使用可溶性CD24治疗癌症疗法中免疫相关不良事件的方法与流程

发明领域

本发明涉及cd24蛋白在治疗与癌症免疫疗法有关的免疫相关不良事件(irae)中的用途。

发明背景

免疫系统具有识别和消除实验模型系统以及患者体内癌症的能力。结果，癌症免疫治疗正在成为癌症治疗最有前途的领域之一。主动的癌症免疫疗法涉及放大自然免疫反应的试剂(包括针对pd-1、pd-l1或ctla-4的抗体)；调节肿瘤微环境的小分子；或使用离体刺激的肿瘤浸润淋巴细胞(til)、活化的自然杀伤(nk)细胞或基因改造的t细胞(嵌合抗原受体[car]和t细胞受体[tcr]修饰的t细胞)进行过继细胞移植(act)。另外，其他直接针对肿瘤的癌症免疫疗法也可以间接引起免疫系统的激活(其包括针对癌症的抗体，例如在实体癌的情况中为抗her-2抗体，在b细胞恶性肿瘤的情况中为抗cd20抗体，或在神经母细胞瘤的情况下为抗gm2抗体)。针对pd-1、pd-l1和ctla-4的抗体，以及靶向肿瘤的抗体，已显示出可用于治疗实体瘤和血液肿瘤的巨大益处。过继细胞免疫疗法(例如cart细胞)已证明对血液系统肿瘤(如白血病)具有令人印象深刻的作用，但迄今为止对实体瘤的作用有限。虽然car-t免疫疗法更多地针对血液恶性肿瘤，但使用基因修饰的tcr的t细胞免疫疗法更多针对实体瘤。

肿瘤通过产生高度耐受和免疫抑制的肿瘤微环境(tme)逃避免疫消除。因此，免疫肿瘤学的一个重要目标是了解肿瘤采用的各种耐受机制，以消除这些机制，从而允许肿瘤浸润、激活和被免疫系统破坏肿瘤细胞。然而，尽管其有治疗前景，但免疫治疗的全身递送也可能导致自我耐受性的破坏。这又导致各种器官系统发生轻度至重度的炎症反应，并且在某些情况下导致威胁生命的自身免疫，通常称为免疫相关不良事件(irae)。随着免疫治疗方法扩展到更多的癌症适应症以及越来越有效的组合，控制非特异性irae将成为这些下一代癌症免疫治疗的关键目标。

在临床前模型中，用针对pd-1、pd-l1和ctla-4的抗体进行治疗是增强抗肿瘤免疫力的强大工具。用抗ctla4的抗体进行单药治疗可促进各种来源的可移植肿瘤的排斥。基于有前途的临床前肿瘤模型研究，已经在不同的人类恶性肿瘤中探索了抗ctla4抗体的临床潜力。尽管抗ctla4(伊匹单抗(ipilimumab)，以yervoy售卖，在美国专利号6,984,720中公开)已显示出治疗黑素瘤的功效，但是ctla4的治疗和靶向与自身免疫样毒性有关。抗pd-1和抗pd-l1抗体显示出明显更高的临床反应和明显更低的irae。但是，大约15-20％的癌症患者仍会出现严重的自身免疫不良事件。此外，抗ctla4mab(例如伊匹单抗和替西木单抗(tremelimumab))与抗pd-1/pd-l1抗体用于联合治疗，具有优异的治疗效果。但是，改善的治疗效果与3级和4级器官毒性的甚至更高发生率相关。已经报道了多个身体部位的irae实例，包括胃肠道、皮肤、肾脏、胰腺、肝脏以及中枢和周围神经系统。irae的发生率和严重程度与患者的总体反应和对检查点阻断的存活率相关，这表明抗肿瘤和自身免疫反应均对抗检查点免疫疗法敏感。此类irae可以大致归类为“自身免疫毒性”或所谓的“靶上非肿瘤毒性”，这是由于当目标肿瘤相关抗原在非恶性组织上表达时，对宿主组织的抗原特异性攻击所致。输注靶向mage-a3的基因工程t细胞后，自身免疫毒性导致致命的毒性。

遗传工程化的t细胞疗法(例如car-t)也与限制其使用的irae相关，尽管此处的不良事件更常见是与细胞因子相关的毒性。car-t细胞导致体内t细胞扩增，其可能导致细胞因子毒性水平的释放，这种全身性炎症反应不同地被称为细胞因子风暴或细胞因子释放综合征(crs)。输注反应在抗体和fc融合蛋白治疗剂中也很常见，并伴有轻度恶心和发烧到威胁生命的多器官衰竭等症状。对于所有经历cart细胞毒性的患者，积极的支持治疗都是必要的，对低血压的早期干预和对并发感染的治疗至关重要。但是，由于免疫抑制疗法废除了cart细胞的抗恶性活性的风险使药理管理变得复杂，这是不使用预防性免疫抑制的主要原因。尽管不同治疗中心的给药适应症有所不同，但使用托珠单抗(tocilizumab)阻断白介素6受体仍是crs的主要药物治疗方法。

crs还伴随着与恶性细胞快速溶解相关的其他形式的癌症治疗而发生，导致了急性过敏反应或称为肿瘤溶解综合征(tls)的现象。由于细胞溶解会导致释放称为危险(损害)相关分子模式(damp)的细胞内成分，因此如果控制不当，它会引起炎症并为自身免疫性疾病设定阶段。然而，传统的免疫抑制剂对于癌症治疗中的不良事件可能是成问题的，因为据认为所有形式的癌症治疗都需要直接或间接的抗癌免疫反应。

因此，在保持癌症免疫力的同时治疗irae的医疗需求仍然很大。

技术实现要素：

本文提供了通过向需要的受试者施用cd24蛋白来治疗、减轻、最小化或预防与癌症免疫疗法相关的免疫相关不良事件(irae)的方法。irae可以是腹泻或其他胃肠道疾病、纯红细胞发育不全、小红细胞性贫血、狼疮、自身免疫性肾炎、自身免疫性肝炎、肺炎、心肌炎、心包炎、内分泌病、艾迪生病、性腺功能低下、干燥综合征或i型糖尿病。cd24蛋白可包含成熟的人cd24或其变体。成熟的人cd24的序列可以包含seqidno：1或2所示的氨基酸序列。cd24蛋白可包含人cd24的任何或全部细胞外结构域。cd24蛋白的序列可以包含具有seqidno：4所示氨基酸序列的信号序列，以允许从表达该蛋白的细胞分泌。信号肽序列可以是在其他跨膜或分泌的蛋白质上发现的信号肽序列，或者是从本领域已知的现有信号肽修饰的信号肽序列。cd24蛋白可以是可溶的和/或可以被糖基化。可以使用真核蛋白表达系统产生cd24蛋白，所述真核蛋白表达系统可以包含中国仓鼠卵巢细胞系中包含的载体或复制缺陷型逆转录病毒载体。复制缺陷型逆转录病毒载体可以稳定地整合到真核细胞的基因组中。

cd24蛋白可以包含蛋白标签，其可以在cd24蛋白的n或c末端融合。该蛋白质可以包含哺乳动物免疫球蛋白(ig)的一部分，其可以是人ig蛋白质的fc区。人ig蛋白可以包含人ig蛋白的铰链区以及ch2和ch3结构域，并且人ig蛋白可以是igg1、igg2、igg3、igg4或iga。fc区还可包含铰链区和igm的ch2、ch3和ch4结构域。cd24蛋白可包含seqidno：5、6、8、9、11或12所示的氨基酸序列。

癌症免疫疗法可以是抗ctla4抗体，其可以是伊匹单抗。抗ctla4抗体可以与另一种疗法联合施用。癌症疗法也可以是抗pd-1抗体，其可以与另一种疗法联合施用。癌症疗法也可以是抗pd-l1抗体，其可以与另一种疗法联合施用。癌症疗法也可以是嵌合抗原t细胞、t细胞受体修饰的t细胞或活化的自然杀伤细胞。癌症疗法也可以是放射疗法、化学疗法或涉及靶向癌细胞的抗体的癌症疗法。

本文还描述了在同种异体造血干细胞移植(hsct)后可能接受、已经接受或正在接受活化的自然杀伤(ank)细胞的受试者中通过将cd24蛋白给予需要其的受试者来治疗、减少或预防移植物抗宿主病(gvhd)的方法。

本文进一步描述了通过将cd24给予需要其的受试者来预防或治疗在癌症治疗期间与大规模肿瘤溶解相关的irae的方法。癌症疗法可以是放射疗法、化学疗法或引起癌细胞直接杀伤的抗癌抗体。

附图说明

图1a显示了全长cd24融合蛋白cd24fc(本文也称为cd24ig)(seqidno：5)的氨基酸组成。带下划线的26个氨基酸是cd24的信号肽(seqidno：4)，其在分泌期间从表达该蛋白质的细胞中被切除，因此从该蛋白质的加工形式(seqidno：6)中缺失。序列的粗体部分是融合蛋白中使用的成熟cd24蛋白的胞外结构域(seqidno：2)。为了避免免疫原性，成熟cd24蛋白中通常存在的最后一个氨基酸(a或v)已被缺失。非带下划线的非粗体字母是igg1fc的序列，包括铰链区以及ch1和ch2结构域(seqidno：7)。图1b显示了cd24^vfc的序列(seqidno：8)，其中成熟的人cd24蛋白(粗体)是seqidno：1的缬氨酸多态性变体。图1c显示了cd24^afc的序列(seqidno：9)，其中成熟的人cd24蛋白(粗体)是seqidno：1的丙氨酸多态性变体。图1b和1c中融合蛋白的各个部分如图1a中标记，并且变体缬氨酸/丙氨酸氨基酸用双下划线标出。

图2显示了来自小鼠(seqidno：3)和人(seqidno：2)的成熟cd24蛋白之间的氨基酸序列变异。潜在的o-糖基化位点以粗体显示，n-糖基化位点用下划线标出。

图3.cd24igg1(cd24fc)药代动力学的winnonlin区室建模分析。空心圆代表3只小鼠的平均值，线是预测的药代动力学曲线。图3a.静脉注射1mgcd24igg1。图3b.皮下注射1mgcd24igg1(cd24fc)。图3c.通过曲线下面积(auc)、半衰期和最大血液浓度测量的血液中抗体总量的比较。注意，总体而言，皮下注射的auc和cmax约为静脉注射的80％，尽管该差异在统计学上并不显著。

图4.cd24-siglecg(10)相互作用可区分pamp和damp。图4a.宿主对pamp的响应不受cd24-siglecg(10)相互作用的影响。图4b.cd24-siglecg(10)相互作用可能通过与siglecg/10相关的shp-1抑制宿主对damp的响应。

图5.cd24fc与siglec10和hmgb1结合并激活siglecg(人siglec10的小鼠同源物)。图5a.cd24-fc-siglec10相互作用的亲和力测量。图5b.cd24-fc以阳离子依赖的方式与hmgb-1特异性相互作用。在存在或不存在阳离子螯合剂edta的情况下，将cd24-fc与hmgb1在0.1mm的cacl2和mgcl2中温育。将cd24fc与蛋白g-小珠下拉，并通过蛋白质印迹法确定hmgb1、cd24fc或对照fc的量。图5c.cd24-fc通过诱导酪氨酸磷酸化(中图)并与shp-1(上图)结合来激活小鼠siglecg。siglecg的量显示在下图中。用1μg/ml的cd24-fc、对照fc或媒介物(pbs)对照刺激cd24^-/-脾细胞30分钟。然后对siglecg进行免疫沉淀，并用抗磷酸酪氨酸或抗shp-1进行探测。

图6.cd24fc抑制抗cd3激活的人t细胞产生tnf-α和ifn-γ。在存在或不存在cd24fc的情况下，用抗cd3刺激人pbml4天，并通过elisa测量细胞培养上清液中释放的ifn-γ和tnf-α的量。显示的数据是一式三份的平均值。误差线，sem。

图7.cd24抑制人类巨噬细胞产生炎症性细胞因子。图7a.cd24的shrna沉默导致自发产生tnf-α、il-1β和il-6。用编码合成的或两个独立的cd24shrna分子的慢病毒载体转导thp1细胞。通过与pma(15ng/ml)培养4天，将转导的细胞分化为巨噬细胞。洗去pma和非贴壁细胞后，将细胞再培养24小时以通过细胞因子珠阵列测量炎性细胞因子。图7b.如图7a，不同是在最后的24小时内将给定浓度的cd24fc或对照iggfc添加至巨噬细胞。图4a所示的数据是来自三个独立实验的平均值和s.d.，而图4b中的代表至少3个独立实验。

图8.cd24fc和csa疗效的kaplan-meier存活分析，来自两个独立实验的汇总数据。

图9显示了通过治疗人受试者中pk可评估群体的平均血浆cd24fc浓度(±sd)的图。pk＝药代动力学；sd＝标准偏差。

图10示出了针对pk可评估群体的cd24fccmax与剂量的剂量比例图。

图11示出了针对pk可评估群体的cd24fcauc0-42d与剂量的剂量比例图。

图12示出了针对pk可评估群体的cd24fcauc0-inf与剂量的剂量比例图。

具体实施方式

发明人已经惊奇地发现，cd24的可溶形式对治疗免疫相关的不良事件(irae)是高度有效的。该作用可以通过damp介导。模式识别涉及由病原体相关和组织损伤相关分子模式(分别称为pamp和damp)触发的炎症反应。发明人已经认识到，最近的研究表明，对damp的加剧的宿主反应可能在炎性和自身免疫性疾病的发病机理中起作用。发现damp促进炎性细胞因子和自身免疫疾病的产生并在动物模型中产生，并因此发现damp诸如hmgb1和hsp90的抑制剂改善类风湿性关节炎(ra)(4-6)。tlr、rage-r、dngr(由clec9a编码)和mincle已显示是负责介导通过多种damp引发的炎症的受体(2,7-14)。

本发明人最近的工作证明了cd24-siglecg相互作用区分damp与pamp的先天免疫(15,16)。siglec蛋白是与膜相关的免疫球蛋白(ig)超家族成员，其识别多种含唾液酸的结构。大多数siglecs具有与shp-1、-2和cbl-b相关的细胞内免疫酪氨酸抑制基序(itim)，以控制炎症反应的关键调节因子。本发明人已经报道cd24是小鼠中siglec、siglecg和人中siglec10的第一自然配体(15)。siglecg与唾液酸化的cd24相互作用以经由shp-1/2信号传导机制抑制tlr介导的对damp如hmgb1的宿主反应(15)。

人cd24是由cd24基因中240个碱基对的开放阅读框编码的小gpi锚定分子(28)。在这80个氨基酸中，前26个构成信号肽，而后23个用作裂解信号，以允许gpi尾部附着。结果，成熟的人cd24分子仅具有31个氨基酸。这31个氨基酸之一是人群体中多态的。开放阅读框的核苷酸170处的c到t过渡导致丙氨酸(a)被缬氨酸(v)取代。由于该残基位于切割位点的紧邻n端，并且由于置换是非保守的，因此这两个等位基因可能在细胞表面以不同的效率表达。事实上，随着cdna的转染研究表明，cd24^v等位基因在细胞表面上更有效地表达(28)。与此相一致，cd24^v/vpbl表达更高水平的cd24，尤其是在t细胞上。

发明人已经证明cd24负调节宿主对由于组织或器官损伤而释放的细胞damp的应答，并且至少两种重叠的机制可以解释该活性。首先，cd24与几种damp结合，包括hsp70、hsp90、hmgb1和核仁素，并抑制宿主对这些damp的应答。为此，假定cd24可以捕获炎症刺激，以防止与其受体tlr或rage相互作用。其次，使用对乙酰氨基酚诱导的小鼠肝坏死模型并确保炎症，发明人证明了cd24通过与其受体siglecg相互作用，为宿主对组织损伤的反应提供了强有力的负调控。为了实现该活性，cd24可以通过siglecg结合并刺激信号传导，其中与siglecg相关的shp1触发负调控。这两种机制可协同作用，因为具有任一基因的靶向突变的小鼠引起强得多的炎症反应。实际上，当用hmgb1、hsp70或hsp90刺激时，从cd24-/-或siglecg-/-小鼠的骨髓中培养的dc产生较高水平的炎症细胞因子。据发明人所知，cd24是唯一能够抑制由damp触发的炎症的抑制性damp受体，并且目前没有专门针对宿主对组织损伤的炎症反应的药物。此外，本发明人已经使用ra、ms和gvhd的小鼠模型证明了外源可溶性cd24蛋白减轻damp介导的自身免疫病的能力。

1.定义.

本文所使用的术语仅出于描述特定实施方案的目的，而无意是限制性的。如说明书和所附权利要求书中所使用的，单数形式“一”、“一个”和“该”包括复数对象，除非上下文另外明确指出。

对于在此的数值范围列举，明确地考虑了它们之间具有相同精确度的每个中间数字。例如，对于6-9的范围，除了6和9外，数字7和8也可以考虑；对于6.0-7.0的范围，明确考虑数字6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9和7.0。

“肽”或“多肽”是氨基酸的连接序列，并且可以是天然的、合成的或天然和合成的修饰或组合。

“基本相同”可以表示第一和第二氨基酸序列在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290或300个氨基酸的区域至少为60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％。

当提到保护动物免受疾病侵害时，“治疗”或“处理”是指预防、抑制、压制或完全消除疾病。预防疾病包括在疾病发作之前向动物施用本发明的组合物。抑制疾病包括在诱导疾病之后但在其临床出现之前向动物施用本发明的组合物。压制疾病包括在疾病的临床出现后向动物施用本发明的组合物。

“变体”可以意指通过氨基酸的插入、缺失或保守取代而在氨基酸序列上不同，但是保留至少一种生物学活性的肽或多肽。“生物活性”的代表性例子包括与toll样受体结合并被特异性抗体结合的能力。变体也可以意指具有与保留至少一种生物学活性的氨基酸序列的参照蛋白质基本相同的氨基酸序列的蛋白质。氨基酸的保守取代，即用具有相似性质(例如，亲水性、带电区域的程度和分布)的不同氨基酸取代氨基酸，通常被认为涉及较小的变化。如本领域所理解的，这些微小的变化可以部分地通过考虑氨基酸的亲水指数来鉴定。kyte等人j.mol.biol.157:105-132(1982)。氨基酸的亲水指数基于对其疏水性和电荷的考虑。在本领域中已知具有相似亲水指数的氨基酸可以被取代并且仍然保留蛋白质功能。一方面，亲水指数为±2的氨基酸被取代。氨基酸的亲水性也可用于揭示使蛋白质保留生物学功能的取代基。在肽的情况下考虑氨基酸的亲水性可以计算该肽的最大局部平均亲水性，这是一种据报道与抗原性和免疫原性很好地相关的有用方法。美国专利号4,554,101，通过引用完全并入本文。如本领域所理解的，具有相似亲水性值的氨基酸的取代可以导致肽保留生物学活性，例如免疫原性。可用亲水性值彼此在±2之内的氨基酸进行取代。氨基酸的疏水性指数和亲水性值均受该氨基酸的特定侧链影响。与该观察一致，与生物学功能相容的氨基酸取代应理解为取决于氨基酸的相对相似性，尤其是那些氨基酸的侧链，如疏水性、亲水性、电荷、大小和其他属性所揭示的。

2.cd24

本文提供了cd24蛋白，其可以包含成熟的cd24或其变体。成熟的cd24对应于cd24的胞外结构域(ecd)。成熟的cd24可以来自人或另一种哺乳动物。如上所述，成熟的人cd24蛋白长31个氨基酸，并在其c末端具有可变的丙氨酸(a)或缬氨酸(v)残基：

setttgtssnssqstsnsglapnptnattk(v/a)(seqidno:1)

c-末端缬氨酸或丙氨酸可以是免疫原性的，并且可以从cd24蛋白中省略掉，从而降低其免疫原性。因此，cd24蛋白可包含缺少c端氨基酸的人cd24的氨基酸序列：

setttgtssnssqstsnsglapnptnattk(seqidno:2)

尽管来自小鼠和人的成熟cd24蛋白的氨基酸序列有相当大的序列变异，但它们在功能上是等效的，因为已显示人cd24fc在小鼠中具有活性。人cd24ecd的氨基酸序列显示出与小鼠蛋白的某些序列保守性(39％同一性；genbank登录号np_033976)。然而，并不奇怪，同一性百分比不会更高，因为取决于物种，cd24ecd的长度仅为27-31个氨基酸，并且与其一些受体例如siglec10/g结合通过糖蛋白的唾液酸和/或半乳糖介导。人siglec-10(genbank登录号af310233)与其鼠类同系物siglec-g(genbank登录号np_766488)受体蛋白的细胞外结构域之间的氨基酸序列同一性为63％(图2)。由于小鼠和人cd24之间主要在c端和糖基化位点的丰度上进行序列保守，因此使用cd24蛋白可以耐受成熟cd24蛋白的显著变异，特别是如果这些变异不影响保守的c末端的残基或不影响小鼠或人cd24的糖基化位点。因此，cd24蛋白可以包含成熟鼠cd24的氨基酸序列：

nqtsvapfpgnqnisaspnptnattrg(seqidno:3)。

与小鼠相比，人cd24ecd的氨基酸序列显示出更多的食蟹猴蛋白的序列保守性(52％同一；uniprot登录号uniprotkb-i7gkk1)。同样，这并不奇怪，因为同一性百分比不更高，因为在这些物种中ecd的长度仅为29-31个氨基酸，以及糖残基在与其受体结合中的作用。食蟹猴siglec-10受体的氨基酸序列尚未确定，但人和恒河猴siglec-10(genbank登录号xp_001116352)蛋白之间的氨基酸序列同一性为89％。因此，cd24蛋白还可包含成熟食蟹猴(或恒河猴)cd24的氨基酸序列：

tvttsaplssnspqntsttpnpantttka(seqidno:10)

cd24蛋白可以是可溶的。cd24蛋白可进一步包含n端信号肽，以允许从表达该蛋白的细胞分泌。信号肽序列可包含氨基酸序列mgramvarlglgllllalllptqiys(seqidno:4)。可选地，信号序列可以是在其他跨膜或分泌的蛋白质上发现的那些信号序列，或者是由本领域已知的现有信号肽修饰的那些信号序列。

a.融合

cd24蛋白可以在其n或c末端与蛋白标签融合，该蛋白标签可以包含一部分哺乳动物ig蛋白，其可以是人或小鼠或来自其他物种。该部分可以包含ig蛋白的fc区。fc区可包含ig蛋白的铰链区、ch2、ch3和ch4结构域中的至少一个。ig蛋白可以是人igg1、igg2、igg3、igg4或iga，并且fc区可以包含ig的铰链区以及ch2和ch3结构域。fc区可包含人免疫球蛋白g1(igg1)同种型(seqidno：7)。ig蛋白也可以是igm，并且fc区可以包含铰链区和igm的ch2、ch3和ch4结构域。蛋白标签可以是有助于蛋白质纯化的亲和标签，和/或可以增强功能性蛋白质的溶解度和回收率的溶解度增强标签。蛋白标签还可以增加cd24蛋白的化合价。蛋白标签还可以包含gst、his、flag、myc、mbp、nusa、硫氧还蛋白(trx)、小泛素样修饰剂(sumo)、泛素(ub)、白蛋白或骆驼ig。制备融合蛋白和纯化融合蛋白的方法是本领域众所周知的。

根据临床前研究，为了构建在实施例中鉴定的融合蛋白cd24fc，已经使用了30个氨基酸的天然cd24分子的截短形式，其在gpi信号切割位点之前缺少最终的多态性氨基酸(即具有seqidno：2的成熟的cd24蛋白)。成熟的人cd24序列与人igg1fc结构域融合(seqidno：7)。全长cd24fc融合蛋白提供在seqidno：5中(图1)，而在seqidno：6中提供从细胞分泌的cd24fc融合蛋白的加工版本(即，缺少被切割的信号序列)。与igg1fc融合的成熟cd24(即具有seqidno：1的成熟cd24蛋白)的经加工的多态性变体可以包含seqidno：11或12。

b.生产

cd24蛋白可被高度糖基化，并可参与cd24的功能，例如免疫细胞的共刺激以及与损伤相关分子模式分子(damp)的相互作用。可以使用真核表达系统制备cd24蛋白。表达系统可需要在哺乳动物细胞如中国仓鼠卵巢(cho)细胞中从载体表达。该系统也可以是病毒载体，例如可用于感染真核细胞的复制缺陷型逆转录病毒载体。cd24蛋白也可以由稳定的细胞系产生，该细胞系表达来自已经整合到细胞基因组中的载体或载体的一部分的cd24蛋白。稳定的细胞系可以从整合的复制缺陷型逆转录病毒载体表达cd24蛋白。表达系统可以是gpex^tm。

c.药物组合物

cd24蛋白可以包含在药物组合物中，该药物组合物可以包含药学上可接受量的cd24蛋白。药物组合物可以包含药学上可接受的载体。药物组合物可以包含溶剂，其可以在延长的时期内保持cd24蛋白稳定。溶剂可以是pbs，其可在-20℃(-15至-25℃)下使cd24蛋白稳定至少66个月。该溶剂可能够与另一种药物组合容纳cd24蛋白。

可以将药物组合物配制用于肠胃外施用，包括但不限于通过注射或连续输注。用于注射的制剂可以是在油性或水性媒介物中的悬浮液、溶液或乳剂的形式，并且可以包含配制剂，其包括但不限于悬浮剂、稳定剂和分散剂。组合物也可以以粉末形式提供，以与合适的媒介物重构，所述媒介物包括但不限于无菌的无热原水。

药物组合物也可以配制成贮库制剂，其可以通过植入或肌内注射给药。组合物可以用合适的聚合或疏水材料(例如，作为在可接受的油中的乳液)、离子交换树脂或作为微溶的衍生物(例如，作为微溶的盐)配制。皮下注射制剂可与狼疮及其相关表现和并发症等适应症特别相关。

d.剂量

cd24蛋白的剂量可以最终通过临床试验确定，以确定具有可接受的毒性和临床功效的剂量。可以通过在啮齿动物和非人类灵长类动物中的药代动力学和毒性研究来估计初始临床剂量。cd24蛋白的剂量可以是0.01mg/kg至1000mg/kg，并且可以是1至500mg/kg，这取决于所需的效果和给药途径。可以通过静脉内输注或皮下、壁内(即腔或器官壁内)或腹膜内注射来施用cd24蛋白，并且剂量可以为10-1000mg、10-500mg、10-240mg、10-120mg或10、30、60、120或240mg，其中受试者是人类。

3.治疗方法

a.免疫相关不良事件

本文提供了通过向需要其的受试者施用cd24蛋白来减轻、减少、最小化或治疗irae的方法。iraes可能与癌症治疗有关，并且受试者可能是癌症患者。癌症疗法可以是癌症免疫疗法。可以将cd24蛋白施用给患有与癌症治疗有关的irae或有患该癌症的风险的受试者。可以在癌症治疗开始之前或在iraes的临床症状出现之前，预防性地使用cd24蛋白以预防irae。在癌症治疗开始并诊断出临床症状之后，cd24蛋白也可以进行治疗性治疗以治疗irae。irae可以是腹泻或其他胃肠道疾病、纯红细胞发育不全、小红细胞性贫血、狼疮、自身免疫性肾炎、自身免疫性肝炎、肺炎、心肌炎、心包炎、内分泌病、艾迪生病、性腺功能低下、干燥综合征或i型糖尿病。

癌症疗法可以是主动免疫疗法。主动免疫疗法的例子包括抗ctla4、抗pd-1、抗pd-l1、抗tnf、针对另一种tnf受体家族成员的抗体、抗lag3、抗tim3和调节肿瘤的微环境的小分子或大分子抑制剂。特别地，所述癌症治疗可以是抗ctla4免疫治疗，并且所述cd24蛋白可以与抗ctla4免疫治疗组合或在其背景下施用于受试者。抗ctla4抗体的实例包括伊匹单抗(yervoy)和特米单抗(tremilimumab)。

在另一个实施方案中，癌症疗法可以是抗pd-1/pd-l1免疫疗法，其可以是抗pd-1抗体或抗pd-l1抗体。抗pd-1抗体的例子包括纳武单抗(nivolumab)(opdivo-bristolmyerssquibb)和派姆单抗(pembrolizumab)(keytruda，mk-3475，merck)。抗pd-l1抗体的实例包括atezolizumab(tecentriq，roche)，avelumab(merckkgaa和pfizer)和德瓦鲁单抗(durvalumab)(imfinzi，astra-zeneca)。

在又一个实施方案中，癌症疗法可以是包含抗ctla-4和抗pd-1单克隆抗体(mab)的联合疗法。抗ctla-4和抗pd-1的联合疗法已成为最有效、最持久的癌症免疫疗法。但是，与联合疗法相关的自身免疫不良反应非常严重，超过50％的黑色素瘤患者出现3级和4级器官毒性。因此，癌症免疫疗法中的主要挑战是如何在不影响治疗功效的情况下减少联合疗法的不良反应。在联合治疗的两种成分中，抗ctla-4mab表现出更多的与免疫治疗相关的不良反应(irae)。

癌症治疗可以是使用离体刺激的肿瘤浸润淋巴细胞(til)或基因改造的t细胞(嵌合抗原受体[car]或t细胞受体[tcr]修饰的t细胞)的过继性细胞转移(act)。特别地，通过引起正常细胞和癌细胞的快速死亡，诸如car-t细胞的癌症疗法可引起损伤相关分子模式(damp)的释放，并因此引起也可导致广泛的器官功能障碍的细胞因子释放综合征。因此，cd24蛋白可用于减少或中和damp的作用，并减轻、最小化或治疗引起的细胞因子风暴。如果car-t细胞靶向也在非肿瘤细胞和组织上表达的肿瘤相关抗原，那么car-t细胞会损害正常细胞。car-t疗法可用于治疗血液系统肿瘤，例如急性淋巴细胞白血病(all)、b细胞急性淋巴细胞白血病、成人骨髓性白血病(aml)、弥漫性大b细胞淋巴瘤(dlbcl)、非何杰金氏病淋巴瘤(nhl)、慢性淋巴细胞性白血病(cll)、原发性纵隔b细胞淋巴瘤(pmbcl)、套细胞淋巴瘤(mcl)和多发性骨髓瘤(mm)。car-t疗法的例子包括靶向b细胞表面抗原cd19的疗法(例如jcar017和jcar014[junotherapeutics])、ctl019(tisagenlecleucel-t[novartis]和kte-c19[axicabtageneciloleucel，kitepharma])和cd22(jcar014[junotherapeutics])。car-t疗法的其他实例包括靶向l1-cam(jcar023[junotherapeutics])、ror-1(jcar024[junotherapeutics])和muc16(jcar020[junotherapeutics])的那些。tcr修饰的t细胞的靶标的实例包括靶向mage-a3的靶标，例如kite-718(kitepharma)、wilms肿瘤抗原1(wt-1)，例如jtcr016(junotherapeutics)和ny-eso-1。

癌症疗法可以是涉及快速杀死癌细胞的疗法，例如辐射和化学疗法。导致的肿瘤溶解可导致释放damp，从而引发炎症级联反应。此类适应症可特别适合用cd24蛋白进行预防性治疗。

b.移植物抗宿主病

本文还提供了在同种异体造血干细胞移植(hsct)后可能接受、已经接受或正在接受活化的自然杀伤(ank)细胞的受试者中通过将cd24蛋白给予需要其的受试者来减少或治疗移植物抗宿主病(gvhd)的方法。异源hsct后，nk细胞可以增强移植并介导移植物抗白血病，但是在hsct之后由自然重构的nk细胞介导的移植物抗白血病的能力是有限的。临床前研究表明，nk细胞的激活会上调激活受体的表达并增强杀伤能力(shah等人，2015年)。然后在一项临床试验中对此进行了测试，该试验研究了在超高风险实体瘤儿童和青少年中hla匹配的t细胞耗竭的非清髓性外周血干细胞移植之后的供体来源活化nk细胞(ank-dli)的过继转移。ank-dli表现出强大的杀伤能力，并显示高水平的激活受体表达。但是，在9个移植受者中有5个在ank-dli后经历了急性移植物抗宿主病(gvhd)，在3名受试者中观察到4级gvhd。gvhd在相配的无关供体中与匹配的同胞供体受者中相比更为常见，并且与较高的供体cd3嵌合相关。考虑到在这种情况下t细胞剂量低于gvhd所需的阈值，得出结论：ank-dli可能通过增加潜在的t细胞同种异体反应性促进了观察到的急性gvhd。

c.施用

药物组合物的施用途径可以是肠胃外的。肠胃外施用包括但不限于静脉内、动脉内、腹膜内、皮下、肌内、鞘内、关节内和直接注射。可以将药物组合物施用于人类患者、猫、狗或大型动物。该组合物每天可施用1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12次。

d.联合治疗

cd24蛋白可与其他药剂组合使用，以进一步减少、减轻或治疗细胞因子释放综合征(crs)。细胞因子释放综合征与包括白介素(il)-6和ifn-γ在内的几种细胞因子的循环水平升高有关。因此，另一种药剂可以是托珠单抗(tocilizumab)(actemra)，一种抗il-6受体抗体，或另一种具有或不具有皮质类固醇的细胞因子靶向剂，它们可用于免疫抑制并可用于逆转该综合征，特别是在接受car-t的患者中。用于crs管理的其他药剂可以是西妥昔单抗(siltuximab)(抗il-6，sylvant)、依那西普(tnfα抑制剂，enbrel)、英夫利昔单抗(infliximab)(抗tnfα，remicade)或阿那白滞素(anakinra)(白介素1受体拮抗剂，kineret)。cd24蛋白可用于靶向和减轻从受损组织释放并引发炎症级联反应的damp的作用，而联合疗法可靶向效应细胞因子分子，从而提供互补的两管齐下的方法来减轻、减少或治疗crs。

cd24蛋白可与其他治疗同时或规律地施用。如本文所用，术语“同时的”或“同时地”是指在彼此的48小时内，优选24小时内，更优选12小时内，再更优选6小时内，最优选3小时内或更短时间内施用cd24蛋白和其他治疗。如本文所用，术语“规律地(metronomically)”是指在与其他治疗不同的时间并且相对于重复施用以一定频率施用药剂。

可以在另一种治疗之前的任何时间点施用cd24蛋白，包括约120小时、118小时、116小时、114小时、112小时、110小时、108小时、106小时、104小时、102小时、100小时、98小时、96小时、94小时、92小时、90小时、88小时、86小时、84小时、82小时、80小时、78小时、76小时、74小时、72小时、70小时、68小时、66小时、64小时、62小时、60小时、58小时、56小时、54小时、52小时、50hr、48小时、46小时、44小时、42小时、40小时、38小时、36小时、34小时、32小时、30小时、28小时、26小时、24小时、22小时、20小时、18小时、16小时、14小时、12小时、10小时、8小时、6小时、4小时、3小时、2小时、1小时、55分钟、50分钟、45分钟、40分钟、35分钟、30分钟、25分钟、20分钟、15分钟、10分钟、9分钟、8分钟、7分钟、6分钟、5分钟、4分钟、3分钟、2分钟和1分钟。可以在第二次cd24蛋白治疗之前的任何时间点施用cd24蛋白，包括约120小时、118小时、116小时、114小时、112小时、110小时、108小时、106小时、104小时、102小时、100小时、98小时、96小时、94小时、92小时、90小时、88小时、86小时、84小时、82小时、80小时、78小时、76小时、74小时、72小时、70小时、68小时、66小时、64小时、62小时、60小时、58小时、56小时、54小时、52小时、50hr、48小时、46小时、44小时、42小时、40小时、38小时、36小时、34小时、32小时、30小时、28小时、26小时、24小时、22小时、20小时、18小时、16小时、14小时、12小时、10小时、8小时、6小时、4小时、3小时、2小时、1小时、55分钟、50分钟、45分钟、40分钟、35分钟、30分钟、25分钟、20分钟、15分钟、10分钟、9分钟、8分钟、7分钟、6分钟、5分钟、4分钟、3分钟、2分钟和1分钟。

可以在另一种治疗后的任何时间点施用cd24蛋白，包括大约1分钟、2分钟、3分钟、4分钟、5分钟、6分钟、7分钟、8分钟、9分钟、10分钟、15分钟、20分钟、25分钟、30分钟、35分钟、40分钟、45分钟、50分钟、55分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、6小时、8小时、10小时、12小时、14小时、16小时、18小时、20小时、22小时、24小时、26小时、28小时、30小时、32小时、34小时、36小时、38小时、40小时、42小时、44小时、46小时、48小时、50小时、52小时、54小时、56小时、58小时、60小时、62小时、64小时、66小时、68小时、70小时、72小时、74小时、76小时、78小时、80小时、82小时、84小时、86小时、88小时、90小时、92小时、94小时、96小时、98小时、100小时、102小时、104小时、106小时、108小时、110小时、112小时、114小时、116小时、118小时和120小时。可以在前一次cd24蛋白治疗之后的任何时间点施用cd24蛋白，包括约120小时、118小时、116小时、114小时、112小时、110小时、108小时、106小时、104小时、102小时、100小时、98小时、96小时、94小时、92小时、90小时、88小时、86小时、84小时、82小时、80小时、78小时、76小时、74小时、72小时、70小时、68小时、66小时、64小时、62小时、60小时、58小时、56小时、54小时、52小时、50hr、48小时、46小时、44小时、42小时、40小时、38小时、36小时、34小时、32小时、30小时、28小时、26小时、24小时、22小时、20小时、18小时、16小时、14小时、12小时、10小时、8小时、6小时、4小时、3小时、2小时、1小时、55分钟、50分钟、45分钟、40分钟、35分钟、30分钟、25分钟、20分钟、15分钟、10分钟、9分钟、8分钟、7分钟、6分钟、5分钟、4分钟、3分钟、2分钟和1分钟。

实施例1

在小鼠体内的cd24药代动力学

将1mgcd24fc(cd24fc)注入纯c57bl/6小鼠中，并在3个小鼠的不同时间点(5分钟、1小时、4小时、24小时、48小时、7天、14天和21天)在每个时间点采集血样。血清以1：100稀释，并使用夹心elisa检测cd24fc的水平，纯化的抗人cd24(3.3μg/ml)作为捕获抗体，过氧化物酶偶联的山羊抗人iggfc(5μg/ml)作为检测抗体。如图3a所示。cd24fc的衰减曲线显示了蛋白质的典型双相衰减。第一生物分布阶段的半衰期为12.4小时。第二阶段遵循从中央隔室进行一阶消除的模型。第二阶段的半衰期为9.54天，与体内抗体相似。这些数据表明融合蛋白在血流中非常稳定。在另一项将融合蛋白皮下注射的研究中，观察到几乎相同的9.52天半衰期(图3b)。更重要的是，尽管cd24fc大约需要48小时才能达到血液中的峰值水平，但通过auc测得的血液中融合蛋白的总量在任一种注射途径下都基本相同。因此，从治疗的角度来看，不同的注射途径不应影响药物的治疗效果。这种观察大大简化了灵长类动物毒性的实验设计和临床试验。

实施例2

宿主对组织损伤反应的cd24-siglec10相互作用

大约二十年前，马特辛格(matzinger)提出了通常被称为危险理论的东西。从本质上讲，她认为免疫系统在感知到宿主的危险时就会打开。尽管当时危险的性质还没有很好的定义，但是已经确定坏死与细胞内组分如hmgb1和热休克蛋白的释放有关，这些组分被称为damp，用于危险相关的分子模式。发现damp促进炎性细胞因子和自身免疫疾病的产生。在动物模型中，发现hmgb1和hsp90抑制剂可改善ra。damp的参与提出了可以探索ra疗法对宿主对damp反应的负调节的前景。

使用对乙酰氨基酚诱导的肝坏死并确保炎症，已观察到通过相互作用siglecg，cd24为宿主对组织损伤的反应提供了强有力的负调控。cd24是gpi锚定分子，在造血细胞和其他组织干细胞中广泛表达。对人类多种自身免疫性疾病的遗传分析，包括多发性硬化症、系统性红斑狼疮、ra和巨细胞关节炎，表明cd24多态性与自身免疫性疾病风险之间存在显著关联。siglecg是i-lectin家族的成员，由其识别包含唾液酸的结构的能力定义。siglecg识别cd24上含有唾液酸的结构，并通过树突状细胞负调节炎症细胞因子的产生。就其与cd24相互作用的能力而言，人类siglec10和小鼠siglecg在功能上是等效的。但是，尚不清楚小鼠和人类同源物之间是否存在一一对应的关系。尽管该机制尚待充分阐明，但与siglecg相关的shp1可能参与了负调控似乎是合理的。最近在《科学》杂志上报道的这些数据导致了一个新模型，其中cd24-siglecg/10相互作用可能在区分病原体相关分子模式(pamp)与damp方面起关键作用(图4)。

至少两种重叠机制可以解释cd24的功能。首先，通过与多种damp结合，cd24可以捕获炎性刺激，以防止其与tlr或rage相互作用。cd24与包括hsp70、90，hmgb1和核仁蛋白在内的数个damp分子相关的观察结果支持了这一观点。其次，也许在与damp结合后，cd24可能会刺激siglecg的信号传导。这两种机制可协同作用，因为具有任一基因的靶向突变的小鼠引起强得多的炎症反应。实际上，当用hmgb1、hsp70或hsp90刺激时，从cd24-/-或siglecg-/-小鼠的骨髓中培养的dc产生高得多的炎症细胞因子。相反，在它们对pamp例如lamp和polyi：c的反应中未发现作用。这些数据不仅提供了先天免疫系统区分病原体与组织损伤的机制，而且还表明cd24和siglecg是与组织损伤相关的疾病的潜在治疗靶标。

实施例3

cd24与gvhd的预防

cd24fc与hmgb1，siglec10相互作用并诱导siglecg和shp-1之间的缔合。

为了测量cd24fc和siglec10之间的相互作用，我们将cd24fc固定在chip上，并使用biacore来测量不同浓度的siglec-10fc的结合。如图5a所示，cd24fc以1.6x10^-7m的kd与siglec10结合。这比对照fc高100倍的亲和力。cd24fc和hmgb1之间的相互作用通过使用cd24fc结合的蛋白g珠的下拉实验，然后用抗igg或抗hmgb1进行蛋白质印迹，进行证实。这些数据证明cd24fc而不是fc结合至hmgb1，并且该结合是阳离子依赖性的(图5b)。为了确定cd24fc是否是人类siglec10的小鼠对应物siglecg的激动剂，我们用cd24fc、对照fc或媒介物(pbs)对照刺激了cd24-/-脾细胞30分钟。然后对siglecg进行免疫沉淀，并用抗磷酸酪氨酸或抗shp-1进行探测。如图5c所示，cd24fc诱导了siglecg的实质性磷酸化和shp-1的结合，shp-1是众所周知的自适应和先天免疫的抑制剂。

cd24fc的体外功效研究。

为了研究cd24fc对人t细胞产生炎性细胞因子的影响，人pbml中的成熟t细胞被抗cd3抗体(okt3)激活，该抗体是不同浓度cd24fc或人igg1fc的存在下t细胞受体的常用激动剂。4天后，收集上清液，并通过酶联免疫吸附测定(elisa)测量ifn-γ和tnf-α的产生以确认激活。图6的结果证明与对照iggfc对照相比，来自两个不同生产批次的cd24fc显著降低了来自活化的人pbml的ifn-γ和tnf-α的产生。另外，当添加cd24fc时，以剂量依赖的方式抑制细胞因子的产生。因此，cd24fc可以在体外抑制抗cd3诱导的人pbml活化。这项研究不仅表明cd24fc的作用机理可能是通过抑制t细胞活化，而且还建立了可靠的生物测定方法，用于药物效力和稳定性测试。

为了确定cd24fc是否调节人类细胞系中炎性细胞因子的产生，我们首先使用rnai使人类急性单核细胞白血病thp1细胞系中的cd24沉默，然后通过用pma处理将其诱导分化为巨噬细胞。如图7a所示，cd24沉默显著增加了tnfα、il-1β和il-6的产生。这些数据证明了内源性人cd24在限制炎症细胞因子产生中的重要作用。重要的是，cd24fc恢复了对cd24沉默的细胞系中tnfα(图7b)以及il-1β和il-6的抑制作用。这些数据不仅证明了cd24在人类细胞炎症反应中的相关性，而且还提供了一种简单的测定方法来评估cd24fc的生物学活性。

综上所述，这些数据证明cd24fc能够抑制由适应性和先天性刺激触发的细胞因子产生。但是，由于该药物在减少先天效应子产生的细胞因子方面更为有效，因此我们认为其预防功能的主要机制是预防移植初期由组织损伤触发的炎症。

csa和cd24fc在人源化小鼠gvhd模型中的治疗效果比较。

gvhd被称为异基因bm移植的主要并发症。但是，在所有人源化动物模型中的gvhd诱导都依赖于大量人pbmc的移植。这些人源化动物模型中的某些无法达到人中所见的全身性gvhd。因此，在新生的nod/scidil2rγ-null(nsg)小鼠中，使用了五十万人bm细胞，开发了人源化全身性gvhd动物模型。结果显示，小鼠发展出具有100％渗透率的异种gvhd，并且所有小鼠最早在移植后14天就表现出高度的人类嵌合性，而在7天后明显增加了近两倍(数据未显示)。根据所使用的供体，移植后1-2个月内的总死亡率为100％(数据未显示)。而且，人t细胞浸润多个靶器官，包括肺、肝、皮肤和肠。就本发明人所知，这是人急性gvhd发病机理的最佳模型，但是由于疾病的严重性和快速发作在治疗上更具挑战性。

用于两个实验的供体引起异常快速和严重的gvhd。为了比较环孢素a(csa)和cd24fc的治疗效果，将nsg小鼠在移植后1周治疗，接受每日最大耐受剂量的csa(0.3到1mg/kg之间，长达4周，具体取决于小鼠年龄)或每周2-4次cd24fc(5mg/kg)。如图8所示，从第二周开始，在媒介物组中观察到gvhd相关死亡的快速发作。cd24fc显著延长了受体小鼠的存活期(p＝0.015)，而csa未能显著延长存活期(p＝0.097)。这些数据证明，与csa相比，cd24fc具有优异的治疗功效。

实施例4

在人体内的cd24药代动力学

该实施例显示了cd24蛋白在人体内的药代动力学分析。这源自于i期、随机、双盲、安慰剂对照、单次上升剂量研究，以评估健康男性和女性成年受试者中cd24fc的安全性、耐受性和pk。这项研究共纳入了5个组，共40位受试者，每组8位受试者。每个组的8位受试者中有6位接受了研究药物，而2位受试者接受了安慰剂(0.9％氯化钠，盐水)。第一组的剂量为10mg。后续的组接受30mg、60mg、120mg和240mg的cd24fc或相匹配的安慰剂，并至少间隔3周给药，以便回顾每个先前组的安全性和耐受性数据。仅在证明足够的安全性和耐受性后，才允许对新的受试者组再用一次较高剂量的药物。

在每个组中，最初的2名受试者在第1天为1名研究用药接受者和1名安慰剂接受者。在第7天后对第3至5名受试者和第6至8名受试者进行给药(子组之间至少间隔24小时)。在同一子组中，每位受试者至少间隔1小时。如有必要，将延迟其余受试者的给药，直至对在该组中涉及第一或第二子组的给药后期间可能出现的任何重大安全性问题进行审查。随后的组在前一个组之后至少3周给药。

筛选期：

筛选访问(第1次访问)在有效治疗期开始之前至多21天进行。提供知情同意后，受试者应进行资格筛选程序。

治疗期：

受试者在第-1天(第2次访问)进入临床药理学部门(cpu)，并且随机治疗期间从过夜禁食至少10小时后的第1天开始。将受试者随机分配为单剂量cd24fc或安慰剂治疗。受试者一直被限制到第4天早上。

随访：

所有受试者在第7天、第14天、第21天、第28天和第42天(±1天)返回cpu，进行随访(第3次访问、第4次访问、第5次访问、第6次访问和第7次访问)。第7次访问是所有受试者的最后一次访问。

治疗持续时间：每个受试者的总研究持续时间长达63天。单剂量给药在第1天进行。

受试者数量：

计划：40位受试者

已筛选：224位受试者

随机：40位受试者

已完成：39位受试者

已中断：1位受试者

诊断和纳入的主要标准：该研究的人群为年龄在18至55岁(含18和55岁)之间的健康男性和女性，体重指数在18kg/m²至30kg/m²(含18kg/m²和30kg/m²)之间。

研究产品和比较者信息：

cd24fc：通过静脉输注给药的单剂量10mg、30mg、60mg、120mg或240mg；批号：09mm-036。cd24fc是完全人源化的融合蛋白，其由人cd24的成熟序列和人免疫球蛋白g1(igg1fc)的片段可结晶区组成。cd24fc以无菌、透明、无色、不含防腐剂的水溶液形式提供，用于静脉注射。cd24fc配制成单剂量注射溶液，浓度为10mg/ml，ph值为7.2。每个cd24fc小瓶在16ml±0.2mlcd24fc中包含160mgcd24fc、5.3mg氯化钠、32.6mg磷酸氢二钠七水合物和140mg磷酸二氢钠一水合物。将cd24fc装在透明的带有氯丁基橡胶塞和铝翻转密封件的硼硅玻璃小瓶中。

通过静脉输注施用匹配的安慰剂(0.9％氯化钠，盐水)；批号：p296855、p311852、p300715、p315952。

意向治疗(itt)人群包括接受至少1剂研究药物的所有受试者。itt人群是受试者信息和安全性评估的主要分析人群。

通过治疗和访问总结了临床实验室评估(化学、血液学和尿液分析)。还总结了从基线的变化。通过治疗和时间点总结了生命体征(血压、心率、呼吸频率和体温)。还总结了从基线的变化。列出所有身体检查数据。总结了心电图参数和基线的变化。列出了总体解释。

血浆cd24fc浓度

如图9所示，cd24fc的平均血浆浓度与所施用的cd24fc的剂量成比例地增加。对于除120mg以外的所有剂量组，在给药后1小时达到cd24fc的最大平均血浆浓度。给药后2小时达到120mg组的cd24fc的最大平均血浆浓度。到第42天(984小时)，所有组的cd24fc平均血浆浓度已降至最大平均血浆浓度的2％至4％之间。

表1总结了通过对可评估的pk人群进行治疗的血浆cd24fcpk参数。

表1通过治疗–pk可评估人群的血浆cd24fc药代动力学参数汇总

血浆cd24fc剂量比例分析

图10示出了针对pk可评估群体的cd24fccmax与剂量的剂量比例图。图11示出了针对pk可评估群体的cd24fcauc0-42d与剂量的剂量比例图。图12示出了针对pk可评估群体的cd24fcauc0-inf与剂量的剂量比例图。表2显示了剂量比例的功效分析。

表2剂量比例的功效分析：血浆cd24fc药代动力学参数–pk可评估人群

cmax斜率估计值为1.172，其中90％ci为1.105至1.240。auc0-42d斜率估计值为1.088，其90％ci为1.027至1.148。auc0-inf斜率估计值为1.087，而90％ci为1.026至1.1。

药代动力学结论

血浆cd24fc的cmax和auc与在小鼠、猴和人中施用的剂量成比例增加。血浆cd24fc在1.01和1.34小时之间达到tmax。血浆cd24fc的t1/2在280.83至327.10小时之间。

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序列表

<110>肿瘤免疫股份有限公司

国家儿童医疗中心

liu,yang

zheng,pan

devenport,martin

<120>使用可溶性cd24治疗癌症疗法中免疫相关不良事件的方法

<130>060275.0503.01pc00

<150>us62/509498

<151>2017-05-22

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