同时的化学疗法和免疫疗法
【专利说明】同时的化学疗法和免疫疗法
[0001] 本申请是分案申请，原申请的申请日为2006年11月2日、申请号为 200680044649. 7 (PCT/US2006/042812)、发明名称为"同时的化学疗法和免疫疗法"。
[0002] 本发明是在美国政府国家卫生研宄所（National Institute of Health)的资金 号ROl CA097222的支持下完成的。所以，美国政府保留本发明的某些权利。
[0003] 本申请要求2005年11月2日提交的美国临时申请60/732, 741的权益，其全部内 容在此明确引入。
[0004] 本发明的技术领域
[0005] 本发明涉及癌症免疫疗法的领域。特别地，其涉及对肿瘤疫苗的增强的应答。
[0006] 发明背景
[0007] 尽管有广泛手术切除、大剂量集中放射性疗法和化学疗法，被诊断患有GBM的 患者在诊断后的平均存活时间小于15个月（Stupp等，Optimal role of temozolomide in the treatment of malignant gliomas，Curr Neurol Neurosci Rep. 2005 年 5 月； 5(3) :198-206)。治疗的失败至少可被部分归因于相对较窄的治疗指数，以至于增大剂量 的尝试导致剂量限制的全身或神经性毒性。虽然免疫疗法的使用很有希望成为这些肿瘤 的潜在治疗方式，但是直到最近，几乎没有显示出临床效力。若干用选定患者进行的临 床实验，包括用树突细胞（DCs)及酸洗脱的肽（Ashkenazi等，A selective impairment of the IL-2system in lymphocytes of patients with glioblastomas: increased level of soluble IL-2R and reduced protein tyrosine phosphorylation, Neuroimmunomodulation. 1997 ；Kolenko 等，Tumor-induced suppression of T lymphocyte proliferation coincides with inhibition of Jak3expression and IL_2receptor signaling: role of soluble products from human renal cell carcinomas. J Tmmunol · 1997 年 9 月 15 日；159 (6):3057-67 ;Liau 等，Dendritic cell vaccination in glioblastoma patients induces systemic and intracranial T-cell responses modulated by the local central nervous system tumor microenvironment. Clin Cancer Res. 2005 年 8 月 I 日；11 (15) :5515-25)或抗原特异性肽（Heimberger AB,Archer GE 等，Dendritic cells pulsed with a tumor-specific peptide induce long-lasting immunity and are effective against murine intracerebral melanoma. Neurosurgery. 2002年I月；50 (I) : 158-64 ;讨论164-6)接种神经胶质瘤患者，已经通过提 高平均存活时间到20-31个月的范围显示出希望。而且，在最近完成的使用抗原特异性免 疫治疗方法的Π 期临床试验中，GBM患者病情发展的时间（time to progression(TTP))被 延迟到15个月，这与具有7个月TTP时间（Stupp等，2005,上文）和平均生存时间为29个月 (Heimberger等，J Transl Med. 2005年 10月 19 日；3:38The natural history of EGFR and EGFRvIII in glioblastoma patients)的包含放射性疗法和替莫挫胺（temozolomide)的 护理标准明显形成对照。总之，这些免疫疗法实验说明尽管恶性神经胶质瘤患者有内在的 免疫抑制，但是仍然能够产生有效的免疫应答。然而，考虑到最近建立的护理标准和总体较 差的预后，不使用某些形式的化学疗法治疗GBM患者是勉强的。
[0008] 在本领域内，有开发出通常地治疗肿瘤和特别地治疗胶质母细胞瘤的更好的方法 的持续需求。
[0009] 发明概述
[0010] 提供了一种治疗受治疗者肿瘤的方法。给予受治疗者治疗有效量的EGFRvin肽 和治疗有效量的、引发淋巴细胞减少症的化学治疗剂。
[0011] 根据另一个实施方式，提供了一种治疗受治疗者体内肿瘤的方法。治疗有效量的 与KLH结合的EGFRvIII肽被给予患有肿瘤的受治疗者。粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子 (Granulocyte/macrophage colony stimulating factor (GM-CSF))作为佐剂，也以有效量 与EGFRvIII肽同时给予受治疗者。治疗有效量的烷化剂也给予受治疗者。
[0012] 根据其它另一实施方式，提供了一种治疗受治疗者肿瘤的方法。治疗有效量的抗 肿瘤疫苗和治疗有效量的替莫唑胺或其药物上可接受的盐被给予受治疗者。
[0013] 根据另一实施方式，提供了一种治疗受治疗者肿瘤的方法。治疗有效量的抗肿瘤 疫苗和治疗有效量的，引发淋巴细胞减少症的化学治疗剂被给予受试者。
[0014] 这些以及其它在本领域普通技术人员阅读本说明书后明了的实施方式为本领域 提供了治疗难以治疗的肿瘤的方法。
[0015] 发明详述
[0016] 由于担心化学疗法引起的淋巴细胞减少症会抵消免疫疗法的治疗效力，化学疗法 和免疫疗法的同时施用被认为是不当的。替莫唑胺对患有恶性神经胶质瘤的患者已经显示 出有效的化学治疗，而使患有胶质母细胞瘤的患者丧失这种试剂以便用免疫疗法治疗是有 争议的。尽管有传统的教条，发明人演示了化学疗法和免疫疗法能够被同时给予而不抵消 免疫疗法的效力。事实上，替莫唑胺引发的淋巴细胞减少症实际可与肽疫苗协同作用。尽管 申请人不希望被特定的有关作用机理的理论所限制，观察到的协同可能从属于调节性T细 胞（Tregs)的抑制或Tregs恢复的失败，这允许效应物（effector)细胞毒性（cytotoxic) ⑶8+T细胞增加。可能也涉及其它机理。
[0017] "EGFRvIII" 或"表皮生长因子受体突变体 III (Epidermal Growth Factor Receptor mutation III)"是表皮生长因子受体的已知突变形式。见，例如美国专利号 6, 503, 503 ;也参见美国专利号 6, 900, 221 ;6, 673, 602 ;6, 479, 286 和 6, 129, 915。引起 vIII 蛋白产生的突变体通常由801对碱基对从胞外域一致的和肿瘤特异性的符合读码框的缺 失来表征，所述缺失将一个密码子分开并在融合点产生一个新的甘氨酸。
[0018] "EGFRvIII肽"用在此处是指合适长度的肽，如至少10个或12个氨基酸，以及达 到16个、20个或30个氨基酸或更多，该肽跨过对应EGFRvIII蛋白的突变剪接点。例子包 括但不限于：H-LEEKKGNYWTDHS-OH或"PEP-3"。所述EGFRvIII肽可能来自（或在序列上对 应于）任何哺乳动物物种的EGFRvIII，但是优选的是人类。特定的野生型EGFR序列在SEQ ID N0:6到9中显示。
[0019] "载体蛋白"用在这里是指与在该物种中发现的，接受本发明所述组合物并引起 免疫应答的蛋白不具有高同源性的蛋白。按照用于比较两个氨基酸序列的已知数学算 法确定，一种蛋白与另一蛋白如果至少75 %相同，更优选地至少85%相同或至少90%相 同，那么该蛋白与另一蛋白具有高同源性（参见，例如Karlin and Altschul，1990, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-2268 ;Karlin 和 Altschul，1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877 ;Torellis 和 Robotti，1994，Comput Appl. Biosci. 10:3-5 ;及 Pearson 和 Lipman，1988, Proc. Natl. Acad. Sci. 85:2444-8)。优选地，两个氨基酸序列的相同百分数用 XBLAST程序，得分=50,字长=3,由BLAST蛋白质搜索确定。异源载体蛋白的例子包括，但 不限于KLH，PhoE，mLT，TraT或来自BhV-I病毒的gD。参见，例如美国专利号6, 887, 472。 这些载体蛋白可能根据已知技术直接或通过一个间插接头片段（intervening linker segment)，如一个或多个（如2个、4个、6个）间插氨基酸（如间插半胱氨酸（CYS)残基） 的链，与肿瘤抗原结合（conjugated)或连接（linked)。
[0020] "KLH"或"匙孔血蓝蛋白（keyhole-limpet hemocyanin) "是一种已知的载体蛋白， 其可根据已知技术与另一种蛋白结合。参见如美国专利号6, 911，204。
[0021] "佐剂"用在此处是指增强与佐剂同时给药的疫苗治疗效力的不同种类化合物中 的任何一种。在一些实施方式中，所述佐剂是造血细胞生长因子，如GM-CSF。常见的佐剂的 例子包括但不限于氢氧化铝、磷酸铝或氧化铝；基于例如矿物油的水包油型或油包水型乳 剂，如Bayol Fo或Marcol 52TM，或植物油的水包油型或油包水型乳剂，如醋酸维生素 E、皂 草戒（saponins)、卡介菌（BCG)、M.vaccae、破伤风类毒素 （Tetanus toxoid)、白喉类毒素 (Diphtheria toxoid)、百日咳博德特氏菌（Bordetella pertussis)、白细胞介素2、白细胞 介素12、白细胞介素4、白细胞介素7、完全弗氏佐剂、不完全弗氏佐剂和非特异性佐剂。参 见，例如美国专利号6, 699, 483。
[0022] "造血细胞生长因子（hematopoietic growth factors) "或"HGFs"已公知。参见， 例如美国专利号6, 863, 885。通常，HGFs是调控造血祖细胞（hematopoietic protenitor cells)增殖和分化的糖蛋白细胞因子。打算在本发明中使用的造血细胞生长因子可选自 G-CSF(粒细胞集落刺激因子）、SCF(干细胞因子）、GM-CSF(粒细胞/巨噬细胞集落刺激 因子）、IL-I (白细胞介素-I)、IL-3、IL-6、IL-8、IL-11、IL-12、LIF(白血病抑制因子）、 FGF-β (成纤维细胞生长因子f3)、FLT-3或它们组合的种类。这些生长因子可以购买（如， R&D Systems，Minneapolis，MN)或按照通常在本领域内和在描述这些因子的文献中所述 的步骤制备。此外，所述造血细胞生长因子可以是该因子的修饰形式或选自GCSF、SCF、 GM-CSF、IL-I、IL-3、IL-6、IL-8、I