本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种治疗非小细胞肺癌的组合物和人参皂苷f4在制备治疗非小细胞肺癌的组合物中的应用。
背景技术：
：进入21世纪，恶性肿瘤死亡率呈逐年上升的趋势，仍然是影响人类生命健康的重要疾病，死亡率居全部死因的第2位，仅次于心血管疾病。按病种分类，2004年全部死因中，肺癌居第8位，并预计在2030年将上升至第6位，位居各种癌症之首。同时，肺癌的发病率在我国也一直处于癌谱首位。2000-2005年间我国肺癌的新发病例增加了12万，并且每年以26.3％的速度增长，预计到2025年我国肺癌人数将达到100万，成为世界第一肺癌大国。肺癌是最常见的肺原发性恶性肿瘤，绝大多数肺癌起源于支气管黏膜上皮，故亦称支气管肺癌。从临床治疗角度，可将其分为小细胞肺癌(sclc)和非小细胞肺癌(nsclc)，其中nsclc占肺癌总数的80％-85％，非小细胞型肺癌包括鳞状细胞癌(鳞癌)、腺癌、大细胞癌，与小细胞癌相比其癌细胞生长分裂较慢，扩散转移相对较晚。非小细胞肺癌约占肺癌总数的80％，约75％的患者发现时已处于中晚期，5年生存率很低，其中高龄患者占多数，约50％的肺癌患者年龄大于65岁。肺癌在全部肿瘤死亡中仍占16.2％。目前国内外对于非小细胞肺癌的治疗方法主要有：手术、化疗、放疗、靶向药物、生物治疗、中医药治疗等。但上述方法均存在缺陷：(1)非小细胞肺癌患者早期缺乏典型的临床表现，不能及时诊断，约70％的患者在确诊时已经处于晚期，无法进行手术。即使患者达到手术标准，术后复发的机率仍较大；(2)化疗方案均凭经验给药，这种同质化的治疗往往具有很大的盲目性，且化疗药物毒副作用明显，对自身免疫系统损伤极大，且容易产生耐药性，多次使用后无效；(3)放疗的副作用大，容易造成肺损伤和放射性肺炎；(4)目前非小细胞肺癌的靶向药物主要是小分子egfr酪氨酸激酶抑制剂：吉非替尼、厄洛替尼及抗肿瘤血管生成药物贝伐单抗、恩度。这些靶向药物虽在一定程度上可以缓解肿瘤进展或改善生存质量，但在治疗的同时同样存在严重的副作用，很多病人无法忍受副作用带来的痛苦而终止用药。人参，又称“百草之王”，古代医药学书籍《神农本草经》对人参的功效有重要记载：“人参味甘，微寒，主补五脏、安精神、定魂魄、止惊悸、除邪气、明目，开心益智、久服轻身延年”。人参皂苷作为人参的主要活性物质，已受到广泛关注。近年来，对于以人参皂苷rg3为首的稀有人参皂苷在抗肿瘤领域的研究也在世界各国深入展开，并得到了国际共识，大量的临床及非临床试验证明稀有人参皂苷具有抗肿瘤作用，其作用机理主要表现在如下方面：a.抑制肿瘤细胞增殖作用；b.促进细胞凋亡作用；c.抑制肿瘤组织新生血管生成，防止肿瘤转移和扩散；d.促进免疫器官功能、增强自身免疫力。而人参皂苷的服用安全性也得到了广泛的认可。专利cn101732332b公开了以20(s)-rg3作为药物在治疗非小细胞肺癌的中的应用。技术实现要素：本发明所要解决的技术问题是：本发明的目的在于提供一种治疗非小细胞肺癌的组合物，人参皂苷f4在制备治疗非小细胞肺癌的药物中的应用。为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：一种治疗非小细胞肺癌的组合物，其含有人参皂苷f4。进一步的，上述的治疗非小细胞肺癌的组合物中，所述组合物还包括灵芝提取物、黄芪提取物、西洋参提取物、三七提取物、当归提取物、山药提取物、淫羊藿提取物中的一种或几种。进一步的，上述的治疗非小细胞肺癌的组合物中，所述组合物为片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、散剂、乳剂、注射剂、溶液剂、喷雾剂、气雾剂、凝胶剂、霜剂或贴膏剂。进一步的，上述的治疗非小细胞肺癌的组合物中，所述组合物以人参皂苷f4为主要活性成分加上药学上可接受的载体，所述载体包括填充剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂、甜味剂中的一种或几种。进一步的，上述的治疗非小细胞肺癌的组合物中，由如下重量份比的原料组成：人参皂苷f41份；灵芝提取物1份；黄芪提取物2份；枸杞提取物5份；淀粉10份。进一步的，上述的治疗非小细胞肺癌的组合物中，由如下重量份比的原料组成：人参皂苷f41份；微晶纤维素10份；聚维酮k303份；交联羧甲基纤维素钠4份；硬脂酸镁1份。进一步的，上述的治疗非小细胞肺癌的组合物中，由如下重量份比的原料组成：人参皂苷f41份；灵芝提取物1份；乳糖10份；预胶化淀粉5份；硬脂酸镁1份。本发明的另一技术方案为：人参皂苷f4在制备治疗非小细胞肺癌的组合物中的应用。进一步的，上述的应用中，所述组合物由人参皂苷f4和药学上可接受的载体组成，所述载体包括填充剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂、甜味剂中的一种或几种。进一步的，上述的应用中，所述组合物为片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、散剂、乳剂、注射剂、溶液剂、喷雾剂、气雾剂、凝胶剂、霜剂或贴膏剂。本发明的有益效果在于：本发明提供一种人参皂苷f4在制备治疗非小细胞肺癌的组合物中的应用和治疗非小细胞肺癌的组合物，人参皂苷f4为一类稀有人参皂苷，在天然人参中的含量极低，本发明申请人发现人参皂苷f4具有治疗非小细胞肺癌的作用，通过细胞及动物实验、临床试验证实，人参皂苷f4可抑制非小细胞肺癌的生长。且效果较人参皂苷rg3更佳。可作为非小细胞肺癌治疗的一种潜在药物，且该药物高效、无毒。可长期服用。具体实施方式为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施方式予以说明。本发明最关键的构思在于：人参皂苷f4为一类稀有人参皂苷，在天然人参中的含量极低，本发明人通过实验发现人参皂苷f4具有治疗非小细胞肺癌的作用，且效果较人参皂苷rg3更佳。可作为非小细胞肺癌治疗的一种潜在药物，且该药物高效、无毒。实施例1一种含人参皂苷f4中药组方颗粒剂的制备方法，原料如下：人参皂苷f4100g；灵芝提取物100g；黄芪提取物200g；枸杞提取物500g；淀粉1000g；将人参皂苷f4、灵芝提取物、黄芪提取物、枸杞提取物及淀粉混合均匀，于湿法制粒机中制粒后烘干、装袋；最终，制备成颗粒剂190袋；每袋10g，一日三次、每次1袋。实施例2一种含人参皂苷f4的胶囊剂的制备方法，原料如下：人参皂苷f4100g；微晶纤维素1000g；聚维酮k30300g；交联羧甲基纤维素钠400g；硬脂酸镁100g；将上述原辅料混合均匀后，经胶囊制备工艺制备成硬胶囊4750粒、每粒400mg。实施例3一种含人参皂苷f4的片剂的制备方法，原料如下：人参皂苷f4100g；灵芝提取物100g；乳糖1000g；预胶化淀粉400g；硬脂酸镁100g；将上述原辅料混合均匀经制粒、烘干、整粒、压片，制备成片剂4250片，每片400mg。实施例4肺癌细胞抑制实验试验材料：人参皂苷f4、人参皂苷20(s)-rg3，分别用细胞培养基(含0.5％dmso便于人参皂苷的溶解)配制浓度为500μg/ml(高剂量)、62.5μg/ml(低剂量)溶液备用。按常规肿瘤细胞培养方法将肺癌细胞nci-h460进行复苏、培养后加入96孔板进行肿瘤细胞抑制实验。具体步骤如下：(1)人肺癌细胞株nci-h460，用rpmi1640细胞培养液，这四种细胞均为贴壁细胞。将冻存的细胞液以1500r离心5min，弃上清，加入新鲜细胞培养液，吹匀，将其加入到培养皿中，放进含5％co2、37℃的生化培养箱中，待细胞贴壁生长24h或者48h，细胞数目达到80％左右时，加入pbs洗涤2-3遍，再加入3ml胰蛋白酶，37℃消化2min，待细胞变圆之后，加入等体积细胞培液终止消化，并将细胞从培养皿底部吹下来。收集细胞液，离心，弃上清，加入一定的培养液，吹匀，将细胞液分别加进两个25cm培养皿中，继续培养。(2)待肿瘤细胞生长至皿底面积80％左右时，加入pbs洗涤2-3遍，再加入3ml胰蛋白酶，37℃消化2min，待细胞变圆之后，加入等体积细胞培养液终止消化，并将细胞从培养皿底部吹下来。收集细胞液，离心，弃上清，加入一定的培养液，吹匀，取大约50μl加到细胞计数板上，在倒置显微镜上计数。细胞密度＝(四大格细胞数之和)×104/ml。调整细胞密度至(7-10)×104/ml，将细胞接种于96孔板中，每孔加入0.1ml，然后放入培养箱中24h。(3)24h后，吸去每个孔中的培养液，加入各浓度含有稀有人参皂苷的培养液，每个浓度设置5个复孔，接着放进培养箱中孵育48h；之后，吸去孔中的旧培养液，每孔依次加入100μl培养液和50μlmtt溶液，摇匀，放进培养箱中孵育4h，然后吸出其混合液，加入150μldmso来溶解紫色晶体甲瓒，震荡10min，放进酶标仪中，检测波长570nm，测定每孔的吸光度值a。抑制率＝(空白组a-实验组a)×100％/空白组。表1为人参皂苷f4对肺癌细胞nci-h460的抑制试验结果。表1试验结果表明，人参皂苷rg3及人参皂苷f4对于nci-h460大细胞肺癌细胞、ltep-78肺鳞癌细胞、a549肺腺癌细胞均有抑制作用，且人参皂苷f4的抑制率较人参皂苷rg3高。实施例5人参皂苷f4治疗非小细胞肺癌的动物实验1、动物和材料t739小鼠58只，近交系，雌雄各半，体重20-22g。大细胞肺癌细胞株nci-h460。人参皂苷rg3、人参皂苷f4。2、实验分组t739小鼠随机分为6组，接种24小时候分组如下：(1)模型组：灌胃生理盐水0.4ml/只/d；(2)阳性对照组：灌胃环磷酰胺0.4ml/只/d，药物浓度5g/ml；rg3低剂量组：灌胃rg3溶液0.4ml/只/d，药物浓度37.5g/ml；rg3高剂量组：灌胃rg3溶液0.4ml/只/d，药物浓度375g/ml；f4低剂量组：灌胃rg3溶液0.4ml/只/d，药物浓度37.5g/ml；f4高剂量组：灌胃rg3溶液0.4ml/只/d，药物浓度375g/ml。3、模型建立取经鉴定的新鲜nci-h460瘤块，无菌条件下剪碎研磨后，再经200目滤网过滤后制成肿瘤单细胞悬液，用生理盐水将悬液稀释至6×106/ml癌细胞悬液，取0.1ml原液，常规方法接种于各组小鼠右侧腋下皮下。4、抑瘤率测定将小鼠于第14天断颈处死，剥离瘤组织，取瘤体，称取瘤体重量，计算抑瘤率：抑瘤率＝(模型组平均肿瘤重量-治疗组平均肿瘤重量)/模型组平均肿瘤重量×100％。5、统计分析数字结果用表示，各组数据均采用spss10.0统计软件进行分析，两组间进行t检验。6、结果表2为人参皂苷f4对大细胞肺癌的抑制率(n＝10)。表2组别动物数瘤重(g)抑制率(％)模型对照组82.39±0.28阳性对照组100.48±0.1979.9**rg3低剂量组101.44±0.2239.7**rg3高剂量组100.95±0.2560.3**f4低剂量组101.06±0.2055.6**f4高剂量组100.69±0.1871.1**注：与模型对照组比较，*p＜0.01，**p＜0.001。结果显示：与没有用药的模型对照组比较，人参皂苷rg3与人参皂苷f4对于小鼠大细胞肺癌均具有显著的抑瘤作用，人参皂苷f4对癌细胞生长的抑制作用较人参皂苷rg3更佳。综上所述，人参皂苷f4为一类稀有人参皂苷，在天然人参中的含量极低，但人参皂苷f4具有治疗非小细胞肺癌的作用，通过细胞及动物实验、临床试验证实，人参皂苷f4可抑制非小细胞肺癌的生长。且效果较人参皂苷rg3更佳。可作为非小细胞肺癌治疗的一种潜在药物，且该药物高效、无毒。可长期服用。以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等同变换，或直接或间接运用在相关的
技术领域：
，均同理包括在本发明的专利保护范围内。当前第1页12