本发明属于植物天然产物提取领域，具体涉及一种杜仲叶提取物的制备方法。
背景技术：
杜仲，又名胶木，为杜仲科植物，自身含有丰富的绿原酸和黄酮类物质。绿原酸，又称咖啡鞣酸，是一种提取于植物的化学物质，绿原酸是一种重要的生物活性物质，能够抑制细菌、病毒、增高白血球、保护肝胆、预防肿瘤、降低血压、血脂、清除自由基和兴奋中枢神经系统等作用；黄酮类化合物在抗菌防病方面也起到重要的作用。现有技术的提取手段，提取绿原酸和黄酮类化合物提取率不高，造成有效物质的浪费，而且纯度也不高，在使用方面受到限制。技术实现要素：为解决上述问题，本发明提供一种杜仲叶提取物的制备方法，该制备方法制得的杜仲叶提取物产量高，纯度好，适用范围广。本发明的目的是以下述方式实现的：一种杜仲叶提取物的制备方法，包括以下步骤：（1）原料处理：称取干净干燥的杜仲叶，在密闭的中草药粉碎机（fw135型）中粉碎，在振荡筛分机中过40-80目筛网，收集杜仲叶粉末以备用；（2）预处理：称取杜仲叶粉末，加入40%-60%质量分数的乙醇溶液，液料比为（10-16）ml：1g，进行浸润预处理，在水浴中温度为40-50℃时加入纤维素酶，搅拌5-10分钟，然后升温至50-60℃加入果胶酶，搅拌5-10分钟；（3）提取：将预处理后的液固混合物进行回流提取，提取温度为60-95℃，搅拌转速为600-1000r/min，提取时间为0.5-2h，提取次数为2-4次，静置数小时后，取上层清液，并合并数次的上层提取液；（4）除杂：在合并的提取液中加入壳聚糖，壳聚糖的质量百分数为0.5%-3%的提取液，在温度为55-65℃条件下搅拌絮凝30-60min，然后静置1-2h，然后过滤，采用质量分数为采用g4砂芯漏斗（孔径为3-4μm）内铺设孔径为4-5μm的微滤膜，进行真空抽滤，得到粗提液；（5）分离提纯：①大孔树脂吸附解吸，粗提液通过非极性或若极性大孔树脂吸附，树脂柱径高比1：4-1：8，上样流速1.0-3.0bv/h，当吸附后的排出液的浓度为≥90%粗提液浓度时，停止吸附；水洗流速为2.0-4.0bv/h，水洗用量为1.0-2.0bv，洗脱溶剂采用质量分数为60-80%的乙醇溶液，洗脱流速由小变大，从1bv/h至3bv/h，当解吸液的浓度≤5%粗提液浓度时，停止解吸；②超滤膜过滤，将上述步骤中得到的解吸液调整浓度至1-2mg/ml，采用平板滤膜过滤装置进行超滤分离过滤，采用超滤膜孔径为5-10nm，超滤压力为0.1-0.2mpa，超滤温度为60-80℃，收集滤出液；③纳滤膜浓缩，将上述步骤中的滤出液，采用平板滤膜过滤装置进行超滤分离过滤，采用纳滤膜孔径为1-3nm，压力为0.05-0.1mpa，温度为50-70℃，收集浓缩液，将浓缩液通过高效液相色谱仪进行色谱分离，将浓缩液显色之后，用紫外吸收检测器，在波长327nm处检测绿原酸的吸收值，在356nm处检测黄酮类的吸收值，并计算出含量；（6）浓缩干燥：在温度为50-70℃，真空度为0.07-0.09mpa的真空干燥箱中，浓缩干燥至粉末状，即得杜仲叶提取物产品。步骤（4）中所述的微滤膜为聚砜（psf）微滤膜、聚丙烯腈（pan）微滤膜、聚丙烯（pp）微滤膜或聚四氟乙烯（ptfe）微滤膜中的一种。步骤（5）中所述的超滤膜为磺化聚砜（psf）超滤膜、聚丙烯腈（pan）超滤膜、聚氯乙烯（pvc）超滤膜或聚偏氟乙烯（pvdf）超滤膜中的一种。步骤（5）中所述的纳滤膜为聚丙烯腈（pan）纳滤膜或聚酰胺（pa）纳滤膜。步骤（5）中所述的大孔树脂为hpd-826树脂或聚酰胺树脂。所述微滤膜、超滤膜和纳滤膜使用前在95%的乙醇中浸泡24小时使其充分溶胀，之后再用去离子水冲洗至无乙醇味，并浸泡在去离子水中，密封，以备用。相对于现有技术，本发明的杜仲叶提取物的制备方法，通过乙醇溶液提取，壳聚糖絮凝澄清，微孔过滤，大孔树脂吸附解吸，超滤过滤和纳滤浓缩，最大程度的提取有效物质，并进行分离提纯，得到的产品纯度高，使用范围广，使用乙醇溶液避免了使用有毒有害的溶剂，提取的产品可用于医药、化妆品等要求较高的领域。具体实施方式实施例1：一种杜仲叶提取物的制备方法，包括以下步骤：（1）原料处理：称取干净干燥的杜仲叶，在密闭的中草药粉碎机（fw135型）中粉碎，在振荡筛分机中过40-80目筛网，收集杜仲叶粉末以备用；（2）预处理：称取杜仲叶粉末，加入40%-60%质量分数的乙醇溶液，液料比为（10-16）ml：1g，进行浸润预处理，在水浴中温度为40-50℃时加入纤维素酶，搅拌5-10分钟，然后升温至50-60℃加入果胶酶，搅拌5-10分钟；（3）提取：将预处理后的液固混合物进行回流提取，提取温度为60-95℃，搅拌转速为600-1000r/min，提取时间为0.5-2h，提取次数为2-4次，静置数小时后，取上层清液，并合并数次的上层提取液；（4）除杂：在合并的提取液中加入壳聚糖，壳聚糖的质量百分数为0.5%-3%的提取液，在温度为55-65℃条件下搅拌絮凝30-60min，然后静置1-2h，然后过滤，采用质量分数为采用g4砂芯漏斗（孔径为3-4μm）内铺设孔径为4-5μm的微滤膜，进行真空抽滤，得到粗提液；（5）分离提纯：①大孔树脂吸附解吸，粗提液通过非极性或若极性大孔树脂吸附，树脂柱径高比1：4-1：8，上样流速1.0-3.0bv/h，当吸附后的排出液的浓度为≥90%粗提液浓度时，停止吸附；水洗流速为2.0-4.0bv/h，水洗用量为1.0-2.0bv，洗脱溶剂采用质量分数为60-80%的乙醇溶液，洗脱流速由小变大，从1bv/h至3bv/h，当解吸液的浓度≤5%粗提液浓度时，停止解吸；②超滤膜过滤，将上述步骤中得到的解吸液调整浓度至1-2mg/ml，采用平板滤膜过滤装置进行超滤分离过滤，采用超滤膜孔径为5-10nm，超滤压力为0.1-0.2mpa，超滤温度为60-80℃，收集滤出液；③纳滤膜浓缩，将上述步骤中的滤出液，采用平板滤膜过滤装置进行超滤分离过滤，采用纳滤膜孔径为1-3nm，压力为0.05-0.1mpa，温度为50-70℃，收集浓缩液，将浓缩液通过高效液相色谱仪进行色谱分离，将浓缩液显色之后，用紫外吸收检测器，在波长327nm处检测绿原酸的吸收值，在356nm处检测黄酮类的吸收值，并计算出含量；（6）浓缩干燥：在温度为50-70℃，真空度为0.07-0.09mpa的真空干燥箱中，浓缩干燥至粉末状，即得杜仲叶提取物产品。步骤（4）中所述的微滤膜为聚砜（psf）微滤膜、聚丙烯腈（pan）微滤膜、聚丙烯（pp）微滤膜或聚四氟乙烯（ptfe）微滤膜中的一种。步骤（5）中所述的超滤膜为磺化聚砜（psf）超滤膜、聚丙烯腈（pan）超滤膜、聚氯乙烯（pvc）超滤膜或聚偏氟乙烯（pvdf）超滤膜中的一种。步骤（5）中所述的纳滤膜为聚丙烯腈（pan）纳滤膜或聚酰胺（pa）纳滤膜。步骤（5）中所述的大孔树脂为hpd-826树脂或聚酰胺树脂。所述微滤膜、超滤膜和纳滤膜使用前在95%的乙醇中浸泡24小时使其充分溶胀，之后再用去离子水冲洗至无乙醇味，并浸泡在去离子水中，密封，以备用。实施例2：一种杜仲叶提取物的制备方法，包括以下步骤：（1）原料处理：称取干净干燥的杜仲叶，在密闭的中草药粉碎机（fw135型）中粉碎，在振荡筛分机中过40目筛网，收集杜仲叶粉末以备用；（2）预处理：称取杜仲叶粉末，加入60%质量分数的乙醇溶液，液料比为10ml：1g，进行浸润预处理，在水浴中温度为50℃时加入纤维素酶，搅拌5分钟，然后升温至60℃加入果胶酶，搅拌5分钟；（3）提取：将预处理后的液固混合物进行回流提取，提取温度为60℃，搅拌转速为1000r/min，提取时间为0.5h，提取次数为2次，静置数小时后，取上层清液，并合并数次的上层提取液；（4）除杂：在合并的提取液中加入壳聚糖，壳聚糖的质量百分数为0.5%的提取液，在温度为65℃条件下搅拌絮凝30min，然后静置2h，然后过滤，采用质量分数为采用g4砂芯漏斗（孔径为3-4μm）内铺设孔径为4-5μm的微滤膜，进行真空抽滤，得到粗提液；（5）分离提纯：①大孔树脂吸附解吸，粗提液通过非极性或若极性大孔树脂吸附，树脂柱径高比1：4，上样流速1.0bv/h，当吸附后的排出液的浓度为≥90%粗提液浓度时，停止吸附；水洗流速为2.0bv/h，水洗用量为1.0bv，洗脱溶剂采用质量分数为60%的乙醇溶液，洗脱流速由小逐渐变大，从1bv/h增大至3bv/h，具体根据实际情况实时调节，当解吸液的浓度≤5%粗提液浓度时，停止解吸；②超滤膜过滤，将上述步骤中得到的解吸液调整浓度至1-2mg/ml，采用平板滤膜过滤装置进行超滤分离过滤，采用超滤膜孔径为5-10nm，超滤压力为0.1mpa，超滤温度为80℃，收集滤出液；③纳滤膜浓缩，将上述步骤中的滤出液，采用平板滤膜过滤装置进行超滤分离过滤，采用纳滤膜孔径为1-3nm，压力为0.05mpa，温度为70℃，收集浓缩液，将浓缩液通过高效液相色谱仪进行色谱分离，将浓缩液显色之后，用紫外吸收检测器，在波长327nm处检测绿原酸的吸收值，在356nm处检测黄酮类的吸收值，并计算出含量；（6）浓缩干燥：在温度为70℃，真空度为0.07mpa的真空干燥箱中，浓缩干燥至粉末状，即得杜仲叶提取物产品。步骤（4）中所述的微滤膜为聚砜（psf）微滤膜。步骤（5）中所述的超滤膜为磺化聚砜（psf）超滤膜。步骤（5）中所述的纳滤膜为聚丙烯腈（pan）纳滤膜。步骤（5）中所述的大孔树脂为hpd-826树脂。所述微滤膜、超滤膜和纳滤膜使用前在95%的乙醇中浸泡24小时使其充分溶胀，之后再用去离子水冲洗至无乙醇味，并浸泡在去离子水中，密封，以备用。实施例3一种杜仲叶提取物的制备方法，包括以下步骤：（1）原料处理：称取干净干燥的杜仲叶，在密闭的中草药粉碎机（fw135型）中粉碎，在振荡筛分机中过80目筛网，收集杜仲叶粉末以备用；（2）预处理：称取杜仲叶粉末，加入40%质量分数的乙醇溶液，液料比为16ml：1g，进行浸润预处理，在水浴中温度为40℃时加入纤维素酶，搅拌10分钟，然后升温至50℃加入果胶酶，搅拌10分钟；（3）提取：将预处理后的液固混合物进行回流提取，提取温度为95℃，搅拌转速为600r/min，提取时间为2h，提取次数为4次，静置数小时后，取上层清液，并合并数次的上层提取液；（4）除杂：在合并的提取液中加入壳聚糖，壳聚糖的质量百分数为3%的提取液，在温度为55℃条件下搅拌絮凝60min，然后静置1h，然后过滤，采用质量分数为采用g4砂芯漏斗（孔径为3-4μm）内铺设孔径为4-5μm的微滤膜，进行真空抽滤，得到粗提液；（5）分离提纯：①大孔树脂吸附解吸，粗提液通过非极性或若极性大孔树脂吸附，树脂柱径高比1：8，上样流速3.0bv/h，当吸附后的排出液的浓度为≥90%粗提液浓度时，停止吸附；水洗流速为4.0bv/h，水洗用量为2.0bv，洗脱溶剂采用质量分数为80%的乙醇溶液，洗脱流速由小变大，从1bv/h至3bv/h，当解吸液的浓度≤5%粗提液浓度时，停止解吸；②超滤膜过滤，将上述步骤中得到的解吸液调整浓度至1-2mg/ml，采用平板滤膜过滤装置进行超滤分离过滤，采用超滤膜孔径为5-10nm，超滤压力为0.2mpa，超滤温度为60℃，收集滤出液；③纳滤膜浓缩，将上述步骤中的滤出液，采用平板滤膜过滤装置进行超滤分离过滤，采用纳滤膜孔径为1-3nm，压力为0.1mpa，温度为50℃，收集浓缩液，将浓缩液通过高效液相色谱仪进行色谱分离，将浓缩液显色之后，用紫外吸收检测器，在波长327nm处检测绿原酸的吸收值，在356nm处检测黄酮类的吸收值，并计算出含量；（6）浓缩干燥：在温度为50℃，真空度为0.09mpa的真空干燥箱中，浓缩干燥至粉末状，即得杜仲叶提取物产品。步骤（4）中所述的微滤膜为聚丙烯腈（pan）微滤膜。步骤（5）中所述的超滤膜为聚丙烯腈（pan）超滤膜。步骤（5）中所述的纳滤膜为聚酰胺（pa）纳滤膜。步骤（5）中所述的大孔树脂为聚酰胺树脂。所述微滤膜、超滤膜和纳滤膜使用前在95%的乙醇中浸泡24小时使其充分溶胀，之后再用去离子水冲洗至无乙醇味，并浸泡在去离子水中，密封，以备用。实施例4一种杜仲叶提取物的制备方法，包括以下步骤：（1）原料处理：称取干净干燥的杜仲叶，在密闭的中草药粉碎机（fw135型）中粉碎，在振荡筛分机中过60目筛网，收集杜仲叶粉末以备用；（2）预处理：称取杜仲叶粉末，加入50%质量分数的乙醇溶液，液料比为12ml：1g，进行浸润预处理，在水浴中温度为45℃时加入纤维素酶，搅拌8分钟，然后升温至55℃加入果胶酶，搅拌8分钟；（3）提取：将预处理后的液固混合物进行回流提取，提取温度为80℃，搅拌转速为800r/min，提取时间为1h，提取次数为3次，静置数小时后，取上层清液，并合并数次的上层提取液；（4）除杂：在合并的提取液中加入壳聚糖，壳聚糖的质量百分数为1.5%的提取液，在温度为60℃条件下搅拌絮凝45min，然后静置1.5h，然后过滤，采用质量分数为采用g4砂芯漏斗（孔径为3-4μm）内铺设孔径为4-5μm的微滤膜，进行真空抽滤，得到粗提液；（5）分离提纯：①大孔树脂吸附解吸，粗提液通过非极性或若极性大孔树脂吸附，树脂柱径高比1：6，上样流速2.0bv/h，当吸附后的排出液的浓度为≥90%粗提液浓度时，停止吸附；水洗流速为3.0bv/h，水洗用量为1.5bv，洗脱溶剂采用质量分数为70%的乙醇溶液，洗脱流速由小变大，从1bv/h至3bv/h，当解吸液的浓度≤5%粗提液浓度时，停止解吸；②超滤膜过滤，将上述步骤中得到的解吸液调整浓度至1-2mg/ml，采用平板滤膜过滤装置进行超滤分离过滤，采用超滤膜孔径为5-10nm，超滤压力为0.15mpa，超滤温度为70℃，收集滤出液；③纳滤膜浓缩，将上述步骤中的滤出液，采用平板滤膜过滤装置进行超滤分离过滤，采用纳滤膜孔径为1-3nm，压力为0.075mpa，温度为60℃，收集浓缩液，将浓缩液通过高效液相色谱仪进行色谱分离，将浓缩液显色之后，用紫外吸收检测器，在波长327nm处检测绿原酸的吸收值，在356nm处检测黄酮类的吸收值，并计算出含量；（6）浓缩干燥：在温度为60℃，真空度为0.08mpa的真空干燥箱中，浓缩干燥至粉末状，即得杜仲叶提取物产品。步骤（4）中所述的微滤膜为聚丙烯（pp）微滤膜。步骤（5）中所述的超滤膜为聚氯乙烯（pvc）超滤膜。步骤（5）中所述的纳滤膜为聚丙烯腈（pan）纳滤膜。步骤（5）中所述的大孔树脂为聚酰胺树脂。所述微滤膜、超滤膜和纳滤膜使用前在95%的乙醇中浸泡24小时使其充分溶胀，之后再用去离子水冲洗至无乙醇味，并浸泡在去离子水中，密封，以备用。实施例5一种杜仲叶提取物的制备方法，包括以下步骤：（1）原料处理：称取干净干燥的杜仲叶，在密闭的中草药粉碎机（fw135型）中粉碎，在振荡筛分机中过50目筛网，收集杜仲叶粉末以备用；（2）预处理：称取杜仲叶粉末，加入55%质量分数的乙醇溶液，液料比为14ml：1g，进行浸润预处理，在水浴中温度为45℃时加入纤维素酶，搅拌7分钟，然后升温至55℃加入果胶酶，搅拌9分钟；（3）提取：将预处理后的液固混合物进行回流提取，提取温度为70℃，搅拌转速为700r/min，提取时间为1.5h，提取次数为3次，静置数小时后，取上层清液，并合并数次的上层提取液；（4）除杂：在合并的提取液中加入壳聚糖，壳聚糖的质量百分数为2%的提取液，在温度为55℃条件下搅拌絮凝50min，然后静置1h，然后过滤，采用质量分数为采用g4砂芯漏斗（孔径为3-4μm）内铺设孔径为4-5μm的微滤膜，进行真空抽滤，得到粗提液；（5）分离提纯：①大孔树脂吸附解吸，粗提液通过非极性或若极性大孔树脂吸附，树脂柱径高比1：5，上样流速1.5bv/h，当吸附后的排出液的浓度为≥90%粗提液浓度时，停止吸附；水洗流速为2.5bv/h，水洗用量为2bv，洗脱溶剂采用质量分数为75%的乙醇溶液，洗脱流速由小变大，从1bv/h至3bv/h，当解吸液的浓度≤5%粗提液浓度时，停止解吸；②超滤膜过滤，将上述步骤中得到的解吸液调整浓度至1-2mg/ml，采用平板滤膜过滤装置进行超滤分离过滤，采用超滤膜孔径为5-10nm，超滤压力为0.1mpa，超滤温度为65℃，收集滤出液；③纳滤膜浓缩，将上述步骤中的滤出液，采用平板滤膜过滤装置进行超滤分离过滤，采用纳滤膜孔径为1-3nm，压力为0.1mpa，温度为55℃，收集浓缩液，将浓缩液通过高效液相色谱仪进行色谱分离，将浓缩液显色之后，用紫外吸收检测器，在波长327nm处检测绿原酸的吸收值，在356nm处检测黄酮类的吸收值，并计算出含量；（6）浓缩干燥：在温度为55℃，真空度为0.07mpa的真空干燥箱中，浓缩干燥至粉末状，即得杜仲叶提取物产品。步骤（4）中所述的微滤膜为聚四氟乙烯（ptfe）微滤膜。步骤（5）中所述的超滤膜为聚偏氟乙烯（pvdf）超滤膜。步骤（5）中所述的纳滤膜为聚丙烯腈（pan）纳滤膜。步骤（5）中所述的大孔树脂为hpd-826树脂。所述微滤膜、超滤膜和纳滤膜使用前在95%的乙醇中浸泡24小时使其充分溶胀，之后再用去离子水冲洗至无乙醇味，并浸泡在去离子水中，密封，以备用。实施例6一种杜仲叶提取物的制备方法，包括以下步骤：（1）原料处理：称取干净干燥的杜仲叶，在密闭的中草药粉碎机（fw135型）中粉碎，在振荡筛分机中过60目筛网，收集杜仲叶粉末以备用；（2）预处理：称取杜仲叶粉末，加入45%质量分数的乙醇溶液，液料比为15ml：1g，进行浸润预处理，在水浴中温度为50℃时加入纤维素酶，搅拌8分钟，然后升温至50℃加入果胶酶，搅拌8分钟；（3）提取：将预处理后的液固混合物进行回流提取，提取温度为90℃，搅拌转速为900r/min，提取时间为2h，提取次数为2次，静置数小时后，取上层清液，并合并数次的上层提取液；（4）除杂：在合并的提取液中加入壳聚糖，壳聚糖的质量百分数为2.5%的提取液，在温度为65℃条件下搅拌絮凝55min，然后静置2h，然后过滤，采用质量分数为采用g4砂芯漏斗（孔径为3-4μm）内铺设孔径为4-5μm的微滤膜，进行真空抽滤，得到粗提液；（5）分离提纯：①大孔树脂吸附解吸，粗提液通过非极性或若极性大孔树脂吸附，树脂柱径高比1：7，上样流速2.5bv/h，当吸附后的排出液的浓度为≥90%粗提液浓度时，停止吸附；水洗流速为2.5bv/h，水洗用量为2.0bv，洗脱溶剂采用质量分数为65%的乙醇溶液，洗脱流速由小变大，从1bv/h至3bv/h，当解吸液的浓度≤5%粗提液浓度时，停止解吸；②超滤膜过滤，将上述步骤中得到的解吸液调整浓度至1-2mg/ml，采用平板滤膜过滤装置进行超滤分离过滤，采用超滤膜孔径为5-10nm，超滤压力为0.2mpa，超滤温度为75℃，收集滤出液；③纳滤膜浓缩，将上述步骤中的滤出液，采用平板滤膜过滤装置进行超滤分离过滤，采用纳滤膜孔径为1-3nm，压力为0.05mpa，温度为65℃，收集浓缩液，将浓缩液通过高效液相色谱仪进行色谱分离，将浓缩液显色之后，用紫外吸收检测器，在波长327nm处检测绿原酸的吸收值，在356nm处检测黄酮类的吸收值，并计算出含量；（6）浓缩干燥：在温度为65℃，真空度为0.08mpa的真空干燥箱中，浓缩干燥至粉末状，即得杜仲叶提取物产品。步骤（4）中所述的微滤膜为聚砜（psf）微滤膜。步骤（5）中所述的超滤膜为聚丙烯腈（pan）超滤膜。步骤（5）中所述的纳滤膜为聚酰胺（pa）纳滤膜。步骤（5）中所述的大孔树脂为聚酰胺树脂。所述微滤膜、超滤膜和纳滤膜使用前在95%的乙醇中浸泡24小时使其充分溶胀，之后再用去离子水冲洗至无乙醇味，并浸泡在去离子水中，密封，以备用。实施例7一种杜仲叶提取物的制备方法，包括以下步骤：（1）原料处理：称取干净干燥的杜仲叶，在密闭的中草药粉碎机（fw135型）中粉碎，在振荡筛分机中过40目筛网，收集杜仲叶粉末以备用；（2）预处理：称取杜仲叶粉末，加入50%质量分数的乙醇溶液，液料比为16ml：1g，进行浸润预处理，在水浴中温度为45℃时加入纤维素酶，搅拌10分钟，然后升温至55℃加入果胶酶，搅拌10分钟；（3）提取：将预处理后的液固混合物进行回流提取，提取温度为90℃，搅拌转速为750r/min，提取时间为1h，提取次数为3次，静置数小时后，取上层清液，并合并数次的上层提取液；（4）除杂：在合并的提取液中加入壳聚糖，壳聚糖的质量百分数为3%的提取液，在温度为60℃条件下搅拌絮凝45min，然后静置1h，然后过滤，采用质量分数为采用g4砂芯漏斗（孔径为3-4μm）内铺设孔径为4-5μm的微滤膜，进行真空抽滤，得到粗提液；（5）分离提纯：①大孔树脂吸附解吸，粗提液通过非极性或若极性大孔树脂吸附，树脂柱径高比1：8，上样流速3.0bv/h，当吸附后的排出液的浓度为≥90%粗提液浓度时，停止吸附；水洗流速为4.0bv/h，水洗用量为2.0bv，洗脱溶剂采用质量分数为80%的乙醇溶液，洗脱流速由小变大，从1bv/h至3bv/h，当解吸液的浓度≤5%粗提液浓度时，停止解吸；②超滤膜过滤，将上述步骤中得到的解吸液调整浓度至1-2mg/ml，采用平板滤膜过滤装置进行超滤分离过滤，采用超滤膜孔径为5-10nm，超滤压力为0.2mpa，超滤温度为60℃，收集滤出液；③纳滤膜浓缩，将上述步骤中的滤出液，采用平板滤膜过滤装置进行超滤分离过滤，采用纳滤膜孔径为1-3nm，压力为0.075mpa，温度为60℃，收集浓缩液，将浓缩液通过高效液相色谱仪进行色谱分离，将浓缩液显色之后，用紫外吸收检测器，在波长327nm处检测绿原酸的吸收值，在356nm处检测黄酮类的吸收值，并计算出含量；（6）浓缩干燥：在温度为50℃，真空度为0.09mpa的真空干燥箱中，浓缩干燥至粉末状，即得杜仲叶提取物产品。步骤（4）中所述的微滤膜为聚四氟乙烯（ptfe）微滤膜。步骤（5）中所述的超滤膜为聚氯乙烯（pvc）超滤膜。步骤（5）中所述的纳滤膜为聚丙烯腈（pan）纳滤膜。步骤（5）中所述的大孔树脂为hpd-826树脂。所述微滤膜、超滤膜和纳滤膜使用前在95%的乙醇中浸泡24小时使其充分溶胀，之后再用去离子水冲洗至无乙醇味，并浸泡在去离子水中，密封，以备用。实施例8一种杜仲叶提取物的制备方法，包括以下步骤：（1）原料处理：称取干净干燥的杜仲叶，在密闭的中草药粉碎机（fw135型）中粉碎，在振荡筛分机中过60目筛网，收集杜仲叶粉末以备用；（2）预处理：称取杜仲叶粉末，加入40%-60%质量分数的乙醇溶液，液料比为15ml：1g，进行浸润预处理，在水浴中温度为40℃时加入纤维素酶，搅拌8分钟，然后升温至50℃加入果胶酶，搅拌8分钟；（3）提取：将预处理后的液固混合物进行回流提取，提取温度为65℃，搅拌转速为600r/min，提取时间为2h，提取次数为2次，静置数小时后，取上层清液，并合并数次的上层提取液；（4）除杂：在合并的提取液中加入壳聚糖，壳聚糖的质量百分数为1%的提取液，在温度为58℃条件下搅拌絮凝50min，然后静置1.5h，然后过滤，采用质量分数为采用g4砂芯漏斗（孔径为3-4μm）内铺设孔径为4-5μm的微滤膜，进行真空抽滤，得到粗提液；（5）分离提纯：①大孔树脂吸附解吸，粗提液通过非极性或若极性大孔树脂吸附，树脂柱径高比1：6，上样流速2bv/h，当吸附后的排出液的浓度为≥90%粗提液浓度时，停止吸附；水洗流速为3bv/h，水洗用量为1.5bv，洗脱溶剂采用质量分数为70%的乙醇溶液，洗脱流速由小变大，从1bv/h至3bv/h，当解吸液的浓度≤5%粗提液浓度时，停止解吸；②超滤膜过滤，将上述步骤中得到的解吸液调整浓度至1-2mg/ml，采用平板滤膜过滤装置进行超滤分离过滤，采用超滤膜孔径为5-10nm，超滤压力为0.15mpa，超滤温度为65℃，收集滤出液；③纳滤膜浓缩，将上述步骤中的滤出液，采用平板滤膜过滤装置进行超滤分离过滤，采用纳滤膜孔径为1-3nm，压力为0.06mpa，温度为55℃，收集浓缩液，将浓缩液通过高效液相色谱仪进行色谱分离，将浓缩液显色之后，用紫外吸收检测器，在波长327nm处检测绿原酸的吸收值，在356nm处检测黄酮类的吸收值，并计算出含量；（6）浓缩干燥：在温度为70℃，真空度为0.07mpa的真空干燥箱中，浓缩干燥至粉末状，即得杜仲叶提取物产品。步骤（4）中所述的微滤膜为聚丙烯腈（pan）微滤膜。步骤（5）中所述的超滤膜为磺化聚砜（psf）超滤膜。步骤（5）中所述的纳滤膜为聚丙烯腈（pan）纳滤膜。步骤（5）中所述的大孔树脂为聚酰胺树脂。所述微滤膜、超滤膜和纳滤膜使用前在95%的乙醇中浸泡24小时使其充分溶胀，之后再用去离子水冲洗至无乙醇味，并浸泡在去离子水中，密封，以备用。对比例1一种杜仲叶提取物的制备方法，包括以下步骤：（1）原料处理：称取干净干燥的杜仲叶，在密闭的中草药粉碎机（fw135型）中粉碎，在振荡筛分机中过60目筛网，收集杜仲叶粉末以备用；（2）提取：称取杜仲叶粉末，进行回流提取，提取温度为65℃，搅拌转速为600r/min，提取时间为2h，提取次数为2次，静置数小时后，取上层清液，并合并数次的上层提取液；（3）分离提纯：①大孔树脂吸附解吸，粗提液通过非极性或若极性大孔树脂吸附，树脂柱径高比1：6，上样流速2bv/h，当吸附后的排出液的浓度为≥90%粗提液浓度时，停止吸附；水洗流速为3bv/h，水洗用量为1.5bv，洗脱溶剂采用质量分数为70%的乙醇溶液，洗脱流速由小变大，从1bv/h至3bv/h，当解吸液的浓度≤5%粗提液浓度时，停止解吸；（4）浓缩干燥：在温度为70℃，真空度为0.07mpa的真空干燥箱中，浓缩干燥至粉末状，即得杜仲叶提取物产品。实施例2-8和对比例1制得的杜仲叶提取物产品中的绿原酸和黄酮类化合物的含量和收率如表1所示。表1实施例2-8和对比例1制得的杜仲叶提取物产品中的绿原酸和黄酮类化合物的含量和收率实施例绿原酸含量%绿原酸收率%黄酮类含量%黄酮类收率%实施例243.17.949.69.8实施例344.49.150.210.3实施例445.910.551.010.8实施例546.710.850.111.5实施例647.711.150.411.7实施例744.58.951.510.3实施例845.18.850.89.9对比例141.87.150.49.6本发明采用醇提法，避免加入有毒有害溶剂，制备的杜仲叶提取物产品可以安全的用于医药、化妆品领域，本发明采用大孔树脂吸附解吸法和膜分离提纯法，所得的杜仲叶提取物产品中的绿原酸和黄酮类化合物的含量高达98.1%，大大减少了杂质的含量,提高了产品的纯度。本发明的工艺可操作性强，可以控制不同的参数以达到不同的使用效果，得到的产品收率高，纯度好。以上所述的仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明整体构思前提下，还可以作出若干改变和改进，这些也应该视为本发明的保护范围。当前第1页12