制备富血小板血浆PRP的方法及该富血小板血浆的用途与流程

文档序号:12336829阅读:来源:国知局

技术特征:

1.从血液中提取富血小板血浆的方法,其包括以下步骤:

(a)使采集的全血置于含有抗凝剂的容器中,使血液和抗凝剂充分混匀;

(b)使混有抗凝剂的血液置于离心管中,进行第一次离心,使血液基本上分成三层;

(c)将最上层和大部分的中间层抽出并转移到新的离心管中,混合均匀,进行第二次离心;

(d)弃掉离心管上层的血浆,利用剩余的血浆使沉淀的血小板重新悬浮,即得富血小板血浆。

2.根据权利要求1的方法,其特征在于以下任一项或多项:

步骤(a)中所述全血是新鲜的全血;

步骤(a)中所述全血是受试个体例如患者或者健康志愿者的全血;

步骤(a)中抗凝剂选自乙二胺四乙酸及其盐(例如乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸二钾、乙二胺四乙酸钙钠)、枸橼酸钠、枸橼酸葡萄糖溶液、或其组合;

乙二胺四乙酸或其盐的典型用量是每0.5~1.5mg用于1ml血液抗凝,例如每0.75~1.25mg用于1ml血液抗凝,可以是干粉直接涂在抗凝管内壁,亦可以是配制成适宜浓度的溶液(例如浓度为1~2%)涂在抗凝管内壁待干燥后使用;

枸橼酸钠的典型用量是每3~5mg用于1ml血液抗凝,可以是干粉直接涂在抗凝管内壁,亦可以是配制成适宜浓度的溶液(例如浓度为3~5%)涂在抗凝管内壁待干燥后使用;

枸橼酸葡萄糖溶液的一个典型配方包含:枸橼酸0.48g、枸橼酸钠1.32g、葡萄糖1.47g、加水至100ml,每1ml血液抗凝通常使用该枸橼酸葡萄糖溶液0.15~0.2ml。

3.根据权利要求1的方法,其特征在于以下任一项或多项:

步骤(a)中所述容器可以是离心管或是采血袋等。如果是离心管并且该离心管容量适合直接离心,则所述步骤(b)中不需要另置于离心管中,而可以直接进行离心;

步骤(a)中还包括在使血液和抗凝剂混均后取适量(例如少于500ul,例如约100ul)用于测定其中血液中血小板的数量,以便用于后续的过程比照、监控;

步骤(b)中经第一次离心后是达到使血液基本上分成三层的程度;

最上层是含血小板的血浆层,中间一层是血块黄层(Buffy Coat层,其中含有血小板和白细胞),最底层的是红细胞层;

步骤(b)中离心的转速为2000rpm~3000rpm,例如2200rpm~2800rpm,例如2300rpm~2500rpm,例如约2400rpm;

步骤(b)中离心的时间为1-10min,例如2-8min,例如3-5min,例如约4min;

步骤(b)中离心的转速为2300rpm~2500rpm,时间为3-5min;

步骤(b)中离心的转速为2400rpm,时间为4min。

4.根据权利要求1的方法,其特征在于以下任一项或多项:

步骤(c)中,所述大部分的中间层是指尽量将中间层全部吸出但避免抽取红细胞;

步骤(c)中离心的转速为1000rpm~2000rpm,例如1200rpm~1800rpm,例如1400rpm~1600rpm,例如约1500rpm;

步骤(c)中离心的时间为10-30min,例如15-25min,例如18-22min,例如约20min;

步骤(c)中离心的转速为1400rpm~1600rpm,时间为18-22min;

步骤(c)中离心的转速为1500rpm,时间为20min;

步骤(c)中所得上层和大部分中间层经混匀后,其中血小板的浓度是分离前全血中血小板浓度的1-5倍,例如1.5~4倍,例如2~3倍;

步骤(c)中所得上层和大部分中间层经混匀后,其中血小板的浓度是分离前全血中血小板浓度的2.5-3.5倍,例如2.6~3.1倍;

步骤(c)中还包括在使抽取的最上层和中间层混合均匀后,取适量(例如少于500ul,例如约100ul)用于测定其中的血小板的数量,以便用于后续的过程比照、监控。

5.根据权利要求1的方法,其特征在于以下任一项或多项:

步骤(d)中,所述弃掉离心管上层的血浆是指弃掉离心管上层至少2/4的血浆;在步骤(d)中,所述弃掉离心管上层的血浆是指弃掉离心管上层至少3/4的血浆;

步骤(d)中,弃掉离心管上层的血浆后,可以利用下部剩下的(约2/4,或者更优选的约1/4)血浆重新使沉淀下来的血小板悬浮;

步骤(d)所得富血小板血浆(PRP)中血小板的浓度是分离前全血中血小板浓度的5-10倍,例如6~8倍,例如6~7倍,例如6.1~6.8倍;

步骤(d)所得富血小板血浆(PRP)中血小板的浓度是分离前全血中血小板浓度的8-10倍,例如8.8~9.2倍;

步骤(d)中还包括在获得富血小板血浆(PRP)后,取适量(例如少于500ul,例如约100ul)用于测定其中的血小板的数量;

在所述抗凝剂中还补充添加了氯化镁和酒石酸钾钠两种试剂,以其用于每1ml血液抗凝计两种试剂用量分别是50μg和100μg;

所述两种试剂是在配制抗凝剂时添加到抗凝剂溶液中的。

6.一种富血小板血浆,其中包含1~3×109/ml浓度的血小板;例如其中包含1.5~2.5×109/ml浓度 的血小板。

7.根据权利要求6的富血小板血浆,其基本上是由权利要求1-6任一项所述的方法获得的;或者其如本发明说明书第二方面任一实施方案所述。

8.富血小板血浆PRP在制备健康产品中的用途,所述的健康产品应用于骨科、口腔科、颌面外科、运动医学以及美容医学。

9.根据权利要求8的用途,其中所述富血小板血浆中包含1~3×109/ml浓度的血小板;例如所述富血小板血浆中包含1.5~2.5×109/ml浓度的血小板。

10.根据权利要求8的用途,所述富血小板血浆基本上是由权利要求1-5任一项所述的方法获得的;或者其如本发明说明书第三方面任一实施方案所述。

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