【技术领域】
本发明涉及植物多酚提取技术领域领域，具体涉及一种芒果叶多酚的提取方法。
背景技术：
我国芒果叶资源丰富，芒果叶中富含芒果苷、槲皮素、金丝桃苷、芒果甘、原儿茶酸等多酚类物质，这些化合物具有抗氧化、清除自由基和抗衰老等功能，在医疗、食品、日用化学品等方面具有重要应用价值。目前芒果叶多数被作为废弃物丢弃，深加工应用的很少，有少数用来提取多酚研究，主要提取方法为浸提法和萃取法，但具体的技术操作只停留在实验室阶段，得率低，纯度差，操作复杂，对设备要求高，提取成本高，不适合规模生产。因此，优化提取工艺，寻求一种操作简单，成本低，得率高，纯度高的提取方法是当前要解决的问题。
技术实现要素：
针对上述问题，本发明要解决的技术问题是提供一种芒果叶多酚的提取方法，该方法通过超声波辅助酶解对芒果叶进行破壁、乙醇提取、螯合金属离子联合超滤进行除杂等一系列技术手段，使制得的多酚纯度和得率较高，且操作方法简单，设备要求低，提取成本低，适合大规模生产。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：
一种芒果叶多酚的提取方法，包括以下步骤：
(1)原料粉碎：将洗净的芒果叶放入干燥箱中，于55-65℃下烘干6-9h，粉碎，过40-50目筛，得到粉末，备用；
(2)提取：向上述粉末中加入所述粉末重量1.5-2.0％的纤维素酶、0.5-0.7％的果胶酶、0.2-0.4％的中性蛋白酶和70-80％的水混合搅拌均匀，并用超声波处理10-15min，停止超声，于42-54℃下水浴保温6-7h，得酶解液，将酶解液加入所述酶解液10-20重量倍的乙醇中提取30-40min，乙醇的体积浓度为35-50％，提取结束后，于2000-2500r/min下离心6-9min，过滤，收集滤液，重复提取3-4次，合并滤液，得提取液；
(3)纯化：向上述提取液中加入所述提取液重量0.2-0.5％的柠檬酸、0.6-0.8％的edta混匀，静置10-12h后，用截留分子量为1-4万的pes膜进行超滤，膜面流速为2.5-3m/s，操作温度为35-45℃，跨膜压力为0.2-0.3mpa；
(4)浓缩和干燥：将上述超滤后的滤液进行浓缩，干燥，得到芒果叶多酚粉末。
较优的，步骤(2)中，提取时，向粉末中加入所述粉末重量1.7％的纤维素酶、0.6％的果胶酶、0.3％的中性蛋白酶和75％的水混合搅拌均匀。
进一步地，步骤(2)中，所述的超声波的功率为150-250w，频率为25-35khz。
较优的，步骤(2)中，所述乙醇的体积浓度为40％。
进一步地，步骤(4)中，所述浓缩的温度为65-75℃。
进一步地，步骤(4)中，所述的干燥为低温真空干燥。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明多酚提取方法通过超声波辅助酶解对芒果叶进行破壁、乙醇提取、螯合金属离子联合超滤进行除杂等一系列技术手段，使制得的多酚纯度和得率较高，且操作方法简单，设备要求低，提取成本低，适合大规模生产。经检测，本发明方法的芒果叶多酚得率为10.1-12.9mg/g，纯度为94.18-96.82％。其中，提取步骤中，超声波可提高酶活力，加上纤维素酶、果胶酶和中性蛋白酶协同增效，加快酶反应速度，提高了芒果叶细胞的破碎和溶解程度，使多酚物质能最大程度的渗出，且果胶酶和中性蛋白酶还将细胞中的蛋白质和果胶溶解成小分子物质，降低了蛋白质和果胶的含量，进而减少了多酚类物质与蛋白质、多糖的结合，提高了游离多酚物质的含量，经乙醇多次提取，提高了得率；纯化步骤中，柠檬酸和edta均能螯合提取液中与多酚物质结合的金属离子，两者协同增效，螯合能力增强，使金属离子沉淀分离出来，提高了提取的纯度，最后用pes膜进行超滤，进一步去除了杂质，提高纯度。
【具体实施方式】
以下结合实施例对本发明的具体实施方式做进一步说明。
实施例1
本实施例一种芒果叶多酚的提取方法，包括以下步骤：
(1)原料粉碎：将洗净的芒果叶放入干燥箱中，于55℃下烘干6h，粉碎，过40目筛，得到粉末，备用；
(2)提取：向上述粉末中加入所述粉末重量1.5％的纤维素酶、0.5％的果胶酶、0.2％的中性蛋白酶和70％的水混合搅拌均匀，并用超声波处理10min，超声波的功率为150w，频率为25khz，停止超声，于42℃下水浴保温6h，得酶解液，将酶解液加入所述酶解液10重量倍的乙醇中提取30min，乙醇的体积浓度为35％，提取结束后，于2000r/min下离心6min，过滤，收集滤液，重复提取3次，合并滤液，得提取液；
(3)纯化：向上述提取液中加入所述提取液重量0.2％的柠檬酸、0.6％的edta混匀，静置10h后，用截留分子量为1万的pes膜进行超滤，膜面流速为2.5m/s，操作温度为35℃，跨膜压力为0.2mpa；
(4)浓缩和干燥：将上述超滤后的滤液进行浓缩，所述浓缩的温度为65℃，低温真空干燥，得到芒果叶多酚粉末。
实施例2
本实施例一种芒果叶多酚的提取方法，包括以下步骤：
(1)原料粉碎：将洗净的芒果叶放入干燥箱中，于65℃下烘干9h，粉碎，过50目筛，得到粉末，备用；
(2)提取：向上述粉末中加入所述粉末重量2.0％的纤维素酶、0.7％的果胶酶、0.4％的中性蛋白酶和80％的水混合搅拌均匀，并用超声波处理15min，所述的超声波的功率为250w，频率为35khz，停止超声，于54℃下水浴保温7h，得酶解液，将酶解液加入所述酶解液20重量倍的乙醇中提取40min，乙醇的体积浓度为50％，提取结束后，于2500r/min下离心9min，过滤，收集滤液，重复提取4次，合并滤液，得提取液；
(3)纯化：向上述提取液中加入所述提取液重量0.5％的柠檬酸、0.8％的edta混匀，静置12h后，用截留分子量为4万的pes膜进行超滤，膜面流速为3m/s，操作温度为45℃，跨膜压力为0.3mpa；
(4)浓缩和干燥：将上述超滤后的滤液进行浓缩，所述浓缩的温度为75℃，低温真空干燥，得到芒果叶多酚粉末。
实施例3
本实施例一种芒果叶多酚的提取方法，包括以下步骤：
(1)原料粉碎：将洗净的芒果叶放入干燥箱中，于60℃下烘干7h，粉碎，过45目筛，得到粉末，备用；
(2)提取：向上述粉末中加入所述粉末重量1.7％的纤维素酶、0.6％的果胶酶、0.3％的中性蛋白酶和75％的水混合搅拌均匀，并用超声波处理13min，超声波的功率为200w，频率为30khz，停止超声，于49℃下水浴保温6.5h，得酶解液，将酶解液加入所述酶解液15重量倍的乙醇中提取35min，乙醇的体积浓度为40％，提取结束后，于2300r/min下离心7min，过滤，收集滤液，重复提取3次，合并滤液，得提取液；
(3)纯化：向上述提取液中加入所述提取液重量0.3％的柠檬酸、0.7％的edta混匀，静置11h后，用截留分子量为3万的pes膜进行超滤，膜面流速为2.8m/s，操作温度为40℃，跨膜压力为0.25mpa；
(4)浓缩和干燥：将上述超滤后的滤液进行浓缩，所述浓缩的温度为70℃，低温真空干燥，得到芒果叶多酚粉末。
为了说明本发明芒果叶多酚的提取效果，申请人做了以下对比试验：试验分为第1组、第2组、第3组、对照组1、对照组2、对照组3、对照组4共7个小组，第1组、第2组、第3组分别使用实施例1、实施例2、实施例3的方法提取，对照组1在提取步骤中未添加纤维素酶和中性蛋白酶，其他步骤均与实施例3相同；对照组2在提取步骤中未添加果胶酶，其他步骤均与实施例3相同；对照组3在纯化步骤中未用柠檬酸和edta进行处理，其他步骤均与实施例3相同；对照组4在纯化步骤中未用柠檬酸，只用edta进行处理，其他步骤均与实施例3相同；各组使用的芒果叶均采摘自生长在广西百色的同一植株芒果，采摘的芒果品种为“台农一号”，提取结束后，取各组的终产品进行检测，其中，多酚得率用酒石酸亚铁比色法测定；多酚纯度用高效液相色谱法测定。检测结果见表1：
表1检测结果
从第1组、第2组、第3组可知，本发明方法最终得到的芒果叶多酚得率为10.1-12.9mg/g，纯度为94.18-96.82％。从第3组与对照组1、对照组2的对比可知，本发明提取步骤中，超声波与纤维素酶、果胶酶和中性蛋白酶协同增效，加快酶反应速度，提高了芒果叶细胞的破碎和溶解程度，使多酚物质能最大程度的渗出，提高了游离多酚物质的含量，进而提高提取得率；从第3组与对照组3、对照组4对比可知，本发明纯化步骤中，柠檬酸和edta均能螯合提取液中与多酚物质结合的金属离子，两者协同增效，螯合能力增强，使金属离子沉淀分离出来，提高提取的纯度。
上述说明是针对本发明较佳可行实施例的详细说明，但实施例并非用以限定本发明的专利申请范围，凡本发明所提示的技术精神下所完成的同等变化或修饰变更，均应属于本发明所涵盖专利范围。