本发明属于中药技术领域，具体涉及一种预防和/或治疗高血脂症的中药组合物及其制备方法。
背景技术：
高脂血症是由于脂肪代谢异常导致血浆中脂质水平高于正常的一种病症。本病属中医“痰浊”“血瘀”范畴。《内经》中有关于脂和膏的论述《灵枢·卫气失常》曰人有肥有膏有肉，眉肉坚，皮满者，肥，眉肉不坚，皮缓者，膏……”。糖尿病属中医“消渴”范畴。研究表明，我国糖尿病患者中血脂异常人群占了很大比例且血脂异常是糖尿病患者心血管并发症的重要危险因素。
中药因在治疗糖尿病高脂血症方面有着疗效肯定、持续、等独特优势而受到越来越多的追捧。如中国专利申请cn103083582a公开了一种治疗高血脂的药物，该药物由下列原料按重量克组成：山楂、丹参、川穹、决明子、车前草、柴胡、青蒿、水蛭、苍术、三七、菊花、荷叶、桃仁、红花、银杏叶、西洋参、红曲、薏米、葛根、冬青子、茵陈防己、茯苓、白术、陈皮等。如中国专利申请cn104306467a公开了一种治疗高血脂症的药剂，包括篇蓄、茯苓、肉桂、米念芭、水毛射、辣椒叶、灯笼花、樱桃叶、阳桃、阴地蕨、山楂、如意草、羽裂星蕨、鸡内金、观音竹、玉竹、红皮、厚朴、麦瓶草、牛马藤、走马风、儿茶、苦荬菜、沙枣、柞树皮和甘草。上述中药对高脂血症均具有较好的疗效，但对糖尿病高脂血症疗效不明显，且中药具有服用周期长的特性，需要长期服用。一般地讲，中药的副作用比人工合成的西药要小些，但中药多是天然药物，有效成分比较复杂，若要长期服用，则会对肝肾造成较大的负担，甚至不可避免地会对人体的肝肾造成损坏。
此外，目前对于中药有效成分的提取依然停留在传统的浸渍法、煎煮法、醇提法等阶段。煎煮法操作温度较高，容易对热敏性有效成分影响较大，且提取液中杂质较多，不利于后续工作的进行。醇提法，操作温度较低，但有效成分提取率较低。近年来出现了一些新的提取方法，如微波、超临界提取剂超声波等，由于强化内部传递过程，可在较低温度下进行提取，但其需要大型的设备，不适用于大面积工业化应用。
因此，有必要提供一种治疗效果显著，对肝脏负担小，毒性小的治疗糖尿病高脂血症的药物，除此之外，还有必要提供一种提取时间短、有效成分得率高、热敏性有效成分损失少的中药提取方法。
技术实现要素：
本发明旨在提供一种预防和/或治疗高血脂症的中药组合物及其制备方法，该中药组合物治疗糖尿病高血脂症具有显著的疗效，且毒性小，对肝肾功能影响小，可长期服用的优点。
为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案：一种预防和/或治疗高血脂症的中药组合物，由以下重量的制备原料制备而成：人参3～12克、黄芩15～60克、炒白术5～20克、炒酸枣仁15～60克、丹参15～60克、川芎6～24克、葛根15～60克、山楂15～60克、甘草6～24克、三七5～20克、水蛭2～10克和大黄1～6克。
进一步地，所述的中药组合物由以下重量的制备原料制备而成：人参5～10克、黄芩20～50克、炒白术6～15克、炒酸枣仁20～50克、丹参20～50克、川芎10～20克、葛根20～50克、山楂20～50克、甘草10～20克、三七6～15克、水蛭3～8克和大黄2～5克。
进一步地，所述的中药组合物由以下重量的制备原料制备而成：人参6克、黄芩30克、炒白术10克、炒酸枣仁30克、丹参30克、川芎12克、葛根30克、山楂30克、甘草12克、三七10克、水蛭5克和大黄3克。
进一步地，所述的中药组合物由以下重量的制备原料制备而成：人参5克、黄芩20克、炒白术6克、炒酸枣仁20克、丹参20克、川芎10克、葛根20克、山楂20克、甘草10克、三七6克、水蛭3克和大黄2克。
进一步地，所述的中药组合物由以下重量的制备原料制备而成：人参10克、黄芩50克、炒白术15克、炒酸枣仁50克、丹参50克、川芎20克、葛根50克、山楂50克、甘草20克、三七15克、水蛭8克和大黄5克。
相应地，本发明还提供了一种制备上述述的中药组合物的方法，包括以下步骤：
a)预处理：取人参、黄芩、炒白术、炒酸枣仁、丹参、川芎、葛根、山楂克、甘草、三七、水蛭和大黄，洗净，晾干，粉碎成粗粉，备用；
b)一次辐照处理：往上述粗粉中加入粗粉3～6倍量的60～90％的乙醇，得混合液，加入0.2～0.5wt％的硫酸亚铁，在室温下用60co-γ射线辐照处理5～10min，得中药粗提取物；其中辐照剂量为0.3～0.8kgy；
c)脉冲电磁场处理：将上述中药粗提取物于常温下暴露于高压脉冲电磁场中处理5～15min，得中药提取物；其中，脉冲电磁场场强控制在10～15kv/cm，频率为10～20hz；
d)二次辐照处理：往上述中药提取物加入核酸，于室温下用60co-γ射线辐照处理30～60min，其中辐照剂量为3～5kgy；
e)将上述辐照处理过后的中药提取物过滤1～2次，合并滤液，将滤液浓缩至30～40℃下测相对密度为1.10～1.30g/ml的浸膏，喷雾干燥，得中药组合物。
进一步地，所述步骤b)中所述辐照剂量为0.5kgy。
进一步地，所述步骤d)中所述辐照剂量为5kgy。
此外，本发明另一目的在于提供上述中药组合物或通过上述方法制备得到的中药组合物用于制备预防和/或治疗糖尿病心脑血管疾病药物中的用途。
本发明另一目的在于提供一种药物，包含上述的中药组合物或通过上述方法制备得到的中药组合物。
进一步地，所述药物还包括药学上可接受的载体。
进一步地，所述药物的剂型为口服剂。
脉冲电磁场是一项高效、节能的新技术，发明人发现将其与有机溶剂提取结合能够有效的破碎植物细胞壁，促进生物活性物质的溶出，且能使提取时间从原来的3～6h缩短到1～1.5h，并且总黄酮的得率也有明显上升(能使总黄酮的含量提高131.7％)。但也存在一个缺陷，需要控制电磁场场强在较高的幅度(30～45kv/cm)和较高的频率(100～200hz)才能达到效果。为了克服上述缺陷，发明人经过大量的资料调研和试验研究，终于发现，在进行脉冲电磁场处理前先进行辐照处理，以较低幅度的电磁场场强和较低的频率仍然能够达到需要的效果，并且提取时间也进一步缩短至30min内，得率能够提高64.2％。需要特别说明的是，在辐照处理过程中需要加入催化剂硫酸亚铁，如果不加入硫酸亚铁，其会导致总黄酮的得率下降43.1％。上述特殊效果产生的机制尚未清楚，发明人认为，可能是辐照处理，并且在催化剂硫酸亚铁的作用下，使水分子分解成了大量具有较高反应活性的粒子，如e-aq、·oh等，这些活性粒子的存在提高了脉冲电磁场对细胞壁的破坏率，从而即使以较低幅度的电磁场场强和较低的频率仍然能够实现快速提取，且得率有显著提高。
另外值得提出的是，由于本发明配方含药材较多，长期服用，容易对肝脏产生较大的负担。而神奇的是，利用再一次的辐照处理，可以明显降低本发明药物的毒性，通过试验二证明，加入本发明药物共培养后，正常肝细胞的存活率仍然高达100％，而加入不经二次辐照处理得到的中药组合物共培养后，正常肝细胞的存活率下降至68％，同时试验三也表示，本发明中药组合物具有改善dm高血脂症小鼠肝功能的作用，上述特殊效果的实现，发明人认为可能是辐照处理能够使中药组合物中的一些毒性物质，如黄曲霉素，降解成无害的小分子。需要说明的，在二次辐照处理过程中需要加入核酸，有利于防止二次辐照对中药组合物中的有效成分的破坏。
本发明具有以下优点：
1)本发明治疗dm高脂血症的药物，疗效确切，对肝肾损伤小，可长期服用。
2)本发明提供的药物能够显著降低dm高脂血症小鼠中血脂的水平，降低模型小鼠fbg的含量，改善dm高脂血症小鼠的肝功能，而一般现有的治疗高脂血症的药物对小鼠fbg的含量不具有降低的作用，同时也不具有改善dm高脂血症小鼠的肝功能的效果。
具体实施方式
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下实施例。
核酸为食品级核酸，购自山东康勤生物科技有限公司，cas号:63231-63-0。
实施例1一种预防和/或治疗糖尿病高脂血症的中药组合物
本发明所述实施例1由以下重量的制备原料制备而成：人参6克、黄芩30克、炒白术10克、炒酸枣仁30克、丹参30克、川芎12克、葛根30克、山楂30克、甘草12克、三七10克、水蛭5克和大黄3克。
实施例2一种预防和/或治疗糖尿病高脂血症的中药组合物
本发明所述实施例2由以下重量的制备原料制备而成：人参5克、黄芩20克、炒白术6克、炒酸枣仁20克、丹参20克、川芎10克、葛根20克、山楂20克、甘草10克、三七6克、水蛭3克和大黄2克。
实施例3一种预防和/或治疗糖尿病高脂血症的中药组合物
本发明所述实施例3由以下重量的制备原料制备而成：人参10克、黄芩50克、炒白术15克、炒酸枣仁50克、丹参50克、川芎20克、葛根50克、山楂50克、甘草20克、三七15克、水蛭8克和大黄5克。
实施例4本发明预防和/或治疗糖尿病高脂血症的中药组合物的制备
a)预处理：取实施例1所述原料，分别洗净，晾干，粉碎成粗粉，备用；
b)一次辐照处理：往上述粗粉中加入粗粉5倍量的75％的乙醇，得混合液，加入0.3wt％的硫酸亚铁，在室温下用60co-γ射线辐照处理8min，得中药粗提取物；其中辐照剂量为0.5kgy；
c)脉冲电磁场处理：将上述中药粗提取物于常温下暴露于高压脉冲电磁场中处理10min，得中药提取物；其中，脉冲电磁场场强控制在12kv/cm，频率为15hz；
d)二次辐照处理：往上述中药提取物加入核酸，于室温下用60co-γ射线辐照处理45min，其中辐照剂量为5kgy；
e)将上述辐照处理过后的中药提取物过滤2次，合并滤液，将滤液浓缩至35℃下测相对密度为1.20g/ml的浸膏，喷雾干燥，得中药组合物。
对比例1、预防和/或治疗糖尿病高脂血症的中药组合物的制备
对比例1与实施例4的区别在于，去掉b)一次辐照处理步骤，其余参数与操作参考实施例4。
对比例2、预防和/或治疗糖尿病高脂血症的中药组合物的制备
对比例2与实施例4的区别在于，b)一次辐照处理步骤中，不加入催化剂硫酸亚铁，其余参数与操作参考实施例4。
对比例3、预防和/或治疗糖尿病高脂血症的中药组合物的制备
s1、预处理：取实施例1所述原料，分别洗净，晾干，粉碎成粗粉，备用；
s2、乙醇提取：往上述粗粉中加入粗粉5倍量的75％的乙醇，在室温下回流提取3次，每次3h，合并提取液，过滤，将滤液浓缩至35℃下测相对密度为1.20g/ml的浸膏，喷雾干燥后加入粉碎过后的煅烧珍珠母、磁石，得中药组合物。
对比例4、预防和/或治疗糖尿病高脂血症的中药组合物的制备
对比例4与实施例4的区别在于，去掉d)二次辐照处理步骤，其余参数与操作参考实施例4。
对比例5、预防和/或治疗糖尿病高脂血症的中药组合物的制备
对比例5与实施例4的区别在于，d)二次辐照处理步骤中不加入核酸，其余参数与操作参考实施例4。
试验例一、不同制备方法对中药组合物中总黄酮含量的影响
1.1材料
本发明实施例4以及对比例1～3制备得到的中药组合物。试验分析用芦丁标准品，购于中国医药集团上海化学试剂公司，所有分析用试剂均为分析纯。
1.2试验方法
1.2.1标准曲线的绘制
准确称取于120℃干燥至恒重的无水芦丁(作黄酮标准对照)9.5mg，用60％的乙醇定容于50ml容量瓶中，摇匀，得到浓度为0.19mg/ml的标准品溶液，作为贮备液备用。准确量取此液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0ml于25ml容量瓶中，分别加5％亚硝酸钠和10％硝酸铝溶液各0.3ml，放置6min。加1mol/ml氢氧化钠溶液4.0ml，分别用30％的乙醇稀释至刻度，混匀，放置16min，并根据标准曲线求出总黄酮浓度-吸光度回归方程，得出总黄酮浓度计算方式。
1.2.2样品中总黄酮含量的测定
1.2.2.1样品液的制备
准确称取实施例4和对比例1～3制备得到的中药组合物样品各5g，用95％乙醇回流提取5h(温度恒定于70℃)，过滤，用旋转蒸发仪减压浓缩至近干，加10ml蒸馏水溶解后，用20ml正丁醇萃取至水液无黄酮反应为止。减压回收正丁醇至近干，加适量30％乙醇溶解，过滤，移至250ml容量瓶中，再用30％乙醇稀释至刻度，摇匀，此即为样品提取液。精密吸取此溶液5ml，置于25ml容量瓶中，加30％乙醇稀释至刻度，得各待测样品液。
1.2.2.2样品液的测定
准确吸取各待测样品液5ml，其余操作同标准曲线制作的测定方法。测定吸光度后，用公式计算总黄酮的含量，每组重复测定3次，取平均值。
2.结果分析
2.2样品中总黄酮的含量
表1样品中总黄酮含量
结果分析：结果表明，在乙醇回流提取的基础上结合脉冲电磁场，能够使提取物中总黄酮的含量提高131.7％；从对比例1和对比例2的试验结果可以明显看出，在进行脉冲电磁场处理前，增加辐照处理步骤，能够使总黄酮的得率提高64.2％，而如果在辐照过程中不加入催化剂硫酸亚铁，其会导致总黄酮的得率下降43.1％。
试验例二、二次辐照处理对中药组合物毒性的影响
2.1材料
取实施例4以及对比例4制备得到的中药组合物各5g，用10ml蒸馏水溶解，得各样品待测液，人正常肝细胞hl-7702(l02)，购自上海君瑞生物技术有限公司。
2.2方法
将人正常肝细胞hl-7702(l02)以每孔3000～6000个细胞的数量接种到96孔板，待细胞贴壁后，加入上述各样品待测液，培养48h，每孔加入10μl浓度为5mg/ml的mtt溶液，继续培养4h，然后弃去培养液每孔加入100μl的dmso，于恒速摇床上避光摇晃。待结晶物充分溶解后，在酶标仪上读取od值(波长570nm，参考波长630nm)，读取每孔的吸光值，计算各组细胞存活率。
2.3结果
表2二次辐照处理对中药组合物毒性影响的结果
2.4结果分析
加入经二次辐照处理后制备得到的中药组合物共培养后，肝细胞的存活率仍然高达100％，而去掉二次辐照处理制备得到的中药组合物，其与肝细胞共培养后，细胞存活率有了显著的下降，这说明，二次辐照处理能够有效降低中药组合物的毒性。
试验例三、中药组合物对糖尿病高血脂症小鼠血脂水平及肝功能的影响
3.1试验动物与饲料昆明小鼠，雌性，体重25～30g，60只，由广州实验动物中心提供。动物架笼饲养，每笼4～6只，每日清扫一次以保持笼内干净。实验室保持安静通风，室温20℃～25℃，湿度70±15％。大鼠基础饲料由新疆实验动物中心提供，饲料总热量15.5kj/g(含碳水化合物50％、脂肪10％、蛋白质20％)。高脂饲料自制，组成为：市售精面50％、基础饲料0％、猪油20％、蔗糖10％、蛋黄7％、胆固醇25％、牛胆盐0.5％，充分混合，烤熟后备用。
3.2试验方法
3.2.1试验分组与建模wistar大鼠适应性喂养1周后，取其中50只大鼠，给予高脂饲料喂养4周后，尾静脉注射alx60mg/kg，1周后，检测空腹血糖≥11.1mmol/l后将动物随机分为5组(模型组、实施例4组、对比例4组、对比例5组以及阳性对照组(中国专利申请cn102343053a所述中药)，另外10只大鼠作为空白组，给予正常饲料，尾静脉注射等体积生理盐水。
3.2.2方法上述各组动物连续灌胃4周，每周观察体质量、空腹血糖(fbg)的变化，与末次灌胃1h禁食14h后，处死动物，分离血清，检测甘油三酯(tg)、总胆固醇(tc)、高低密度脂蛋白胆固醇(hdl-c)、低密度脂蛋白胆固醇(ldl-c)以及血清中丙氨酸基转移酶(alt)和天冬氨酸氨基转移酶(ast)。
3.3统计学分析试验数据采用spss16.0软件分析，组间均值比较采用单因素方差分析、mann-whitney检验。
4.结果
表3对dm高脂血症模型小鼠体质量的影响(
注：与空白组相比，*p＜0.05，**p＜0.01，与模型组相比，#p＜0.05，##p＜0.01。
结果显示，模型组小鼠体质量与空白对照组相比有显著差异；灌胃实施例4组中药组合物第2～4周后，与模型组相比，存在显著性差异，与空白组相比无统计学意义；灌胃对比例5组和阳性对照组药物第3～4周后与模型组相比具有显著性差异。
表4对dm高脂血症模型小鼠fbg的影响
注：与空白组相比，*p＜0.05，**p＜0.01；与模型组相比，#p＜0.05，##p＜0.01。
结果显示，模型组小鼠血清fbg均值极显著高于空白组，给药各组均能降低小鼠血清fbg水平。与模型组相比，灌胃实施例4组制备得到的中药组合物第2～4周fbg连续有显著降低，其中第3～4周fbg下降与模型组相比具有极显著性差异，这说明，本发明中药组合物能有效降低dm高脂血症小鼠的血糖水平。对比例5组同期fbg也持续低于模型组，至第3周差异显著；阳性对照组与模型组相比，差异不显著，无统计学意义。
表5对dm高脂血症模型小鼠血脂水平的影响(
注：与空白组相比，*p＜0.05，**p＜0.01；与模型组相比，#p＜0.05，##p＜0.01。
结果显示，与空白组比较，模型组小鼠血清中tg、tc、hdl-c和ldl-c的含量均有极显著升高。与模型组比较，灌胃实施例4制备得到的中药组合物以及阳性对照组药物4周后，tg、tc、hdl-c和ldl-c均显著降低，表明两者均具有显著的降低血清中血脂水平的作用，而实施例4组效果更显著；灌胃对比例5组中药组合物4周后，与模型组相比差异不显著，无统计学意义。这可能是因为，核酸的加入能够降低了二次辐照处理对中药有效成分的破坏。
表6对dm高脂血症小鼠血清中alt以及ast的影响
注：与空白组相比，*p＜0.05，**p＜0.01；与模型组相比，#p＜0.05，##p＜0.01。
当肝损伤时，血清中alt以及ast的含量会明显升高，故两者能敏感地提示肝细胞的损伤及损伤的程度。试验结果表明，与模型组相比，灌胃本发明实施例4组制备得到的中药组合物4周后，可以使dm高脂血小鼠血清中alt以及ast的水平明显下降，差异具有显著性；对比例4组和阳性对照组与模型组相比，差异不显著，不具有统计学意义。这说明，二次辐照处理能够降低中药组合物对肝的影响，改善dm高脂血症小鼠的肝功能，同时也说明现有的治疗高脂血症药物会对肝功能造成一定损失，不宜长期服用。
结论，本发明中药组合物能够显著降低dm高脂血症小鼠中血脂的水平，降低模型小鼠fbg的含量，改善dm高脂血症小鼠的肝功能，而一般现有的治疗高脂血症的药物对小鼠fbg的含量不具有降低的作用，同时也不具有改善dm高脂血症小鼠的肝功能的效果。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。