本发明涉及化合物的制药用途，具体来说，涉及金线莲苷或其药学上可接受的盐在制备防治神经炎症的药物中的用途。
背景技术：
神经炎症主要是由中枢神经系统胶质细胞在外来病原或自身某些成分的刺激下，导致炎症基因表达升高并释放至周围神经微环境的过程。由于炎症因子释放导致神经微环境的改变不利于神经元存活和突触修剪，从而促使某些神经疾病发生。
神经系统中主要的免疫细胞为小胶质细胞，神经炎症也主要由该类细胞介导。小胶质细胞与外周的巨噬细胞在激活过程中存在一些类似的特征，比如当被脂多糖（lps）刺激时，il6、tnfα、inos和il-1β等促炎性细胞因子表达升高，表现为m1型激活；被抑炎因子il-4刺激时，则cd206、il-10和arg1等抑炎性分子表达增加，表现为m2型激活。
研究发现，小胶质细胞的m1型激活使疾病症状恶化，m2型激活使疾病症状减轻。例如，给自身免疫性脑脊髓炎（eae）模型小鼠注射芬戈莫德（一种神经炎症抑制剂），可以抑制小胶质细胞m1型激活，从而减轻小鼠脱髓鞘和运动障碍的症状。当抑制cb1受体时，小胶质细胞il-4和il-10等抑炎性细胞因子表达显著下调，促炎性细胞因子il-17和ifn-γ表达显著升高，小胶质细胞呈m1型激活，从而使eae模型动物发病时间提前和病情加重。过表达microrna-124则可抑制小胶质细胞m1型激活，从而减少髓鞘特异性t细胞的激活，则能够显著改善小鼠临床症状。小胶质细胞nlrp3炎症小体激活将导致il-1β和il-18等促炎细胞因子表达和分泌增加，促使辅助性t细胞和cd4阳性t细胞向中枢神经系统迁移，在eae和多发性硬化症的进展过程中发挥重要作用。除了多发性硬化症，在其他疾病模型中（如帕金森病、脑卒中、阿尔兹海默病等），抑制炎症也具有治疗作用，此处不再一一列举。
总之，现有研究结果表明，抑制靶向小胶质细胞m1型激活，可抑制促炎性细胞因子释放和外周免疫细胞向中枢神经系统的迁移。发挥治疗阿尔兹海默病、帕金森病、多发性硬化症、肌萎缩侧索硬化症和脑卒中等疾病的作用。
金线莲苷是从兰科开唇兰属植物金线莲中提取得到的化学成分，药理研究表明其具有降血糖、降血脂、保肝护肝、改善骨质疏松等作用，但尚未见其对神经炎症具有任何作用的报道。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供金线莲苷或其药学上可接受的盐的新的制药用途。
本发明的目的是通过如下技术方案实现的。
本发明提供金线莲苷或其药学上可接受的盐在制备防治神经炎症的药物中的用途。
根据本发明的用途，优选地，所述神经炎症为小胶质细胞m1激活所致的神经炎症。
本发明还提供金线莲苷或其药学上可接受的盐用于在制备防治神经炎症导致的神经系统疾病的药物中的用途。
根据本发明的用途，优选地，所述神经炎症为小胶质细胞m1激活所致的神经炎症。
根据本发明的用途，优选地，所述神经系统疾病选自阿尔兹海默病、帕金森病、多发性硬化症、肌萎缩侧索硬化症和脑卒中中的任一种。
根据本发明的用途，优选地，所述神经系统疾病为阿尔兹海默病。
根据本发明的用途，优选地，所述药物含有：
a.金线莲苷或其药学上可接受的盐，和
b.药学上可接受的辅料。
根据本发明的用途，优选地，所述药物以所述金线莲苷或其药学上可接受的盐作为唯一药学活性成分。
根据本发明的用途，优选地，所述药物除了含有金线莲苷或其药学上可接受的盐，还含有其他用于治疗阿尔茨海默病的药学活性成分。
根据本发明的用途，优选地，所述药物的剂型为口服剂型。
金线莲苷或其药学上可接受的盐对于小胶质细胞m1激活所致的神经炎症具有有效防治作用，进而对小胶质细胞m1激活所致的神经炎症导致的神经系统疾病包括阿尔兹海默病、帕金森病、多发性硬化症、肌萎缩侧索硬化症和脑卒中等具有防治作用。通过对神经系统疾病之一——阿尔茨海默病（ad）的动物模型进行学习认知功能实验发现，金线莲苷或其药学上可接受的盐能够有效改善其学习认知功能，对神经系统疾病具有确切的防治作用。
具体实施方式
下面对本发明的具体实施方式作进一步的说明。
神经系统中主要的免疫细胞为小胶质细胞，神经炎症也主要由该类细胞介导。小胶质细胞与外周的巨噬细胞在激活过程中存在一些类似的特征，比如小胶质细胞被脂多糖（lps）刺激时，il6、tnfα、inos和il-1β等促炎性细胞因子表达升高，表现为m1型激活；小胶质细胞被抑炎因子il-4刺激时，则cd206、il-10和arg1等抑炎性分子表达增加，表现为m2型激活。小胶质细胞的m1型激活使疾病症状恶化，而m2型激活使疾病症状减轻。大量研究结果表明，抑制靶向小胶质细胞m1型激活，可抑制促炎性细胞因子释放和外周免疫细胞向中枢神经系统的迁移，因而具有防治神经炎症作用，并有效发挥防治阿尔兹海默病、帕金森病、多发性硬化症、肌萎缩侧索硬化症和脑卒中等疾病的作用。
本发明中，金线莲苷的化学结构如式ⅰ所示：
本发明中，金线莲苷的药学上可接受的盐可以为糖苷上的羟基氢被金属原子部分或全部取代后形成的盐。优选地，所述金属原子为钠或钾。
本发明中，金线莲苷或其药学上可接受的盐能够抑制小胶质细胞m1型激活，从而抑制促炎性细胞因子释放和外周免疫细胞向中枢神经系统的迁移，因而具有防治神经炎症的作用。
因此，本发明提供金线莲苷或其药学上可接受的盐在制备防治神经炎症的药物中的用途。
本发明中，所述的神经炎症与神经系统疾病具有明确的相关性。所述神经系统疾病包括阿尔兹海默病、帕金森病、多发性硬化症、肌萎缩侧索硬化症和脑卒中等。
因此，本发明还提供金线莲苷或其药学上可接受的盐用于制备防治神经系统疾病的药物的用途。根据本发明优选的实施方式，所述神经系统疾病选自阿尔兹海默病、帕金森病、多发性硬化症、肌萎缩侧索硬化症和脑卒中中的任一种。根据本发明的一个优选的实施方式，所述神经系统疾病为阿尔兹海默病；更优选地，所述阿尔茨海默病的患者具有学习认知功能减退的症状。
本发明中，所述药物含有金线莲苷或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的辅料。
根据本发明的一个实施方式，所述药物以所述金线莲苷或其药学上可接受的盐作为唯一的药学活性成分。
根据本发明的另一个实施方式，所述药物除了含有金线莲苷或其药学上可接受的盐，还含有其他用于治疗阿尔茨海默病的药学活性成分。
本发明中，所述药物剂型不限，例如可以为口服剂型或注射剂型，并优选为口服剂型，如片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂等。
本发明发现，金线莲苷或其药学上可接受的盐能够有效抑制小胶质细胞m1型激活，从而抑制促炎性细胞因子释放和外周免疫细胞向中枢神经系统的迁移，对于小胶质细胞m1激活所致的神经炎症具有防治作用，进而对小胶质细胞m1激活所致的神经炎症导致的神经系统疾病包括阿尔兹海默病、帕金森病、多发性硬化症、肌萎缩侧索硬化症和脑卒中等具有防治作用。实验显示，本发明的金线莲苷或其药学上可接受的盐能够有效抑制小胶质细胞促炎性细胞因子tnfα、il6和inos的表达，从而抑制小胶质细胞m1型激活。另外，通过对神经系统疾病的典型疾病——阿尔茨海默病的动物模型进行学习认知功能实验发现，金线莲苷或其药学上可接受的盐能够有效改善其学习认知功能，对阿尔茨海默病防治作用确切，从而验证了对这类小胶质细胞m1激活所致的神经炎症导致的神经系统疾病具有确切的防治作用。
以下通过具体实施例对本发明做进一步说明。
以下实施例中，pcr试剂盒为康润生物科技生产，货号为a304。反转录酶为全式金生物科技有限公司生产，货号at311。实时荧光定量pcr仪器型号为abistudioq3。内参基因β-actin的引物序列为forward：5’-ggctgtattcccctccatcg-3’，reverse：5’-ccagttggtaacaatgccatgt-3’）。m1型炎症因子tnfα的引物序列为forward：5’-caggcggtgcctatgtctc-3’；reverse：5’-cgatcaccccgaagttcagtag-3’。m1型炎症因子il-6的引物序列为forward：5’-gctaccaaactggatataatcagga-3’；reverse：5’-ccaggtagctatggtactccagaa-3’。m1型炎症因子inos的引物序列为forward：5’-gttctcagcccaacaatacaaga-3’；reverse：5’-gtggacgggtcgatgtcac-3’。
实施例1金线莲苷抑制炎症因子tnfα表达实验
实验步骤为：①将bv2小胶质细胞接种在12孔细胞培养板内，10万个细胞/孔；②12h后用终浓度为20μm的金线莲苷（储液摩尔浓度为80mm）先预处理1h，以不用金线莲苷预处理的细胞作为未刺激对照组；③金线莲苷预处理1h的细胞分为两组，分别加入脂多糖（lps）（终浓度为1μg/ml），其中一组lps刺激12h，另一组lps刺激24h；④lps刺激到预定时间点时，用trizol试剂裂解细胞，提取rna；⑤提取rna之后，每个样品取1μg总rna，用反转录酶以随机引物进行反转录，得到cdna。将所述cdna通过实时荧光定量pcr，采用sybergreen染料法进行相对定量，检测内参基因β-actin和m1型炎症因子tnfα的表达，通过2-△△ct法计算表达量。
实验结果见表1。表1中，各组数据以未经lps刺激的对照组的数值的倍数来表示。
表1金线莲苷抑制炎症因子tnfα表达
注：**表示与对照组相比，差异极显著（p<0.01）。
实施例2金线莲苷抑制炎症因子il6表达实验
实验步骤为：①将bv2小胶质细胞接种在12孔细胞培养板内，10万个细胞/孔；②12h后用终浓度为20μm的金线莲苷（储液摩尔浓度为80mm）先预处理1h，以不用金线莲苷预处理的细胞作为未刺激的对照组；③金线莲苷预处理1h后的细胞分为两组，分别加入lps（终浓度为1μg/ml），其中一组lps刺激12h，另一组lps刺激24h；④lps刺激到预定时间点时，用trizol试剂裂解细胞，提取rna；⑤提取rna之后，每个样品取1μg总rna，用反转录酶以随机引物进行反转录，得到cdna。将所述cdna通过实时荧光定量pcr，采用sybergreen染料法进行相对定量，检测内参基因β-actin和m1型炎症因子il-6的表达，通过2-△△ct法计算表达量。
实验结果见表2。表2中，各组数据以未经lps刺激的对照组的数值的倍数来表示。
表2金线莲苷抑制炎症因子il6表达
注：**表示与对照组相比，差异极显著（p<0.01）。
实施例3-金线莲苷抑制炎症因子inos表达实验
实验步骤为：①将bv2小胶质细胞接种在12孔细胞培养板内，10万个细胞/孔；②12h后用终浓度为20μm的金线莲苷（用摩尔浓度为80mm的储液稀释）先预处理1h，以不用金线莲苷预处理的细胞作为未刺激的对照组；③金线莲苷预处理1h后的细胞分为两组，分别加入lps（终浓度为1μg/ml），其中一组lps刺激12h，另一组lps刺激24h；④lps刺激到预定时间点时，用trizol试剂裂解细胞，提取rna；⑤提取rna之后，每个样品取1μg总rna，用反转录酶以随机引物进行反转录，得到cdna。将所述cdna通过实时荧光定量pcr，采用sybergreen染料法进行相对定量检测内参基因β-actin和m1型炎症因子inos的表达，通过2-△△ct法计算表达量。
实验结果见表3。表3中，各组数据以未经lps刺激的对照组的数值的倍数来表示。
表3金线莲苷抑制炎症因子inos表达
注：**表示与对照组相比，差异极显著（p<0.01）。
上述实施例1-3实验结果表明，金线莲苷可以抑制小胶质细胞促炎性细胞因子tnfα、il6和inos的表达，从而抑制小胶质细胞介导的神经炎症。
实施例4-金线莲苷增强ad模型小鼠学习记忆能力
本实施例以典型的神经系统疾病——阿尔茨海默病作为示例，验证金线莲苷对神经系统疾病的实际作用。
采用morris水迷宫试验法，取5xfad转基因小鼠（ad模型小鼠）30只，随机分为3组，每组10只。在小鼠4月龄通过灌胃给予金线莲苷，连续给药1个月，给药剂量分别为0、20mg/ml和50mg/ml。连续给药一个月后通过水迷宫实验检测小鼠的空间学习记忆能力，模拟金线莲苷对ad的治疗作用。
morris水迷宫试验主要步骤如下：
①水迷宫由一个圆形不锈钢水池构成，其直径为120cm，逃生平台直径为10cm，注入水之后，添加钛白粉使水呈乳白色，并将平台隐藏在水面下1cm(固定在人为划分好的四个象限的其中一个中间)。水池深60cm，其边缘设定四个小鼠入水起始点(东、西、南、北)，并在壁上贴不同形状（三角形、圆形、正方形和梯形）和颜色（红、黄、蓝、黑）的物体给小鼠空间定位提供视觉线索。实验中水温保持在22±1℃，整个实验过程中平台位置、视觉线索位置等均保持不变。
②实验中，小鼠放入水池后，连接于电脑摄像头开始记录下小鼠在水迷宫中寻找隐藏平台的游泳潜伏期（首次到达平台时间）、路程（运动距离）及路径（运动轨迹）。小鼠每天训练两次，每次1分钟，对于找到平台的小鼠，让其待在平台上30秒后拿出迷宫，休息两个小时后再进行下次训练；对于找不到平台的小鼠，将其引导到平台上，同样在平台上待30秒后拿出，休息两个小时后再进行下次训练。
③根据小鼠的训练情况，连续训练6天并记录每次训练时第一次到达平台的时间，可以统计分析每组小鼠每天首次到达平台的平均时间，以初步评价小鼠的学习认知能力。
④在最后一次训练结束24小时后测试小鼠的学习记忆能力。
测试过程为：将隐藏在水面下的平台取出，让小鼠在迷宫中自由探索1分钟，记录分析小鼠首次到达平台区域的时间、穿越平台所在位置的次数、和在平台所在象限停留时间，并进行统计分析，以评价小数的学习认知能力。首次到达平台时间越少，在平台区域穿梭次数越多，在平台所在象限停留时间越长，则表明小鼠记忆能力越强。
实验结果见表4。表4中，各指标的t1表示金线莲苷组（20mg/kg）与对照组相比的检验值，t2表示金线莲苷组（50mg/kg）与对照组相比的检验值；各指标的p1表示金线莲苷组（20mg/kg）与对照组相比的显著性水平，p2表示金线莲苷组（50mg/kg）与对照组相比的显著性水平。
表4结果显示，金线莲苷组（20mg/kg）和金线莲苷组（50mg/kg）小鼠首次到达平台区域的时间极显著低于对照组，平台区域穿越次数极显著多于对照组，在平台所在象限停留时间极显著长于对照组，且差异均具有统计学意义。因此，金线莲苷可以显著提高阿尔茨海默病模型小鼠的空间学习记忆能力，对阿尔茨海默病有明显的预防和治疗作用。
表424小时后各组小鼠学习记忆能力比较（x̅±sd）
注：**表示与对照组相比，差异极显著（p<0.01）。
本发明并不限于上述实施方式，在不背离本发明的实质内容的情况下，本领域技术人员可以想到的任何变形、改进、替换均落入本发明的范围。