一种细胞外泌体在眼贴膜中的应用的制作方法

本发明实施例涉及眼贴膜技术领域，具体涉及一种细胞外泌体在眼贴膜中的应用。

背景技术：

眼贴膜是指为了治疗眼部某种疾病或解决眼部皮肤问题所创造的类似于创可贴的薄膜，无纺布浸泡纯中药成分，可以帖敷眼眶部位，让药物通过眼部吸收，来让眼疾得到改善和缓解，一般分为治疗类眼贴和美容类眼贴。眼贴膜的作用：防眼部病变、有效缓解眼睛疲劳、对抗视力下降和滋润眼部、缓解眼睛干燥的作用。细胞外泌体是指包含了复杂rna和蛋白质的小膜泡，现今，其特指直径在40-100nm的盘状囊泡，多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体，其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。

现有技术存在以下不足：现代社会，人们长时间看电脑、手机等电子设备，对眼睛的伤害极大，同时由于传统的眼贴护眼灯产品，没有跟据眼部的皮肤吸收和敏感度等做改善，基本的不到很大的吸收和改善眼部疲劳等问题，故将细胞外泌体应用在眼贴膜中很有必要。

技术实现要素：

为此，本发明实施例提供一种细胞外泌体在眼贴膜中的应用，通过在传统的眼贴膜技术基础上增加细胞外泌体，外泌体对细胞间通信、疾病的传播及组织修复具有重要的调节作用，外泌体与受体细胞的结合方式多种多样，外泌体可以将膜蛋白或其内容物转移至受体细胞，也可以直接与受体细胞膜融合，此外，外泌体上的跨膜蛋白还可以直接作用于皮肤表面，同时还添加修护溶酶，具有加快吸收，对眼周边的损坏组织具有修护疗伤作用。

为了实现上述目的，本发明实施例提供如下技术方案：一种细胞外泌体在眼贴膜中的应用，包括细胞外泌体，所述细胞外泌体与修护溶酶制备外泌体修护溶酶，所述细胞外泌体与原生液精华制备外泌体原生液精华，将外泌体修护溶酶与外泌体原生液精华混合后，将眼贴膜浸泡于混合液中制备眼贴膜成品。

优选地，外泌体修护溶酶与外泌体原生液精华的混合比例为1-3：1.5-3.5，眼贴膜浸泡于混合液中的时间为10-20min。

优选地，眼贴膜成品的使用方法为：使用前先彻底清洁肌肤，然后取出眼贴膜成品贴于眼部，轻轻按摩促进眼部肌肤吸收，15-20min后取下，再次按摩眼部肌肤促进余下的精华吸收。

本发明还包括外泌体修护溶酶制备方法如下：

s1、准备原料(按重量份数计)包括：水80-90份、玻尿酸钠1-2份、透明质酸钠1-3份、玻璃酸钠0.5-1份、类人胶原蛋白1-2份、胶原蛋白胜肽0.5-1份、二丙二醇3-4份、甘油2-2.5份、银耳多糖0.2-0.8份、纤维蛋白酶0.1-0.3份、溶菌酶份0.05-0.2份、谷胱甘肽过氧化物酶0.05-0.2份和细胞外泌体1-3份；

s2、将水、玻尿酸钠、透明质酸钠和玻璃酸钠放入制料锅中混合搅拌得第一混合物；

s3、将类人胶原蛋白、胶原蛋白胜肽、二丙二醇、甘油和银耳多糖放入制料锅中混合搅拌得第二混合物；

s4、将第一混合物与第二混合物混合搅拌，然后将混合物放入均质机中乳化，然后使用真空脱泡机对混合物抽真空脱泡；

s5、将脱泡后的混合物与纤维蛋白酶、溶菌酶、谷胱甘肽过氧化物酶和细胞外泌体混合搅拌后冷却至室温，制得外泌体修护溶酶。

优选地，在步骤s2中制料锅温度为75-85℃，搅拌时间为30-60min，在步骤s3中制料锅温度为75-85℃，搅拌时间为30-60min，在步骤s4中第一混合物与第二混合物的混合温度为80-85℃，搅拌时间为30-60min，均质乳化时间为10-20min。

优选地，在步骤s5中混合搅拌温度为40-45℃，混合搅拌时间为20-40min。

本发明还包括外泌体原生液精华制备方法如下：

s1、准备原料(按重量份数计)包括：水70-85份，聚乙二醇-751-3份、1，3-丙二醇1-2份、丁二醇0.5-1份、甜菜碱0.5-3.5份、洋甘菊油0.5-2.5份、乙酰基六肽-81-2份、二裂酵母发酵产物溶孢物0.4-0.8份、聚谷氨酸0.5-1份、芦荟提取物1-2份、葡萄萃取物0.4-1份、叶黄素0.6-2份、细胞外泌体1-3份；

s2、将水、聚乙二醇-75、1，3-丙二醇、丁二醇、甜菜碱、洋甘菊油、乙酰基六肽-8、二裂酵母发酵产物溶孢物和聚谷氨酸于制料锅中混合搅拌；

s3、使用均质机进行均质；

s4、均质后的物料降温后依次加入芦荟提取物、葡萄萃取物、叶黄素和细胞外泌体保温搅拌，然后冷却至室温制得外泌体原生液精华。

优选地，在步骤s2中制料锅温度为80-85℃，搅拌时间为20-40min，在步骤s3中均质时间为10-20min，在步骤s4中均质后的物料降温至40-45℃，搅拌时间为20-40min。

本发明实施例具有如下优点：

本发明通过在传统的眼贴膜技术基础上增加细胞外泌体，外泌体对细胞间通信、疾病的传播及组织修复具有重要的调节作用，外泌体与受体细胞的结合方式多种多样，外泌体可以将膜蛋白或其内容物转移至受体细胞，也可以直接与受体细胞膜融合，此外，外泌体上的跨膜蛋白还可以直接作用于皮肤表面，同时还添加修护溶酶，具有加快吸收，对眼周边的损坏组织具有修护疗伤作用。

具体实施方式

以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1：

本发明提供一种细胞外泌体在眼贴膜中的应用，包括细胞外泌体，所述细胞外泌体与修护溶酶制备外泌体修护溶酶，所述细胞外泌体与原生液精华制备外泌体原生液精华，将外泌体修护溶酶与外泌体原生液精华按1：1.5混合后，将眼贴膜浸泡于混合液中10min，制备眼贴膜成品，眼贴膜成品的使用方法为：使用前先彻底清洁肌肤，然后取出眼贴膜成品贴于眼部，轻轻按摩促进眼部肌肤吸收，15min后取下，再次按摩眼部肌肤促进余下的精华吸收。

外泌体修护溶酶制备方法如下：

s1、准备原料(按重量份数计)包括：水80份、玻尿酸钠1份、透明质酸钠1份、玻璃酸钠0.5份、类人胶原蛋白1份、胶原蛋白胜肽0.5份、二丙二醇3份、甘油2份、银耳多糖0.2份、纤维蛋白酶0.1份、溶菌酶份0.05份、谷胱甘肽过氧化物酶0.05份和细胞外泌体1份；

s2、将水、玻尿酸钠、透明质酸钠和玻璃酸钠放入制料锅中于75℃混合搅拌30min得第一混合物；

s3、将类人胶原蛋白、胶原蛋白胜肽、二丙二醇、甘油和银耳多糖放入制料锅中于75℃混合搅拌30min得第二混合物；

s4、将第一混合物与第二混合物于80℃混合搅拌30min，然后将混合物放入均质机中乳化10min，然后使用真空脱泡机对混合物抽真空脱泡；

s5、将脱泡后的混合物与纤维蛋白酶、溶菌酶、谷胱甘肽过氧化物酶和细胞外泌体于40℃混合搅拌20min后冷却至室温，制得外泌体修护溶酶。

外泌体原生液精华制备方法如下：

s1、准备原料(按重量份数计)包括：水70份，聚乙二醇-751份、1，3-丙二醇1份、丁二醇0.5份、甜菜碱0.5份、洋甘菊油0.5份、乙酰基六肽-81份、二裂酵母发酵产物溶孢物0.4份、聚谷氨酸0.5份、芦荟提取物1份、葡萄萃取物0.4份、叶黄素0.6份、细胞外泌体1份；

s2、将水、聚乙二醇-75、1，3-丙二醇、丁二醇、甜菜碱、洋甘菊油、乙酰基六肽-8、二裂酵母发酵产物溶孢物和聚谷氨酸于制料锅中80℃混合搅拌20min；

s3、使用均质机进行均质10min；

s4、均质后的物料降温40℃后依次加入芦荟提取物、葡萄萃取物、叶黄素和细胞外泌体保温搅拌20min，然后冷却至室温制得外泌体原生液精华。

实施例2：

本发明提供一种细胞外泌体在眼贴膜中的应用，包括细胞外泌体，所述细胞外泌体与修护溶酶制备外泌体修护溶酶，所述细胞外泌体与原生液精华制备外泌体原生液精华，将外泌体修护溶酶与外泌体原生液精华按1.5：2混合后，将眼贴膜浸泡于混合液中14min，制备眼贴膜成品，眼贴膜成品的使用方法为：使用前先彻底清洁肌肤，然后取出眼贴膜成品贴于眼部，轻轻按摩促进眼部肌肤吸收，14min后取下，再次按摩眼部肌肤促进余下的精华吸收。

外泌体修护溶酶制备方法如下：

s1、准备原料(按重量份数计)包括：水84份、玻尿酸钠1.2份、透明质酸钠1.5份、玻璃酸钠0.65份、类人胶原蛋白1.3份、胶原蛋白胜肽0.65份、二丙二醇3.2份、甘油2.15份、银耳多糖0.4份、纤维蛋白酶0.15份、溶菌酶份0.1份、谷胱甘肽过氧化物酶0.1份和细胞外泌体1.5份；

s2、将水、玻尿酸钠、透明质酸钠和玻璃酸钠放入制料锅中于78℃混合搅拌40min得第一混合物；

s3、将类人胶原蛋白、胶原蛋白胜肽、二丙二醇、甘油和银耳多糖放入制料锅中于78℃混合搅拌40min得第二混合物；

s4、将第一混合物与第二混合物于81.5℃混合搅拌40min，然后将混合物放入均质机中乳化12min，然后使用真空脱泡机对混合物抽真空脱泡；

s5、将脱泡后的混合物与纤维蛋白酶、溶菌酶、谷胱甘肽过氧化物酶和细胞外泌体于42℃混合搅拌25min后冷却至室温，制得外泌体修护溶酶。

外泌体原生液精华制备方法如下：

s1、准备原料(按重量份数计)包括：水78份，聚乙二醇-751.5份、1，3-丙二醇1.25份、丁二醇0.65份、甜菜碱2份、洋甘菊油1份、乙酰基六肽-81.25份、二裂酵母发酵产物溶孢物0.55份、聚谷氨酸0.25份、芦荟提取物1.25份、葡萄萃取物0.6份、叶黄素0.9份、细胞外泌体1.25份；

s2、将水、聚乙二醇-75、1，3-丙二醇、丁二醇、甜菜碱、洋甘菊油、乙酰基六肽-8、二裂酵母发酵产物溶孢物和聚谷氨酸于制料锅中82.5℃混合搅拌26min；

s3、使用均质机进行均质13min；

s4、均质后的物料降温42℃后依次加入芦荟提取物、葡萄萃取物、叶黄素和细胞外泌体保温搅拌27min，然后冷却至室温制得外泌体原生液精华。

实施例3：

本发明提供一种细胞外泌体在眼贴膜中的应用，包括细胞外泌体，所述细胞外泌体与修护溶酶制备外泌体修护溶酶，所述细胞外泌体与原生液精华制备外泌体原生液精华，将外泌体修护溶酶与外泌体原生液精华按2：3混合后，将眼贴膜浸泡于混合液中18min，制备眼贴膜成品，眼贴膜成品的使用方法为：使用前先彻底清洁肌肤，然后取出眼贴膜成品贴于眼部，轻轻按摩促进眼部肌肤吸收，18min后取下，再次按摩眼部肌肤促进余下的精华吸收。

外泌体修护溶酶制备方法如下：

s1、准备原料(按重量份数计)包括：水88份、玻尿酸钠1.6份、透明质酸钠2份、玻璃酸钠0.8份、类人胶原蛋白1.6份、胶原蛋白胜肽0.8份、二丙二醇3.8份、甘油2.25份、银耳多糖0.6份、纤维蛋白酶0.2份、溶菌酶份0.15份、谷胱甘肽过氧化物酶0.15份和细胞外泌体2份；

s2、将水、玻尿酸钠、透明质酸钠和玻璃酸钠放入制料锅中于82℃混合搅拌50min得第一混合物；

s3、将类人胶原蛋白、胶原蛋白胜肽、二丙二醇、甘油和银耳多糖放入制料锅中于82℃混合搅拌50min得第二混合物；

s4、将第一混合物与第二混合物于83℃混合搅拌50min，然后将混合物放入均质机中乳化16min，然后使用真空脱泡机对混合物抽真空脱泡；

s5、将脱泡后的混合物与纤维蛋白酶、溶菌酶、谷胱甘肽过氧化物酶和细胞外泌体于43.5℃混合搅拌35min后冷却至室温，制得外泌体修护溶酶。

外泌体原生液精华制备方法如下：

s1、准备原料(按重量份数计)包括：水82份，聚乙二醇-752份、1，3-丙二醇1.75份、丁二醇0.85份、甜菜碱3份、洋甘菊油2份、乙酰基六肽-81.75份、二裂酵母发酵产物溶孢物0.65份、聚谷氨酸0.75份、芦荟提取物1.75份、葡萄萃取物0.8份、叶黄素1.5份、细胞外泌体2份；

s2、将水、聚乙二醇-75、1，3-丙二醇、丁二醇、甜菜碱、洋甘菊油、乙酰基六肽-8、二裂酵母发酵产物溶孢物和聚谷氨酸于制料锅中83.5℃混合搅拌35min；

s3、使用均质机进行均质17min；

s4、均质后的物料降温43.5℃后依次加入芦荟提取物、葡萄萃取物、叶黄素和细胞外泌体保温搅拌35min，然后冷却至室温制得外泌体原生液精华。

实施例4：

本发明提供一种细胞外泌体在眼贴膜中的应用，包括细胞外泌体，所述细胞外泌体与修护溶酶制备外泌体修护溶酶，所述细胞外泌体与原生液精华制备外泌体原生液精华，将外泌体修护溶酶与外泌体原生液精华按3：3.5混合后，将眼贴膜浸泡于混合液中20min，制备眼贴膜成品，眼贴膜成品的使用方法为：使用前先彻底清洁肌肤，然后取出眼贴膜成品贴于眼部，轻轻按摩促进眼部肌肤吸收，20min后取下，再次按摩眼部肌肤促进余下的精华吸收。

外泌体修护溶酶制备方法如下：

s1、准备原料(按重量份数计)包括：水90份、玻尿酸钠2份、透明质酸钠3份、玻璃酸钠1份、类人胶原蛋白2份、胶原蛋白胜肽1份、二丙二醇4份、甘油2.5份、银耳多糖0.8份、纤维蛋白酶0.3份、溶菌酶份0.2份、谷胱甘肽过氧化物酶0.2份和细胞外泌体3份；

s2、将水、玻尿酸钠、透明质酸钠和玻璃酸钠放入制料锅中于85℃混合搅拌60min得第一混合物；

s3、将类人胶原蛋白、胶原蛋白胜肽、二丙二醇、甘油和银耳多糖放入制料锅中于85℃混合搅拌60min得第二混合物；

s4、将第一混合物与第二混合物于85℃混合搅拌60min，然后将混合物放入均质机中乳化20min，然后使用真空脱泡机对混合物抽真空脱泡；

s5、将脱泡后的混合物与纤维蛋白酶、溶菌酶、谷胱甘肽过氧化物酶和细胞外泌体于45℃混合搅拌40min后冷却至室温，制得外泌体修护溶酶。

外泌体原生液精华制备方法如下：

s1、准备原料(按重量份数计)包括：水85份，聚乙二醇-753份、1，3-丙二醇2份、丁二醇1份、甜菜碱3.5份、洋甘菊油2.5份、乙酰基六肽-82份、二裂酵母发酵产物溶孢物0.8份、聚谷氨酸1份、芦荟提取物2份、葡萄萃取物1份、叶黄素2份、细胞外泌体3份；

s2、将水、聚乙二醇-75、1，3-丙二醇、丁二醇、甜菜碱、洋甘菊油、乙酰基六肽-8、二裂酵母发酵产物溶孢物和聚谷氨酸于制料锅中85℃混合搅拌40min；

s3、使用均质机进行均质20min；

s4、均质后的物料降温45℃后依次加入芦荟提取物、葡萄萃取物、叶黄素和细胞外泌体保温搅拌40min，然后冷却至室温制得外泌体原生液精华。

实施例5：

分别取上述实施例1-4所制得的眼贴膜成品给90位经常使用电子产品的30岁女士使用，每30人为一组，分三组在长时间使用电子产品后分别试用三个实施例中制备的眼贴膜成品，使用3个月后，得到以下数据：

由上表可知，实施例2制备的眼贴膜成品能够有效应对使用电子产品后的眼部疲劳情况，并且同时起到滋润眼部、缓解眼睛干燥发胀的作用，对眼周边的损坏组织具有修护疗伤作用。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施例对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。