本发明涉及生物制剂，特别涉及含有水蛭提取物的药物组合物及其制备方法、应用。
背景技术：
：中风(状语名：麻邦)是指以突然昏仆、偏瘫(半身不遂)、神志不清、口舌歪斜、语言不利，或不经昏仆而见痿癖不遂为主症的一种疾病。壮医认为，其病因主要是过食肥甘厚味，热毒、火毒、湿毒内生，脏腑功能失调，体内阴盛阳衰，或阳盛阴衰，三道两路不通，三气不能同步，巧坞(大脑)功能失调所致。属中医学中风、西医的脑梗塞、脑栓塞、脑血栓形成等范畴。蚂蝗，又称水蛭，为中国药典收载的药材品种，功能破血，逐瘀，通经，用于癥瘕痞块，血瘀经闭，跌扑损伤。水蛭始载于《神农本草经》，“主逐恶血，瘀血，月闭，破血瘕积聚，无子，利水道”。由于近年来对活血化瘀治疗各种疑难病的不断深入研究，水蛭的药用也倍受青睐。水蛭作为传统中药，在心脑血管临床应用很广泛，在入药的方式上通常采用原药材粉碎后直接服用，或水提或醇提或水提醇沉后服用，其所采取的提取方法一般都比较传统，药用疗效也很有限。技术实现要素：本发明要解决的技术问题是提供一种组合物，此组合物在壮医学上具有通调龙路火路、通血栓、补气通络的作用，在中医学上具有活血化瘀，益气通络的作用，且可以应用于药物改善微循环，以及治疗血栓、中风病和高血脂，本发明还提供了组合物的制备方法，采用此制备方法对金边蚂蟥、土鳖虫、地龙、黄精和党参进行提取，可以最大限度地提取有效成分，得到的组合物应用于药物时疗效非常好。为了解决上述技术问题，本发明通过如下技术方案实现：本发明第一方面提供了一种组合物，其至少是以金边蚂蟥、土鳖虫、地龙、黄精和党参为原料制备而成。在一优选例中，其至少是由以下重量份的原料制备而成:在一优选例中，其至少是由以下重量份的原料制备而成:在一优选例中，组合物包括金边蚂蟥提取物，以及土鳖虫、地龙、黄精和党参的提取物。在一优选例中，所述金边蚂蟥提取物由以下方法制备而成：将金边蚂蟥粉碎成粉末，加水浸泡，过滤得滤液，离心，取上清液用酸液调ph值至1.5-3，静置，接着超滤，收集滤液，用碱液调ph值至6.5-7.5，过滤得到滤液，在滤液加入淀粉，混匀后进行喷雾干燥，即得金边蚂蟥提取物。在一优选例中，所述喷雾干燥采用喷雾干燥机进行，喷雾干燥机的进口温度为85-95℃，出口温度为65-75℃在一优选例中，所述喷雾干燥采用喷雾干燥机进行，喷雾干燥机的进口温度为90℃，出口温度为70℃；在一优选例中，所述酸液为三氯乙酸溶液；在一优选例中，所述上清液用三氯乙酸溶液调ph值至2.5；在一优选例中，所述三氯乙酸溶液的浓度为2mol/l；在一优选例中，所述碱液为naoh溶液；在一优选例中，所述滤液用naoh溶液调ph值至7；在一优选例中，所述naoh溶液的浓度为1mol/l；在一优选例中，所述金边蚂蟥粉碎成粉末后，是采用4-8倍水于4℃浸泡6小时，过滤100目筛网得到滤液，然后以5000r/min的转速离心5-12min；在一优选例中，所述超滤是采用额定孔径范围为0.03-0.05微米的微孔过滤膜过滤；在一优选例中，用naoh溶液调ph值至6.5-7.5后，是采用200目筛网过滤得到滤液。在一优选例中，所述土鳖虫、地龙、黄精和党参的提取物由以下方法制备而成：将土鳖虫干品、地龙干品、黄精、党参加水煎煮提取2次，第1次加7-12倍水煮3-4小时，第2次加4-10倍水煮2-3小时，合并滤液，过滤，滤液浓缩成相对密度为1.20～1.25的稠膏，干燥，粉碎，过100目筛网，即得到土鳖虫、地龙、黄精、党参的提取物。本发明第二方面提供了所述组合物在制备改善微循环的药物中的应用。本发明第三方面提供了所述组合物在制备抗高血脂的药物中的应用。本发明第四方面提供了所述组合物在制备抗血栓的药物中的应用。本发明第五方面提供了所述组合物在制备治疗中风病的药物中的应用。本发明涉及的“d1”代表给药后第一天，其它依次类推。本发明涉及的“1w”代表1周，其余依次类推。本发明涉及的“金边蚂蟥”的壮药名称为堵平怀(duzbing’vaiz)；本发明涉及的“土鳖虫”的壮药名称为堵兜老(duzdaeuhlaux)；本发明涉及的“地龙”的壮药名称为堵黏(duzndwen)。本发明的组合物配方：金边蚂蟥、土鳖虫、地龙、黄精和党参，是在发掘壮医民间验方和传统中医用水蛭治疗血瘀证的基础上，在壮医、中医理论和临床治疗原则指导下，经三十多年临床实践研究，总结治疗麻邦(中风病气虚血瘀证)的有效方药，并结合现代中药药理、药化研究，经科学的制备方法制备而成。金边蚂蟥在壮医上的功能为调龙道和散淤血，在中医上的功能为破血通经和逐瘀消癥。土鳖虫在壮医上的功能为通龙路、化瘀消肿和接骨止痛，在中医上的功能为破血逐瘀和续筋接骨。地龙在壮医上的功能为通调两路、清热毒和调气道，在中医上的功能为清热定惊、通络、平喘和利尿。黄精在壮医上的功能为调气道、水道、升阳、消肿、固表止汗、生津养血、行滞通痹和托毒排脓，在中医上的功能为补气升阳、固表止汗、利水消肿、生津养血、行滞通痹、托毒排脓和敛疮生肌。党参具有补中益气，健脾益肺之功效，且具有增强免疫力、扩张血管、降压、改善微循环、增强造血功能等作用。本发明具有以下有益效果：(1)复方是中药的精髓，本发明的组合物作为药物方解：金边蚂蟥咸、苦平，土鳖虫咸、寒，两药均有通调龙路火路、通血栓的作用，本方用其通调龙路火路、通血栓的作用，两药共为主药、母药。地龙，咸，寒；通调龙路火路、清热毒、调气道；黄精甜、微温，补气虚、强身体，两药共凑帮药的作用。(2)本发明组合物的制备方法中对金边蚂蟥的提取采用低温生物提取技术，解决目前行业中存在的提取抗凝血剂含量偏低、有效活性成分不足和半衰期短等的难点，从而把水蛭素活性提取含量和效价提升到新的高度，而且使用本发明的制备方法制备组合物能够最大限度地降低有害毒素，适应药品、保健品及美容产品质量标准要求。(3)在大量的临床试验的积累下，组合物进行了组方的最优化搭配和最优化配比，各组分呈现良好的量效关系，因此以本发明组合物的特定的配方和配比配合使用在壮医学上具有最优通调龙路火路、通血栓和补气通络的功效，中医谓之最佳活血化瘀和益气通络之功，且应用于药物时，不仅能最大程度的改善微循环，而且在治疗高血脂、血栓和中风病时能发挥其最佳疗效。具体实施方式除非特殊说明，本发明所用术语具有本发明所属领域中的一般含义。下面参考具体实施例，对本发明进行说明，需要说明的是，这些实施例仅仅是说明性的，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。实施例1本实施例提供了一种中药组合物及其制备方法。所述中药组合物由以下重量份的原料制备而成:上述中药组合物的制备方法包括如下步骤：(1)制备金边蚂蟥提取物将4kg金边蚂蟥(购买于南宁市净雪皇生物工程有限公司)粉碎成粉末，加16l纯净水于4℃浸泡6小时，过滤100目筛网得到滤液，滤液以5000r/min的转速离心5min，取上清液用浓度为2mol/l的三氯乙酸溶液调ph值至2.5，12℃以下静置24小时，接着用额定孔径范围为0.03-0.05微米的微孔过滤膜过滤后，收集滤液，用1mol/l的naoh溶液调ph值至7.0，200目筛网过滤得到滤液，在滤液加入10g淀粉，混匀后进行喷雾干燥，喷雾干燥机的进口温度为90℃，出口温度为70℃，干燥后即得金边蚂蟥提取物1kg。(2)制备土鳖虫、地龙、黄精、党参的提取物土鳖虫干品1kg、地龙干品2kg、黄精2kg、党参1kg(均购买于南宁生源中药饮片有限责任公司)加水煎煮提取2次，第1次加60l的纯净水煎煮3h，第2次加48l的纯净水煎煮2h，合并滤液，200目筛网过滤，滤液浓缩成相对(水)密度为1.20～1.25(70℃)的稠膏，干燥，粉碎，过100目筛网，即得到土鳖虫、地龙、黄精、党参的提取物2kg。(3)制备含有金边蚂蟥提取物以及土鳖虫、地龙、黄精、党参的提取物的中药组合物在土鳖虫、地龙、黄精、党参的提取物2kg中加入上述金边蚂蟥提取物1kg，混匀得到本实施例的中药组合物。胶囊制备：在中药组合物中按照常规比例加入适量硬脂酸镁及淀粉，混匀，装入胶囊，制备成为含有中药组合物的胶囊，胶囊内容物为棕褐色粉末，气微腥，味微苦。实施例2本实施例提供了一种中药组合物及其制备方法。所述中药组合物由以下重量份的原料制备而成:上述中药组合物的制备方法包括如下步骤：(1)制备金边蚂蟥提取物将4kg金边蚂蟥(购买于南宁市净雪皇生物工程有限公司)粉碎成粉末，加16l纯净水于4℃浸泡10小时，过滤100目筛网得到滤液，滤液以5000r/min的转速离心12min，取上清液用浓度为2mol/l的三氯乙酸溶液调ph值至2.5，12℃以下静置24小时，接着用额定孔径范围为0.03-0.05微米的微孔过滤膜过滤后，收集滤液，用1mol/l的naoh溶液调ph值至7.5，200目筛网过滤得到滤液，在滤液加入10g淀粉，混匀后进行喷雾干燥，喷雾干燥机的进口温度为90℃，出口温度为70℃，干燥后即得金边蚂蟥提取物1kg。(2)制备土鳖虫、地龙、黄精、党参的提取物土鳖虫干品1kg、地龙干品1kg、黄精3kg、党参3kg(均购买于南宁生源中药饮片有限责任公司)加水煎煮提取2次，第1次加60l的纯净水煎煮4h，第2次加35l的纯净水煎煮3h，合并滤液，200目筛网过滤，滤液浓缩成相对(水)密度为1.20～1.25(70℃)的稠膏，干燥，粉碎，过100目筛网，即得到土鳖虫、地龙、黄精、党参的提取物2.5kg。(3)制备含有金边蚂蟥提取物以及土鳖虫、地龙、黄精、党参的提取物的中药组合物在土鳖虫、地龙、黄精、党参的提取物2.5kg中加入上述金边蚂蟥提取物1kg，混匀得到本实施例的中药组合物。胶囊制备同实施例1。实施例3本实施例提供了一种中药组合物及其制备方法。所述中药组合物由以下重量份的原料制备而成:上述中药组合物的制备方法包括如下步骤：(1)制备金边蚂蟥提取物将4kg金边蚂蟥(购买于南宁市净雪皇生物工程有限公司)粉碎成粉末，加16l纯净水于4℃浸泡12小时，过滤100目筛网得到滤液，滤液以5000r/min的转速离心14min，取上清液用浓度为2mol/l的三氯乙酸溶液调ph值至1.5，12℃以下静置24小时，接着用额定孔径范围为0.03-0.05微米的微孔过滤膜过滤后，收集滤液，用1mol/l的naoh溶液调ph值至6.8，200目筛网过滤得到滤液，在滤液加入10g淀粉，混匀后进行喷雾干燥，喷雾干燥机的进口温度为90℃，出口温度为70℃，干燥后即得金边蚂蟥提取物1kg。(2)制备土鳖虫、地龙、黄精、党参的提取物土鳖虫干品1kg、地龙干品2kg、黄精1kg、党参1kg(均购买于南宁生源中药饮片有限责任公司)加水煎煮提取2次，第1次加60l的纯净水煎煮3h，第2次加48l的纯净水煎煮2h，合并滤液，200目筛网过滤，滤液浓缩成相对(水)密度为1.20～1.25(70℃)的稠膏，干燥，粉碎，过100目筛网，即得到土鳖虫、地龙、黄精、党参的提取物1.5kg。(3)制备含有金边蚂蟥提取物以及土鳖虫、地龙、黄精、党参的提取物的中药组合物在土鳖虫、地龙、黄精、党参的提取物1.5kg中加入上述金边蚂蟥提取物1kg，混匀得到本实施例的中药组合物。胶囊制备同实施例1。实施例4本实施例对实施例1的含有中药组合物的胶囊在改善微循环、抗高血脂和抗凝抗血栓等各方面的作用进行了评价。一、实验准备1.实验分组本实施例中涉及的实验分组：高剂量试验组、中剂量试验组、低剂量试验组、华法林阳性对照组、辛伐他汀组和空白对照组。所述高剂量试验组、中剂量试验组、低剂量试验组均以本发明实施例1的中药组合物的胶囊体[规格：0.4g/粒(其中胶囊包衣0.08g)]为试验药物。高剂量试验组中针对试验药物的给药剂量为1.04g/kg/d，中剂量试验组中针对试验药物的给药剂量为0.52g/kg/d，低剂量试验组中针对试验药物的给药剂量为0.26g/kg/d。具体使用时是采用在试验药物加入蒸馏水溶解，各组给药体积均为0.4ml。华法林阳性对照组：采用上海信谊九福药业有限公司生产的批号为18140206c的华法林钠片，给药剂量为0.4mg/kg/d，具体使用时是采用在试验药物加入蒸馏水溶解，给药体积均为0.4ml。辛伐他汀组：采用成都恒瑞制药有限公司生产的批号为130601的辛伐他汀片，给药剂量为5.0mg/kg/d，具体使用时是采用在试验药物加入蒸馏水溶解，给药体积均为0.4ml，空白对照组：蒸馏水使用体积为0.4ml2.试剂和仪器盐酸肾上腺素：远大医药(中国)有限公司，批号：140110胆固醇：成都市科龙化工试剂厂，分析纯，批号：2014060101猪胆盐：成都市科龙化工试剂厂，生化试剂，批号：20130503。猪油：市场采购猪板油按照现有常规方法熬炼即得。蛋黄粉：市场采购生鸡蛋带壳煮熟后取蛋黄，60℃烘干后研碎即得。辛伐他汀：成都恒瑞制药有限公司，批号：130601。台式低速大容量离心机：上海安亭科学仪器厂，tdl-33。电子天平：梅特勒—托利多上海天平仪器厂，hangpingja1003型。全自动生化分析仪：日立全自动生化分析仪，7100型。全自动血栓检测仪：郑州明举科技有限公司，型号：lmk-12多环型。凝血酶原时间(pt)测定试剂盒，上海太阳生物技术有限公司生产，批号：105243；活化部分凝血活酶时间(aptt)测定试剂盒，上海太阳生物技术有限公司生产，批号：112172；凝血酶时间(tt)测定试剂盒，上海太阳生物技术有限公司生产，批号：121128。3.实验动物(1)动物：昆明种小鼠18～22g，spf级，雌雄兼用；wister大鼠180～220g，spf级，雌雄兼用；以及sd大鼠。均由广西医科大学医学实验动物中心提供。(2)饲养条件：室温25±5℃，湿度60±20％。饲以广西医科大学实验动物中心提供的常规饲料(成分有大米粉、玉米粉、鱼粉、奶粉、麦麸、多维素、鱼肝油、鸡蛋以及盐等)。自由摄食、饮水。二、实验方法和结果1.本发明实施例1中含有中药组合物的胶囊对大鼠静脉血栓的溶栓效应试验取wister大鼠50只，随机分成5组：空白对照组、华法林阳性对照组、高剂量试验组、中剂量试验组和低剂量试验组，每组10只，分别将各组的大鼠按照上述实验准备的剂量和要求连续灌胃给药7天，每日一次，各组大鼠于末次给药后1小时，腹腔注射10％水合氯醛(300mg/kg)麻醉，开腹分离下腔静脉，于左肾静脉下方用线结扎，2小时后，于结扎处下2cm处结扎血管，阻断血流，记录血栓形成率，取出血栓，称血栓长度和湿重。血栓形成率(％)＝各组形成血栓的个数/各组总受试个数×100％实验结果如表1所示，本发明实施例1中含有中药组合物的胶囊能降低大鼠血栓湿重，减少血栓形成。表1含有中药组合物的胶囊对大鼠静脉血栓的溶栓效应注：与模型组比较**p<0.012.本发明实施例1中含有中药组合物的胶囊本发明实施例1中含有中药组合物的胶囊对大鼠体外血栓的影响试验取wister大鼠50只，随机分成5组：空白对照组、华法林阳性对照组、高剂量试验组、中剂量试验组和低剂量试验组，每组10只，分别将各组的大鼠按照上述实验准备的剂量和要求连续灌胃给药7天，每日一次，各组大鼠于末次给药后1小时，腹腔注射10％水合氯醛(300mg/kg)麻醉，开腹腹主动脉取血1ml，放入聚乙烯试管，在lmk-12体外血栓仪上旋转10分钟(15圈/分)，取出血栓，在滤纸上吸干后量取血栓长度，称取血栓湿重。将血栓60℃烘干30min再称取重量，即得血栓干重。实验结果显示，本发明实施例1中含有中药组合物的胶囊能缩短血栓长度、降低血栓湿重和血栓干重作用，结果见表2。表2本发明实施例1中含有中药组合物的胶囊对大鼠体外血栓的影响组别血栓长度(cm)血栓湿重(g)血栓干重(g)空白对照组10.080±0.9100.575±0.0610.146±0.022华法林阳性对照组0.379±0.141＊＊0.048±0.014＊＊0.008±0.002＊＊高剂量试验组1.710±0.401＊＊0.074±0.008＊＊0.020±0.001＊＊中剂量试验组2.680±0.352＊＊0.141±0.019＊＊0.030±0.008＊＊低剂量试验组4.530±0.531＊＊0.281±0.031＊＊0.070±0.009＊＊注：与正常组比较：*p<0.05，**p<0.013.本发明实施例1中含有中药组合物的胶囊对大鼠全血凝固时间(ct)、部分凝血酶原时间(aptt)、凝血酶原时间(pt)、凝血酶时间(tt)的影响试验取wister大鼠50只，随机分成5组：空白对照组、华法林阳性对照组、高剂量试验组、中剂量试验组和低剂量试验组，每组10只，分别将各组的大鼠按照上述实验准备的剂量和要求连续灌胃给药7天，每日一次，各组大鼠于末次给药后1小时，尾巴取血，采用挑丝法测定大鼠全血凝固时间(ct)，腹腔注射10％水合氯醛(300mg/kg)麻醉，开腹腹主动脉取血2ml放入枸橼酸钠抗凝管中，于广西医科大学第一附属医院测定aptt、pt、tt。实验数据采用统计学软件spss16.0对所有数据进行分析。结果显示，与空白组比较，蛭血通肠溶胶囊低剂量组、高剂量组均可延长大鼠的pt、ct，各组对aptt和tt均无明显影响，结果见表3。表3本发明实施例1中含有中药组合物的胶囊对大鼠aptt、pt、tt、ct的影响组别n剂量(g/kg)aptt(s)pt(s)tt(s)ct(s)空白对照组10-22.91±2.0713.73±1.1029.69±2.4631.50±9.44低剂量试验组91.1121.53±1.1315.22±1.37★29.63±2.4642.89±10.96★中剂量试验组82.2122.09±1.2115.16±1.08★31.74±3.5241.25±18.85高剂量试验组94.4222.97±2.9614.69±0.78★31.56±3.1147.00±16.42★华法林阳性对照组70.000434.43±3.61★★28.50±1.27★★34.14±2.94★★207.14±57.07★★注：与空白对照组比较，★p<0.05，★★p<0.01。4.本发明实施例1中含有中药组合物的胶囊对小鼠微循环的影响试验取昆明种小鼠60只，雌雄各半，随机分成6组：空白对照组、模型对照组、华法林阳性对照组、高剂量试验组、中剂量试验组和低剂量试验组，每组10只，分别将各组的小鼠按照上述实验准备的剂量和要求连续灌胃给药5天(这里的模型对照组同空白对照组供给蒸馏水)。各组小鼠末次给药后1h，腹腔注射10％乌拉坦(0.12ml/10g)麻醉小鼠，将动物俯卧于微循环的观察台上，平展耳廓并滴少许石蜡油使之固定于载玻片上，再覆盖玻片，然后将观察台置于显微镜载物台上，调节光源至适当亮度，在透射光下用10×4倍镜观察小鼠耳廓微循环，然后尾静脉注射0.01％盐酸肾上腺素注射液5ml/kg体重造成小鼠微循环障碍模型，各组都作再次观察小鼠耳廓微循环在造模后15min的变化，分别记录动脉血流速度，用显微测微尺测量耳廓细动脉(a)和细静脉(v)的血管口径，计算造模前后的变化率。计算公式：动脉血流速度变化率(％)＝(造模前动脉血流速度-造模后15min)/造模前×100％静脉血流速度变化率(％)＝(造模前静脉血流速度-造模后15min)/造模前×100％动脉血流量变化率(％)＝(造模前动脉血流量-造模后15min)/造模前×100％统计方法采用华西医科大学卫生统计学教研室的《中国医学百科全书-医学统计学》统计软件包(第二版)进行有关检验，数据均以-x±s表示。实验结果显示，本发明实施例1中含有中药组合物的胶囊能降低小鼠耳廓动脉血流速度变化率、静脉血流速度变化率、动脉血流量变化率，缓解小鼠耳廓动静脉血管管径的缩小，结果见表4和表5。表4小鼠造模前后动静脉血流速度变化率、动脉血流量变化率(n＝10)分组动脉血流速度变化率(％)静脉血流速度变化率(％)动脉血流量变化率(％)空白对照组1.44±0.401.47±0.442.07±1.66模型对照组22.11±9.8**16.74±13.08*77.64±10.90**华法林阳性对照组3.20±1.22**2.62±0.72*13.12±6.84高剂量试验组3.63±1.12**4.92±0.80**27.60±14.27**中剂量试验组4.83±1.25**7.24±0.06**37.85±8.08**低剂量试验组7.62±0.69**14.24±5.20**68.23±14.75**注：与空白组比较，*p<0.05，**p<0.01表5小鼠造模后耳廓动静脉血管口径(n＝10)分组静脉管径(um)动脉管径(um)空白对照组201.44±33.2765.42±25.01模型对照组153.79±21.46**39.25±15.23*华法林阳性对照组182.40±34.70**63.22±25.01高剂量试验组199.00±27.5550.82±12.85中剂量试验组176.63±41.5846.00±9.71低剂量试验组164.91±42.22*45.25±11.21*注：与空白组比较，*p<0.05，**p<0.015.本发明实施例1中含有中药组合物的胶囊对实验性大鼠高脂血症血脂的影响试验(1)高脂饲料的配制高脂饲料的组分包括：基础饲料82.9％，胆固醇1％，猪胆盐0.1％，猪油12％，蛋黄粉4％(百分数代表重量百分比)。基础饲料采用现有常规饲料，高脂饲料的配制方法为：按比例先将胆固醇、猪胆盐、蛋黄粉研碎混合，然后加入温热的猪油中，再与基础饲料拌匀即得。(2)高脂血症模型建立及分组选取70只健康sd大鼠，体重200±20g，雌雄各半，适应性饲养7天后，随机抽取10只作为空白对照组，雌雄各半，实验全程喂饲基础饲料。其余60只大鼠喂饲高脂饲料4周，诱导建立饮食性高脂血症大鼠模型。4周后禁食不禁水12h，于次日眼内眦采血2ml，制备血清，测定各大鼠的tc、tg、hdl-c、ldl-c水平，与空白组的血脂水平进行比较，确定造模是否成功。造模成功后，将50只高脂血症大鼠按tc水平随机分成5个组：模型对照组，辛伐他汀组、高剂量试验组、中剂量试验组和低剂量试验组，每组10只且雌雄各半。灌胃给药，空白对照组和模型对照组给予等剂量的蒸馏水。同时按照上述方法给予高脂饲料(或基础饲料)，持续3周。灌胃3周后，禁食不禁水12h，眼眦取血2ml。4℃静置10min，3000pr/min离心15min，分离血清，用全自动生化仪检测tc、tg、hdl-c、ldl-c水平。实验结果如表6所示，本发明实施例1中含有中药组合物的胶囊低剂量组能显著降低胆固醇、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白的含量，本发明实施例1中含有中药组合物的胶囊中、高剂量组对高脂血症大鼠有一定的降血脂作用，但无统计学意义。表6本发明实施例1中含有中药组合物的胶囊对高血脂大鼠血脂的影响(n＝10)组别tc(mmol/l)tg(mmol/l)hdl-c(mmol/l)ldl-c(mmol/l)空白对照组1.62±0.23●●1.42±0.211.62±0.23●●0.20±0.07●●模型对照组4.66±1.64＊＊1.85±1.384.66±1.64＊＊3.28±2.05＊＊辛伐他汀组3.76±0.69＊＊1.97±0.923.76±0.69＊＊2.15±0.62＊＊高剂量试验组4.09±1.16＊＊1.68±0.904.09±1.16＊＊2.84±1.75＊＊中剂量试验组3.66±2.03＊＊1.83±1.093.66±2.03＊＊2.34±2.58＊＊低剂量试验组2.67±0.61＊●1.27±0.382.67±0.61＊●1.54±0.75＊●●注：与空白组比较＊p<0.05，＊＊p<0.01，与模型组比较●p<0.05，●●p<0.01三、试验结论本发明实施例1中含有中药组合物的胶囊对大鼠静脉血栓模型和体外血栓模型的有抑制作用，能降低大鼠血栓湿重，减少血栓形成，缩短血栓长度、降低血栓湿重和血栓干重。试验结果证明，本发明实施例1中含有中药组合物的胶囊对血栓形成有明显的防治作用。本发明实施例1中含有中药组合物的胶囊对大鼠凝血功能无明显作用，对大鼠ct有所延长，对aptt、pt、tt无明显影响。试验结果证明，本发明实施例1中含有中药组合物的胶囊对大鼠无明显抗凝血作用。本发明实施例1中含有中药组合物的胶囊对小鼠耳廓微循环障碍有显著改善作用，能降低小鼠耳廓动脉血流速度变化率、静脉血流速度变化率、动脉血流量变化率，缓解小鼠耳廓动静脉血管管径的缩小。说明本发明实施例1中含有中药组合物的胶囊有改善血管微循环作用。本发明实施例1中含有中药组合物的胶囊对大鼠高脂血症有一定的改善作用，其低剂量组能显著降低胆固醇、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白的含量，本发明实施例1中含有中药组合物的胶囊中、高剂量组对高脂血症大鼠有一定的降血脂作用，但无统计学意义。说明本发明实施例1中含有中药组合物的胶囊对高脂血症大鼠的血脂有一定改善作用。实施例5本实施例对本发明实施例1中含有中药组合物的胶囊的临床应用进行了急性毒性评价。一、实验准备1.实验分组本实施例中涉及的实验分组：给药组和对照组。给药组：以本发明实施例1的中药组合物的胶囊体[规格：0.4g/粒(其中胶囊包衣0.08g)]为试验药物，具体使用时是采用在试验药物加入蒸馏水溶解。2.实验动物spf级昆明小鼠，共40只、雌雄各半，体重为18～20g，来源于广西医科大学实验动物中心，生产许可证号：scxk桂2009-0002。二、实验方法根据预试验结果，拟采用最大给药量法进行供试品单次给药毒性试验。取40只昆明小鼠分成给药组和对照组，每组20只动物且雌雄各半，给药组中的小鼠采用供试品药液连续灌胃给药14天，每日给药一次，对照组给予与给药组相同体积的蒸馏水，具体参数如表7所示。表7试验剂量与分组表三、实验结果(1)毒性反应毒性反应的结果如表8所示，给药组及对照组的小鼠的毒性反应的结果完全一致。表8给药后动物出现毒性反应的情况注：“-”为无毒性反应；“+”为有毒性反应。(2)体重结果结果见表9和10，各给药组动物体重在给药后14天内与对照组无显著差异。表9雌性小鼠给药前后体重变化表10雄性小鼠给药前后体重变化(3)死亡结果给药后至观察期14天结束，对照组和给药组的动物行为活动及体征表现均正常，且无一死亡。(4)大体解剖结果如表11和12所示，给药组和对照组动物经大体解剖所见：心脏、肺脏、肝脏、脾脏、肾脏和胃肠，诸脏器均未发生异常改变。表11雌性小鼠脏器改变表12雄性小鼠脏器改变综上，小鼠急性毒性测定结果表明，小鼠灌胃高于临床剂量约577倍的30.0g·kg-1本发明实施例1中含有中药组合物的胶囊后，未见动物出现任何不良反应及死亡，故限于给药浓度和给药体积，未能测出ld50，口服毒性很小，认为该本发明实施例1中含有中药组合物的胶囊给小鼠经灌胃给药ld50大于30.0g·kg-1。实施例6本实施例对本发明实施例1中含有中药组合物的胶囊的临床应用进行了蓄积毒性评价，并确定无毒反应剂量。一、实验准备1.实验分组本实施例中出现的实验分组：高剂量试验组、中剂量试验组、低剂量试验组和空白对照组。所述高剂量试验组、中剂量试验组、低剂量试验组均以本发明实施例1的中药组合物的胶囊体[规格：0.4g/粒(其中胶囊包衣0.08g)]为试验药物。高剂量试验组中针对试验药物的给药剂量为4.16g·kg-1/d，相当于临床拟用剂量(原生药每日22g)的80倍剂量；中剂量试验组中针对试验药物的给药剂量为2.08g·kg-1/d，相当于临床拟用剂量(原生药每日22g)的40倍剂量；低剂量试验组中针对试验药物的给药剂量为1.04g·kg-1/d，相当于临床拟用剂量(原生药每日22g)的20倍剂量。具体使用时是采用在试验药物加入蒸馏水溶解，给药体积按照1.76ml/100g计算。空白对照组：均给予蒸馏水的体积0.4ml。2.实验动物spf级sd大鼠，共80只且雌雄各半，约4～5周龄，体重为140～170g，来源于广西医科大学实验动物中心，生产许可证号：scxk桂2009-0002。实验动物饲养管理：在整个实验过程中，实验动物在标准饲养盒内喂养，每盒5只，盒内始终保持清洁干燥；室内温度控制在23.37±0.72℃，相对湿度44.19±5.30％，各项管理措施均符合《药物非临床研究质量管理规范》相关要求。二、实验方法将80只sd大鼠随机分成高剂量试验组、中剂量试验组、低剂量试验组和空白对照组，每组20只且雌雄各半，分别将高剂量试验组、中剂量试验组和低剂量试验组的大鼠按照实验准备的剂量和要求连续灌胃给药90天，每天灌胃给药1次，剂距1:2，对照组灌胃等体积的蒸馏水。每日观察动物自主活动、精神状态、皮毛、粪便情况；每周称量体重、记录摄食量。给药结束(末次给药)后，每组雌雄各取7只动物，禁食16小时，按45mg·kg-1给大鼠腹腔注射戊巴比妥钠进行麻醉，经腹主动脉取血，其中edta抗凝血液用于血常规检测；枸橼酸钠抗凝血液经离心分离血浆后测定凝血指标；非抗凝血液经离心分离血清后测定生化指标；最后将动物解剖取相应脏器进行病理检查。于恢复期结束(停药三周后)时，每组雌雄各取3只动物，用同样方法取血、剖杀，进行与给药结束时相同的各项检查。检测数据采用spss16.0版软件进行统计学分析。对照组与给药组的各项测试数据经t检验比较组间差异；尿液检查用秩和检验比较组间差异；病理组织学检查各组病变用χ2检验进行统计分析，以p<0.05判为有统计学差异。三、实验结果1.一般临床观察检疫期、给药期及恢复期结束各阶段，各组动物行为活泼，自主活动规律，外观体征、体表粘膜、及粪便颜色形态正常，腺体无异常分泌物。对照组与给药组动物间无差异。2.体重结果如表13和14所示，在整个实验过程中，三个不同剂量的试验组大鼠体重均未见与药物相关的异常降低的趋势，其变化值均属正常范围内的波动。表13给药90天及恢复期雌性大鼠体重变化注：与对照组相比较：*；p<0.05；**；p<0.01表14给药90天及恢复期雄性大鼠体重变化注：与对照组相比较:*；p<0.05；**；p<0.013.摄食量结果见表15～16，由表可知，在整个实验过程中，各剂量的试验组的大鼠的饲料摄取量与空白对照组相比较无明显统计学差异。表15给药90天及恢复期雌性大鼠摄食量变化(体重)注：1w代表1周，其余依次类推。与对照组相比较:*；p<0.05；**；p<0.01表16给药13周及恢复期雄性大鼠摄食量变化(体重)注：与对照组相比较:*；p<0.05；**；p<0.014.临床病理学检查(1)血液学指标结果见表17～20(表中各检测项目的英文缩写的具体指代见《常用化验项目英文缩写指导手册》)。血液学检测结果显示：本实验中各时期检测数据显示，在给药90天后，雌性大鼠高剂量组的红细胞平均体积(mcv)、中性粒细胞比率(neut％)低于对照组，红细胞平均血红蛋白浓度(mchc)、淋巴细胞比率(lymph％)高于对照组；低剂量和中剂量组的嗜酸性粒细胞比率(eo％)低于对照组。恢复期结束后，雄性大鼠低剂量组的红细胞计数(rbc)、血红蛋白(hgb)低于对照组；中剂量组红细胞平均血红蛋白浓度(mchc)、血小板压积(pct)低于对照组。因检测值未超出正常值范围，且无剂量及时效的相关性，故不认为与药物作用有关，不具有毒理学意义。表17给药90天雌性大鼠血液学指标注：与对照组相比较:*；p<0.05；**；p<0.01表18给药90天雄性大鼠血液学指标注：与对照组相比较:*；p<0.05；**；p<0.01表19恢复期结束雌性大鼠血液学指标注：与对照组相比较:*；p<0.05；**；p<0.01表20恢复期结束雄性大鼠血液学指标注：与对照组相比较:*；p<0.05；**；p<0.01(2)血液生化指标结果见表21～24(表中各检测项目的英文缩写的具体指代见《常用化验项目英文缩写指导手册》)。血液生化检测结果显示：给药结束时，雌性大鼠中剂量组总胆红素(tbil)低于对照组，因检测值未超出正常值范围，且无剂量及时效的相关性，故不认为与药物作用有关。总蛋白(tp)、氯离子(cl)、钠离子(na)的改变虽然具有统计学差异，并具有剂量相关性，但基于这些变化并未超出大鼠的正常生理值范围，因此不具有毒理学意义。雄性大鼠低剂量组的甘油三酯(tg)高于对照组，tp低于对照组，因检测值未超出正常值范围，且无剂量及时效的相关性，故不认为与药物作用有关。恢复期雌性大鼠肌酐(crea)低于低剂量组；雄性大鼠中剂量组球蛋白(glb)高于低剂量组，a/g低于对照组，但属于正常范围内波动，不具有毒理学意义。本次血液生化指标的变化值与现有测试背景资料数据相符，可认为上述改变属正常生理范围的波动，而并无毒理学意义。表21给药90天雌性大鼠血液生化指标注：与对照组相比较:*；p<0.05；**；p<0.01表22给药90天雄性大鼠血液生化指标注：与对照组相比较:*；p<0.05；**；p<0.01表23恢复期结束雌性大鼠血液生化指标注：与对照组相比较:*；p<0.05；**；p<0.01表24恢复期结束雄性大鼠血液生化指标注：与对照组相比较:*；p<0.05；**；p<0.01(3)凝血指标结果见表25～26；各组各时间段凝血各项指标未出现显著性变化。表25给药13周及恢复期雌性大鼠凝血指标注：与对照组相比较:*；p<0.05；**；p<0.01表26给药13周及恢复期雄性大鼠凝血指标注：与对照组相比较:*；p<0.05；**；p<0.01(4)脏器结果见表27～28；给药结束及恢复期结束时，与空白对照组相比，均未见脏器系数存在明显改变，无毒理学意义。表27给药90天大鼠脏器系数注：脏器系数＝[脏器重量(g)/体重(g)]×100％；与对照组相比较:*；p<0.05；**；p<0.01表28恢复期结束大鼠脏器系数注：脏器系数＝[脏器重量(g)/体重(g)]×100％；与对照组相比较:*；p<0.05；**；p<0.015.组织病理学检查(1)系统尸检：在本次试验各时期，各实验组大鼠的被毛光滑，头部器官、会阴部均未见异常；心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、脑、甲状腺、胸腺、肠系膜淋巴结、膀胱、胸骨、脊髓、视神经、脑垂体、气管、胃、十二指肠、空肠、结肠、回肠、胸腔及腹腔均未发现肉眼可见病变。雌鼠卵巢、子宫、雄鼠睾丸、附睾、前列腺也未见异常。(2)病理检查：试验各时期各组均有个别动物出现肾脏、前列腺和肺脏的间质性炎症，此类病变是大鼠常见的自发性病变，并无毒理学意义，且对照组与给药组间的发生率和病变程度无明显差别，故认为与受试物无关。器官组织的病理改变与给药相关性分析认为：在本次试验各时期，均未发现与给予受试物相关的病理改变。综上，本实施例证明了连续给sd大鼠灌胃给予本发明实施例1中含有中药组合物的胶囊提取物90天，各给药组动物的诸项生理指标均未出现因药物引起的毒性反应和与给药相关的病理改变。经停药3周的观察，各项检测指标也均未显现出因给药而引发延迟或蓄积性毒性反应。本次实验的无毒性反应生药量为4.16g·kg-1。实施例7本实施例对本发明实施例1的含有中药组合物的胶囊应用于麻邦(中风病气虚血瘀证)进行了有效性和安全性的评价。一、受试者选择选择符合壮医诊断标准和西医诊断标准的中风病患者，然后采用中医诊断标准进行进一步筛选。所述壮医诊断标准参照《中国壮医病型诊疗规范》的有关内容拟定。具体为主症：半身不遂、肢体瘫软、口舌歪斜、语言不利或肢体麻木；兼次症：自汗，气短乏力，脸色晄白，纳差；舌诊：舌质淡紫或紫暗，或有瘀斑，苔白腻或薄白。口唇暗红或紫暗，舌下脉络粗胀，色淡紫或紫暗；脉象：弦涩或脉细无力。所述西医诊断标准参照中华人民共和国卫生部颁发的《中药新药临床研究指导原则》2015年拟定，具体为采用ct或mri头颅平扫的方法。所述中医诊断标准参照中华人民共和国卫生部颁发的《中药新药临床研究指导原则》2015年拟定，并将本发明实施例1中含有中药组合物的胶囊治疗中风病的主治分期，分为初期：中经络(气虚血瘀证)；中期：恢复期(气虚血瘀证)；后期：后遗症半身不遂型(气虚血瘀证)。其中中经络(气虚血瘀证)主症：半身不遂，肢体瘫软，言语不利，口舌歪斜；兼次症：自汗，气短乏力，脸色晄白，纳差；舌象：舌质暗淡或有瘀斑，苔薄白或白腻；脉象：细缓或细涩。其中中脏腑恢复期或后遗症半身不遂(气虚血瘀证)主症：偏身瘫软不用，伴肢体麻木，甚则感觉完全丧失，口舌歪斜；兼次症：自汗，气短乏力，脸色晄白，纳差；舌象：舌质淡紫或紫暗，或有瘀斑，苔薄白或白腻；脉象：弦涩或脉细无力。经采用中医诊断标准进行进一步筛选后，最后入选为本实施例受试者的标准为：(1)同意参加临床研究并签署知情同意书；(2)符合中风病中经络气虚血瘀证的患者；(3)符合中风病中脏腑恢复期气虚血瘀证的患者；(4)符合中风病后遗症半身不遂(气虚血瘀证)的患者；以及(5)年龄在40岁以上，75岁以下者(含40岁、75岁)。本实施例受试者的排除(即无法入选)标准为：(1)短暂性脑缺血发作(tia)或脑出血；或(2)脑干梗死者；或(3)无症状性脑梗塞；或(4)经检查型实由脑肿瘤、脑外伤、血液病等引起的中风患者或因风湿性心脏病、冠心病及其他心脏病合并房颤，引起脑栓塞者；或(5)合并有肝、肾、造血系统、内分泌系统等严重疾病及骨关节病(影响中风患者肢体功能恢复者)、精神病患者；或(6)怀疑或确有酒精、药物滥用病史，或者根据研究者的判断，具有降低入组可能性或使入组复杂化的其他病变或情况，如工作环境经常变动、生活环境不稳定等易造成失访的情况；或(7)有出血倾向者；或(8)妊娠或哺乳期妇女及准备受孕的妇女；或(9)已知对本药物组成成分过敏及过敏体质者；或(10)4周内使用过已知对主要脏器有损害的药物者；或(11)病人不能合作或1个月内参加过其它药物临床研究者；或(12)研究者认为不宜入选的其他情况。本实施例受试者的脱落的标准为：(1)病人自行退出(未能坚持服够疗程，不良反应等)。或(2)失访；或(3)究者令其退出(依从性差，不良反应等)。本实施例受试者的脱落的标准为：(1)最终诊断不符合本方案纳入标准者。或(2)采用该治疗方法有效，但患者为提高疗效，采用其它治疗方法或服用其药，无法判定疗效。或(3)无任何检测记录者。本实施例受试者中止和撤出临床研究的标准为：(1)不能坚持治疗者；或(2)出现严重不良反应者；或(3)临床研究过程中出现严重的其它并发症者；或(4)病情恶化，必须采取紧急措施者。二、试验方法试验采用完全随机分组方法，受试者共144例(考虑到试验过程中的剔除、脱落病例最终确定)，试验组随机分配72例，对照组随机分配72例，随机分配编码由统计人员采用spss22.0软件在计算机上模拟产生，所有编号配备相应的治疗药盒。试验组：试验药物采用本发明实施例1中含有中药组合物的胶囊，其规格为每粒装0.4g(其中胶囊包衣0.08g)，4粒/次，3次/日，口服，服用一个疗程，即28天。对照组：阳性对照药物采用贵州百灵企业集团制药股份有限公司生产的国药准字为z20027144的银丹心脑通软胶囊，其规格为每粒装0.4g，4粒/次，3次/日，口服，服用一个疗程，即28天。该药由银杏叶、丹参、灯盏细辛、绞股蓝、山楂、大蒜、三七、艾叶组成，主要功效为活血化瘀、行气止痛，用于气滞血瘀引起的中风、中风后遗症，与试验药物(本发明实施例1的含有中药组合物的胶囊)的功能主治相似，符合公认、同类、择优原则。合并用药情况：试验观察期间伴有感染、高血压、高血糖、高血脂等，均按临床常规治疗。服药期间不得使用任何其它的影响中风病疗效评价的药物，如含有三七、丹参、红花等活血化瘀中药成分的饮片、成药及抗凝(如肝素等)、降纤(如东陵克栓酶、降纤酶等)、抗血小板聚集(除阿司匹林外)、有改善脑血管功能的钙离子拮抗剂(如尼莫地平、西比灵等)及神经营养剂(如胞磷胆碱、依达拉奉等)等化学药。观察指标包括安全性指标和疗效性指标，安全性指标包括：一般体检项目如血压、呼吸、心率、体温等和血脂(cho、tg、hdl-c、ldl-c)，疗效性指标包括患者状况评分(改良rankin量表)、患者神经功能缺损程度(nihss量表)评价和中医症候观察。疗效判定标准包括诊断性指标判定标准、有效性指标判定标准、中医证候疗效判定标准(《中药新药治疗泄泻的临床研究指导原则》)和壮医疗效评定标准。诊断性指标包括：头颅ct或mri，以及血脂(cho、tg、hdl-c、ldl-c)。有效性指标包括：改良rankin量表无明显残障(0～2级)的比例(治疗结束)，nihss评分较基线改善情况(治疗结束)，以及中医症候疗效(治疗结束)。中医证候疗效判定标准(《中药新药治疗泄泻的临床研究指导原则》)包括：临床痊愈(中医临床症状消失或基本消失)，证候积分≥95％；显效(中医临床症状明显改善)，证候积分≥70％，＜95％；有效(中医临床症状有好转)，证候积分≥30％，＜70％；以及无效(中医临床症状无明显改善，甚或加重)，证候积分＜30％。壮医疗效评定标准包括：治愈(神志清醒，四肢活动正常，其他症状及体征也恢复正常)；好转(神志恢复清醒，肢体活动受限等症状明显减轻)；以及无效(症状及体征未见改善)。临床疗效判定采用尼莫地平法：(治疗前积分一治疗后积分)/治疗前积分×100％，以百分数表示。三、试验结果1.病例入组与完成情况本临床试验共入组麻邦(中风病气虚血瘀证)病例144例。其中，试验组入组72例，脱落8例，剔除0例；对照组入组72例，脱落6例，剔除0例。两组病例的脱落率，经卡方检验，差异无显著性意义(p>0.05)。结果见表29至表32。表29试验入组与完成情况组别入组数脱落数脱落率(％)剔除数剔除率(％)试验组72811.100.0对照组7268.300.0总计144149.700.0表30脱落率分析表31入组病例分布情况表32剔除与脱落病例一览表crf号组别性别年龄脱落原因3对照组男64患者自动退出31对照组女43患者自动退出63对照组男74患者自动退出82对照组女58患者自动退出88对照组男65患者自动退出103对照组男63患者自动退出2试验组女76患者自动退出10试验组男46患者自动退出21试验组男50患者自动退出23试验组男76患者自动退出106试验组女63失访87试验组男51患者自动退出124试验组男61失访131试验组男74失访2.可比性分析试验组男女比例分别为62.5％和37.5％，对照组男女比例分别为56.9％和43.1％，经χ2检验，性别构成的组间差异无显著性意义(p>0.05)。试验组与对照组入组病例的年龄，经t检验，组间差异无显著性意义(p>0.05)。试验组与对照组入组病例的病程，经似然比χ2检验，组间差异无显著性意义(p>0.05)。试验组与对照组入组病例合并疾病，经χ2检验，组间差异无显著性意义(p>0.05)。fas(全分析集)分析与pps(符合方案集)分析结果一致，结果见表33和表34。表33试验组与对照组性别、年龄和病程分析(fas)试验组(n＝72)对照组(n＝72)统计量p值检验方法性别男45(62.5)41(56.9)0.4620.497χ2检验女27(37.5)31(43.1)年龄(岁)mean±sd60.69±9.36358.40±9.3201.1140.136t检验min，max41.00，76.0041.00，74.00病程(月)mean±sd23.92±31.97819.27±21.57453.9900.429似然比χ2检验min，max2.00，240.002.00，132.00合并疾病无32(44.4)31(43.1)0.0280.867χ2检验有40(55.6)41(56.9)表34试验组与对照组性别、年龄和病程分析(pps)3.影响因素分析(1)依从性依从性计算方法：实际用药量/规定用药量×100％。在试验过程中，试验组与对照组的依从性经χ2检验，组间差异无显著性意义(p>0.05)。结果见表35。表35依从性分析(pps)试验组n(％)对照组n(％)统计量p值检验方法依从性好63(98.4)63(95.5)依从性差1(1.6)3(4.5)1.0160.602χ2检验合计64(100.00)66(100.00)(2)合并用药情况fas分析：试验组和对照组分别有40例、40例合并用药，经χ2检验，差异无显著性意义(p>0.05)，结果见表36。其中试验组37例合并用降压药，2例合并用降压药、降糖药，1例合并用降压药、清热药；对照组34例合并用降压药，1例合并用降压药、降糖药，1例合用降压药、降脂药，2例合并用降压药、钙片，2例合并用钙片。pps分析：试验组和对照组分别有39例、35例合并用药，经χ2检验，差异无显著性意义(p>0.05)，结果见表37。其中试验组36例合并用降压药，2例合并用降压药、降糖药，1例合并用降压药、清热药；对照组29例合并用降压药，1例合并用降压药、降糖药，1例合用降压药、降脂药，2例合并用降压药、钙片，2例合并用钙片。表36合并用药分析(fas)合并用药试验组n(％)对照组n(％)统计量p值检验方法无32(39.1)32(39.1)有40(60.9)40(60.9)0.0001χ2检验合计72(100.0)72(100.0)表37合并用药分析(pps)合并用药试验组n(％)对照组n(％)统计量p值检验方法无25(39.1)31(47.0)有39(60.9)35(63.0)0.8290.363χ2检验合计64(100.0)66(100.0)4.疗效分析因为壮医证候与中医证候基本相同，故壮医的疗效与中医的疗效是基本相同。(1)中医证候分析a.中医证候积分分析治疗前两组的中医证候积分经似然比χ2检验，差异无显著性意义(p>0.05)；治疗后两组的中医证候积分经似然比χ2检验，差异无显著性意义(p>0.05)。试验组治疗前、后，经非参数检验，差异有显著性意义(p<0.01)；对照组治疗前、后，经非参数检验，差异有显著性意义(p<0.01)。fas分析、pps分析结果一致。见表38、表39。表38治疗前、后中医证候积分分析(fas)试验组(mean±sd)对照组(mean±sd)*统计量*p值检验方法n7272治疗前11.76±4.60411.74±4.48813.8320.879似然比χ2检验治疗后7.43±3.8887.91±3.98813.7570.868似然比χ2检验△统计量--△p值0.0000.000检验方法非参数检验非参数检验注：*：组间比较；△：组内前后比较(下同)。表39治疗前、后中医证候积分分析(pps)试验组(mean±sd)对照组(mean±sd)*统计量*p值检验方法n6466治疗前12.07±4.7111.71±4.39412.0860.946似然比χ2检验治疗后7.20±3.9807.50±3.55213.8820.807似然比χ2检验△统计量--△p值0.0000.000检验方法非参数检验非参数检验注：*：组间比较；△：组内前后比较(下同)。b.中医证候疗效分析fas分析结果表明：试验组与对照组的中医证候疗效等级分布经似然比χ2检验，组间差异无显著性意义(p>0.05)，说明两组对中医证候疗效相当。试验组和对照组中医证候的总有效率分别为69.4％和65.3％，经卡方检验，组间差异无显著性意义(p>0.05)，试验组总有效率略优于对照组，结果见表40。pps结果分析表明：试验组与对照组的中医证候疗效等级分布经似然比χ2检验，组间差异无显著性意义(p>0.05)，说明两组对中医证候疗效相当；试验组和对照组中医证候的总有效率分别为78.1％和71.2％，经卡方检验，组间差异无显著性意义(p>0.05)，试验组总有效率略优于对照组，结果见表41。表40中医症候积分疗效分析(fas)试验组n(％)对照组n(％)统计量p值检验方法显效3(4.2)0(0.0)有效47(65.3)47(65.3)4.3510.114似然比χ2检验无效22(30.6)25(34.7)合计72(100.0)72(100.0)总有效率(％)69.465.30.2840.594χ2检验注：中医证候总有效率(％)＝(痊愈例数+显效例数+有效例数)/评价的病例数×100％(下同)。表41中医症候积分疗效分析(pps)试验组n(％)对照组n(％)统计量p值检验方法显效3(4.7)0(0.0)有效47(73.4)47(71.2)4.8890.087似然比χ2检验无效14(21.9)19(28.8)合计64(100.0)66(100.0)总有效率(％)78.171.20.0820.365χ2检验注：中医证候总有效率(％)＝(痊愈例数+显效例数+有效例数)/评价的病例数×100％(下同)。c.中医证候单项症状体征评分分析上肢不遂评分治疗前两组的上肢不遂评分，经似然比χ2检验，组间差异无显著性意义(p>0.05)；治疗后两组的上肢不遂评分，经似然比χ2检验，组间差异无显著性意义(p>0.05)。试验组治疗前、后上肢不遂评分，经配对χ2检验，差异有显著性意义(p<0.01)；对照组治疗前、后上肢不遂评分，经非参数检验，差异有显著性意义(p<0.01)。fas分析、pps分析结果一致，见表42、表43。表42治疗前、后上肢不遂评分分析(fas)试验组(％)对照组(％)统计量p值检验方法治疗前0分10(13.9)12(16.7)2分31(43.1)28(38.9)3.6850.298似然比χ2检验4分26(36.1)31(43.1)6分5(6.9)1(1.4)合计72(100.0)72(100.0)治疗后0分18(25.0)18(25.0)2分42(58.3)40(55.6)1.7960.847似然比χ2检验4分11(15.3)14(19.4)6分1(1.4)0(0.0)合计72(100.0)74(100.0)统计量31.000-p值0.0000.004检验方法配对χ2检验非参数检验表43治疗前、后上肢不遂评分分析(pps)试验组(％)对照组(％)统计量p值检验方法治疗前0分8(12.5)10(15.2)2分28(43.8)26(39.2)3.8710.276似然比χ2检验4分23(35.9)29(43.9)6分5(7.8)1(1.5)合计64(100.0)66(100.0)治疗后0分16(25.0)16(24.2)2分39(60.9)38(57.6)2.1740.714似然比χ2检验4分8(12.5)12(18.2)6分1(1.6)0(0.0)合计64(100.0)66(100.0)统计量31.00-p值0.0000.002检验方法配对χ2检验非参数检验下肢不遂评分两组治疗前的下肢不遂评分，经似然比χ2检验，组间差异无显著性意义(p>0.05)；两组治疗后的下肢不遂评分，经似然比χ2检验，组间差异无显著性意义(p>0.05)；试验组治疗前、后下肢不遂评分，经配对χ2检验，差异有显著性意义(p<0.01)；对照组治疗前、后下肢不遂评分，经配对χ2检验，差异有显著性意义(p<0.01)。fas分析、pps分析结果一致，见表44、表45。表44治疗前、后下肢不遂评分分析(fas)表45治疗前、后下肢不遂评分分析(pps)试验组(％)对照组(％)统计量p值检验方法治疗前0分1(1.6)4(6.1)2分27(42.2)30(45.5)4.9660.174似然比χ2检验4分31(48.4)31(47.0)6分5(7.8)1(1.5)合计64(100.0)66(100.0)治疗后0分6(9.4)8(12.1)2分47(73.4)48(72.7)0.6060.895似然比χ2检验4分9(014.1)9(13.6)6分2(3.1)1(1.5)合计64(100.0)66(100.0)统计量32.0026.000p值0.0000.000检验方法配对χ2检验配对χ2检验口舌歪斜评分治疗前两组口舌歪斜评分，经似然比χ2检验，组间差异无显著性意义(p>0.05)；治疗后两组口舌歪斜评分，经似然比χ2检验，组间差异无显著性意义(p>0.05)；试验组治疗前、后的口舌歪斜评分差值，经配对χ2检验，差异无显著性意义(p>0.05)；对照组治疗前、后下肢不遂评分，经配对χ2检验，差异无显著性意义(p>0.05)。fas分析、pps分析结果一致，见表46、表47。表46治疗前、后口舌歪斜评分分析(fas)表47治疗前、后口舌歪斜评分分析(pps)试验组(％)对照组(％)统计量p值检验方法治疗前0分41(64.1)36(54.5)2分17(26.6)25(37.9)1.9180.383似然比χ2检验4分6(9.4)5(7.6)6分0(0.0)0(0.0)合计64(100.0)66(100.0)治疗后0分41(64.1)38(57.6)2分18(28.1)24(36.4)1.0550.590似然比χ2检验4分4(7.8)4(6.1)6分0(0.0)0(0.0)合计64(100.0)66(100.0)统计量1.0003.000p值0.6070.223检验方法配对χ2检验配对χ2检验言语不清评分治疗前两组言语不清评分，经似然比χ2检验，组间差异无显著性意义(p>0.05)；治疗后两组言语不清评分，经似然比χ2检验，组间差异无显著性意义(p>0.05)。试验组治疗前、后的言语不清评分差值，经配对χ2检验，差异无显著性意义(p>0.05)；对照组治疗前、后的言语不清评分差值，经配对χ2检验，差异显著性意义(p>0.05)。fas分析、pps分析结果一致，见表48、表49。表48治疗前、后言语不清评分分析(fas)试验组(％)对照组(％)统计量p值检验方法治疗前0分36(54.2)31(45.8)2分29(40.3)31(45.8)1.1620.559似然比χ2检验4分4(5.6)4(8.3)6分0(0.0)0(0.0)合计72(100.0)72(100.0)治疗后0分40(55.6)34(47.2)2分30(41.7)33(45.8)1.9580.376似然比χ2检验4分2(2.8)5(6.9)6分0(0.0)0(0.0)合计72(100.0)72(100.0)统计量3.0002.000p值0.2230.368检验方法mcnemar检验mcnemar检验表49治疗前、后言语不清评分分析(pps)肢体麻木评分治疗前两组的肢体麻木评分，经似然比χ2检验，组间差异无显著性意义(p>0.05)；治疗后两组的肢体麻木评分，经似然比χ2检验，组间差异无显著性意义(p>0.05)。试验组治疗前、后的肢体麻木评分差值，经非参数检验，差异均有显著性意义(p<0.01)；对照组治疗前、后的肢体麻木评分差值，经非参数检验，差异均有显著性意义(p<0.01)。fas分析、pps分析结果一致，见表50、表51。表50治疗前、后肢体麻木评分分析(fas)试验组(％)对照组(％)统计量p值检验方法治疗前0分26(36.1)20(27.8)2分22(30.6)27(37.5)2.7660.429似然比χ2检验4分23(31.9)25(34.7)6分1(1.6)0(0)合计72(100.0)72(100.0)治疗后0分47(65.3)41(56.9)2分20(27.8)28(38.9)2.2540.324似然比χ2检验4分5(6.9)3(4.2)6分0(0.0)0(0.0)合计72(100.0)72(100.0)统计量--p值0.0000.000检验方法非参数检验非参数检验表51治疗前、后肢体麻木评分分析(pps)气短乏力评分治疗前两组的气短乏力评分，经似然比χ2检验，组间差异无显著性意义(p>0.05)；治疗后两组的气短乏力评分，经似然比χ2检验，组间差异无显著性意义(p>0.05)。试验组治疗前、后的气短乏力评分差值，经配对χ2检验，差异有显著性意义(p<0.01)；对照组治疗前、后的气短乏力评分差值，经配对χ2检验，差异有显著性意义(p<0.01)。fas分析、pps分析结果一致，见表52、表53。表52治疗前、后气短乏力评分分析(fas)试验组(％)对照组(％)统计量p值检验方法治疗前0分24(33.3)22(30.6)1分22(30.6)34(47.2)5.0820.079似然比χ2检验2分26(36.1)16(22.2)3分0(0)0(0)合计72(100.00)72(100.00)治疗后0分42(58.3)42(58.3)1分27(37.5)27(37.5)0.0001.000似然比χ2检验2分3(4.2)3(4.2)3分0(0.00)0(0.00)合计72(100.00)72(100.00)统计量39.00030.000p值0.0000.000检验方法配对χ2检验配对χ2检验表53治疗前、后气短乏力评分分析(pps)试验组(％)对照组(％)统计量p值检验方法治疗前0分22(34.4)22(33.3)1分18(28.1)30(45.5)5.6640.059似然比χ2检验2分24(37.5)14(21.2)3分0(0)0(0)合计64(100.00)66(100.00)治疗后0分40(62.5)42(63.6)1分23(35.9)23(34.8)0.0181.000似然比χ2检验2分1(1.6)1(1.5)3分0(0.00)0(0.00)合计64100.00)66(100.00)统计量39.00030.000p值0.0000.000检验方法配对χ2检验配对χ2检验自汗评分治疗前两组的自汗评分，经似然比χ2检验，组间差异无显著性意义(p>0.05)；治疗后两组的自汗评分，经似然比χ2检验，组间差异无显著性意义(p>0.05)。试验组治疗前、后的自汗评分差值，经配对χ2检验，差异有显著性意义(p<0.01)；对照组治疗前、后的自汗评分差值，经非参数检验，差异有显著性意义(p<0.01)。fas分析、pps分析结果一致，见表54、表55。表54治疗前、后自汗评分分析(fas)试验组(％)对照组(％)统计量p值检验方法治疗前0分38(52.8)36(54.9)1分21(29.2)18(28.2)1.5840.947似然比χ2检验2分13(18.1)10(15.5)3分0(0)1(1.4)合计72(100.00)72(100.00)治疗后0分58(80.6)54(818)1分12(16.7)12(18.2)0.5020.778似然比χ2检验2分2(2.8)0(0.0)3分0(0.0)0(0.0)合计72(100.0)72(100.0)统计量27.000-p值0.0000.001检验方法配对χ2检验非参数检验表55治疗前、后自汗评分分析(pps)试验组(％)对照组(％)统计量p值检验方法治疗前0分34(53.1)36(55.4)1分18(28.1)18(27.7)1.6180.914似然比χ2检验2分12(18.8)10(15.4)3分0(0)1(1.5)合计64(100.00)66(100.00)治疗后0分54(84.4)54(818)1分9(14.4)12(18.2)1.7860.635似然比χ2检验2分1(1.6)0(0.0)3分0(0.0)0(0.0)合计64(100.0)66(100.0)统计量27.000-p值0.0000.000检验方法配对χ2检验非参数检验面色晄白评分治疗前两组的面色晄白评分，经似然比χ2检验，组间差异无显著性意义(p>0.05)；治疗后两组的面色晄白评分，经似然比χ2检验，组间差异无显著性意义(p>0.05)。试验组治疗前、后的面色晄白评分差值，经非参数检验检验，差异有显著性意义(p<0.01)；对照组治疗前、后的面色晄白评分差值，经非参数检验检验，差异有显著性意义(p<0.01)。fas分析、pps分析结果一致，见表56、表57。表56治疗前、后面色晄白评分分析(pps)表57治疗前、后面色晄白评分分析(pps)试验组(％)对照组(％)统计量p值检验方法治疗前0分42(65.6)48(72.7)1分17(26.6)12(18.2)1.3270.515似然比χ2检验2分5(7.8)6(9.1)3分0(0)0(0)合计64(100.00)66(100.00)治疗后0分59(92.2)60(90.9)1分5(7.8)6(9.1)0.0690.793χ2检验2分0(0.0)0(0.0)3分0(0.0)0(0.0)合计64(100.00)66(100.00)统计量-p值0.0000.005检验方法非参数检验非参数检验(2)rms状况评分分析a.用药前rms无明显残疾的比例分析用药前试验组和对照组改良rankin量表无明显残疾的比例，经χ2检验，组间差异无显著性意义(p>0.05)；用药后试验组和对照组改良rankin量表无明显残疾的比例，经χ2检验，组间差异无显著性意义(p>0.05)fas分析、pps分析结果一致，见表58、表59。表58用药前后两组rms无明显残疾的比例分析(fas)表59用药前后两组rms无明显残疾的比例分析(pps)b.两组rms状况评分用药前两组改良rankin量表评分的比例，经似然比χ2检验，组间差异无显著性意义(p>0.05)；用药后两组改良rankin量表评分的比例，经似然比χ2检验，组间差异无显著性意义(p>0.05)。试验组用药前、后改良rankin量表评分的比例经配对χ2检验，差异有显著性意义(p<0.01)；对照组用药前、后改良rankin量表评分的比例经配对χ2检验，差异有显著性意义(p<0.01)。fas分析、pps分析结果一致，见表60、表61、表62和表63。表60治疗前后组间rms状况评分分析(fas)表61治疗前后组间rms状况评分分析(pps)表62治疗前后组内rms状况评分分析(fas)表63治疗前后组内rms状况评分分析(pps)(3)nihss评分分析a.nihss评分较基线改善情况分析治疗前试验组和对照组nihss总积分均大于1。fas分析结果：治疗后nihss总积分≤1分为临床恢复良好，试验组临床恢复良好比例为2.7％，对照组临床恢复良好比例为0％。经χ2检验，组间差异无显著性意义(p>0.05)，结果见表64。pps分析结果：治疗后nihss总积分≤1分为临床恢复良好，试验组临床恢复良好比例为3.3％，对照组临床恢复良好比例为0％。经fisher检验，组间差异无显著性意义(p>0.05)，结果见表65。表64治疗后nihss评分较基线改善情况分析(fas)表65治疗后nihss评分较基线改善情况分析(pps)b.nihss积分情况分析fas分析结果：用药前两组nihss积分经似然比χ2检验，组间差异无显著性意义(p>0.05)；用药后两组nihss积分经t检验，组间差异无显著性意义(p>0.05)。试验组用药前、后nihss积分经非参数检验，差异有显著性意义(p<0.01)；对照组用药前、后nihss积分经配对t检验，差异有显著性意义(p<0.01)结果见表66。pps分析结果：用药前两组nihss积分经t检验，组间差异无显著性意义(p>0.05)；用药后两组nihss积分经似然比χ2检验，组间差异无显著性意义(p>0.05)，结果见表67。试验组用药前、后nihss积分经非参数检验，差异有显著性意义(p<0.01)；对照组用药前、后nihss积分经配对t检验，差异有显著性意义(p<0.01)结果见表67。表66治疗前后两组nihss积分分析(fas)表67治疗前后两组nihss积分分析(pps)(4)血脂分析用药前两组血脂(cho、tg、hdl-c、ldl-c)经t检验和似然比χ2检验，组间差异均无显著性意义(p>0.05)；用药后两组血脂(cho、tg、hdl-c、ldl-c)经t检验和似然比χ2检验，组间差异均无显著性意义(p>0.05)；试验组用药前、后血脂(cho、tg、hdl-c、ldl-c)经配对t检验、非参数检验，差异有显著性意义(p<0.05)；对照组用药前、后血脂(cho、tg、hdl-c、ldl-c)经配对t检验、非参数检验，差异有显著性意义(p<0.05)。fas分析、pps分析结果一致，见表68、表69。表68治疗前后血脂分析(fas)表69治疗前后血脂分析(pps)(5)不良事件在试验过程中，在服药期间出现不良事件，试验组有5例病例，4例为胃部不适，属轻度反应，其中3例予以停药观察，1例减少服药用，均未进行相应的治疗，停药、减量后症状消失；1例为感冒，食欲不振，患者自动停止服药，不良事件可能与治疗药物无关，不良反应发生率6.9％(5/72)。对照组有4例病例，3例为胃部不适，属于轻度反应，其中2例予以停药观察，1例减少服药用，均未进行相应的治疗，停药、减量后症状消失；1例为便秘，予以减少服用量，症状消失，不良反应发生率5.6％(4/72)。上述临床试验结果显示：(1)本发明实施例1中含有中药组合物的胶囊与银丹心脑通软胶囊治疗麻邦(中风病气虚血瘀证)，均能改善中医证候和临床症状体征。(2)在rms状况评分、中医证候积分、nihss评分等方面，本发明实施例1中含有中药组合物的胶囊与银丹心脑通软胶囊疗效相当。在中医证候疗效方面本发明实施例1中含有中药组合物的胶囊略优于银丹心脑通软胶囊。因为目前壮药制剂参考中药制剂进行研究，壮医证候及疗效标准与中医证候及疗效标准基本相同，故壮医的疗效与中医的疗效是基本相同，本发明实施例1中含有中药组合物的胶囊略优于对照组。(3)安全性方面，在服药期间两组均未发生明显的毒副作用和不良反应。综上所述，本发明实施例1中含有中药组合物的胶囊治疗麻邦(中风病气虚血瘀证)临床疗效好，安全性较高，值得临床推广使用，以治疗更多的麻邦(中风病气虚血瘀证)患者。表70中药组合物对比例1对比例2对比例3对比例4对比例5金边蚂蟥4份5份4份4份4份土鳖虫1份1份3份地龙2份2份2份3份黄精3份2份2份2份党参1份3份1份2份对比例1本对比例中药组合物的原料组成见表70。本对比例中药组合物的制备方法包括如下步骤：(1)制备金边蚂蟥提取物与实施例1不同的是，采用4kg金边蚂蟥，加8倍水(即32l纯净水)。(2)制备土鳖虫、地龙、黄精的提取物与实施例1不同的是采用土鳖虫干品1kg、地龙干品2kg、黄精3kg，第1次加10倍水(即60l的纯净水)煎煮，第2次加8倍水(即48l的纯净水)煎煮。(3)制备含有金边蚂蟥提取物以及土鳖虫、地龙、黄精、党参的提取物的中药组合物将上述土鳖虫、地龙、黄精的提取物与上述金边蚂蟥提取物混匀得到本对比例的中药组合物。胶囊制备：在中药组合物中按照常规比例加入适量硬脂酸镁及淀粉，混匀，装入胶囊，制备成为含有中药组合物的胶囊。采用与本发明实施例1的中药组合物相同的试验方法进行药效验证时发现，对比例1对治疗中风病后遗症的体症气短乏力、自汗这些方面远远不如本发明实施例1的含有中药组合物的胶囊对体症的改变效果明显。对比例2本对比例中药组合物的原料组成见表70。本对比例中药组合物的制备方法与对比例类似。采用与本发明实施例1的中药组合物相同的试验方法进行药效验证时发现，对比例2对治疗中风病中经络气虚血瘀证患者出现的感觉减弱以及发音障碍这些方面的效果远不如本发明实施例1的含有中药组合物的胶囊对体症的改变效果明显；对比例3本对比例中药组合物的原料组成见表70。本对比例中药组合物的制备方法与对比例类似。采用与本发明实施例1的中药组合物相同的试验方法进行药效验证时发现，对比例3对治疗中风病恢复期气虚血瘀证患者出现的自汗，气短乏力，脸色晄白，纳差以及总胆固醇(cho)、甘油三酯(tg)偏高的这些症状的效果远不如本发明实施例1的含有中药组合物的胶囊对体症的改变效果明显。对比例4本对比例中药组合物的原料组成见表70。本对比例中药组合物的制备方法与对比例类似。采用与本发明实施例1的中药组合物相同的试验方法进行药效验证时发现，对比例4对治疗中风病的后遗症半身不遂型出现的口舌歪斜、言语蹇涩或不语、凝视呆滞及视野模糊的这些症状的效果远不如本发明实施例1的含有中药组合物的胶囊对体症的改变效果明显。对比例5本对比例中药组合物的原料组成见表70。本对比例中药组合物的制备方法与对比例类似。采用与本发明实施例1的中药组合物相同的试验方法进行药效验证时发现，对比例5对治疗中风病的后遗症半身不遂型出现的肢体麻木、面瘫、共济失调以及意识水平低下的这些症状的效果远不如本发明实施例1的含有中药组合物的胶囊对体症的改变效果明显。当前第1页12