本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种蟾蜍草中有效成分的提取方法及其应用。
背景技术：
蟾蜍草是一种直立草本，高15～19cm，多分枝。是一种野生的、比较稀少的中草药。它可以有效预防和治疗感冒、慢性肠炎等疾病，对治疗咳嗽及支气管炎有显著的效果。蟾蜍草与二栖爬行动物蟾蜍分泌物蟾酥及含有此类物质的蟾皮、蟾衣、干蟾在一些疾病的防治方面，有着异曲同工之妙。
蟾蜍草中的有效成分主要是高车前甙，高车前甙目前主要应用于治疗人的支气管炎，其毒性较小。但是目前针对蟾蜍草中有效成分的提取方法研究较少，急需一种简单易行且可以获得较高含量高车前甙的提取方法。
母猪在怀孕时，经常会出现低烧、食欲不振等症状，此时若对其用普通药物治疗，很容易对其肚内的胎儿造成伤害，严重时可造成流产死胎现象的发生。因此急需一种科学的用药方法，来解决妊娠母猪低烧的症状。
技术实现要素：
为了解决上述问题，本发明提供了一种蟾蜍草中有效成分的提取方法及其在治疗母猪低烧方面的应用。
本发明是通过以下技术方案实现的。
一种蟾蜍草中有效成分的提取方法，提取包括以下步骤：
（1）烘干研碎：取生长成熟的蟾蜍草全株，放入烘干机中烘干，烘干温度设定为50-60℃，烘干时间为30-40min，将烘干后的蟾蜍草粉碎至80-100目；
（2）粗提：将粉碎后的蟾蜍草放入容器中，并向其中加入10-15倍质量重的蒸馏水，将蒸馏水加热到35-37℃，然后向其中加入混合酶制剂，搅拌30-50min后过滤得滤渣，再将滤渣放入15-20倍质量重的蒸馏水中，并向其中加入体积分数为15%的硫酸溶液，调节溶液的pH至2.8-3.0，然后将溶液加热至100℃，浸提3-4小时后冷却降温，浸提的过程中，持续用超声处理，然后将得到的混合物过滤，得到的滤液放入3-5℃的环境里降温，降温处理2-3小时后，再次进行过滤，得到的高车前甙粗品；采用混合酶制剂处理粉碎后的蟾蜍草，可以将蟾蜍草根茎中的脂质和纤维素分解为小分子的物质，减少这些大分子物质对蟾蜍草中有效成分的吸附作用，从而在浸提时，能将蟾蜍草中的有效成分快速彻底的提取出来；用浓硫酸将溶液的pH调节至2.8-3.0，并用超声处理，有利于高车前甙从蟾蜍草中析出，提高产品的收率；
（3）精炼：将步骤（2）所得的粗品溶解95%的乙醇溶液中，向溶液中加入浓度为20-25%的氨水，调节溶液的pH至8.0-8.5，然后用旋转蒸发仪减压浓缩，1.0-1.5小时后，将得到的晶体物质再次溶解在100℃的蒸馏水中，然后将溶液放入1-3℃的环境下降温，重结晶得到高车前甙精品；此时将溶液的pH调节至弱碱性，能增加高车前甙在浓缩时的稳定性，防止在浓缩时随着乙醇溶液一起散发出去，其中旋转蒸发仪购于上海鹏鸣生物科技发展有限公司，规格为50L；
将从蟾蜍草中提取出来的高车前甙作为唯一有效成分制成片剂，其中每粒片剂所含高车前甙2-3g，在妊娠母猪出现低烧时使用，使用方法如下：在妊娠母猪出现低烧后，将1-2粒片剂放入母猪饲料中，每天早晚各给药一次，连续给药两天；高车前甙能有效的治疗妊娠母猪的低烧症状，并且对母猪肚内的胎儿不造成伤害，一般用药两天，母猪低烧即可退去。
上述步骤（2）中所述的混合酶制剂由以下重量份的组分组成：纤维素酶10-15份、脂肪酶8-10份。
有益效果：本发明提供的一种蟾蜍草中有效成分的提取方法及其应用，提取的工艺简单，用料环保，高车前甙的收率和纯度高；将高车前甙制成片剂，用于治疗妊娠母猪的低烧，不会对母猪体内的胎儿造成任何影响，而且药效快，能使低烧母猪快速退烧。
具体实施方法
实施例1
一种蟾蜍草中有效成分的提取方法，提取包括以下步骤：
（1）烘干研碎：取生长成熟的蟾蜍草全株，放入烘干机中烘干，烘干温度设定为50℃，烘干时间为30min，将烘干后的蟾蜍草粉碎至80目；
（2）粗提：将粉碎后的蟾蜍草放入容器中，并向其中加入10倍质量重的蒸馏水，将蒸馏水加热到35℃，然后向其中加入混合酶制剂，搅拌30min后过滤得滤渣，再将滤渣放入15倍质量重的蒸馏水中，并向其中加入体积分数为15%的硫酸溶液，调节溶液的pH至2.8，然后将溶液加热至100℃，浸提3小时后冷却降温，浸提的过程中，持续用超声处理，然后将得到的混合物过滤，得到的滤液放入3℃的环境里降温，降温处理2小时后，再次进行过滤，得到的高车前甙粗品；
（3）精炼：将步骤（2）所得的粗品溶解95%的乙醇溶液中，向溶液中加入浓度为20%的氨水，调节溶液的pH至8.0，然后用旋转蒸发仪减压浓缩，1.0小时后，将得到的晶体物质再次溶解在100℃的蒸馏水中，然后将溶液放入1℃的环境下降温，重结晶得到高车前甙精品。
将从蟾蜍草中提取出来的高车前甙作为唯一有效成分制成片剂，其中每粒片剂所含高车前甙2-3g，在妊娠母猪出现低烧时使用，使用方法如下：在妊娠母猪出现低烧后，将1粒片剂放入母猪饲料中，每天早晚各给药一次，连续给药两天。
步骤（2）中所述的混合酶制剂由以下重量份的组分组成：纤维素酶10份、脂肪酶8份。
本实施例中，高车前甙的收率为87.4%，纯度为99.3%。
实施例2
一种蟾蜍草中有效成分的提取方法，提取包括以下步骤：
（1）烘干研碎：取生长成熟的蟾蜍草全株，放入烘干机中烘干，烘干温度设定为55℃，烘干时间为35min，将烘干后的蟾蜍草粉碎至90目；
（2）粗提：将粉碎后的蟾蜍草放入容器中，并向其中加入13倍质量重的蒸馏水，将蒸馏水加热到36℃，然后向其中加入混合酶制剂，搅拌40min后过滤得滤渣，再将滤渣放入17倍质量重的蒸馏水中，并向其中加入体积分数为15%的硫酸溶液，调节溶液的pH至2.8-3.0，然后将溶液加热至100℃，浸提3.5小时后冷却降温，浸提的过程中，持续用超声处理，然后将得到的混合物过滤，得到的滤液放入4℃的环境里降温，降温处理2.5小时后，再次进行过滤，得到的高车前甙粗品；
（3）精炼：将步骤（2）所得的粗品溶解95%的乙醇溶液中，向溶液中加入浓度为22%的氨水，调节溶液的pH至8.4，然后用旋转蒸发仪减压浓缩，1.3小时后，将得到的晶体物质再次溶解在100℃的蒸馏水中，然后将溶液放入2℃的环境下降温，重结晶得到高车前甙精品。
将从蟾蜍草中提取出来的高车前甙作为唯一有效成分制成片剂，其中每粒片剂所含高车前甙2.5g，在妊娠母猪出现低烧时使用，使用方法如下：在妊娠母猪出现低烧后，将1粒片剂放入母猪饲料中，每天早晚各给药一次，连续给药两天。
步骤（2）中所述的混合酶制剂由以下重量份的组分组成：纤维素酶13份、脂肪酶9份。
本实施例中，高车前甙的收率为88.1%，纯度为99.4%。
实施例3
一种蟾蜍草中有效成分的提取方法，提取包括以下步骤：
（1）烘干研碎：取生长成熟的蟾蜍草全株，放入烘干机中烘干，烘干温度设定为60℃，烘干时间为40min，将烘干后的蟾蜍草粉碎至100目；
（2）粗提：将粉碎后的蟾蜍草放入容器中，并向其中加入15倍质量重的蒸馏水，将蒸馏水加热到37℃，然后向其中加入混合酶制剂，搅拌50min后过滤得滤渣，再将滤渣放入20倍质量重的蒸馏水中，并向其中加入体积分数为15%的硫酸溶液，调节溶液的pH至3.0，然后将溶液加热至100℃，浸提4小时后冷却降温，浸提的过程中，持续用超声处理，然后将得到的混合物过滤，得到的滤液放入5℃的环境里降温，降温处理3小时后，再次进行过滤，得到的高车前甙粗品；
（3）精炼：将步骤（2）所得的粗品溶解95%的乙醇溶液中，向溶液中加入浓度为25%的氨水，调节溶液的pH至8.5，然后用旋转蒸发仪减压浓缩，1.5小时后，将得到的晶体物质再次溶解在100℃的蒸馏水中，然后将溶液放入3℃的环境下降温，重结晶得到高车前甙精品。
将从蟾蜍草中提取出来的高车前甙作为唯一有效成分制成片剂，其中每粒片剂所含高车前甙3g，在妊娠母猪出现低烧时使用，使用方法如下：在妊娠母猪出现低烧后，将2粒片剂放入母猪饲料中，每天早晚各给药一次，连续给药两天。
步骤（2）中所述的混合酶制剂由以下重量份的组分组成：纤维素酶15份、脂肪酶10份。
本实施例中，高车前甙的收率为88.1%，纯度为99.6%。
试验：
采用实施例1的方式，在安徽省肥西县养殖场对妊娠母猪进行试验，发现对低烧的妊娠母猪，本产品治疗疗效显著，妊娠母猪在用药后第二天即可完全退烧，并对母猪的肚内的胎儿不产生任何影响，并且不影响母猪的生育能力。