在癌症免疫疗法中有用的生物标记的制作方法
【专利说明】在癌症免疫疗法中有用的生物标记
[00011本申请是分案申请，其原申请的国际申请号为PCT/KR2014/005031，中国国家申请 号为201480001504.3,申请日为2014年6月5日，发明名称为"在癌症免疫疗法中有用的生物 标记"。 【技术领域】
[0002] 本发明有关癌症免疫疗法及抗发炎药物的技术领域。特别是，本发明是关于利用 嗜酸粒细胞趋化蛋白（eotaxin)及C-反应蛋白的诊断/预测价值的治疗用方法及试剂盒。 【【背景技术】】
[0003] 16肽（16-mer peptide)EARPALLTSRLRFIPK(序列编号：1，亦称为「GV1001」）是人类 端粒酶的其中一段片段(W0 00/02581) XV1001能与多种第II型人类白血球抗原(HLA)分子 结合并包含推定的第I型HLA表位。该肽因此被认为能够引发复合型CD4/CD8T-细胞反应，而 复合型CD4/CD8T-细胞反应在引发肿瘤扑杀作用及长期记忆方面上很重要。晚期胰腺癌及 肺癌患者的临床研究显示在超过50%的受试者身上引发GV1001专一 1性T-细胞反应且在临 床上没有显著毒性（请见2009，Kyte JA发表，Expert Opin Investig Drugs期刊18卷5期： 687-94页）。
[0004] 延寿基金会(Life Extension foundation)在2013年6月6日刊载一篇有关慢性发 炎的在线公开文献(WWW. lef.org)，该篇文献集中讨论有关慢性低度发炎的长期健康影响， 并回顾各种发炎标记及介导物质，例如，肿瘤坏死因子(TNFa)、核因子-kB(NF-kB)、介白素、 C-反应蛋白（CRP)、类花生酸、及环氧合酶(COX)及各种其它引发因子。
[0005] Guo等人(J 11111111111〇1，2001年166卷:5208-5218页）发现当受到急性炎性损伤的小 鼠模型产生发炎反应时，嗜酸粒细胞趋化蛋白的mRNA与蛋白质的表现提高(upregulated)， 并探讨嗜酸粒细胞趋化蛋白在嗜中性白血球招集作用中所扮演的角色为何。
[0006] 嗜酸粒细胞趋化蛋白-1、嗜酸粒细胞趋化蛋白-2及嗜酸粒细胞趋化蛋白-3 (亦称 为CCL11、CCL24及CCL26)是已知能招集嗜酸性白血球(eosinophil)及其它白血球的趋化因 子，并借着与细胞表面的趋化因子受体(例如，CCR3)结合而引起该等趋化因子作用。
[0007] 本发明实施方式的目的是提供预测GV1001衍生药物的医疗功效及预测罹癌患者 (尤其是胰腺癌患者)的患者存活期的方法。 【
【发明内容】
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[0008] TeloVac，一项针对晚期及转移型胰腺癌进行多机构合作的GV1001疫苗第三期临 床试验，该项临床试验目前由凯尔杰姆维克斯公司(KaeI-GemVax)的子公司杰姆维克斯有 限公司(GemVax AS)资助并由英国癌症研究中心利物浦临床试验研究单位所主导进行。
[0009] 该项试验在全英国52个机构募集1062个患者接受试验。尽管接受注射疫苗的试验 组与接受化疗的对照组之间的总体存活期无明显差异，然而该项试验还包括了宏远的转译 研究计划。初步研究结果显示该疫苗产生显著的抗发炎反应，此结果与母公司凯尔杰姆维 克斯公司正在主导的新研究高度吻合。此外，在患者子群组中鉴别出三种可能作为提高存 活期指针的生物标记：嗜酸粒细胞趋化蛋白（eotaxin)、巨·细胞发炎蛋白la(MIPla)及 Κ应蛋白 （CRP) 。
[0010] 因此，就其最广方面而言，本发明是关于使用嗜酸粒细胞趋化蛋白及/或MIPla及/ 或CRP作为可用于以GV1001衍生物质进行治疗处理的预后工具。 【【附图说明】】
[0011] 第1图图示第2组基期（baseline)、第3组基期、第2组7周及第3组10周的患者血清 中的IL-4、IL-5、IL-7、IL-17、PDGF及VEGF含量(p值，未修正的克-瓦二氏检定法）。
[0012] 第2图：图示第2组及第3组的IFNy、IL-10、IL-7、PDGF、RANTES、TNFα及VEGF的含量 变化。图中亦示出正(+ve)变化与负(-ve)变化的数目及p值。
[0013] 第3图：第2组患者和第3组患者在基期及在后续治疗时的CRP含量。
[0014] 第4图：第2组患者（左图）和第3组患者（右图）在基期及后续治疗时的C R P成对分 析。图中亦示出正(+ve)变化与负(_ve)变化的数目及p值。
[0015] 第5图：针对基期的IL-8含量、治疗后的IL-8含量及从基期到治疗后的IL-8绝对变 化值以中位数为准分成两部分所绘示的存活期曲线图。
[0016] 第6图：针对基期的嗜酸粒细胞趋化蛋白含量、治疗后的嗜酸粒细胞趋化蛋白含量 及从基期到治疗后的嗜酸粒细胞趋化蛋白绝对变化值以中位数为准分成两部分所绘示的 存活期曲线图。
[0017] 第7图：针对基期的MIPla含量、治疗后的MIPla含量及从基期到治疗后的MIPla绝 对变化值以中位数为准分成两部分所绘示的存活期曲线图。
[0018] 第8图：针对基期的ΜΙΡΙβ含量、治疗后的ΜΙΡΙβ含量及从基期到治疗后的ΜΙΡΙβ绝 对变化值以中位数为准分成两部分所绘示的存活期曲线图。
[0019] 第9图：针对基期的VEGF含量、治疗后的VEGF含量及从基期到治疗后的VEGF绝对变 化值以中位数为准分成两部分所绘示的存活期曲线图。
[0020] 第10图：针对基期的CRP含量、治疗后的CRP含量及从基期到治疗后的CRP绝对变化 值以中位数为准分成两部分所绘示的存活期曲线图。
[0021] 第11图：针对第3组在治疗后的CRP含量以中位数为准分成两部分所绘示的存活期 曲线图。
[0022]第11图为第3组CRP的存活期曲线
[0023] 第12图：（A)嗜酸粒细胞趋化蛋白的存活期曲线（高：中位存活期为493天，η = 16; 低：中位存活期为239天，n = 25) dBhCRP的存活期曲线（高：中位存活期为222天，η = 20; 低：中位存活期为486天，η = 21)。
[0024] 第13图图示第2组的基期血清细胞因子数据及治疗后血清细胞因子数据的对数 (log)平均数的测线图。
[0025] 第14图图示第3组的基期血清细胞因子数据及治疗后血清细胞因子数据的对数平 均数。
[0026] 第15图图示各组血清中的细胞因子平均差（治疗后-基期）的测线图。值得注意的 是，结果显示在第2组中有19种细胞因子在基期与在治疗后之间表现出具有统计意义的下 降情形（该 19 种细胞因子为?〇6卩、11^10、11^-1抑、11^-2、11^-4、11^-5、11^-7、11^-1〇、11^-12、11^-13、IL-17、G-CSF、IFNy、嗜酸粒细胞趋化蛋白、FGFb、MIPlβ、RANTES、TNFα、VEGF ;而非CRP、 IL-6、IL-8、IL-9、IL-15、GM-CSF、IP10、MCPl、MIPla)，且在第 3 组中没有一个细胞因子表现 出具有统计意义的下降情形
[0027] 第16图示出针对各组的血清中的各种细胞因子使用魏克逊符号排序检定法 (Wilcoxon signed-rank test)所获得的p值，该方法是用以检定由基期到治疗后的数值升 高/下降情形。如图中所见，有显著差异者(P〈〇.05)以灰色粗体字型表示。第2组中的该等细 胞因子的降幅大于第3组，并指出在第2组中有19种细胞因子明显降低，但第3组中则无。
[0028] 第17图是针对该项研究中各组的各种细胞因子，示出治疗后血清中的细胞因子含 量减去基期血清中的细胞因子含量所得的差值中位数。含量下降者以浅灰色表示，及含量 升高/不变者则以深灰色表示。
[0029] 第18图图示针对该项研究中各组的血清中的每种细胞因子基期数据所建立的考 氏比例风险模型(Cox proportional hazards model)。该表给出该基期数据的单变量分析 结果并示出具有95%信赖区间的风险比率及p值。就第2组而言，CRP、IL-lra、IL-2、IL-10、 嗜酸粒细胞趋化蛋白及IFNy具有显著意义(p〈0.1)，就第3组而言则是CRP、IL-lra及嗜酸 粒细胞趋化蛋白具有显著意义。
[0030] 第19a图及第19b图示出第2组及第3组处于基期时的CRP含量。就第2组而言，低CRP 含量得到337天的中位存活期，及对于第3组而言，低CRP含量得到373天的中位存活期。基期 CRP含量预测出第3组中的中位(95%CI)总体存活期（高CRP = 250[132~451]天；低CRP = 372.5[229~517]天;？ = 0.0500)，但未能预测第2组的中位总体存活期(高0^=195[140~ 262]天；低〇^ = 337[167~366]天卬=0.2534)。
[0031 ]第20a图及第20b图示第2组及第3组处于基期时的嗜酸粒细胞趋化蛋白含量。就第 2组而言，高的血清嗜酸粒细胞趋化蛋白含量得到300天的中位存活期，及对于第3组而言， 高的血清嗜酸粒细胞趋化蛋白含量得到451天的中位存活期。