三棱素A在制备抗缺血性脑卒中的药物方面的应用的制作方法

本发明属于医药技术领域。更具体地，涉及三棱素a在制备抗缺血性脑卒中的药物方面的应用。

背景技术：

缺血性脑卒中(stroke)是指由于脑的供血动脉(颈动脉和椎动脉)狭窄或闭塞、脑供血不足导致的脑组织坏死的总称。脑缺血包括四种类型，分为短暂性脑缺血发作(tia)、可逆性神经功能障碍(rind)、进展性卒中(sie)和完全性卒中(cs)。tia无脑梗死存在，而rind、sie和cs有不同程度的脑梗死存在。目前，治疗缺血性脑卒中的方法主要为服用化学药物或手术治疗，该病预后差，有一定的致残率和致死率，可反复发作；另外，化学药物对患者有很强的毒副作用，患者易对化学药物有依赖性和耐药性。因此，开发一种疗效好、毒副作用小、具有显著抗缺血性脑卒中的药物具有重要的临床应用价值。

研究显示，专利cn108926566a公开了三棱素a的抗血瘀证应用，证明了三棱素a具有抗血瘀的作用。专利cn103520160a公开了三棱中肽类化合物的应用，证明了三棱中肽类化合物具有抗凝血和抗血栓的作用。然而血瘀证、凝血病和血栓均与缺血性脑卒中有本质区别。血瘀证是指中医辨证中的一种证型，血淤即血液运行不畅，有瘀血，血淤证可见于很多种疾病；一般而论，凡离开经脉之血不能及时消散和瘀滞于某一处，或血流不畅，运行受阻，郁积于经脉或器官之内呈凝滞状态，都叫血瘀。凝血病是由于凝血因子的减少或破坏，主要症状一般为出血、皮肤瘀斑等。血栓是血流在心血管系统血管内面剥落处或修补处的表面所形成的小块，在可变的流体依赖型中，血栓由不溶性纤维蛋白，沉积的血小板，积聚的白细胞和陷入的红细胞组成，主要症状有呼吸困难，动脉粥样硬化，静脉曲张，颈内动脉创伤性血栓，胸痛等。可以看出，缺血性脑卒中与血瘀证、凝血病和血栓的发病机制和症状均有较大的本质差异。

目前未有三棱中三棱素成分是否有抗缺血性脑卒中作用的研究报道，研究三棱中三棱素成分是否具有抗缺血性脑卒中的作用，可以弥补现有技术的空白，且对于指导临床用药和新药的开发具有重要的意义。

技术实现要素：

本发明要解决的技术问题是弥补现有技术空白，提供三棱素a在制备抗缺血性脑卒中的药物方面的应用，为抗缺血性脑卒中的天然药物开发提供有力的依据。

本发明的目的是提供三棱素a在制备抗缺血性脑卒中的药物方面的应用。

本发明另一目的是提供一种抗缺血性脑卒中的药物。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

本发明首次证实了三棱素a对于钙离子超载损伤、缺氧缺糖损伤具有一定的抑制作用，能够改善神经功能缺损症状，显著降低脑缺血再灌注损伤大鼠的脑梗死面积和脑指数；而且能够显著降低血清中的血栓素a2(tax2)、内皮素1(et-1)、肿瘤坏死因子α(tnfα)、白细胞介素β(il-β)、丙二醛(mda)水平和乳酸脱氢酶(ldh)活性，同时能够显著降低血脑屏障的通透性，具有显著的抗缺血性脑卒中的作用，可用于制备抗缺血性脑卒中的药物，为抗缺血性脑卒中的天然药物开发提供有力的依据。

因此，以下应用均应在本发明的保护范围之内：

三棱素a在制备抗缺血性脑卒中的药物方面的应用。

所述应用是指三棱素a在制备能够抑制缺血性脑卒中患者细胞钙离子超载损伤或缺氧缺糖损伤的药物方面的应用。

所述应用是指三棱素a在制备能够改善缺血性脑卒中患者神经功能缺损症状或降低脑组织梗死面积的药物方面的应用。

所述应用是指三棱素a在制备能够降低缺血性脑卒中患者脑指数的药物方面的应用。

所述应用是指三棱素a在制备能够降低缺血性脑卒中患者血清中的血栓素a2(tax2)、内皮素1(et-1)、肿瘤坏死因子α(tnfα)、白细胞介素β(il-β)、丙二醛(mda)水平或乳酸脱氢酶(ldh)活性的药物方面的应用。

所述应用是指三棱素a在制备能够降低血脑屏障的通透性的药物方面的应用。

所述三棱素a(cyc-(tyr-leu))的结构式如式(i)所示：

另外，本发明还提供了一种抗缺血性脑卒中的药物，包含有效量的三棱素a。

所述药物还包括一种或多种药学上可接受的载体，制备成不同的剂型。

本发明具有以下有益效果：

本发明提供了三棱素a在制备抗缺血性脑卒中的药物方面的应用。本发明首次证实了三棱素a对钙离子超载损伤、缺氧缺糖损伤具有显著的抑制作用，能够改善神经功能缺损症状，显著降低脑缺血再灌注损伤大鼠的脑梗死面积和脑指数；而且能够显著降低血清中的tax2、et-1、tnfα、il-β、mda水平和ldh活性，同时，具有改善血脑屏障、保护神经元细胞的作用，用于缺血性脑卒中的治疗，疗效显著，且使用剂量小。

另外，三棱素a为中药三棱的有效成分，其来源广泛，安全低毒。因此，本发明的三棱素a为抗缺血性脑卒中的天然药物开发提供了一种新的选择和有力的依据，具有广阔的发展空间和良好的应用前景。

附图说明

图1是不同浓度kcl对pc12细胞的存活率的影响结果图。

图2是不同浓度na2s2o4对pc12细胞的存活率的影响结果图。

图3是各组大鼠脑组织的梗死情况结果图。

具体实施方式

以下结合具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。

除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。

实施例1三棱素a对pc12细胞钙离子超载损伤、缺氧缺糖损伤的抑制作用实验

一、实验材料

(1)实验细胞

pc12细胞株(大鼠肾上腺嗜铬肿瘤细胞)，从上海细胞资源中心购买所得。

(2)实验试剂

(3)实验仪器

二、三棱素a对pc12细胞钙超载损伤模型的作用

1、不同浓度kcl对pc12细胞的存活率的影响实验

(1)实验方法

根据kcl所致pc12细胞钙离子超载损伤模型建立的方法，并加以改进，具体操作步骤如下：

将pc12细胞从培养箱中取出，加入胰酶消化，细胞脱落后，终止消化，离心，加入含血清培养基配制成悬浮液，每个孔加入100μl，接种于96孔板，周围一圈加100μlpbs，防止出现边缘效应。于培养箱中放置24h之后，配制不同浓度的kcl，分别为250mmol/l、225mmol/l、200mmol/l、175mmol/l、150mmol/l、125mmol/l、100mmol/l、75mmol/l，每个浓度对应一个组别，并设置正常组，每个组设5个复孔，每个孔加入100μl的kcl溶液，正常组加入不含血清的dmem。损伤4h后吸出液体，用pbs洗2～3次，均加入含10％血清的培养基，放入培养箱中继续培养24h。再加入mtt，4h后，将液体吸出加入二甲基亚砜(dmso)，培养箱中放置10min，于490nm处测吸光度，计算存活率。

(2)实验结果

不同浓度kcl对pc12细胞的存活率的影响结果如图1所示，可以看出，kcl的浓度可以影响pc12细胞的存活率，随kcl浓度的增加，pc12细胞的存活率降低；kcl的浓度为125mmol/l、损伤4h时，pc12细胞的存活率为49.5％。

2、不同浓度的三棱素a对pc12细胞钙超载损伤后细胞的存活率的影响实验

(1)实验方法

将pc12细胞配制成细胞悬浮液后，接种于96孔板中，每孔100μl，培养24h。换液，设置5个不同浓度(0.4mmol/l、0.33mmol/l、0.267mmol/l、0.2mmol/l和0.133mmol/l)的三棱素a组、阳性组(20μmmol/l依达拉奉)、模型组(含血清dmem)、正常组(含血清dmem)，总共8组，每个组设置5个复孔，培养24h。换液，正常组加入100μl的含血清的dmem，其余组加入125mmol/l的kcl溶液。损伤4h，用pbs洗2～3次，每个组再加入与之前一样浓度三棱素a，阳性组加依达拉奉、模型组和正常组加入含血清的dmem，培养24h。加入mtt，于490nm处测吸光度，计算存活率。

(2)实验结果

不同浓度的三棱素a对pc12细胞钙超载损伤后细胞的存活率结果如表1所示，可以看出，随三棱素a的浓度的增加，pc12细胞钙超载损伤后细胞的存活率显著提高，均高于模型组；三棱素a浓度为0.4mmol/l、0.33mmol/l和0.267mmol/l时，与模型组相比，存在极显著性差异(p＜0.01)；三棱素a浓度为0.2mmol/l时，与模型组相比，存在显著性差异(p＜0.05)；其中，三棱素a浓度为0.4mmol/l时，pc12细胞钙超载损伤后细胞的存活率最高，为68.2％。

表1不同浓度的三棱素a对pc12细胞钙超载损伤后细胞的存活率结果

注：*表示与模型组比较，p＜0.05；**表示与模型组比较，p＜0.01。

3、不同浓度的三棱素a对pc12细胞钙超载损伤后细胞上清液的ldh活性和mda含量的影响实验

(1)实验方法

将pc12细胞接种于96孔板中，培养24h后。换液，设置5个不同浓度(0.4mmol/l、0.33mmol/l、0.267mmol/l、0.2mmol/l和0.133mmol/l)的三棱素a组、阳性组(20μmmol/l依达拉奉)、模型组和正常组(均加入含血清的dmem)，共8组，重复5个复孔，每个孔100μl，培养24h。换液，正常组加入含血清的dmem，其余组加入125mmol/l的kcl溶液，损伤4h。换液，三棱素a组加入与之前一样浓度的三棱素a，阳性组加依达拉奉，模型组和正常组加含血清的dmem，培养24h。将液体吸出，离心，3000rpm/min，10min，取上清液，按南京建成生物工程研究所mda和ldh试剂盒的说明书操作，测吸光度，计算丙二醛(mda)含量和乳酸脱氢酶(ldh)活性，重复2～3次。

(2)实验结果

当细胞发生缺血性损伤时，会有ldh、mda的释放。根据mda的含量、ldh的活性，可以间接反应三棱素a抗脑缺血的作用。不同浓度的三棱素a对pc12细胞钙超载损伤后细胞上清液的ldh活性和mda含量的影响结果如表2所示，可以看出，随三棱素a浓度的提高，ldh的活性、mda含量逐渐降低，均低于模型组；当三棱素a浓度为0.4mmol/l、0.33mmol/l、0.267mmol/l和0.2mmol/l时，与模型组相比，存在极显著性差异(p＜0.01)；当三棱素a浓度为0.133mmol/l时，与模型组相比，存在显著性差异(p＜0.05)；其中，三棱素a浓度为0.4mmol/l时，pc12细胞钙超载损伤后细胞上清液的ldh活性和mda含量均最低。

表2不同浓度的三棱素a对pc12细胞钙超载损伤后细胞上清液的ldh活性和mda含量的影响结果

注：*表示与模型组比较，p＜0.05；**表示与模型组比较，p＜0.01。

三、三棱素a对pc12细胞氧糖剥夺损伤模型的作用

1、不同浓度na2s2o4对pc12细胞的存活率的影响实验

(1)实验方法

将pc12细胞配制成悬浮液，每个孔加入100μl，接种于96孔板，周围一圈加pbs。于培养箱中放置24h之后，配制不同浓度的na2s2o4，分别为11.25mmol/l、10mmol/l、8.75mmol/l、7.5mmol/l、6.25mmol/l、5mmol/l、3.75mmol/l、2.5mmol/l、1.25mmol/l，每个浓度对应一个组别，以及正常组，设5个复孔，每个孔100μl，正常组为100μldmem，4h后吸出液体每个组均加入含10％血清的培养基，放入培养箱中继续培养。24h后于490nm处测吸光度，根据吸光度测细胞存活率。

(2)实验结果

不同浓度na2s2o4对pc12细胞的存活率的影响结果如图2所示，可以看出，可以看出，na2s2o4的浓度可以影响pc12细胞的存活率，随na2s2o4浓度的增加，pc12的存活率逐渐降低；na2s2o4的浓度为5mmol/l、损伤4h时，pc12细胞的存活率为48.7％。

2、不同浓度三棱素a对pc12细胞氧糖剥夺损伤后细胞存活率的影响实验(1)实验方法

将pc12细胞接种于96孔板中，培养24h。换液，设置5个不同浓度(0.4mmol/l、0.33mmol/l、0.267mmol/l、0.2mmol/l和0.133mmol/l)的三棱素a组、阳性组(20μmmol/l依达拉奉)、模型组(加入含血清dmem)、正常组(加入含血清dmem)，总共8组，设5个复孔，培养24h。换液加入5mmol/l的na2s2o4，正常组加不含血清的dmem，损伤4h。换液，每个组加入与之前一样浓度的三棱素a，阳性组加依达拉奉，正常组、模型组加含血清的dmem，培养24h。加入mtt，于490nm处测吸光度，计算存活率。

(2)实验结果

不同浓度三棱素a对pc12细胞氧糖剥夺损伤后细胞存活率的影响结果如表3所示，可以看出，随着三棱素a浓度的提高，pc12细胞的存活率逐渐提高，均高于模型组；三棱素a浓度为0.4mmol/l和0.33mmol/l时，与模型组相比，存在极显著性差异(p＜0.01)；三棱素a浓度为0.267mmol/l和0.2mmol/l时，与模型组相比，存在显著性差异(p＜0.05)；其中，三棱素a浓度为0.4mmol/l时，pc12细胞氧糖剥夺损伤后细胞存活率最高，为71.8％。

表3不同浓度三棱素a对pc12细胞氧糖剥夺损伤后细胞存活率的影响结果

注：*表示与模型组比较，p＜0.05；**表示与模型组比较，p＜0.01。

3、不同浓度三棱素a对pc12细胞氧糖剥夺损伤后细胞上清液的ldh活性和mda含量的影响实验

(1)实验方法

将pc12细胞接种于96孔板中，培养24h。换液，设置5个不同浓度(0.4mmol/l、0.33mmol/l、0.267mmol/l、0.2mmol/l和0.133mmol/l)的三棱素a组、阳性组(20μmmol/l依达拉奉)、模型组(加入含血清培养基)、正常组(加入含血清培养基)，共8组，重复5个复孔，培养24h。换液，加入5mmol/l的na2s2o4，正常组加入含血清培养基，损伤4h。换液，加入与之前一样浓度的三棱素a，阳性组加依达拉奉，正常组和模型组加入含血清的dmem，培养24h。将液体吸出，离心，3000rpm/min，10min，取上清液，按南京建成生物工程研究所mda和ldh试剂盒的说明书操作，测吸光度，计算ldh活性和mda含量，重复2～3次。

(2)实验结果

不同浓度三棱素a对pc12细胞氧糖剥夺损伤后细胞上清液的ldh活性和mda含量的影响结果如表4所示，可以看出，随三棱素a浓度的提高，ldh的活性、mda含量逐渐降低，均低于模型组；在ldh活性方面，当三棱素a浓度为0.4mmol/l、0.33mmol/l和0.267mmol/l时，与模型组相比，存在极显著性差异(p＜0.01)；当三棱素a浓度为0.2mmol/l和0.133mmol/l时，与模型组相比，存在显著性差异(p＜0.05)。在mda含量方面，当三棱素a浓度为0.4mmol/l、0.33mmol/l、0.267mmol/l和0.2mmol/l时，与模型组相比，存在极显著性差异(p＜0.01)；当三棱素a浓度为0.133mmol/l时，与模型组相比，存在显著性差异(p＜0.05)。其中，三棱素a浓度为0.4mmol/l时，pc12细胞氧糖剥夺损伤后细胞上清液的ldh活性和mda含量均最低。

表4不同浓度三棱素a对pc12细胞氧糖剥夺损伤后细胞上清液的ldh活性和mda含量的影响结果

注：*表示与模型组比较，p＜0.05；**表示与模型组比较，p＜0.01。

实施例2三棱素a对大鼠脑缺血再灌注损伤的药效实验

一、实验材料

(1)实验动物

spf级sd大鼠(雄性，体重250～300g)，实验大鼠由广东省医学实验动物中心提供，许可证号：scxk(粤)2013-0002。由广东药科大学实验动物中心饲养。

(2)实验仪器

(3)实验试剂

二、三棱素a对大鼠脑缺血再灌注损伤的药效实验方法和实验结果

1、实验动物分组、给药

将雄性sd大鼠随机分成两批，一批用于研究三棱素a对缺血性脑卒中脑组织的保护作用，另一批用于研究三棱素a对缺血性脑卒中的血脑屏障的保护作用。

每批雄性sd大鼠随机分为三棱素a高、中、低剂量组、假手术组、阳性组(尼莫地平)、模型组，共6组。将三棱素a、尼莫地平溶解于0.5％cmc-na(称量0.5gcmc-na溶于水，定容到100ml)，三棱素a高、中、低剂量组分别给药0.0606g/kg、0.0303g/kg、0.01515g/kg，阳性组给药20mg/kg，假手术组、模型组给药0.5％cmc-na。连续灌胃给药4天(每100g体重给药1ml)，第四天给药2h后，进行手术构建mcao模型(造模前12h禁食不禁水)，造模后8h再灌胃1次。

2、大鼠局灶性脑缺血再灌注模型(mcao)的建立

于末次灌胃2h后，采用线栓法构造大鼠大脑中动脉阻塞(middlecerebralarteryocclusion，mcao)再灌注模型，假手术组不插线栓，其余操作一样。给大鼠腹腔注射10％水合氯醛麻醉(3ml/kg)，待其完全麻醉后将大鼠仰卧固定于手术台，剪毛后涂抹碘伏，在颈部正中位纵行切口(25cm处)，分离大鼠右侧颈总动脉及颈外动脉，并结扎这两个动脉的近心端，用微型动脉夹夹闭颈内动脉，用眼科剪于cca结扎的远心端(距离颈总动脉分叉处约5cm)剪一小口插入栓线，松开ica动脉夹，迅速调整栓线的力度及方向，栓线从cca进入ica，直至大脑前动脉的起始区域，遇阻力后稍加用力插入然后停止。将缝合伤口后给大鼠腹腔注射1ml生理盐水，缺血2h后将栓线拔出至标志的黑点处，再灌注24小时。(参照longa改良法)待大鼠麻醉苏醒后，采用longa法进行神经损伤症状评分，并取大鼠脑组织，部分脑组织进行ttc染色，以及将部分脑组织保存(用于westernblot)，采用试剂盒测定血清中大鼠tax2、et-1、tnfα、il-β和mda的含量、ldh的活性。

3、神经病学功能评分和梗死面积的测定

(1)实验方法

神经功能损伤按4分进行评分：没有明显神经功能缺损症状：0分；无法完全伸展左前肢：1分；向左侧旋转行走：2分；行走时向左侧倾倒：3分；无法行走，发生意识障碍：4分。待大鼠苏醒后观察状况并进行评分、记录，1分以上即造模成功。剔除死亡大鼠、造模不成功的大鼠。

在灌注24h后，称重，腹腔注射10％水合氯醛，并进行腹主动脉取血后，立马将大鼠开颅取脑(去除小脑和嗅球部分)，用pbs将脑组织清洗之后，用滤纸将脑组织的水分吸干，并使用电子天平称量脑组织的湿重，并计算大鼠脑指数，后将脑组织放入-20℃冰箱中冷冻10min，取出放置于脑模上，进行切片，沿视神经交叉部分及视神经2mm处将大脑切成5片。将切片置于0.5％ttc中进行染色(避光)，正染和反染各5min，后取出放于4％多聚甲醛固定液中，24h后拍照，用imagej测量脑组织梗死面积，并算出梗死面积百分比，记录数据。

(2)实验结果

各组大鼠脑组织的梗死情况结果如图3所示，可以看出，假手术组未出现梗死灶，而模型组出现梗死灶，三棱素a高、中、低剂量组的梗死情况比模型组明显减轻。梗死面积是反应脑组织受损情况的重要指标。各组大鼠脑组织的神经病学功能评分和梗死面积结果如表5所示，可以看出，随三棱素a浓度的提高，梗死面积和神经病学评分逐渐提高，但均低于模型组；三棱素a中、低剂量组(分别给药0.0303g/kg和0.01515g/kg)的梗死面积和神经病学评分与模型组相比，存在极显著性差异(p＜0.01)；三棱素a高剂量组(给药0.0606g/kg)的梗死面积和神经病学评分与模型组相比，存在显著性差异(p＜0.05)；表明三棱素a具有抑制大鼠脑缺血损伤的作用。

表5各组大鼠脑组织的神经病学功能评分和梗死面积结果

注：*表示与模型组比较，p＜0.05；**表示与模型组比较，p＜0.01。

4、各组大鼠血清中mda含量、ldh活性的测定

(1)实验方法

大鼠腹主动脉取血后，将血液静止一段时间，离心(3000rpm/min，4℃，10min)。离心后取上清液，后放置于-80℃冰箱中，测mda含量、ldh活性(根据南京建成生物工程研究所试剂盒说明书)。

(2)实验结果

ldh的活性和mda的含量能够在一定程度上间接的反应脑组织中神经元细胞的凋亡、坏死情况。各组大鼠血清中mda含量、ldh活性的结果如表6所示，可以看出，随着三棱素a浓度的提高，mda含量、ldh活性逐渐提高，但均低于模型组；三棱素a高、中、低剂量组(分别给药0.0606g/kg、0.0303g/kg和0.01515g/kg)的ldh的活性和mda的含量与模型组相比，均存在极显著性差异(p＜0.01)。

脑指数能够在一定程度上反应脑组织受损伤情况，脑组织受损会水肿。各组大鼠脑指数的结果如表7所示，可以看出，随着三棱素a浓度的提高，大鼠脑指数提高，但均低于模型组；三棱素a高、中、低剂量组(分别给药0.0606g/kg、0.0303g/kg和0.01515g/kg)的脑指数与模型组相比，均存在极显著性差异(p＜0.01)。

表6各组大鼠血清中mda含量、ldh活性的结果

注：**表示与模型组比较，p＜0.01。

表7各组大鼠脑指数的结果

注：**表示与模型组比较，p＜0.01。

5、各组大鼠血清中tax2、et-1、tnfα、il-β含量的测定

(1)实验方法

从-80℃冰箱中将血清取出，测定血栓素a2(tax2)、内皮素1(et-1)、肿瘤坏死因子α(tnfα)、白细胞介素β(il-β)的含量(根据南京建成生物工程研究所试剂盒说明书)。

(2)实验结果

脑组织受损往往会产生炎症，测定tnfα、il-β的含量，能够观察三棱素a能否降低炎症因子，以及是否能够降低相关凝血因子。各组大鼠血清中tax2、et-1、tnfα、il-β含量结果如表8所示，可以看出，随着三棱素a浓度的提高，大鼠血清中tax2、et-1、tnfα、il-β含量均提高，但均低于模型组；三棱素a中、低剂量组(分别给药0.0303g/kg和0.01515g/kg)的血清中tax2、et-1、tnfα、il-β含量与模型组相比，均存在极显著性差异(p＜0.01)。

表8各组大鼠血清中tax2、et-1、tnfα、il-β含量结果

注：*表示与模型组比较，p＜0.05；**表示与模型组比较，p＜0.01。

6、各组大鼠血脑屏障通透性的考察

(1)实验方法

雄性sd大鼠构建mcao模型后，大鼠苏醒后进行神经病学评分，脑缺血2h后拔出线栓，将造模不成功和死亡的大鼠剔除，再灌注22小时后，于大鼠尾静脉注射2％伊文思蓝(evansblue，eb)，用生理盐水将依文思蓝稀释成2％，数秒之后大鼠眼睛和皮肤变蓝色，2h后将大鼠处死，取出脑组织。将大鼠脑组织取出后，在pbs中清洗3次，装入离心管中，并剪碎，后加入2ml的50％三氯乙酸，并放置于60℃水浴中24h后，离心，4℃，3000rpm/min，10min，取上清。

将2％eb按1：10000、1：5000、1：1000、1：500稀释，于632nm处测吸光度，并制作标准曲线。并测各组上清液在632nm处的吸光度，根据标准曲线求各组伊文思蓝的含量。

(2)实验结果

当脑缺血时会破坏血脑屏障，血脑屏障通透性会发生改变，因此，根据伊文思蓝的含量，可以评价血脑屏障破坏程度、通透性。各组大鼠神经病学评分和伊文思蓝含量结果如表9所示，可以看出，随着三棱素a浓度的提高，大鼠神经病学评分和伊文思蓝含量均提高，但均低于模型组；三棱素a中、低剂量组(分别给药0.0303g/kg和0.01515g/kg)的神经病学评分和伊文思蓝含量与模型组相比，均存在极显著性差异(p＜0.01)。

三棱素a低剂量组的伊文思蓝含量为8.98μg/ml，与模型组比，存在显著性差异。

表9各组大鼠神经病学评分和伊文思蓝含量结果

注：*表示与模型组比较，p＜0.05；**表示与模型组比较，p＜0.01。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。