一种治疗糖尿病周围神经病变的药物及其制备方法与流程

本发明涉及一种治疗糖尿病周围神经病变的药物及其制备方法，属于药品技术的领域。

技术背景

糖尿病周围神经病变(dpn)是糖尿病三大并发症之一，也是糖尿病最常见、最复杂、最容易忽视的并发症。糖尿病患者终生dpn发生率超过60％，其中36％存在严重的难治性疼痛，出现dpn后，3年生存率约为53％。糖尿病周围神经病变不仅给患者带来剧烈的疼痛，引起糖尿病患者高致残率与致死率，还给患者带来了极大的精神和经济负担，严重影响生活质量。据中华医学会糖尿病学分会公布的《中国糖尿病及代谢综合征流行病学调查报告》显示，我国糖尿病的发生率呈现快速增长态势，国内大中城市成年人糖尿病的患病率已达到了11.66％，据此推算，我国城市糖尿病患者已超过了4100多万人，。

dpn的发病机制复杂多变，现代医学对于发病机制尚未明确，暂无可靠的治疗药物，临床疗效较为有限。而中医在糖尿病(消渴症)周围神经病变(痹证、血痹、痿证)积累了丰富的经验，对于早期诊断与治疗有着非常显著的优势。然而中医药治疗dpn尚有不足之处:(1)现代医学对于中药组方药理的研究甚少，诸如中成药、经验方、经方治疗dpn仅局限于疗效的分析，尚缺乏科学的依据来证明疗效；(2)中药治疗往往比同类口服西药价格高，而且疗程越长，价格的差异越明显；(3)对于中医药治疗dpn的副作用的研究甚少，机理不清。

中医药对于dpn的早期诊断与治疗有着非常显著的优势。经络舒宁胶囊在原方(丹参、三七、水飞蓟素)的基础上，将中药复方制剂提升为有效部位组合药物，以药效为评价指标，进行了有效部位拆方研究，确定了最佳有效部位组合的，不仅保留了原中药的性味功能，而且有明确复方制剂的药理、质量可控的化学成分体系、规范的制剂工艺等，从而保证了安全性和稳定性。

技术实现要素：
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本发明的目的，是提供一种治疗糖尿病周围神经病变的药物及其制备方法。本发明在丹参、三七、水飞蓟素的基础上，将中药复方制剂提升为有效部位组合药物，以药效为评价指标，进行了有效部位拆方研究，确定了最佳有效部位组合的，不仅保留了原中药的性味功能，而且有明确复方制剂的药理、质量可控的化学成分体系、规范的制剂工艺等，从而保证了安全性和稳定性。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案实现：一种治疗糖尿病周围神经病变的药物，按照重量份计算，主要由丹参总酚酸提取物8-28份、丹参酮提取物90-110份、三七总皂苷8-28份、水飞蓟素20-40份和微晶纤维素68-88份制备而成。

前述的治疗糖尿病周围神经病变的药物中，按照重量份计算，主要由丹参总酚酸提取物15-21份、丹参酮提取物95-105份、三七总皂苷15-21份、水飞蓟素25-35份和微晶纤维素75-81份制备而成。

前述的治疗糖尿病周围神经病变的药物中，按照重量份计算，主要由丹参总酚酸提取物18份、丹参酮提取物100份、三七总皂苷18份、水飞蓟素30份和微晶纤维素78份制备而成。

一种前述的治疗糖尿病周围神经病变的药物的制备方法，取上述原料，可加入辅料，可以不加辅料，制成药物制剂。

前述的治疗糖尿病周围神经病变的药物的制备方法，制剂为口服制剂。

前述的治疗糖尿病周围神经病变的药物的制备方法，所述口服制剂为胶囊剂、颗粒剂、片剂或丸剂。

前述的治疗糖尿病周围神经病变的药物的制备方法，所述胶囊剂这样制备：以上四味，粉碎成细粉，过筛，配研混匀，加入微晶纤维素，混匀，装入胶囊，即得。

实验例1工艺研究

1仪器与试药

auy220电子分析天平(shimadzu)；lrh-150s恒温恒湿培养箱(广东医疗器械厂)；远红外鼓风干燥箱(上海贺德实验设备有限公司)；丹酚酸提取物(批号：20120801，贵阳中医学院制剂实验室自制)；丹参酮提取物(批号：20121001，贵阳中医学院制剂实验室自制)；三七总皂苷提取物(昆明双星科技有限公司，批号：090910)；水飞蓟素；乳糖、可溶性淀粉、甘露醇、微晶纤维素、糊精均为药用级；其余试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1辅料种类的选择

2.1.1混合粉的制备

分别以糊精、可溶性淀粉、甘露醇、微晶纤维素、乳糖为辅料，设计全药粉及药粉与辅料的混合粉配伍的6个不同处方，按表1所示，称取主药与辅料(均过100目筛)，混匀，置干燥器内备用。

表1不同辅料与主药的配伍比例(g)

2.1.2休止角的测定

采用固定漏斗法，将3只漏斗串联并放置于水平固定的绘图纸上方1cm高度处，小心地将不同辅料制成的药粉分别沿斗壁倒入最上方的漏斗中，一直到漏斗下形成的圆锥体的尖端接触到最下面漏斗的下口为止，测出圆锥体底部的直径，计算出休止角α。处方见表2。

表2主药与辅料比例对堆密度及流动性的影响

休止角越小，说明流动性越好。一般认为α≤30°时流动性好，α≤40°时可以满足生产过程中对流动性的要求。由结果可知，除药粉加入乳糖外，其余各处方可满足生产要求，且药粉加入微晶纤维素后，休止角最小，流动性最好。

2.1.3堆密度的测定

采用量筒法，精密称取2g左右的混合粉，置10ml量筒中，在距离木板5cm的高度使量筒垂直自由落下，反复5次振动后，测定混合粉的体积，共测定5次，计算堆密度，结果见表2。

2.1.4吸湿率的测定

取底部盛有nacl过饱和溶液的玻璃干燥器，放入25℃的恒温培养箱内恒温24h，此时干燥器内的相对湿度为75％。在已恒重的称量瓶底部，放入厚约2mm的药粉，准确称量后置于nacl过饱和溶液的玻璃干燥器内(称量瓶瓶盖打开)，分别于2、4、6、8、10、12、24、48h后称量(m)，计算吸湿率，结果见图1。

注：吸湿率＝(m吸湿后－m吸湿前)/m吸湿前×100％

由图1可知，药粉加入微晶纤维素或可溶性淀粉后，吸湿率均有大幅度降低。而药粉加入糊精、乳糖或甘露醇后，吸湿率反而升高；且不同辅料中以微晶纤维素防潮性能最佳，所以选择微晶纤维素作为该药粉的成型辅料。

2.2辅料用量的选择

2.2.1混合粉的制备

分别以不同用量的微晶纤维素为辅料，设计药粉与不同用量辅料的混合粉配伍的6个处方，按表3所示，称取主药与微晶纤维素(均过100目筛)，混匀，置干燥器内备用。

表3不同用量的辅料与主药的配伍比例(g)

2.2.2休止角与堆密度的测定

按2.1.2、2.1.3项下方法测定休止角与堆密度，结果见表4。

表4主药与不同用量的辅料对堆密度及流动性的影响

主药加入不同用量的微晶纤维素后，休止角α均≤40°，可以满足生产过程中对流动性的要求。

2.2.3吸湿率的测定

按2.1.4项下方法测定吸湿率，结果见图2。

主药加入不同用量的微晶纤维素后，吸湿率均有不同程度的降低。且主药与微晶纤维素的比例为1:0.5时，防潮性能最佳，所以选择1:0.5为药粉与微晶纤维素的最佳成型比例。

2.3堆密度及空囊壳的选择

按照2.1.3项下方法测定胶囊内容物的堆密度,以确定空囊壳的型号。结果见表5。

表5胶囊内容物堆密度的测定结果

由结果可知，5次测定结果的平均值为0.54g/ml。根据临床及药效学实验结果已知每次服用生药量为0.17g，算得微晶纤维素的用量为0.08g，药粉总重0.25g。由堆密度和质量求得近似容量为0.46ml。由胶囊号码与近似容积的关系选择1号空胶囊(0.48ml±10％)为宜，每粒胶囊装量为0.25g。

2.4胶囊内容物休止角的测定

按照2.1.2项下方法测定胶囊内容物的休止角，5次测定结果休止角平均值为33.88°，表明本品流动性好，易于分装。

2.5临界相对湿度(crh)的测定

将制备好的胶囊内容物干燥至恒重后，平铺在已恒重的称量瓶底部(厚度约2mm)，精密称定后分别置于盛有不同浓度硫酸和不同盐过饱和溶液的干燥容器内(称量瓶瓶盖打开)，于25℃恒温培养箱中保持7d后称重，计算吸湿率，结果见表6、图3。

表6临界相对湿度的测定结果

由结果可知，胶囊内容物在相对湿度57.7％以上其吸湿率迅速上升。以吸湿率为纵坐标，相对湿度为横坐标作图，通过吸湿曲线的二次线性拟合，得曲线方程；通过吸湿曲线的切线作图，得到该胶囊内容物的临界相对湿度(crh)为66％。

3结论

本处方由丹参总酚酸、总丹参酮、三七总皂苷和水飞蓟素组成，比较容易吸湿。本实验通过对5种常用辅料的筛选，比较各辅料的吸湿性和流动性。实验结果表明，不同辅料对处方均有不同程度的影响，其中以微晶纤维素降低吸湿性的效果最佳，流动性最好，有助于控制装量差异，增加稳定性，且成本较低，有利于工业化大生产。

临界相对湿度能反映药物的吸湿情况，同时也以此来确定生产时的环境湿度。由实验结果得知，该胶囊内容物的临界相对湿度为66％，因此要求在生产中胶囊成型的环境湿度必须控制在66％以下，可以防止因药粉的吸湿而结块、潮解从而导致药物降解，甚至变质。

实验例2药效研究

一、经络舒宁对糖尿病动物周围神经病变的保护作用

1.实验材料

1.1实验动物

8周龄雄性sd大鼠，体重180～220g，购自长沙市天勤生物技术有限公司，许可证号：scxk(湘)2015-0003。动物饲养环境：温度25±2℃，湿度50±5％，光照周期12小时，自由饮食饮水，大鼠清晰盘每天同一时间清洗一次。

1.2动物饲料

普通饲料采用清洁级维持饲料；高脂高糖饲料由贵阳中医学院药剂实验室自制，配方为普通饲料：蛋黄：白砂糖：猪油＝55:15:15:15，为确保清洁，新配制的饲料在一周内喂完。

1.3药物及试剂

链脲佐菌素(streptozotocin，stz)，美国sigma公司；柠檬酸，上海化学试剂总厂(批号：20140209)；柠檬酸三钠，重庆川东化工有限公司(批号：20110601；)盐酸二甲双胍肠溶片，贵州圣济堂制药有限公司(批号：20150717)；

甘油三酯(tg)测试盒，南京建成生物工程研究所(批号：20150720)；总胆固醇(t-cho)测试盒，南京建成生物工程研究所(批号：20150715)；高密度脂蛋白胆固醇(hdl-c)测试盒，南京建成生物工程研究所(批号：20150919)；低密度脂蛋白胆固醇(ldl-c)测试盒，南京建成生物工程研究所(批号：20150919)；糖化血红蛋白(ghb)测试盒，南京建成生物工程研究所(批号:20150928)。

1.4主要仪器

accu-chekperforma卓越型血糖仪，罗氏诊断产品有限公司；高速离心机，上海安亭科学仪器厂；phs-3b精密ph计，上海虹益仪器仪表有限公司；auy220型电子分析天平，日本岛津公司；tu-1810紫外可见分光光度计，北京普析通用仪器有限责任公司。

2.实验方法

2.1stz溶液配制

2.10g柠檬酸、2.94g柠檬酸钠分别溶于双蒸水，定容至100ml。取上述柠檬酸液各50ml，充分混匀，调节使ph在4.2-4.5范围内，缓冲液4℃保存备用。

称取100.0mgstz溶于5ml缓冲液中，在冰水浴中按25mg/kg腹腔注射，stz液临用时配制且在30min内注射完毕。

2.2模型建立及分组

120只清洁级sd雄性大鼠，适应性饲养一周后，随机分为正常对照组(15只)与造模组(105只)，正常对照组喂以普通饲料，造模组喂以高脂高糖饲料，每周记录体重。8w时，将造模组在禁食不禁水12小时条件下腹腔注射预冷的stz液，注射完毕后的大鼠自由进食、饮水，72h后采血测随机血糖，选择大于11.1mol/l的造模成功大鼠进行分组，正常对照组注射等量柠檬酸缓冲液进行实验。

实验共分7组：正常对照组、模型组、弥可保组、经络舒(jls)低剂量组、经络舒(jls)高剂量组、经络舒宁(jlsn)低剂量组、经络舒宁(jlsn)高剂量组。

2.3指标及检测方法

2.3.1坐骨神经传导速度测定

以10％水合氯醛为麻醉剂，根据大鼠体质量，按350mg/kg标准腹腔注射麻醉，麻醉后俯卧位固定。在右侧坐骨切迹处插入刺激电极，记录电极置于右足底第2趾间，参考电极在刺激电极与记录电极中间。用单脉冲方波刺激，波宽0.1ms，刺激强度1.5倍阈值，每2个刺激之间间隔5s以上。计算机记录从刺激神经开始到远端肌肉出现动作电位的时间，即潜伏期。重复测定10次，计算平均值。将动物后足以自然肢体状态与脊柱成45°角向斜后方拉直，沿动物体表准确测定刺激电极到记录电极之间的距离。代入公式：mncv(m/s)＝刺激电极与记录电极间的距离/潜伏期，求算出坐骨结节到踝关节处的坐骨神经传导速度。

2.3.2各组大鼠血清sod、mda含量比较

大鼠坐骨神经传导速度测定完成后，腹主动脉取血，3000r/min离心10min分离血清，于-20℃保存待测，操作严格按照说明书进行。

2.3.3光镜观察坐骨神经形态的病理变化

处死大鼠后，取出右侧坐骨切迹至远端的2cm坐骨神经，冷生理盐水冲洗，放入4％多聚甲醛中固定，常规脱水，石蜡包埋，苏木素-伊红染色，光镜下观察经络舒宁胶囊对大鼠坐骨神经形态结构的影响。以坐骨神经纤维结构模糊、排列紊乱；轴索萎缩、变性、大小形态不规则；髓鞘结构模糊、变性；雪旺细胞减少或变性等为阳性。至给药8周实验结束时，正常对照组、模型组、弥可保组、jls低剂量组、jls高剂量组、jls低剂量组、jls高剂量组大鼠分别为9、7、8、7、7、7、7只。

2.3.4数据处理

采用spss16.0软件进行统计分析，实验数据以均数±标准差表示，组间比较采用单因素方差分析；方差不齐时，采用kruskal-wallish检验，p<0.05为差异有统计学意义。

3.结果

3.1各组大鼠坐骨神经传导速度比较

与正常组相比，模型组大鼠坐骨神经传导速度明显减慢，具有显著性差异(p<0.01)，各治疗组除经络舒低剂量组外均可延缓坐骨神经传导速度的减慢，其中经络舒高剂量组疗效最优，与正常组相比无显著性差异(p>0.05)，结果见表7与图4。

表7各组大鼠坐骨神经传导速度比较(m/s)

注：与正常组比较，^*p<0.05，^**p<0.01；与模型组比较，^#p<0.05，^##p<0.01

3.2各组大鼠血清sod、mda含量比较

与正常组比较，模型组sod显著下降，mda显著上升，差异具有统计学意义(p<0.01)；经络舒与经络舒宁高剂量组血清sod活性显著高于模型组(p<0.05)及低剂量组(p>0.05)；各给药组除经络舒低剂量组外mda水均显著低于模型组(p<0.05)，经络舒宁高剂量组mda降低效果最明显，各组组间比较无显著性差异(p>0.05)，结果见表8。

表8各组大鼠血清sod、mda含量比较(x±s，nmol/ml)

注：与正常组比较，^*p<0.05，^**p<0.01；与模型组比较，^#p<0.05，^##p<0.01

3.3光镜观察坐骨神经形态的病理变化

正常组大鼠在给药8周后坐骨神经纤维排列规则，形态正常，神经纤维轴突及其周围髓鞘均染成紫红色，神经纤维中央可见一条线条被染成深紫色，即为轴索，轴突外围有髓鞘包围，片中可见网状结构的神经角质网是因髓磷脂在制片过程中被溶解导致。在髓鞘边缘紧贴髓鞘可见卵圆形的schwann细胞核。模型组大鼠给药8周后坐骨神经可见明显的损伤变化，神经纤维变细且排列紊乱，轴索萎缩甚至消失，髓鞘空泡变性，雪旺细胞减少。各给药组大鼠给药8周后坐骨神经也出现类似于模型组的病理变化，但均有不同程度的减轻，其中阳性弥可保组与经络舒宁高剂量组优于其他组。各组大鼠坐骨神经病理形态学改变见图5和图6。

二、对糖尿病动物感觉神经的影响

1.实验材料

1.1实验动物

4周龄c57bl/j小鼠150只，雄性，体重18-22g，购自长沙天勤生物技术有限公司，动物合格证号：scxk(湘)2015-0007。8周龄雄性sd大鼠，体重180～220g，购自长沙市天勤生物技术有限公司，许可证号：scxk(湘)2015-0003。动物饲养环境：温度25±2℃，湿度50±5％，光照周期12小时，自由饮食饮水，动物垫料每天同一时间清洗一次。

1.2动物饲料

普通饲料采用清洁级维持饲料；高脂高糖饲料由贵阳中医学院药剂实验室自制，配方为普通饲料：蛋黄：白砂糖：猪油＝55:15:15:15，为确保清洁，新配制的饲料在一周内喂完。

1.3药物及试剂

链脲佐菌素(streptozotocin，stz)，美国sigma公司；柠檬酸，上海化学试剂总厂(批号：20140209)；柠檬酸三钠，重庆川东化工有限公司(批号：20110601；)甲钴胺(弥可保)，卫材(中国)药业有限公司，批号：1411052。

1.4主要仪器

accu-chekperforma卓越型血糖仪，罗氏诊断产品有限公司；phs-3b精密ph计，上海虹益仪器仪表有限公司；auy220型电子分析天平，日本岛津公司；恒温水浴箱；yls-3e型电子压痛仪，济南益延科技发展有限公司。

2实验方法

2.1小鼠压痛值的测定

实验前将小鼠右后爪掌部做定点标记，置于安静环境中一段时间，将小鼠在压痛仪上测定压痛值，以小鼠出现嘶叫、后爪收缩等疼痛逃避反应为判定指标。

2.2大鼠甩尾温度阈值的测定

将大鼠宽松限制在鼠笼内，尾尖置于恒温水浴箱内入水2cm左右，初始水温38℃，以每分钟2℃加热升高水温，记录大鼠因水温升高甩尾而离开水面时的温度，即为甩尾温度阈值。

2.3数据处理

采用spss16.0软件进行统计分析，实验数据以均数±标准差表示，组间比较采用单因素方差分析；方差不齐时，采用kruskal-wallish检验，p<0.05为差异有统计学意义。

3.结果

3.1小鼠压痛值的测定

与正常组比较，其余各组小鼠压痛阈值均明显降低，差异具有显著性(p<0.01或p<0.05)；与模型组相比，各给药组小鼠痛阈值均有不同程度的升高，其中经络舒宁高剂量组效果最优，与模型组相比具有显著性差异(p<0.05)，结果见表9和图7。

表9各组小鼠压痛阈值的比较(x±s，g)

注：与正常组比较，*p<0.05，**p<0.01与模型组比较，#p<0.05，##p<0.01

3.2大鼠甩尾温度阈值的测定

由表可知，与正常组比较，其余各组甩尾温度阈值均出现不同程度的上升，其中弥可保组升高幅度最小，且无显著性差异(p>0.05)，说明该药对甩尾温度有良好的改善作用；与模型组相比，除经络舒低剂量组外，其余各给药组甩尾温度阈值与模型组比较均有显著性差异(p<0.01)，结果见表10和图8。

表10各组大鼠甩尾温度阈值的比较(x±s，℃)

注：与正常组比较，*p<0.05，**p<0.01与模型组比较，#p<0.05，##p<0.01

与现有技术相比，本发明在丹参、三七、水飞蓟素的基础上，将中药复方制剂提升为有效部位组合药物，以药效为评价指标，进行了有效部位拆方研究，确定了最佳有效部位组合的，不仅保留了原中药的性味功能，而且有明确复方制剂的药理、质量可控的化学成分体系、规范的制剂工艺等，从而保证了安全性和稳定性。

附图说明

图1是不同处方混合粉的吸湿率；

图2是主药与不同用量的辅料对吸湿率的影响；

图3是临界相对湿度图；

图4是各组大鼠坐骨神经传导速度比较；

图5是各组大鼠血清sod含量比较；

图6是各组大鼠血清mda含量比较；

图7是各组小鼠压痛阈值的比较；

图8是各组大鼠甩尾温度阈值的比较。

下面结合实施例对发明作进一步的说明，但并不作为对本发明限制的依据。

具体实施方式：

实施例1

原料：丹参总酚酸提取物18g、丹参酮提取物100g、三七总皂苷18g、水飞蓟素30g和微晶纤维素78g。

工艺：丹参总酚酸提取物、丹参酮提取物、三七总皂苷和水飞蓟素，粉碎成细粉，过筛，配研混匀，加入微晶纤维素，混匀，装入胶囊，即得。

规格：0.5g/粒。

用法用量：每次2-3粒，每天2-3次。

功能主治：益气养阴，扶正和营，行滞通脉，活络止痛之功效，用于糖尿病外周神经炎，糖尿病植物神经功能紊乱。

实施例2

原料：丹参总酚酸提取物21g、丹参酮提取物105g、三七总皂苷21g、水飞蓟素35g和微晶纤维素81g。

工艺：丹参总酚酸提取物、丹参酮提取物、三七总皂苷和水飞蓟素，粉碎成细粉，过筛，配研混匀，加入微晶纤维素，混匀，装入胶囊，即得。

规格：0.5g/粒。

用法用量：每次2-3粒，每天2-3次。

功能主治：益气养阴，扶正和营，行滞通脉，活络止痛之功效，用于糖尿病外周神经炎，糖尿病植物神经功能紊乱。

实施例2

原料：丹参总酚酸提取物15g、丹参酮提取物95g、三七总皂苷15g、水飞蓟素25g和微晶纤维素75g。

工艺：丹参总酚酸提取物、丹参酮提取物、三七总皂苷和水飞蓟素，粉碎成细粉，过筛，配研混匀，加入微晶纤维素，混匀，装入胶囊，即得。

规格：0.5g/粒。

用法用量：每次2-3粒，每天2-3次。

功能主治：益气养阴，扶正和营，行滞通脉，活络止痛之功效，用于糖尿病外周神经炎，糖尿病植物神经功能紊乱。