本发明涉及化妆品技术领域，具体涉及一种含益生菌发酵液的美白护肤液及其制备方法。
背景技术：
随着人们生活水平的提高及保健、美容意识的增强，人们越来越注重皮肤的保养。然而社会竞争加剧，工作压力大，生活节奏款，使得现代社会人们的皮肤面临各种困扰，例如：皮肤老化加快，皮肤松弛，色斑沉着，肤色暗黄，没有光泽并且出现各种细纹，皱纹，此外皮肤的敏感性增加，容易对外界的灰尘，花粉，螨虫，雾霾等产生过敏反应，给人们带来各种不便。
开发一种既能有效改善皮肤，并能避免对皮肤产生刺激或副作用、美白补水的护肤品成为迫在眉睫的事情。当今社会的护肤品主要包括化学护肤品和天然护肤品。其中，化学护肤品大多添加化学原料或化学添加剂，虽然见效快，但容易给使用者造成副作用，如“铅超标”、“汞超标”等。并且，化学护肤品由于分子大，往往是涂抹效果好，但对皮肤本身的改善效果却不如人意。天然护肤品主要包括中药护肤品和果蔬护肤品。天然护肤品虽来源天然，但对皮肤的改善效果不够理想；同时，若各组分搭配不当，往往有一定的刺激性，易造成皮肤过敏。
目前市面上有很多护肤品，他们在普通的护肤品基础上添加一些植物提取液，然后宣称具有某种功效，然而由于皮肤的屏障功能，植物提取液的有效成分尤其是高分子物质、水溶性物质均难以透过皮肤吸收，而导致实际功效甚微。因此有必要提供一种护肤品组合物，其能够很好的透过皮肤表层而被吸收，进入深层及体循环；其可以使皮肤光滑、细嫩，具有优良的抗氧化、美白护肤的效果。
益生菌(probiotics)是一类对宿主有益的活性微生物，是定植于人体肠道、生殖系统内，能产生确切健康功效从而改善宿主微生态平衡、发挥对肠道有益作用的活性有益微生物的总称。人体、动物体内有益的细菌或真菌主要有：酪酸梭菌、乳酸菌、双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、放线菌、酵母菌等。目前世界上研究的功能最强大的产品主要是以上各类微生物组成的复合活性益生菌，其广泛应用于生物工程、工农业、食品安全以及生命健康领域。
中国专利cn104586737a公开了一种益生菌美白修复面膜精华液及其制备方法，该发明以酵母菌溶胞物、明串球菌/萝卜跟发酵产物滤液、乳酸杆菌发酵溶胞产物、二裂酵母发酵产物溶胞物和嗜酸菌/葡萄发酵产物五种天然益生菌为原料制备出具有美白修复面膜精华液。抗氧化肽是指具有抑制或清除体内各种自由基产物的寡肽。虽然现有技术中已经有天然提取物或者微生物发酵产物来替换传统化工产品的报道，但微生物发酵获得的精华液稳定性较差，尤其是在25℃以上的温度下，不仅会使产品质量下降，而且给储存和运输带来了很大挑战。南京中医药大学王令充团队(食品工业科技，2011，32(10)：285-291)以四角蛤蜊提取多糖的蛋白质残渣为原料，采用胰蛋白酶进行酶解获得抗氧化肽，但其酶解液ph碱性较强，对皮肤刺激性较强，不适合作为皮肤直接接触的精华液；若是对酶解液进行酸碱调节又会影响酶解液抗氧化性。
技术实现要素：
本发明的目的在于提出一种含益生菌发酵液的美白护肤液及其制备方法，通过大量的研究发现，选择特定的菌株组合复配后，对营养料进行发酵后可以显著提升其美容功效，经过长期的研究，发现一种来源于纯天然植物，通过益生菌复合剂发酵后可以起到非常显著的美白祛斑、补水保湿效果，其祛斑脱色效果极佳，尤其是对黄褐斑和顽固性色素沉着效果十分显著。
本发明的技术方案是这样实现的：
本发明提供一种益生菌发酵液的制备方法，包括以下步骤：
s1.菌种活化：将枯草芽孢杆菌、瑞士乳杆菌及乳酸菌菌种的甘油冻存管置于室温，融化后用无菌接种环挑取菌种分别划线接种于营养琼脂培养基、无菌的mrs肉汤培养基和莫匹罗星锂盐mrs琼脂培养基，在35-37℃倒置培养20-24h，然后将其转接至相应液体培养基，适宜条件下培养20-24h后备用；
s2.营养料的制备：将糙米洗净，浸泡在无菌水中1-3h，向水中加入玉米蛋白和豌豆蛋白，搅拌溶解，再加入葡萄籽提取物混合均匀后，得到营养料；
s3.发酵培养基的制备：按照每100ml培养基中含营养料5-10g、豆粕1-3g、玉米1-3g、麸皮2-4g进行混合，用氨水调节ph值为8，制得发酵培养基；
s4.益生菌发酵液的制备：将步骤s1得到的枯草芽孢杆菌、瑞士乳杆菌菌种及乳酸菌菌种混合培养与步骤s3中的发酵培养基中，控制发酵温度在35-37℃，湿度在50-70％，置恒温摇床转速100-120r/min培养24-48h后，取出，压榨培养基，过滤，滤液为益生菌发酵液。
作为本发明的进一步改进，步骤s2种所述糙米、玉米蛋白、豌豆蛋白、葡萄籽提取物的质量比为10：(1-2)：(0.5-2.5)：(0.1-1)。
作为本发明的进一步改进，步骤s4中所述枯草芽孢杆菌、瑞士乳杆菌菌种及乳酸菌菌种的接种量分别为1.5-2.5％、0.1-2％、0.1-1％。
本发明进一步保护一种上述的制备方法制得的益生菌发酵液。
本发明进一步保护一种上述的益生菌发酵液在制备护肤品中的应用。
本发明进一步保护一种含益生菌发酵液的美白护肤液，由以下原料制备而成：上述益生菌发酵液、蚕丝蛋白粉、皂角粉、珍珠粉、乳木果油、烟酰胺、edta-二钠、甘油、卡波姆、抗氧剂、紫外线吸收剂、角鲨烷、茶树精油、丁二醇、燕麦β-葡聚糖、透明质酸钠、去离子水。
作为本发明的进一步改进，由以下原料按重量百分比制备而成：上述益生菌发酵液0.5-2.5％、蚕丝蛋白粉0.5-1.5％、皂角粉0.1-0.5％、珍珠粉0.5-2％、乳木果油0.1-1％、烟酰胺0.01-0.1％、edta-二钠0.5-4％、甘油2-5％、卡波姆0.1-1％、抗氧剂0.01-0.5％、紫外线吸收剂0.01-0.1％、角鲨烷0.5-1.5％、茶树精油0.1-0.5％、丁二醇1-4％、燕麦β-葡聚糖0.1-0.5％、透明质酸钠0.01-0.2％、去离子水余量。
作为本发明的进一步改进，由以下原料按重量百分比制备而成：上述益生菌发酵液0.7-2％、蚕丝蛋白粉0.7-1.2％、皂角粉0.2-0.4％、珍珠粉0.7-1.5％、乳木果油0.2-0.7％、烟酰胺0.02-0.08％、edta-二钠1-3％、甘油2.5-4.5％、卡波姆0.2-0.8％、抗氧剂0.1-0.4％、紫外线吸收剂0.02-0.08％、角鲨烷0.7-1.2％、茶树精油0.2-0.4％、丁二醇2-3％、燕麦β-葡聚糖0.2-0.4％、透明质酸钠0.05-0.15％、去离子水余量。
作为本发明的进一步改进，所述抗氧剂选自二苯胺、对苯二胺、2，6-三级丁基-4-甲基苯酚、双(3，5-三级丁基-4-羟基苯基)硫醚、四〔β-(3，5-三级丁基-4-羟基苯基)丙酸〕季戊四醇酯、二氢喹啉、三辛酯、三癸酯、三(十二碳醇)酯和三(十六碳醇)酯中的一种或几种混合；所述紫外线吸收剂选自邻羟基苯甲酸苯酯、2-(2ˊ-羟基-5ˊ-甲基苯基)苯并三氮唑、2，4-二羟基二苯甲酮、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮、2-羟基-4-正辛氧基二苯甲酮、2-(2'-羟基-3'，5'-二叔苯基)-5-氯化苯并三唑、单苯甲酸间苯二酚酯、三(1，2，2，6，6-五甲哌啶基)亚磷酸酯、4-苯甲酰氧基-2，2，6，6-四甲基哌啶、2，4，6-三(2'正丁氧基苯基)-1，3，5-三嗪、六甲基磷酰三胺中的一种或几种混合。
本发明进一步保护一种上述的含益生菌发酵液的美白护肤液的制备方法，包括以下步骤：
s1.将抗氧剂、紫外线吸收剂、蚕丝蛋白粉、皂角粉、珍珠粉混合均匀，得到物料一；
s2.将权利要求4所述益生菌发酵液、edta二钠、茶树精油、角鲨烷、燕麦β-葡聚糖、透明质酸钠、乳木果油、烟酰胺加入去离子水中，加入卡波姆和步骤s1得到的物料一，加热至35-45℃，加入甘油、丁二醇，超声混合均匀后，10000-12000r/min均质1-3min，得到含益生菌发酵液的美白护肤液。
本发明具有如下有益效果：益生元是通过选择性的刺激一种或几种细菌的生长与活性，从而提高益生菌的生物活性，得到更多更高含量的营养物质，本发明在制备具有抗氧化的葡萄籽提取物、含有美白成分的糙米和玉米蛋白、豌豆蛋白加入营养料中，经过3中益生菌的发酵培养，将玉米蛋白、豌豆蛋白、糙米分解为玉米低聚肽、豌豆低聚肽、氨基酸等美白营养物质，将葡萄籽提取物分解为小分子维生素、小分子抗氧化物质，从而该类营养物质能很容易被皮肤吸收而不会造成皮肤的负担，起到美白淡斑的效果；
枯草芽孢杆菌、瑞士乳杆菌和乳酸菌等益生菌在含有本发明制得的营养液的培养基中具有很好的体外增殖促进作用，能够分解产生大量的小分子美白保湿营养物质，如容易吸收的氨基酸、小分子化合物、寡糖、小分子肽，促进皮肤吸收，从而恢复皮肤弹性，降低皮肤光损伤造成的敏感、细胞破坏，恢复细胞活力，促进皮肤健康，减少黑色素的生成和沉积；
本发明通过大量的研究发现，选择特定的菌株组合复配后，对营养料进行发酵后可以显著提升其美容功效，经过长期的研究，发现一种来源于纯天然植物，通过益生菌复合剂发酵后可以起到非常显著的美白祛斑、补水保湿效果，其祛斑脱色效果极佳，尤其是对黄褐斑和顽固性色素沉着效果十分显著。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
枯草芽孢杆菌，购于西安韵禾生物科技有限公司、瑞士乳杆菌，含量大于99％，购于常州凯乔生物科技有限公司，乳酸菌，购于山东菌乐科技有限公司；
葡萄籽提取物cas号84929-27-1，购于上海研生实业有限公司。
实施例1益生菌发酵液
s1.菌种活化：将枯草芽孢杆菌、瑞士乳杆菌及乳酸菌菌种的甘油冻存管置于室温，融化后用无菌接种环挑取菌种分别划线接种于营养琼脂培养基、无菌的mrs肉汤培养基和莫匹罗星锂盐mrs琼脂培养基，在35℃倒置培养20h，然后将其转接至相应液体培养基(分别为营养琼脂培养基、无菌的mrs肉汤培养基和莫匹罗星锂盐mrs琼脂培养基中不含固体琼脂的液体培养基)，，适宜条件下培养20h后备用；
s2.营养料的制备：将100g糙米洗净，浸泡在500ml无菌水中1h，向该水中加入10g玉米蛋白和5g豌豆蛋白，搅拌溶解，再加入1g葡萄籽提取物混合均匀后，得到营养料；
s3.发酵培养基的制备：按照每100ml培养基中含营养料5g、豆粕1g、玉米1g、麸皮2g进行混合，余量为无菌水，用氨水调节ph值为8，制得发酵培养基；
s4.益生菌发酵液的制备：将步骤s1得到的枯草芽孢杆菌、瑞士乳杆菌菌种及乳酸菌菌种混合培养与步骤s3中的发酵培养基中，接种量分别为1.5％、0.1％、0.1％，控制发酵温度在35℃，湿度在50％，置恒温摇床转速100r/min培养24h后，取出，压榨培养基，过滤，滤液为益生菌发酵液。
实施例2益生菌发酵液
s1.菌种活化：将枯草芽孢杆菌、瑞士乳杆菌及乳酸菌菌种的甘油冻存管置于室温，融化后用无菌接种环挑取菌种分别划线接种于营养琼脂培养基、无菌的mrs肉汤培养基和莫匹罗星锂盐mrs琼脂培养基，在37℃倒置培养24h，然后将其转接至相应液体培养基(分别为营养琼脂培养基、无菌的mrs肉汤培养基和莫匹罗星锂盐mrs琼脂培养基中不含固体琼脂的液体培养基)，适宜条件下培养24h后备用；
s2.营养料的制备：将100g糙米洗净，浸泡在500ml无菌水中3h，向该水中加入20g玉米蛋白和25g豌豆蛋白，搅拌溶解，再加入10g葡萄籽提取物混合均匀后，得到营养料；
s3.发酵培养基的制备：按照每100ml培养基中含营养料10g、豆粕3g、玉米3g、麸皮4g，余量为无菌水，进行混合，用氨水调节ph值为8，制得发酵培养基；
s4.益生菌发酵液的制备：将步骤s1得到的枯草芽孢杆菌、瑞士乳杆菌菌种及乳酸菌菌种混合培养与步骤s3中的发酵培养基中，接种量分别为2.5％、2％、1％，控制发酵温度在37℃，湿度在70％，置恒温摇床转速120r/min培养48h后，取出，压榨培养基，过滤，滤液为益生菌发酵液。
对比例1益生菌发酵液
与实施例2相比，发酵培养基中没有添加营养料，由豆粕替代，其他条件不变。
s3.发酵培养基的制备：按照每100ml培养基中含豆粕13g、玉米3g、麸皮4g进行混合，用氨水调节ph值为8，制得发酵培养基。
对比例2益生菌发酵液
与实施例2相比，营养料中没有添加豌豆蛋白，其他条件不变。
s2.营养料的制备：将100g糙米洗净，浸泡在无菌水中3h，向水中加入45g玉米蛋白，搅拌溶解，再加入10g葡萄籽提取物混合均匀后，得到营养料。
对比例3益生菌发酵液
与实施例2相比，营养料中没有添加玉米蛋白，其他条件不变。
s2.营养料的制备：将100g糙米洗净，浸泡在无菌水中3h，向水中加入45g豌豆蛋白，搅拌溶解，再加入10g葡萄籽提取物混合均匀后，得到营养料。
实施例3含益生菌发酵液的美白护肤液
原料组成(质量百分比)：实施例1制得的益生菌发酵液0.5％、蚕丝蛋白粉0.5％、皂角粉0.1％、珍珠粉0.5％、乳木果油0.1％、烟酰胺0.01％、edta-二钠0.5％、甘油2％、卡波姆0.1％、三癸酯0.01％、2，4-二羟基二苯甲酮0.01％、角鲨烷0.5％、茶树精油0.1％、丁二醇1％、燕麦β-葡聚糖0.1％、透明质酸钠0.01％、去离子水余量。
制备方法：
s1.将三癸酯、2，4-二羟基二苯甲酮、蚕丝蛋白粉、皂角粉、珍珠粉混合均匀，得到物料一；
s2.将权利要求4所述益生菌发酵液、edta二钠、茶树精油、角鲨烷、燕麦β-葡聚糖、透明质酸钠、乳木果油、烟酰胺加入去离子水中，加入卡波姆和步骤s1得到的物料一，加热至35℃，加入甘油、丁二醇，超声混合均匀后，10000r/min均质1min，得到含益生菌发酵液的美白护肤液。
实施例4含益生菌发酵液的美白护肤液
原料组成(质量百分比)：实施例1制得的益生菌发酵液2.5％、蚕丝蛋白粉1.5％、皂角粉0.5％、珍珠粉2％、乳木果油1％、烟酰胺0.1％、edta-二钠4％、甘油5％、卡波姆1％、二苯胺0.5％、2-(2'-羟基-3'，5'-二叔苯基)-5-氯化苯并三唑0.1％、角鲨烷1.5％、茶树精油0.5％、丁二醇4％、燕麦β-葡聚糖0.5％、透明质酸钠0.2％、去离子水余量。
制备方法：
s1.将二苯胺、2-(2'-羟基-3'，5'-二叔苯基)-5-氯化苯并三唑、蚕丝蛋白粉、皂角粉、珍珠粉混合均匀，得到物料一；
s2.将权利要求4所述益生菌发酵液、edta二钠、茶树精油、角鲨烷、燕麦β-葡聚糖、透明质酸钠、乳木果油、烟酰胺加入去离子水中，加入卡波姆和步骤s1得到的物料一，加热至45℃，加入甘油、丁二醇，超声混合均匀后，12000r/min均质3min，得到含益生菌发酵液的美白护肤液。
实施例5含益生菌发酵液的美白护肤液
与实施例4相比，原料配方不同。
原料组成(质量百分比)：实施例2制得的益生菌发酵液0.7％、蚕丝蛋白粉0.7％、皂角粉0.2％、珍珠粉0.7％、乳木果油0.2％、烟酰胺0.02％、edta-二钠1％、甘油2.5％、卡波姆0.2％、双(3，5-三级丁基-4-羟基苯基)硫醚0.1％、4-苯甲酰氧基-2，2，6，6-四甲基哌啶0.02％、角鲨烷0.7％、茶树精油0.2％、丁二醇2％、燕麦β-葡聚糖0.2％、透明质酸钠0.05％、去离子水余量。
实施例6含益生菌发酵液的美白护肤液
与实施例4相比，原料配方不同。
原料组成(质量百分比)：实施例2制得的益生菌发酵液2％、蚕丝蛋白粉1.2％、皂角粉0.4％、珍珠粉1.5％、乳木果油0.7％、烟酰胺0.08％、edta-二钠3％、甘油4.5％、卡波姆0.8％、对苯二胺0.4％、六甲基磷酰三胺0.08％、角鲨烷1.2％、茶树精油0.4％、丁二醇3％、燕麦β-葡聚糖0.4％、透明质酸钠0.15％、去离子水余量。
对比例4含益生菌发酵液的美白护肤液
与实施例6相比，益生菌发酵液由对比例1制备，其他条件一致。
对比例5含益生菌发酵液的美白护肤液
与实施例6相比，益生菌发酵液由对比例2制备，其他条件一致。
对比例6含益生菌发酵液的美白护肤液
与实施例6相比，益生菌发酵液由对比例3制备，其他条件一致。
测试例1益生菌发酵液的营养成分测定
将本发明实施例1、2以及对比例1-3制得的益生菌发酵液进行营养成分测定，结果见表1。
表1
由表1可知，经枯草芽孢杆菌、瑞士乳杆菌及乳酸菌菌种混合发酵制备的益生菌发酵液含有菌株代谢产生的多种活性成分。其中超氧化物歧化酶具有抗氧化的作用，可以有效防止皮肤衰老，祛斑，抗皱；透明质酸可以改善皮肤营养代谢，使皮肤柔嫩、光滑、去皱、增加弹性、防止衰老，在保湿的同时又是良好的透皮吸收促进剂；苯乳酸是乳酸菌产生的一种天然抑菌物质，对人和动物细胞无毒，抑菌谱宽、稳定性高，对多种致病细菌腐真菌具有抑制作用；胞外多糖具有保湿、抗氧化、增强免疫、修复皮肤组织、促进皮肤血液循环、抗痤疮等作用；多肽具有促进细胞分裂分化，促进表皮愈合等作用。
测试例2细胞毒性测试：
实验分组：实施例3-6和对比例4-6过滤后的发酵组合物溶于无血清dmem培养液中，以无血清dmem培养液为阴性对照样组，每个样品设置3个重复。
mtt检测：将生长良好的l929细胞调整浓度为1×105个/ml，按照100μl/孔接种至96孔板，在37℃，5％co2环境中，无血清dmem培养液培养24h。贴壁生长后，吸弃有培养液，按照实验分组方案每孔加入100μl不同质量分数的样品溶液，阴性对照样组继续无血清dmem培养，常规培养48h。向细胞培养板中每孔加入5mg/mlmtt溶液20μl，置培养箱内避光孵育4h。吸弃上清，每孔加入dmso100μl。细胞培养板用铝箔纸包裹，置于摇床低速振荡20min，在570nm波长处测定吸光度。按下式计算其他各组细胞相对存活率(β)。结果如表2所示。
β＝an/a0
式中，an为实验组吸光度，a0为阴性对照组吸光度。
表2不同组别中细胞存活率的影响
根据iso10993-5:2009所述的毒性分级评价方法，细胞存活率大于70％，可视为无毒性。
测试例3dpph自由基的清除作用试验：
设置5组，分别为阳性对照组(vc组)，实施例3-6组、对比例4-6组。选用维生素c作为阳性对照组用药，无水乙醇为溶剂，将维生素c配成待测溶液(浓度为80μg/ml)。同样按此方法，将实施例3-6和对比例4-6所得到的发酵组合物，按照重量来配置出不同浓度的实验组溶液(浓度为80μg/ml)。
新鲜配制200umol/ldpph乙醇溶液。将待检测溶液(1ml)+dpph乙醇溶液(5ml)混匀，在37℃避光孵育30min后在517nm处测吸光度(a1)；将待检测溶液(1ml)+无水乙醇(5ml)混匀，在37℃避光孵育30min测吸光度(a2)；空白对照组为无水乙醇(1ml)+dpph乙醇溶液(5ml)，在37℃避光孵育30min测吸光度记为a0。按下式计算样品对dpph自由基的相对清除率(γ)，清除率越大表示抗氧化能力越强。每个受试物设置5个平行重复。结果如表3所示。
统计学处理：使用spss16.0，进行统计学分析，计量资料的结果表示为均值±标准差，采用组间t检验。
表3各组对dpph自由基的相对清除率
注：*：p<0.05(与阳性实验组比较)。
可见，实施例3-6和使用vc的阳性实验组相比较，其对dpph自由基的相对清除率更高，有统计学差异(p＜0.05)；而采用对比例1-3制得的益生菌发酵液的对比例，和阳性组以及实施例组比较，对dpph自由基的相对清除率显著下降，清除自由基的效果都要差。说明添加营养料或者单独添加玉米蛋白或豌豆蛋白制得的营养料对3种菌种之间相互作用产生的发酵菌液的成分影响很大，没有添加营养料的菌液清除自由基的效果最差，单独添加玉米蛋白或豌豆蛋白制得的营养料清除自由基的效果也不佳，同时可见，玉米蛋白和豌豆蛋白的添加，对于菌液的清除自由基效果，还具有协同增效的作用。
测试例4体外抑制酪氨酸酶实验
溶液配制：配制包含0.025mol/lna2hpo4和0.02mol/lkh2po4的pbs溶液(ph＝6.8)；用pbs配制1mg/ml的酪氨酸溶液和200u/ml的酪氨酸酶溶液。
将实施例3-6、对比例4-6做为处理组，维生素c乙基醚溶液为阳性对照组。pbs配制维生素c乙基醚溶液，质量分数分别为0.50％；pbs配制实施例3-6组、对比例4-6组溶液，质量分数分别为0.50％。
酶活检测：使用微量移液器分别按照表3移取a、b、c、d四组样液置于1.5mlep管(配制反应体系为1000ul)，35℃水浴10min；加入酪氨酸酶溶液200ul，35℃水浴30min，各反应管分别取150ul加入96孔板，酶标仪测定475nm吸光度a值。每组重复试验3次。
表4各组反应液的组成
注：a组：无底物，不含抑制剂；b组：有底物，不含抑制剂；c组：无底物，含抑制剂；d组：有底物，含络氨酸酶抑制剂。
计算各处理组的酪氨酸酶抑制率(i)，i＝[1-(ad-ac)/(ab-aa)]*100％。试验结果如表5所示。
统计学处理：使用spss16.0，进行统计学分析，计量资料的结果表示为均值±标准差，采用组间t检验。
表5
注：*：p<0.05(与阳性实验组比较)
从表5可见，随着浓度的增加，酪氨酸酶抑制率均逐渐升高。在相同浓度下，实施例4-6组和阳性对照组比较，有统计学差异(p＜0.05)，其中实施例6组的酪氨酸酶抑制率最好。对比例4-6组和阳性对照组比较，其酪氨酸酶抑制率低；说明添加营养料或者单独添加玉米蛋白或豌豆蛋白制得的营养料对3种菌种之间相互作用产生的发酵菌液的成分影响很大，没有添加营养料的菌液抑制酪氨酸酶的效果最差，单独添加玉米蛋白或豌豆蛋白制得的营养料抑制酪氨酸酶的效果也不佳，同时可见，玉米蛋白和豌豆蛋白的添加，对于菌液的抑制酪氨酸酶，还具有协同增效的作用。
与现有技术相比，益生元是通过选择性的刺激一种或几种细菌的生长与活性，从而提高益生菌的生物活性，得到更多更高含量的营养物质，本发明在制备具有抗氧化的葡萄籽提取物、含有美白成分的糙米和玉米蛋白、豌豆蛋白加入营养料中，经过3中益生菌的发酵培养，将玉米蛋白、豌豆蛋白、糙米分解为玉米低聚肽、豌豆低聚肽、氨基酸等美白营养物质，将葡萄籽提取物分解为小分子维生素、小分子抗氧化物质，从而该类营养物质能很容易被皮肤吸收而不会造成皮肤的负担，起到美白淡斑的效果；
枯草芽孢杆菌、瑞士乳杆菌和乳酸菌等益生菌在含有本发明制得的营养液的培养基中具有很好的体外增殖促进作用，能够分解产生大量的小分子美白保湿营养物质，如容易吸收的氨基酸、小分子化合物、寡糖、小分子肽，促进皮肤吸收，从而恢复皮肤弹性，降低皮肤光损伤造成的敏感、细胞破坏，恢复细胞活力，促进皮肤健康，减少黑色素的生成和沉积；
本发明通过大量的研究发现，选择特定的菌株组合复配后，对营养料进行发酵后可以显著提升其美容功效，经过长期的研究，发现一种来源于纯天然植物，通过益生菌复合剂发酵后可以起到非常显著的美白祛斑、补水保湿效果，其祛斑脱色效果极佳，尤其是对黄褐斑和顽固性色素沉着效果十分显著。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。