本发明涉及以作为n－3系不饱和脂肪酸的二十二碳六烯酸和/或二十碳五烯酸作为有效成分的中性脂肪值的降低或抑制升高用的组合物、以及该组合物的制造中的二十二碳六烯酸和/或二十碳五烯酸的使用方法。
此外，本发明涉及鱼油(dha·epa)的摄取方法及用于该摄取方法的组合物，所述摄取方法能够通过在从睡眠中醒来后6小时以内的第一次用餐(早餐)中摄取而提高血中的n－3系不饱和脂肪酸(dha·epa)的浓度，对人而言是通过降低血中的n－6系不饱和脂肪酸的浓度而提高n－3/n－6比以降低中性脂肪。
背景技术：
已知二十二碳六烯酸(dha)及二十碳五烯酸(epa)是被分类为n－3系(ω－3)脂肪酸的高度不饱和脂肪酸，从鲱鱼、青花鱼、沙丁鱼、金枪鱼、鲣鱼、秋刀鱼、鰤鱼等鱼得到的鱼油中的这些物质的含量高。
对于dha，报告过具有血小板凝结抑制作用、血中中性脂肪值降低作用、血中胆固醇值降低作用、脑功能改善效果等各种生理活性功能。
对于epa，也报告过血小板凝结抑制作用、血中中性脂肪值降低作用、血中胆固醇值降低作用等各种生理活性功能。
dha及epa被作为中性脂肪值降低用的营养辅助食品或药品的有效成分使用。
在非专利文献1中，公开过鱼油具有血浆中性脂肪值降低效果。另外，在专利文献1中，公开过包含鱼油的控制脂肪代谢的组合物。
在专利文献2中，公开过dha具有血中中性脂肪值降低作用。
非专利文献2是关于二十碳五烯酸乙酯(epa－e)的生物体内动态的报告，公开过epa具有减少血液中的中性脂肪的作用。
另一方面，近年来，已经确立了评价生物体节律、昼夜节律的时间生物学，正在进行关于服药的时机与效果的关系、用餐或摄取营养的时机与效果的关系的研究。
在非专利文献3中记载有如下的方面，即，用餐的时机对于维持合适的体重、预防代谢综合征的发病很重要，此外，验证了在早晨、傍晚时不断食地摄取dha/epa对糖·脂肪代谢造成的影响、肥胖抑制效果。
在专利文献3中公开过如下的内容，即，通过在餐后2～6小时且在下次用餐前1小时的两顿饭中间经口服用dha可以抑制餐后的血糖值升高。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：国际公开第2009/050580号说明书
专利文献2：日本特开平8－140636号公报
专利文献3：国际公开第2012/063820号说明书
非专利文献1：biochimicaetbiophysicaacta，792，(1984)，103-109
非专利文献2：j.lipidnutr.vol.24，no.1(2015)，21-32
非专利文献3：食品与开发、vol.51、no1、ubmmedia株式会社、2016年1月1日发行、第4页～6页
技术实现要素：
发明所要解决的问题
本发明的目的在于，提供可以有效地获得dha和/或epa所具有的中性脂肪值降低或抑制升高效果的以dha和/或epa作为有效成分的抑制中性脂肪值降低或升高用的组合物。
用于解决问题的方法
本发明的中性脂肪值的降低或抑制升高用的组合物的特征在于，作为有效成分包含二十二碳六烯酸(dha)和/或二十碳五烯酸(epa)，以作为必需时间范围包含早餐时的、包含早餐时在内的从睡眠中醒来后6小时以内作为摄取用时间范围摄取。
需要说明的是，本发明中，将从睡眠中醒来后6小时以内第一次摄取的食物定义为早餐。
本发明的中性脂肪值的降低或抑制升高用的组合物的制造中的中性脂肪值的降低或抑制升高用的有效成分的使用方法的特征在于，所述有效成分包含二十二碳六烯酸(dha)和/或二十碳五烯酸(epa)，以作为必需时间范围包含早餐时的、包含早餐时在内的从睡眠中醒来后6小时以内作为摄取用时间范围摄取所述组合物。
作为上述的有效成分，可以使用鱼油。
另外，上述的组合物可以设为医药制剂或包含功能性食品的食品的形态。
发明效果
根据本发明的中性脂肪值降低或抑制升高用的组合物，通过将作为有效成分的dha和/或epa的摄取时期设为包含早餐时在内的从睡眠中醒来后6小时以内的摄取用时间内，可以不对血糖值造成影响地有效地获得中性脂肪值的降低或抑制升高效果。
附图说明
图1是关于含鱼油饲料的限时喂食的实验步骤的简单的说明图。
图2是在光照期12小时、黑暗期12小时的明暗循环下(时刻0：00点灯、时刻12：00灭灯)进行2周的鱼油限时喂食后、从时刻2：00起每6小时杀死小鼠并从所得的血液中分离血浆而测定血浆中的葡萄糖、游离脂肪酸、中性脂肪与总胆固醇的浓度得到的图表。
图3是表示每单位重量肝脏组织中的游离脂肪酸、中性脂肪与总胆固醇的含量的图表。
图4是表示脂肪酸合成相关基因(fasn、acc1、scd1)的表达量的分析结果的图表。
图5是在进行2周的鱼油限时喂食后从时刻2：00起每6小时杀死小鼠并从所得的血液中分离血浆而测定血浆中的脂肪酸浓度得到的图表。
图6是在时刻1：00和时刻13：00进行鱼油单次施用后、在施用0、6、10、14、18小时后杀死小鼠并从所得的血液中分离血浆而测定血浆中的脂肪酸量、n－3系不饱和脂肪酸、n－3/n－6比得到的图表。
图7是测定实施例4的血浆中的脂肪酸量、n－3系不饱和脂肪酸、n－3/n－6比得到的图表。
图8是表示实施例5的血中中性脂肪的推移的图表。
图9是表示实施例5的血中n－6系不饱和脂肪酸的推移的图表。
图10是表示实施例5的血中n－3系不饱和脂肪酸的推移的图表。
图11是表示实施例5的血中n－3/n－6比的推移的图表。
图12是表示实施例5的血中饱和脂肪酸的推移的图表。
具体实施方式
已知dha及epa具有各种生理活性功能，本发明人等着眼于其中性脂肪值的降低或抑制升高效果，对可以更加有效地获得该效果的作为有效成分包含这些物质的组合物的形态、其摄取或投与的时机进行了深入研究。
在使用包含dha及epa的鱼油进行的小鼠的实验中，对于在每一天的生物体节律中的包含从睡眠中醒来时的一天的活动开始初期摄取鱼油的小鼠，没有对全天的血糖值、总胆固醇值及血中游离脂肪酸值产生影响，然而观察到血中dha及epa浓度的增加和中性脂肪值的降低效果。这些效果被认为是因如下原因而观察到，即，在一天的活动开始初期摄取鱼油，由此进一步增加dha及epa等n－3系不饱和脂肪酸向血中的纳入。
需要说明的是，本发明人等的实验中所用的小鼠为夜行性，通常具有在黑暗期12小时期间包含包括清醒时的活动期、在光照期睡觉的每一天的生物体节律。
本发明人的利用小鼠的实验的结果显示，根据鱼油的摄取的时机不同，鱼油中所含的dha及epa对中性脂肪值产生特异性的作用，该见解是本发明人等新发现的见解。
此外，进行了人临床试验，确认通过在早餐时摄取鱼油会降低血中的n－6系不饱和脂肪酸的浓度，提高n－3/n－6比而降低中性脂肪。
由于血中饱和脂肪酸浓度也降低，因此认为也有β氧化亢进而抑制了中性脂肪的再合成的可能性。
本发明是基于上述的本发明人的新的见解而完成的发明。
本发明的组合物作为有效成分包含dha和/或epa。
本发明涉及dha和/或epa的在中性脂肪值的降低或抑制升高用的组合物的制造中的作为中性脂肪值的降低或抑制升高用的有效成分的使用方法。
上述的组合物均为在以作为必需时间范围包含早餐时的、包含早餐时在内的从睡眠中醒来后6小时以内作为摄取用时间范围摄取。
此外，本发明涉及一种需要处置的对象者的降低中性脂肪值或抑制中性脂肪值的升高的方法，包含中性脂肪值的降低或抑制升高用的有效成分的组合物由所述对象者以作为必需时间范围包含早餐时的、包含早餐时在内的从睡眠中醒来后6小时以内作为摄取用时间范围摄取，所述有效成分包含二十二碳六烯酸(dha)和/或二十碳五烯酸(epa)。
此外，本发明涉及二十二碳六烯酸(dha)和/或二十碳五烯酸(epa)的用于需要处置的对象者的中性脂肪值的降低或抑制升高的使用，其中，二十二碳六烯酸(dha)和/或二十碳五烯酸(epa)由所述对象者以作为必需时间范围包含早餐时的、包含早餐时在内的从睡眠中醒来后6小时以内作为摄取用时间范围摄取。
dha及epa可以单独地、或者组合地作为有效成分使用。在将dha及epa双方作为有效成分使用的情况下，能够恰当地利用鱼油。
作为鱼油，关于dha及epa的各种纯度、组成的鱼油在市场上有售或公知，可以从这些鱼油中选择使用能够获得本发明的目的效果的鱼油。
作为市售的鱼油，例如可以举出maruhanichiro公司制的dha22(作为脂肪酸组成含有22％的dha的精制金枪鱼油)、dha22k(作为脂肪酸组成含有22％的dha的精制金枪鱼油、鲣鱼油)、dha27w(作为脂肪酸组成含有27％的dha的精制金枪鱼油·鲣鱼油)、dha46a(作为脂肪酸组成含有46％的dha的精制金枪鱼油)、dha－rs(作为脂肪酸组成含有70％的dha的精制金枪鱼油·鲣鱼油)等。
鱼油中的dha及epa的含量通常是dha为5～70质量％，epa为0.1～45质量％，dha与epa的质量比为700：1～1：9，可以将具有这些范围的dha及epa含量的鱼油作为本发明的组合物的有效成分利用。
本发明的组合物中的dha和/或epa的含量只要是可以获得作为目标的中性脂肪值的降低或抑制升高效果，就没有特别限定，然而可以从0.01～95质量％的范围中选择。
另外，本发明的组合物中的dha和/或epa的含量可以根据摄取用时间内的总摄取量(或总施用量)及组合物的形态的至少一方来选择。
摄取用时间内的总摄取量(或总施用量)只要是可以获得作为目标的中性脂肪值的降低或抑制升高效果，就没有特别限定，然而可以从每1天(体重60kg)中100mg～10000mg、优选为300mg～5000mg、更优选为500mg～2000mg的范围中选择。
为了获得本发明中作为目标的效果，重要的是在从睡眠中醒来后的生物体的活动开始时期的初期，使生物体摄取本发明的组合物中的dha和/或epa，即，重要的是每一天的生物体节律中的dha和/或epa的摄取的时机。
作为从睡眠中醒来后的生物体的活动开始时期的初期，将作为必需时间包含早餐时的、包含早餐时在内的从睡眠中醒来后6小时以内的范围作为摄取用时间使用。
优选在该摄取用时间中不包含午餐。
在上述的摄取用时间内，可以将早餐时作为必需时间，并根据需要在早餐时以外的摄取用时间内，单次或分为多次地摄取本发明的组合物。
从将dha和/或epa的消耗量限制为必需最小限度，有效地获得作为目标的效果的方面考虑，优选将本发明的组合物的摄取的时机仅限定于上述的摄取用时间内。
本发明中所说的“睡眠”，是伴随着对周围刺激的反应的降低的、没有意识然而可以容易地醒来的自然的状态，在1天24小时中存在多个该状态的情况下，它们当中仅持续最长时间该状态的状态相当于本发明中所说的“睡眠”。即，本发明中所说的睡眠在1天24小时中仅有1次，另外例如与人通常在夜间取得的持续数小时的睡眠(就寝)不同，在白天等取得的持续比较短时间的所谓午觉并非本发明中所说的睡眠。另外，在本发明的食品的摄取方法中，睡眠时间没有特别限制，优选为3小时以上，更优选为4～10小时。
对于实施在上述经过特定的时机下摄取本发明的组合物的期间，只要是以可以获得本发明的效果的方式设定即可，没有特别限制，优选持续一定期间地实施在上述经过特定的时机下的摄取，从更加充分地获得本发明的效果的观点考虑，优选持续2周以上、特别是持续4周以上地实施在上述经过特定的时机下的摄取。
本发明的组合物可以采用各种形态来提供。例如，本发明的组合物可以采用包含功能性食品的食品本身、制造各种加工食品或包含功能性食品的食品时所用的添加剂、动物用饲料本身、制造动物用饲料时所用的添加剂、或者医药制剂等形态。这些的各种形态可以利用通常所实行的方法来制造。
需要说明的是，作为本发明的应用对象的食品包含包括饮料在内的全部食品，除了包括所谓的健康食品的一般加工食品以外，还包含日本消费者厅的保健功能食品制度中所规定的特定保健用食品或营养功能食品等保健功能食品、营养辅助食品等、以及日本以外的国家中所对应的特定保健用食品或营养功能食品等保健功能食品、营养辅助食品等，还包含向动物喂食的饲料。
作为药品的形态，可以举出口服液剂、片剂、颗粒剂、散剂、胶囊剂、栓剂、眼药水、胶状物等。另外，功能性食品等食品也可以作为例如口服液剂、片剂、颗粒剂、散剂、胶囊剂、胶状物等提供。
在作为医药制剂的制剂化时，可以利用制药中所用的各种载体、赋形剂、稀释剂、基剂等添加剂。
作为各种制剂中所用的添加剂，例如可以举出硬脂酸镁、滑石、乳糖、糊精、淀粉类、甲基纤维素、甘油脂肪酸酯类、水、丙二醇、聚乙二醇类、醇、微晶纤维素、羟丙基纤维素、低取代度羟丙基纤维素、羧甲基纤维素类、罂粟酮(ポピドン)、聚乙烯醇、硬脂酸钙等。此时，根据需要，可以添加着色剂、稳定化剂、抗氧化剂、防腐剂、ph调节剂、张度剂、溶解助剂和/或无痛化剂等。
颗粒剂、片剂、或胶囊剂也可以利用涂覆基剂、例如羟丙基甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯等进行涂覆。这些制剂可以以0.01质量％以上、优选以0.5～50质量％的比例含有dha和/或epa。
能够应用本发明的食品可以采用固体、半固体或液状的形态，作为进行制剂化时的形态，可以举出片剂、丸剂、胶囊、液剂、糖浆、粉末、颗粒等各种制剂形态。
作为能够应用本发明的食品的产品形态，例如可以举出饮料(清凉饮料、茶饮料、咖啡饮料、乳饮料、果汁饮料、碳酸饮料、营养饮料、粉末饮料、果冻饮料、酒精饮料等)、面包类、面条类、米饭类、果冻状食品、糕点糖果类(各种点心类、烤制点心、洋点心类、巧克力、口香糖、饴糖、压片糖果等)、汤类、乳产品、冷冻食品、水产加工品(鱼肉香肠、鱼糕、圆筒状鱼糕、鱼肉山芋饼等)、畜产加工品(汉堡牛肉饼、火腿、香肠、烧香肠、奶酪、黄油、酸奶、生奶油、人造黄油、发酵乳等)、速食食品、营养辅助食品、胶囊、谷物、其他加工食品、调料作料及它们的材料等。在这些产品中可以以0.01质量％以上、优选以0.1～5质量％的比例含有dha和/或epa。
摄取本发明的组合物的、或者作为本发明的组合物的施用对象的生物体、或者需要利用dha和/或epa进行本发明的处置的对象者，包含人及各种动物。作为动物，例如可以举出狗、猫、小鼠、大鼠、兔、牛、马、猴等。特别优选对中性脂肪值的升高成为问题的宠物、家畜、畜肉用动物等应用本发明的组合物。
在将本发明的组合物作为各种形态的食品或医药制剂等产品提供时，为了使利用者可以作为早餐用来认识，可以对产品添加关于如下方面的说明，即，必须将早餐时作为摄取时，并且根据需要将包含早餐时在内的从睡眠中醒来后6小时以内作为摄取用时间范围。该说明可以通过向产品包装内附上与产品分开准备的说明书、或者向产品本身或产品的包装(包括包装分割了的产品的中袋)上印刷说明书来提供。在该说明中，可以记载关于产品的dha和/或epa的含量、摄取时间内的dha和/或epa的摄取总量、或持续摄取的期间等的信息。另外，产品可以依照每次在摄取用时间范围内摄取的分量进行分割，将经过分割的产品的必需量收纳于产品包装内。
[实施例]
以下，利用实施例对本发明进行更详细的说明，然而本发明并不限定于以下的实施例。
(实施例1：由包含dha·epa等n－3系不饱和脂肪酸的鱼油的活动期前半摄取带来的脂质代谢改善作用)
＜小鼠饲料的制备＞
如表1所示，将高果糖饲料f2hfrd(东方酵母工业株式会社制)中所含的4质量％的猪油置换为包含dha·epa等n－3系不饱和脂肪酸的鱼油(dha－22k、maruhanichiro株式会社制)，将所得的材料作为含鱼油改性f2hfrd饲料。作为对照，将f2hfrd作为小鼠的饲料。
[表1]
【表1】
表1:实验用试样的组成
表1中的各成分的数值是每1kg饲料中的克数。
表1中的ain－93g矿物质混合物具有以下的组成(g/kg)。
·碳酸钙：357
·磷酸二氢钾：250
·柠檬酸三钾：28
·氯化钠：74
·硫酸钾：46.6
·氧化镁：24
·柠檬酸铁：6.06
·菱锌矿(smithsonite)：1.65
·碳酸锰：0.63
·碳酸铜：0.324
·碘酸钾：0.01
·硒酸钠：0.0103
·四水合钼酸铵：0.00795
·九水合偏硅酸钠：1.45
·十二水合硫酸铬钾：0.275
·氯化锂：0.0174
·硼酸：0.0815
·氟化钠：0.0635
·四水合碳酸镍(ii)：0.0306
·偏钒酸铵：0.0066
·蔗糖：209.7832
表1中的ain－93维生素混合物具有以下的组成(g/kg)。
·烟酸：3
·泛酸钙：1.6
·盐酸吡哆醇：0.7
·盐酸硫胺素：0.6
·核黄素：0.6
·叶酸：0.2
·d－生物素：0.02
·维生素b－12(氰钴胺：0.1％)：2.5
·维生素e(全消旋－α－生育酚乙酸酯：50％)：15
·维生素a(全反式－视黄醇棕榈酸酯：500000u/g)：0.8
·维生素d3(胆钙化醇：400000u/g)：0.25
·维生素k(叶绿醌)：0.075
·蔗糖：974.655
dha－22k的脂肪酸组成如下所示。
·棕榈酸(16：0)：22.0％
·硬脂酸(18：0)：5.7％
·油酸(18：1n－9)：11.7％
·亚油酸(18：2n－6)：1.2％
·花生四烯酸(20：4n－6)：1.8％
·epa(20：5n－3)：5.1％
·dha(22：6n－3)：27.3％
·其他：25.2％
＜小鼠的饲养及包含dha·epa的鱼油的限时喂食＞
将ddy系的小鼠(5周龄的雄性、日本slc株式会社)在光照期12小时、黑暗期12小时的明暗循环下(时刻0：00点灯、时刻12：00灭灯)饲养3周(驯化饲养期间)。驯化饲养期间后，将小鼠分为3组(各组24只)，如图1所示，向对照组(ctrl)作为饮食整天提供f2hfrd饲料，向鱼油早晨摄取组(bf－fo)作为饮食在包含小鼠的活动开始时刻的时刻6：00～18：00提供含鱼油改性f2hfrd饲料(图1中的“f2hfrd+鱼油”)，在剩下的时刻18：00～6：00提供f2hfrd饲料，向鱼油傍晚摄取组(dn－fo)作为饮食在包含小鼠的活动结束时刻的时刻18：00～6：00提供含鱼油改性f2hfrd饲料，在剩下的时刻6：00～18：00提供f2hfrd饲料，使之摄食2周。
每一天的鱼油的摄取量是，鱼油早晨摄取组为0.12±0.0084g(平均值±标准误差)，鱼油傍晚摄取组为0.14±0.0089g，没有观察到统计学上的显著性差异(t检验)。
＜试验例1：对于血液中脂质浓度的效果＞
在持续2周的含鱼油改性f2hfrd饲料的限时喂食后，从时刻2：00起每6小时每次杀死各组4只小鼠，进行全血采血后，分离血浆，以零下80度进行冷冻保存。图2是表示血浆中的葡萄糖(glu)、游离脂肪酸(ffa)、中性脂肪(tg)与总胆固醇(t－cho)的浓度的图表，使用市售的试剂盒(labassayglucose、labassaynefa、labassaytriglyceride、labassaycholesterol试剂盒(和光纯药))进行测定。在鱼油早晨摄取组(bf－fo)中，显而易见，总胆固醇、中性脂肪、游离脂肪酸的血浆中浓度与对照组(ctrl)相比在统计学上显著地降低。对于葡萄糖浓度没有看到明显的作用。
＜试验例2：对肝脏中脂质量的效果＞
与试验例1相同，持续2周含鱼油改性f2hfrd饲料的限时喂食后，从时刻2：00起每6小时每次杀死各组4只小鼠，采集肝脏的一部分，依照非专利文献(journalofnutrition(2015)，vol.145，no.2，pp.199-206，oishik.etal.)，测定肝脏组织中的脂质。图3是表示每单位重量肝脏组织中的游离脂肪酸(ffa)、中性脂肪(tg)与总胆固醇(t－cho)的含量的图表。在鱼油早晨摄取组(bf－fo)中，显而易见，总胆固醇、中性脂肪、游离脂肪酸的肝脏组织中的含量与对照组(ctrl)相比在统计学上显著地降低。在鱼油傍晚摄取组(dn－fo)中，与对照组相比没有观察到显著的差异。
＜试验例3：对脂肪组织中的脂肪酸合成基因的mrna表达的效果＞
与试验例1相同，在持续2周含鱼油改性f2hfrd饲料的限时喂食后，从时刻2：00起每6小时每次杀死各组4只小鼠，采集白色脂肪的一部分，提取全部mrna后，利用定量pcr法调查了脂肪酸合成相关基因(fasn、acc1、scd1)的表达量。图4是表示脂肪酸合成相关基因(fasn、acc1、scd1)的表达量的分析结果的图表。图4中，mrna的表达量是作为将对照组(ctrl)的峰值设为100％的比来表示。在鱼油早晨摄取组(bf－fo)中，显而易见，scd1基因的mrna表达量与对照组相比在统计学上显著地降低。在鱼油傍晚摄取组(dn－fo)中，与对照组(ctrl)相比没有观察到显著的差异。
＜试验例4：对血液中脂肪酸浓度的效果＞
图5是在与试验例1相同地进行2周鱼油限时喂食后从时刻2：00起每6小时杀死小鼠并从所得的血液中分离血浆、测定血浆中的脂肪酸浓度得到的图表。脂肪酸是从血浆(100μl)中依照canadianjournalofbiochemistryandphysiology(1959)，vol.37，no.8，pp.911-917，e.g.bligh，w.j.dyer的方法用氯仿－甲醇溶液提取。脂肪酸浓度的测定是对日本油化学会制定的基准油脂分析试验法2.4.1.2-2013甲酯化法(三氟化硼－甲醇法)进行部分改变后实施。相对于所提取的试样，加入0.5n氢氧化钠甲醇溶液1.5ml，在100℃加热9分钟。冷却后，加入三氟化硼甲醇络合物·甲醇溶液2ml，在100℃加热7分钟。再次冷却后，加入己烷3ml并搅拌。再加入蒸馏水3ml并搅拌，静置，分离为2层后回收上层。用无水硫酸钠去除水，对其实施了气相色谱分析。在鱼油早晨摄取组中，包含于鱼油中而在体内基本上不能合成的dha、epa的浓度与鱼油傍晚摄取组相比全天都显示出统计学上显著的高值。在鱼油中与dha相同程度包含的棕榈酸的浓度没有观察到差别。
另外，测定出脂肪酸的绝对量(表2)，其结果是，在时刻20：00时鱼油早晨摄取组(bf－fo)与鱼油傍晚摄取组(dn－fo)相比dha及epa量明显更多。已知以dha为首的n－3系不饱和脂肪酸经由淋巴管进行体循环转移，血浆中浓度在施用9小时后显示出最高值(非专利文献2)，可以认为早餐时(时刻6：00～18：00)摄取的n－3系不饱和脂肪酸发生了转移。另一方面，在时刻8：00时鱼油傍晚摄取组(dn－fo)与鱼油早晨摄取组(bf－fo)相比没有观察到显著的差别。这些结果暗示，鱼油早晨摄取组(bf－fo)一方会进一步提高血浆中n－3系不饱和脂肪酸浓度。
[表2]
【表2】
(实施例2：包含dha·epa等n－3系不饱和脂肪酸的鱼油的摄取时刻的差别对向粪便中的脂肪酸排出量的影响)
＜小鼠饲料的制备＞
使用了与实施例1相同的饲料。
＜小鼠的饲养及包含dha·epa的鱼油的限时喂食＞
进行了与实施例1相同的限时喂食。
在持续9天含鱼油改性f2hfrd饲料的限时喂食后，采取1天的粪便，测定出粪便中的脂肪酸量。脂肪酸是从粪便中利用与(实施例1)＜试验例4＞相同的方法提取，进行甲酯化处理，实施了气相色谱分析。将1天的粪便中的脂质量表示于表3中。有如下的趋势，即，鱼油早晨摄取组(bf－fo)比鱼油傍晚摄取组(dn－fo)少，暗示脂质被更多地纳入体内。其中，鱼油早晨摄取组(bf－fo)的n－3系不饱和脂肪酸向粪便中的排出少，n－3/n－6比低于鱼油傍晚摄取组(dn－fo)。可以认为是因为，在作为早饭摄取鱼油的情况下，将更多的n－3pufa纳入血中，因此血浆中n－3系不饱和脂肪酸浓度增加。
[表3]
【表3】
表3
bf-fovsdn-fo,lsd,＊:p＜0.05,
(实施例3：包含dha·epa等n－3系不饱和脂肪酸的鱼油的摄取时刻的差别对向血中的脂肪酸纳入量的影响)
将ddy系的小鼠(7周龄的雄性、日本slc株式会社)分为在时刻1：00单次施用鱼油(10mg/kg)的鱼油傍晚摄取组(dn－fo)和在时刻13：00单次施用鱼油(10mg/kg)的鱼油早晨摄取组(bf－fo)(各组25只)。在5小时的断食后施用鱼油。对各组在施用0、6、10、14、18小时后每次杀死5只小鼠，采集了血浆。脂肪酸是利用与(实施例1)＜试验例4＞相同的方法提取，进行甲酯化处理，实施了气相色谱分析。图6是测定各组的血浆中脂肪酸量、n－3系不饱和脂肪酸、n－3/n－6比得到的图表。鱼油早晨摄取组(bf－fo)的脂肪酸向血中的纳入量多，也与(实施例2)的向粪中的排出少的结果相符。
(实施例4：包含dha·epa等n－3系不饱和脂肪酸的鱼油的摄取时刻的差别对向血中的脂肪酸纳入量的影响2)
增加样品数后实施了与实施例3相同的试验。将7周龄ddy小鼠98只分为鱼油傍晚摄取组(dn－fo)和鱼油早晨摄取组(bf－fo)2组(各49只)。在5小时的断食后施用了鱼油。对各组在施用0、6、10、14、18小时后每次杀死9只(仅0小时后为8只)小鼠，采集了血浆。图7是测定各组的血浆中脂肪酸量、n－3系不饱和脂肪酸、n－3/n－6比得到的图表。在增加了样品数的情况下，也与实施例3相同，鱼油早晨摄取组(bf－fo)的脂肪酸向血中的纳入量多。
(实施例5：包含dha·epa等n－3系不饱和脂肪酸的鱼油的摄取时刻的差别对健康的正常人的血中脂质产生的影响)
本试验中使用了每1根中添加了含有dha850mg、epa200mg的鱼油的鱼肉香肠、作为对照的替代鱼油而配合了橄榄油的安慰剂鱼肉香肠。
将20岁以上且60岁以下的健康的日本人男女20名分为各10名的2组，进行了8周试验。使鱼油早晨摄取组分别每天早餐时摄取1根添加鱼油的鱼肉香肠，晚餐时摄取1根安慰剂鱼肉香肠。使鱼油傍晚摄取组分别每天早餐时摄取1根安慰剂鱼肉香肠，晚餐时摄取1根添加鱼油的鱼肉香肠。早餐是在从睡眠中醒来后6小时以内摄取。采血是在第0周、第4周、第8周以早晨的采血作为基准(0h)，从早晨的采血起8小时后进行傍晚的采血(8h)。在早晨的采血8小时前摄取规定食物，断食至早晨的采血结束。在早晨的采血结束后摄取规定食物及受测食物，以后直到傍晚的采血采取8小时以上的断食。进行血中中性脂肪量及血中脂肪酸量的测定，并进行了评价。
图8中表示出血中中性脂肪的推移。在鱼油早晨摄取组中，第8周(8wk)的血中中性脂肪与摄取前相比0h、8h采血均明显地降低。
图9中表示出n－6系不饱和脂肪酸，图10中表示出n－3系不饱和脂肪酸，图11中表示出n－3/n－6比。鱼油早晨摄取组在第8周(8wk)中，0h、8h采血与摄取前相比n－6系不饱和脂肪酸均降低，而鱼油傍晚摄取组与摄取前相比增加。可以认为，通过提高n－3/n－6比而使中性脂肪降低。
图12中表示出饱和脂肪酸。鱼油早晨摄取组在第8周(8wk)中，0h、8h采血与摄取前相比饱和脂肪酸均降低，因此也可以考虑β氧化亢进而抑制了中性脂肪的再合成的可能性。
这些结果不仅在小鼠中，而且还在人中显示出作为早饭摄取鱼油的有用性。