本发明涉及皮肤护理技术领域，特别是涉及一种柑橘抑菌液及其制备方法。
背景技术：
在自然环境中存在各种各样的细菌，有些细菌是有害菌，例如，金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌等细菌。与上述有害菌过多的接触会导致疾病的产生，因此，对上述细菌进行抑制是十分必要的。
常用的抑菌剂分为三类：有机抑菌剂、无机抑菌剂以及复合抑菌剂，其中，有机抑菌剂包括化学合成有机抑菌剂和天然抑菌剂；无机抑菌剂包括：氯己定抑菌剂和银离子抑菌剂；复合抑菌剂为上述有机抑菌剂和无机抑菌剂复合而成的抑菌剂。化学合成的有机抑菌剂存在化学稳定性差以及易产生有毒的分解产物的缺点。无机成抑菌剂如氯己定还存在对皮肤有刺激性进而导致过敏反应的缺点；无机抑菌剂如银离子抑菌剂存在对肺、神经以及生殖细胞产生毒性的缺点，因此，有机抑菌剂中的天然抑菌剂以其绿色无副作用的优点，得到了用户的普遍欢迎。目前最常用的天然抑菌剂为以柑橘提取物为有效成分的柑橘抑菌液。现有的柑橘抑菌液的主要成分有：橙皮苷、新橙皮苷、柚皮苷、柠檬苦素、维生素p、橙皮素、维生素c以及水。
然而，现有的柑橘抑菌液的抑菌率仅能达到90％。
技术实现要素：
本发明实施例的目的在于提供一种柑橘抑菌液及其制备方法，以实现提高柑橘抑菌液的抑菌率的目的。具体技术方案如下：
本发明实施例提供了一种柑橘抑菌液，包括：柑橘提取物、抗菌助剂、维生素c以及水，其中，所述抗菌助剂，基于所述抗菌助剂的重量，包括：2-10％重量百分数的藤茶提取物、1-10％重量百分数的甘草提取物、1-10％重量百分数的积雪草提取物、1.5-15％重量百分数的八角茴香果提取物、2-20％重量百分数的大花仙人掌提取物以及余量的溶剂。
可选的，在本发明实施例的一种具体实施方式中，所述柑橘提取物与水的重量比为1:600-1:1500。
可选的，在本发明实施例的一种具体实施方式中，所述维生素c与所述柑橘提取物的重量比为1:1-1:5。
可选的，在本发明实施例的一种具体实施方式中，所述抗菌助剂与所述柑橘提取物的重量比为1:1-5:1。
可选的，在本发明实施例的一种具体实施方式中，所述柑橘抑菌液中还含有维生素b3，所述维生素b3与所述柑橘提取物的重量比为1:5-2:1。
可选的，在本发明实施例的一种具体实施方式中，所述柑橘提取物，基于所述柑橘提取物的重量，包括：15％-40％重量百分数的橙皮苷；0.5％-5％重量百分数的新橙皮苷；8％-30％重量百分数的果胶；0.2％-5％重量百分数的柠檬酸；0.2％-5％重量百分数的柠檬烯、0.5％-5％重量百分数的吖啶酮、0.5％-5％重量百分数的香豆素、0.5％-5％重量百分数的维生素p、0.5％-5％重量百分数的柠檬苦素以及余量的溶剂。
本发明实施例还提供了一种柑橘抑菌液的制备方法，所述方法包括：
获取柑橘提取物、水、抗菌助剂和维生素c；
将水加热到40-70摄氏度；
将所述柑橘抑菌液、所述抗菌助剂加入到加热后的水中，搅拌5-15分钟，得到柑橘提取物混合液；
将所述柑橘提取物混合液静置2-6小时后，用180-300目筛网过滤；静置30分钟后再次使用180-300目筛网过滤一次，得到柑橘抑菌液。
可选的，在本发明实施例的一种具体实施方式中，所述柑橘提取物与水的重量比为1:600-1:1500，所述抗菌助剂与所述柑橘提取物的重量比为1:1-5:1，所述维生素c与所述柑橘提取物的重量比为1:1-1:5。
可选的，在本发明实施例的一种具体实施方式中，在将所述柑橘提取物混合液静置2-6小时后，用200-250目筛网过滤之前，所述方法还包括：
使用维生素b3调节柑橘提取物混合液的ph值至3.0-6.8。
经实验验证，应用本发明实施例提供的一种柑橘抑菌液及其制备方法，可以使柑橘抑菌液的抑菌率达到99.9％。
具体实施方式
本发明实施例提供了一种柑橘抑菌液，包括：柑橘提取物、抗菌助剂、维生素c以及水，其中，所述抗菌助剂，基于所述抗菌助剂的重量，包括：2-10％重量百分数的藤茶提取物、1-10％重量百分数的甘草提取物、1-10％重量百分数的积雪草提取物、1.5-15％重量百分数的八角茴香果提取物、2-20％重量百分数的大花仙人掌提取物以及余量的溶剂。在本发明实施例的一种具体实施方式中，上述抗菌助剂可以为目前是商场售卖的配方如上的仟敏舒。
在本发明实施例的一种具体实施方式中，水可以为纯化水。进一步的，纯化水可以为《中国药典》2015年版中规定的纯化水。
在本发明实施例的一种具体实施方式中，所述柑橘提取物与水的重量比为1:600-1:1500。在本发明实施例的另一种具体实施方式中，柑橘提取物与水的重量比可以为1:600-1:700，还可以为1:700-1:800，还可以为1:800-1:900，还可以为1:900-1:1000，还可以为1:1000-1:1100，还可以为1:1100-1:1200，还可以为1:1200-1:1300，还可以为1:1300-1:1400，还可以为1:1400-1:1500。
在本发明实施例的一种具体实施方式中，为了进一步抑制硌氨酸酶的形成，从而达到更好的美白和淡斑的效果，所述维生素c与所述柑橘提取物的重量比为1:1-1:5。在实际应用中，维生素c可以为化学合成的维生素c，也可以是从植物中提取的维生素c。
在本发明实施例的一种具体实施方式中，所述抗菌助剂与所述柑橘提取物的重量比为1:1-5:1。
在本发明实施例的一种具体实施方式中，为了增强毛细血管壁，防止皮肤的瘀伤，所述柑橘抑菌液中还含有维生素b3，所述维生素b3与所述柑橘提取物的重量比为1:5-2:1。另外，在柑橘抑菌液中添加维生素c时，再添加维生素b3，可以防止维生素c被氧化，增强维生素c的效果。
在本发明实施例的一种具体实施方式中，所述柑橘提取物，基于所述柑橘提取物的重量，包括：15％-40％重量百分数的橙皮苷；0.5％-5％重量百分数的新橙皮苷；8％-30％重量百分数的果胶；0.2％-5％重量百分数的柠檬酸；0.2％-5％重量百分数的柠檬烯、0.5％-5％重量百分数的吖啶酮、0.5％-5％重量百分数的香豆素、0.5％-5％重量百分数的维生素p、0.5％-5％重量百分数的柠檬苦素以及余量的溶剂。
本发明实施例还提供了一种柑橘抑菌液的制备方法，所述方法包括：获取柑橘提取物、水、抗菌助剂和维生素c；将水加热到40-70摄氏度；将所述柑橘抑菌液、所述抗菌助剂加入到加热后的水中，搅拌5-15分钟，得到柑橘提取物混合液；将所述柑橘提取物混合液静置2-6小时后，用180-300目筛网过滤；静置30分钟后再次使用180-300目筛网过滤一次，得到柑橘抑菌液。
在本发明实施例的一种具体实施方式中，柑橘提取物可以由以下方法制备：
称取清洗后的柑橘，并将清洗后的柑橘分为等重的两份，其中，柑橘包括红橘和/或塔罗科血橙。将其中一份柑橘粉碎后的颗粒装入渗漉筒，向所述渗漉筒内加入与粉碎后的颗粒等体积的、浓度为60％(体积百分比)的乙醇水溶液，浸渍48h后收集渗漉液，回收所述渗漉液中的乙醇，减压浓缩。将另一份柑橘的果皮清洗后粉碎为直径2-3mm的颗粒，将粉碎后的颗粒倒入沸水中浸泡5min杀酶。将杀酶后的颗粒倒入在40摄氏度的水中，并浸泡30min，再加热到90℃，保温5min，过滤得到滤渣。将得到的滤渣倒入夹层锅中，加入滤渣重量的4倍的水，并调ph至1.5-2.0。将调ph值后的滤渣和水的混合物加热到95℃，恒温60min并持续搅拌；再加入质量为所述滤渣和水的混合物总重量2-3％的、浓度为0.3％-0.4％的六偏磷酸钠搅拌，在加入六偏磷酸钠后的滤渣和水的混合物冷却至50摄氏度以前过滤得果胶萃取液；将所述果胶萃取液冷却至50℃，加入基于果胶萃取液重量1％-2％的淀粉酶，在酶作用终了时，再加热至80℃，保温5min杀酶。上述的酶作用终了时，可以按照如下方法判断：在果胶萃取液中加入碘液，当淀粉类成分被淀粉类酶分解后，蓝色消失，即可以判断淀粉酶的作用终了。将浓缩后的渗漉液与杀酶后的果胶溶液混合，得到柑橘提取物。
采用液相色谱-质谱联用技术对所制备的柑橘提取物进行检测，可以确定其所含有的化学成分及其组成。
在本发明实施例的一种具体实施方式中，所述柑橘提取物与水的重量比为1:600-1:1500，所述抗菌助剂与所述柑橘提取物的重量比为1:1-5:1，所述维生素c与所述柑橘提取物的重量比为1:1-1:5。
在本发明实施例的一种具体实施方式中，在将所述柑橘提取物混合液静置2-6小时后，用200-250目筛网过滤之前，所述方法还包括：使用维生素b3调节柑橘提取物混合液的ph值至3.0-6.8。
下面将结合具体实施例对本发明的技术方案进行描述，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明的保护范围。
实施例1-3为应用本发明提供的配方及工艺条件制备的柑橘抑菌液；对比例1-3为应用现有技术提供的配方及工艺条件制备的柑橘抑菌液。
实施例1
1)称取清洗后的塔罗科血橙100kg，并将清洗后的塔罗科血橙分为等重的两份，每份50kg。将其中一份塔罗科血橙粉碎后的直径2mm的颗粒装入渗漉筒，向所述渗漉筒内加入与粉碎后的颗粒等体积的、浓度为60％(体积百分比)的乙醇水溶液，浸渍48h后收集渗漉液，回收所述渗漉液中的乙醇，减压浓缩。
将另一份50kg的塔罗科血橙的果皮清洗后粉碎为直径2mm的颗粒，将粉碎后的颗粒倒入沸水中浸泡5min杀酶。将杀酶后的颗粒倒入在40摄氏度的纯化水中，并浸泡30min，再加热到90℃，保温5min，过滤得到滤渣。将得到的滤渣倒入夹层锅中，加入滤渣重量的4倍的纯化水，并调ph至1.5。将调ph值后的滤渣和纯化水的混合物加热到95℃，恒温60min并持续搅拌；再加入质量为所述滤渣和纯化水的混合物总重量2％的、浓度为0.3％的六偏磷酸钠搅拌，在加入六偏磷酸钠后的滤渣和纯化水的混合物冷却至50摄氏度以前过滤得果胶萃取液；将所述果胶萃取液冷却至50℃，加入基于果胶萃取液重量1％的淀粉酶，在酶作用终了时，再加热至80℃，保温5min杀酶。将浓缩后的渗漉液与杀酶后的果胶溶液混合，得到塔罗科血橙的柑橘提取物。经过液相色谱-质谱联用技术测量，柑橘提取物中各成分及各成分的比例如下：基于柑橘提取物的重量，包括：21.3％重量百分数的橙皮苷；1.2％重量百分数的新橙皮苷；8.7％重量百分数的果胶；0.6％重量百分数的柠檬酸；0.7％重量百分数的柠檬烯、2.3％重量百分数的吖啶酮、1.4％重量百分数的香豆素、1.2％重量百分数的维生素p、0.1％重量百分数的柠檬苦素、60％的1,3-丙二醇以及2.5％的水。
2)称取60kg纯化水、0.1kg制备的柑橘提取物、0.1kg昆明仟草生物科技有限公司生产的产品编号为km-ch-0107的仟敏舒和0.1kg维生素c，且仟敏舒的成分如下：基于仟敏舒的重量，包括：2％重量百分数的藤茶提取物、10％重量百分数的甘草提取物、9％重量百分数的积雪草提取物、10％重量百分数的八角茴香果提取物、5％重量百分数的大花仙人掌提取物、60％的1,3-丙二醇以及4％的水。
3)将纯化水加热到40摄氏度；将柑橘提取物、仟敏舒加入到加热后的纯化水中，搅拌5分钟，得到柑橘提取物混合液。
4)使用0.187kg维生素b3调节柑橘提取物混合液的ph值至3.0。
5)将柑橘提取物混合液静置2小时后，用180目筛网过滤；静置30分钟后再次使用180目筛网过滤一次，得到柑橘抑菌液。
实施例2
1)称取清洗后的塔罗科血橙100kg，并将清洗后的塔罗科血橙分为等重的两份，每份50kg。将其中一份塔罗科血橙粉碎后的直径2.5mm的颗粒装入渗漉筒，向所述渗漉筒内加入与粉碎后的颗粒等体积的、浓度为60％(体积百分比)的乙醇水溶液，浸渍48h后收集渗漉液，回收所述渗漉液中的乙醇，减压浓缩。
将另一份50kg的塔罗科血橙的果皮清洗后粉碎为直径2mm的颗粒，将粉碎后的颗粒倒入沸水中浸泡5min杀酶。将杀酶后的颗粒倒入在40摄氏度的纯化水中，并浸泡30min，再加热到90℃，保温5min，过滤得到滤渣。将得到的滤渣倒入夹层锅中，加入滤渣重量的4倍的纯化水，并调ph至1.7。将调ph值后的滤渣和纯化水的混合物加热到95℃，恒温60min并持续搅拌；再加入质量为所述滤渣和纯化水的混合物总重量2％的、浓度为0.35％的六偏磷酸钠搅拌，在加入六偏磷酸钠后的滤渣和纯化水的混合物冷却至50摄氏度以前过滤得果胶萃取液；将所述果胶萃取液冷却至50℃，加入基于果胶萃取液重量1.5％的淀粉酶，在酶作用终了时，再加热至80℃，保温5min杀酶。将浓缩后的渗漉液与杀酶后的果胶溶液混合，得到塔罗科血橙的柑橘提取物。经过液相色谱-质谱联用技术测量，柑橘提取物中各成分及各成分的比例如下：基于柑橘提取物的重量，包括：32.7％重量百分数的橙皮苷；2.8％重量百分数的新橙皮苷；15.4％重量百分数的果胶；3.1％重量百分数的柠檬酸；2.8％重量百分数的柠檬烯、3.2％重量百分数的吖啶酮、2.9％重量百分数的香豆素、3.6％重量百分数的维生素p、2.3％重量百分数的柠檬苦素以及31.2％的水。
2)称取60kg纯化水、0.06kg制备的柑橘提取物、0.1kg昆明仟草生物科技有限公司生产的产品编号为km-ch-0107的仟敏舒和0.036kg维生素c，且仟敏舒的成分如下：基于仟敏舒的重量，包括：10％重量百分数的藤茶提取物、8％重量百分数的甘草提取物、1％重量百分数的积雪草提取物、2％重量百分数的八角茴香果提取物、12％重量百分数的大花仙人掌提取物、60％的1,3-丙二醇以及7％的水。
3)将纯化水加热到50摄氏度；将柑橘提取物、仟敏舒加入到加热后的纯化水中，搅拌10分钟，得到柑橘提取物混合液。
4)使用0.078kg维生素b3调节柑橘提取物混合液的ph值至5.2。
5)将柑橘提取物混合液静置4小时后，用200目筛网过滤；静置30分钟后再次使用200目筛网过滤一次，得到柑橘抑菌液。
实施例3
1)称取清洗后的塔罗科血橙100kg，并将清洗后的塔罗科血橙分为等重的两份，每份50kg。将其中一份塔罗科血橙粉碎后的直径3mm的颗粒装入渗漉筒，向所述渗漉筒内加入与粉碎后的颗粒等体积的、浓度为60％(体积百分比)的乙醇水溶液，浸渍48h后收集渗漉液，回收所述渗漉液中的乙醇，减压浓缩。
将另一份50kg的塔罗科血橙的果皮清洗后粉碎为直径2mm的颗粒，将粉碎后的颗粒倒入沸水中浸泡5min杀酶。将杀酶后的颗粒倒入在40摄氏度的纯化水中，并浸泡30min，再加热到90℃，保温5min，过滤得到滤渣。将得到的滤渣倒入夹层锅中，加入滤渣重量的4倍的纯化水，并调ph至2.0。将调ph值后的滤渣和纯化水的混合物加热到95℃，恒温60min并持续搅拌；再加入质量为所述滤渣和纯化水的混合物总重量3％的、浓度为0.4％的六偏磷酸钠搅拌，在加入六偏磷酸钠后的滤渣和纯化水的混合物冷却至50摄氏度以前过滤得果胶萃取液；将所述果胶萃取液冷却至50℃，加入基于果胶萃取液重量2％的淀粉酶，在酶作用终了时，再加热至80℃，保温5min杀酶。将浓缩后的渗漉液与杀酶后的果胶溶液混合，得到塔罗科血橙的柑橘提取物。经过液相色谱-质谱联用技术测量，柑橘提取物中各成分及各成分的比例如下：基于柑橘提取物的重量，包括：37.8％重量百分数的橙皮苷；4.1％重量百分数的新橙皮苷；26.9％重量百分数的果胶；4.6％重量百分数的柠檬酸；4.8％重量百分数的柠檬烯、3.9％重量百分数的吖啶酮、5.0％重量百分数的香豆素、4.7％重量百分数的维生素p、3.8％重量百分数的柠檬苦素以及4.4％的水。
2)称取60kg纯化水、0.04kg制备的柑橘提取物、0.2kg昆明仟草生物科技有限公司生产的产品编号为km-ch-0107的仟敏舒和0.008kg维生素c，且仟敏舒的成分如下：基于仟敏舒的重量，包括：5％重量百分数的藤茶提取物、2％重量百分数的甘草提取物、5％重量百分数的积雪草提取物、6％重量百分数的八角茴香果提取物、18％重量百分数的大花仙人掌提取物以及64％的1,3-丙二醇。
3)将纯化水加热到70摄氏度；将柑橘抑菌液、仟敏舒加入到加热后的水中，搅拌15分钟，得到柑橘提取物混合液。
4)使用0.047kg维生素b3调节柑橘提取物混合液的ph值至6.8。
5)将柑橘提取物混合液静置6小时后，用250目筛网过滤；静置30分钟后再次使用250目筛网过滤一次，得到柑橘抑菌液。
对比例1
1)称取本发明实施例1中制备的柑橘提取物0.2kg、纯化水60kg。
2)将纯化水加热到40摄氏度；将柑橘提取物加入到加热后的纯化水中，搅拌5分钟，得到柑橘提取物混合液。
3)将柑橘提取物混合液静置2小时后，用180目筛网过滤；静置30分钟后再次使用180目筛网过滤一次，得到柑橘抑菌液。
对比例2
1)称取本发明实施例2中制备的柑橘提取物0.16kg、纯化水60kg。
2)将纯化水加热到40摄氏度；将柑橘提取物加入到加热后的纯化水中，搅拌5分钟，得到柑橘提取物混合液。
3)将柑橘提取物混合液静置2小时后，用180目筛网过滤；静置30分钟后再次使用180目筛网过滤一次，得到柑橘抑菌液。
对比例3
1)称取本发明实施例3中制备的柑橘提取物0.24kg、纯化水60kg。
2)将纯化水加热到40摄氏度；将柑橘提取物加入到加热后的纯化水中，搅拌5分钟，得到柑橘提取物混合液。
3)将柑橘提取物混合液静置2小时后，用180目筛网过滤；静置30分钟后再次使用180目筛网过滤一次，得到柑橘抑菌液。
对比例4
1)称取本发明实施例1中使用的仟敏舒0.2kg、纯化水60kg。
2)将纯化水加热到40摄氏度；将仟敏舒加入到加热后的纯化水中，搅拌5分钟，得到仟敏舒抑菌液。
对比例5
1)称取本发明实施例2中使用的仟敏舒0.16kg、纯化水60kg。
2)将纯化水加热到40摄氏度；将仟敏舒加入到加热后的纯化水中，搅拌5分钟，得到仟敏舒抑菌液。
对比例6
1)称取本发明实施例3中使用的仟敏舒0.24kg、纯化水60kg。
2)将纯化水加热到40摄氏度；将仟敏舒加入到加热后的纯化水中，搅拌5分钟，得到仟敏舒抑菌液。
分别对实施例1-3制备的柑橘抑菌液和对比例1-6制备的抑菌液进行抑菌率实验；对实施例1-3制备的柑橘抑菌液进行皮肤刺激实验、皮肤变态反应实验以及稳定性实验，实验过程及实验结果如下：
一、抑菌率实验
1)将金黄色葡萄球菌(atcc6538)的24h斜面培养物用磷酸盐缓冲液洗下，制备成浓度为1*106cfu/ml的菌悬液。另外，制备无菌的磷酸盐浓度为0.03mol/l且ph为7.2的缓冲液1000l。
2)以无菌操作分别取5ml实施例1制备的柑橘抑菌液，分别标记为样品1、样品2以及样品3。以无菌操作分别取5ml实施例2制备的柑橘抑菌液，分别标记为样品4、样品5以及样品6。以无菌操作分别取5ml实施例3制备的柑橘抑菌液，分别标记为样品7、样品8以及样品9。
以无菌操作分别取5ml对比例1制备的柑橘抑菌液，分别标记为样品10、样品11以及样品12。以无菌操作分别取5ml对比例2制备的柑橘抑菌液，分别标记为样品13、样品14以及样品15。以无菌操作分别取5ml对比例3制备的柑橘抑菌液，分别标记为样品16、样品17以及样品18。
以无菌操作分别取5ml对比例4制备的仟敏舒抑菌液，分别标记为样品19、样品20以及样品21。以无菌操作分别取5ml对比例5制备的仟敏舒抑菌液，分别标记为样品22、样品23以及样品24。以无菌操作分别取5ml对比例6制备的仟敏舒抑菌液，分别标记为样品25、样品26以及样品27。
3)分别将100μl金黄色葡萄球菌的菌悬液滴入样品1-27中，充分混合后，开始计时，在作用时长为30s、1分钟、2分钟、5分钟、10分钟以及20分钟时，分别测试各个样品的抑菌率。抑菌率的测试方法依照《一次性使用卫生用品卫生标准》gb15979-2002附录c中规定的方法。
4)按照上述方法，分别测试样品1-27对大肠杆菌(atcc11229)和白色念珠菌(atcc10231)的抑菌率。
对于样品1-27进行的抑菌率实验的结果如下表所示，表1为对样品1-27进行金黄色葡萄球菌(atcc6538)抑菌实验的抑菌率测试结果。
表1
从表1可以看出，实施例1-3制备的样品1-9相对于对比例1-6制备的样品10-27，其对金黄色葡萄球菌(atcc6538)的抑菌率从99％提高到了99.9％。
从表1还可以看出，在培养时长为30秒时，样品1-9的对于金黄色葡萄球菌(atcc6538)抑菌率就可以达到99.9％，而样品10-27的抑菌率只有在培养时长为2分钟时才可以达到99％，因此应用本发明实施例制备的柑橘抑菌液起效速度更快。
表2为对样品1-18进行大肠杆菌(atcc11229)抑菌实验的抑菌率测试结果。
表2
从表2可以看出，实施例1-3制备的样品1-9相对于对比例1-6制备的样品10-27，其对大肠杆菌(atcc11229)的抑菌率从99％提高到了99.9％。
从表2还可以看出，在培养时长为30秒时，样品1-9的对于大肠杆菌(atcc11229)的抑菌率就可以达到99.9％，而样品10-27的抑菌率只有在培养时长为2分钟时才可以达到99％，因此应用本发明实施例制备的柑橘抑菌液对大肠杆菌(atcc11229)起效速度更快。
表3为对样品1-18进行白色念珠菌(atcc10231)抑菌实验的抑菌率测试结果。
表3
从表3可以看出，实施例1-3制备的样品1-9相对于对比例1-6制备的样品10-27，其对白色念珠菌(atcc10231)的抑菌率从99％提高到了99.9％。
从表3还可以看出，在培养时长为30秒时，样品1-9的对于白色念珠菌(atcc10231)的抑菌率就可以达到99.9％，而样品10-27的抑菌率只有在培养时长为2分钟时才可以达到99％，因此应用本发明实施例制备的柑橘抑菌液对白色念珠菌(atcc10231)起效速度更快。
二、一次完整皮肤刺激实验
1)选取体重1.7-2.3kg的皮肤完好的健康雌雄家兔各18只，并在皮肤刺激实验开始前24h，用脱毛剂将家兔背部脊柱两侧的毛去掉，脱毛区域尺寸为3cm×3cm。
2)次日，按照雌兔2只和雄兔2只为一组，将36只家兔分为9组。将样品1直接滴在第一组家兔脊柱一侧的脱毛区域上，用样区域尺寸为2.5cm×2.5cm，然后将一层无刺激塑料膜敷贴覆盖住用样区域，再用无刺激胶布将无刺激塑料膜固定在家兔身上。
3)制作空白对照区域：将纯化水滴在该组家兔的另一侧脱毛区域上，用样区域尺寸为2.5cm×2.5cm，然后将一层无刺激塑料膜敷贴覆盖住用样区域，再用无刺激胶布将无刺激塑料膜固定在家兔身上。
4)在敷贴时长达到4h时，取下无刺激塑料膜并用温水去除残留样品。
5)分别于去除残留样品后1h、24h和48h观察皮肤局部反应。按照上述操作，使用样品2-9对其他8组家兔进行处理。
对于样品1-9进行一次完整皮肤刺激实验的结果如表4所示，表4为对样品1-9进行一次完整皮肤刺激实验的皮肤刺激反应评分结果。
表4
注：皮肤刺激反应评分方法参见《消毒技术规范(2002)》中的“消毒产品毒理学实验技术规范”部分。
从表4可以看出，样品1-9对完整皮肤无刺激。
三、一次破损皮肤刺激实验
1)选取体重1.7-2.3kg的皮肤完好的健康雌雄家兔各18只，并在皮肤刺激实验开始前24h，用脱毛剂将家兔背部脊柱两侧的毛去掉，脱毛区域尺寸为3cm×3cm。
2)次日，按照雌兔2只和雄兔2只为一组，将36只家兔分为9组。将所有家兔的尺寸为2.5cm×2.5cm的去毛皮肤用75％酒精清洁消毒。并在消毒区域内用灭菌刀片或注射针头在皮区内划一个“井”形的破损伤口，注意皮肤破损仅达表皮，不要伤及真皮。将样品1直接滴在第一组家兔脱毛区域的破损伤口上，用样区域尺寸为2.5cm×2.5cm，然后将一层无刺激塑料膜敷贴覆盖住用样区域，再用无刺激胶布将无刺激塑料膜固定在家兔身上。
3)在敷贴时长达到4h时，取下无刺激塑料膜并用温水去除残留样品。
4)分别于去除残留样品后1h、24h和48h观察皮肤局部反应。按照上述操作，使用样品2-9对其他8组家兔进行处理。
对于样品1-9进行一次破损皮肤刺激实验的结果如表5所示，表5为对样品1-9进行一次破损皮肤刺激实验的皮肤刺激反应评分结果。
表5
注：皮肤刺激反应评分方法参见《消毒技术规范(2002)》中的2.3“消毒产品毒理学实验技术规范”部分。
从表5可以看出，样品1-9对破损皮肤无刺激。
四、多次完整皮肤刺激实验
1)选取体重1.7-2.3kg的皮肤完好的健康雌雄家兔各18只，并在皮肤刺激实验开始前24h，用脱毛剂将家兔背部脊柱两侧的毛去掉，脱毛区域尺寸为3cm×3cm。
2)次日，按照雌兔2只和雄兔2只为一组，将36只家兔分为9组。将样品1直接滴在第一组家兔脊柱一侧的脱毛区域上，用样区域尺寸为2.5cm×2.5cm，然后将一层无刺激塑料膜敷贴覆盖住用样区域，再用无刺激胶布将无刺激塑料膜固定在家兔身上。
3)制作空白对照区域：将纯化水滴在该组家兔的另一侧脱毛区域上，用样区域尺寸为2.5cm×2.5cm，然后将一层无刺激塑料膜敷贴覆盖住用样区域，再用无刺激胶布将无刺激塑料膜固定在家兔身上。
4)对于用样区域，在敷贴时长达到4h时，取下无刺激塑料膜并用温水去除残留样品，在下次用样前记录实验结果。每天用样一次，连续用样14天。对于空白对照实验，在敷贴时长达到4h时，取下无刺激塑料膜并用温水去除残留的纯化水，在下次使用纯化水前记录实验结果。每天使用纯化水一次，连续14天。按照上述操作，使用样品2-9对其他8组家兔进行处理。
对于样品1-9进行多次完整皮肤刺激实验的结果如表6所示，表6为对样品1-9进行多次完整皮肤刺激实验的皮肤刺激反应评分结果。
表6
注：皮肤刺激反应评分方法参见《消毒技术规范(2002)》中的“消毒产品毒理学实验技术规范”部分。
从表6可以看出，使用样品1-9持续14天，对完整皮肤无刺激。
五、皮肤变态反应实验
1)取实施例1-3制备的柑橘抑菌液原液作为诱导浓度的柑橘抑菌液和激发浓度的柑橘抑菌液，并配置诱导浓度的2，4-二硝基氯苯溶液和激发浓度的2，4-二硝基氯苯溶液。关于诱导浓度和激发浓度的溶液的规定参见《消毒技术规范(2002)》中“消毒产品毒理学实验基本要求”部分。
2)选取体重200g～300g的皮肤完好的健康白色豚鼠48只，并在皮肤刺激实验开始前24h，用脱毛剂将豚鼠背部左侧的毛去掉，脱毛区域尺寸为3cm×3cm。将48只豚鼠中的16只豚鼠作为实验组、其中的16只豚鼠作为阳性对照组、剩余的16只豚鼠作为阴性对照组。
3)对于实验组，取诱导浓度的柑橘抑菌液0.5ml直接涂在实验组豚鼠背部左侧的脱毛区域上，用样区域尺寸为2cm×2cm，然后将一层无刺激塑料膜敷贴覆盖住用样区域，再用无刺激胶布将无刺激塑料膜固定在豚鼠身上。在敷贴时长达到6h时，取下无刺激塑料膜并用温水去除残留样品。然后在第一次用样后第7天和第14天以同样方法重复一次。在第一次用样后第28天，将激发浓度的柑橘抑菌液0.5ml直接涂在用样区域上，然后将一层无刺激塑料膜敷贴覆盖住用样区域，再用无刺激胶布将无刺激塑料膜固定在豚鼠身上。在敷贴时长达到6h时，取下无刺激塑料膜并用温水去除残留样品。再在去除残留样品后的第24h和第48h观察皮肤反应。
对于阳性对照组豚鼠，按照上述方法，利用2，4-二硝基氯苯进行诱导和激发处理。
对于阴性对照组豚鼠，仅在第28天时，将激发浓度的柑橘抑菌液0.5ml直接涂在用样区域上，然后将一层无刺激塑料膜敷贴覆盖住用样区域，再用无刺激胶布将无刺激塑料膜固定在豚鼠身上。在敷贴时长达到6h时，取下无刺激塑料膜并用温水去除残留样品。再在去除残留样品后的第24h和第48h观察皮肤反应。
对应用本发明实施例1-3制备的柑橘抑菌液进行皮肤变态反应实验的结果如表7所示，表7为对实验组豚鼠、阳性对照组豚鼠、阴性对照组豚鼠进行致敏强度打分的结果。
表7
注：致敏强度打分方法参见《消毒技术规范(2002)》中的“消毒产品毒理学实验技术规范”部分。
从表7可以看出，实施例1-3对应的实验组豚鼠的致敏强度打分均为零，应用本发明实施例制备的柑橘抑菌液不会产生致敏反应。
六、稳定性实验
1)将样品1-9在37℃、相对湿度75％条件下存放90天。
2)按照本发明实施例中抑菌率实验的方法测试各个样品针对黄色葡萄球菌(atcc6538)、大肠杆菌(atcc11229)和白色念珠菌(atcc10231)的抑菌率。
对于样品1-9进行的抑菌率实验的结果如下表所示，表8为对样品1-9进行金黄色葡萄球菌(atcc6538)抑菌实验的抑菌率测试结果。
表8
从表8可以看出，样品1-9在上述条件下保存后，其对金黄色葡萄球菌(atcc6538)的抑菌率仍然达到了99％以上。
表9为对样品1-9进行大肠杆菌(atcc11229)抑菌实验的抑菌率测试结果。
表9
从表9可以看出，样品1-9在上述条件下保存后，其对大肠杆菌(atcc11229)的抑菌率仍然达到了99％以上。
表10为对样品1-9进行白色念珠菌(atcc10231)抑菌实验的抑菌率测试结果。
表10
从表10可以看出，样品1-9在上述条件下保存后，其对金黄色葡萄球菌(atcc6538)的抑菌率仍然达到了99％以上。
从表8-10可以看出，应用本发明实施例制备的柑橘抑菌液的稳定性很高。
需要说明的是，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并非用于限定本发明的保护范围。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换、改进等，均包含在本发明的保护范围内。