗下扁瓶胰蛋白胨大豆琼脂培养基上的菌苔,转移至盛放有500mL液体培养液的转移瓶内,混匀得到菌种液,再将转移瓶内的菌种液接种至50L种子罐内,设定细菌发酵温度:37±0.5℃,pH:7.20±0.1,溶氧:60%-80%,转速:100-350rpm,发酵时长为36-55h,得到初步菌种液;

2)、1500L发酵罐通气培养

将步骤1)得到的初步菌种液加入800~900L的液体培养液中,混合均匀后在1500L发酵罐中通气培养,设定细菌发酵温度:37±0.5℃,pH:7.20±0.1,溶氧:60%-80%,转速:100-350rpm,发酵时长为36-55h,得到菌液;

三、浓缩

将步骤2)中得到的菌液注入中空纤维超滤系统中浓缩至所需的体积,所述中空纤维超滤系统中有2-4支中空纤维柱,膜面积为2.5-5m2/支,中空纤维的孔径为300KD-700KD或0.1μm;超滤温度为2~8℃,超滤时间不超过3h,即得到浓缩菌液;最好先用生理盐水冲洗中空纤维超滤系统至中性,再将发酵完成的菌液注入中空纤维超滤系统;

四、冻干

向步骤三得到的浓缩菌液中加入冻干保护剂,定量分装后迅速进行冷冻真空干燥,得到所述兽用冻干布氏菌病活疫苗。

8.根据权利要求6或7所述制备工艺,其特征在于,所述兽用冻干布氏菌病活疫苗中活菌数为(1.2-1.6)×1010CFU/mL,活菌损失率不超过4.5%。

9.一种兽用冻干布氏菌病活疫苗,其特征在于,制备所述兽用冻干布氏菌病活疫时经权利要求1-5任一所述浓缩工艺对发酵后的菌液进行浓缩。

10.一种兽用冻干布氏菌病活疫苗,其特征在于,是由权利要求6-8任一所述制备工艺得到的。

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