本发明涉及小动物活体成像中，将下颌下腺固定后在双光子激光扫描显微镜下观察荧光示踪分子经旁细胞途径流动性的装置。由于下颌下腺离心脏和肺脏距离较近，因此容易受到心跳和呼吸搏动的波及，焦平面一直在变动，无法得到连续清晰的动态图片。本发明的主要目的即是寻找一种简单易行且可根据腺体大小进行调整的固定装置，使得活体动物的下颌下腺固定较为稳固，从而避免焦平面变动对实验连贯性和实验条件均一性的影响。
背景技术：
旁细胞途径是下颌下腺分泌唾液的重要途径，以往关于旁细胞途径通透性的检测仅仅是在培养的细胞系和离体孵育的组织块上进行，但这两种均与活体动物的唾液分泌过程有较大差异，如能进行活体动态观察旁细胞途径荧光示踪分子的流动性可更为准确和真实地反应旁细胞途径的开放在调控唾液分泌中的作用。此外，小动物活体下颌下腺成像不仅可以实时定量观察下颌下腺腺泡细胞和血管内皮细胞各自的旁细胞途径通透性的开放程度，还可用于荧光标记的炎症细胞进入腺体的动态追踪、过表达带有荧光标签的蛋白在药物作用下的转位情况等实验。下颌下腺位于颈部皮下，位置表浅，将动物俯卧式置于倒置显微镜下可观察到下颌下腺腺泡、导管以及间质结构。然而，采用俯卧位在进行动态拍摄时，由于下颌下腺距离心脏和肺脏均较近，即使动物处于麻醉状态下，其快速的心跳和呼吸依然存在，因此可导致动态成像时的焦平面一直在不停地变动，无法得到清晰、准确和具有可比性的图像。对这一困难的解决方案国内尚无报道，国外有报道制作一个细长且有一定硬度的尺子，将一端压在腺体上，另一端用胶带粘在显微镜台面上。这种方法的不足之处在于当显微镜的载物台不是很大或者不是一个水平面时，均可导致腺体固定的不稳定或不能紧密贴合在用于观察的共聚焦小皿玻璃片上，这将直接影响动态观察和记录的效果。
技术实现要素：
本发明采用更易置于下颌下腺组织上并可以调整重量的固定装置。圆形螺丝状装置垂直且平整地压在小动物一侧下颌下腺组织上，根据下颌下腺大小调节金属垫片的数量，以保证镜下腺体内血管流动的通畅以及焦平面的稳定，从而简便、灵活可调控地获得可连续记录的焦平面稳定的完整视频图像。
技术方案
本实用新型解决其技术问题所采用的技术方案是：制备直径与小动物腺体匹配的螺丝状装置，如体重为20g的8周龄C57/BL6雄性小鼠，下颌下腺重量约为0.04g，可制备直径为8mm螺丝状装置(重量为1.9g)，螺丝状圆底朝下，其上套几个与螺丝底大小一样的圆形金属垫片(单个重量为0.6g)，以保证该装置既具有一定的重量可以稳定地固定住下颌下腺组织，又可以通过调整金属垫片的数量来选择与不同周龄或不同大小的小动物腺体所匹配的固定装置。
附图说明
图1上排：显微镜载物台上小鼠下颌下腺固定装置的示意图
1.载物台(带加热台)，2.胶带，3.垫片，4.固定装置，5.螺丝状装置，6.滤纸，7.下颌下腺，8.共聚焦小皿，9.玻璃片。
下排：是本发明装置侧面放大图，其中：
a.螺丝状装置外径长8mm；b.垫片外径长8mm。
具体实施方式
选取8-12周龄的C57/BL6小鼠，饲养于北京大学医学部实验动物部，自由进食和饮水，12小时/12小时日照节律。经尾静脉注射不同分子量大小的荧光示踪分子FITC-右旋糖酐(1.5mg/kg)后腹腔注射0.4g/kg水合氯醛麻醉小鼠，切开颈部皮肤分离出一侧下颌下腺。小鼠侧卧位置于37℃加热台上，将下颌下腺拉出置于共聚焦小皿的玻璃片中心后在腺体上方盖一层去离子水润湿的滤纸，此时将组装好的螺丝状装置和金属垫片垂直放在滤纸上方，再使用胶带以螺丝头为中心进行十字交叉式粘在台面上，调节焦平面，镜下对焦即可拍摄动态视频，观察正常状态下荧光示踪分子的流动性，并进一步进行药物处理，记录荧光分子从血管内向腺体基底侧以及顺着相邻腺泡细胞间的旁细胞途径流入腺泡腔的情况。