专利名称：抗栓降脂含片及其生产方法
技术领域：
本发明属于具有生物活性物质提取、精制及剂型制备方法。
肝素(Heparinum)是一种具有相同糖重复单位和功能基团的不同链长和分子量的一族化合物，广泛存在于哺乳动物体内各脏器组织中，如肠粘膜、十二指肠、肺、肝、心、胰、胎盘及血液中。本世纪初已从动物脏器中分离出这一物质并证明其具有抗凝血活性，多年的研究和应用证明肝素具有抗凝血、血脂净化、减少血糖等作用、因而对由于血液变稠、栓塞形成等原因而形成的心血管疾病有预防和治疗作用。最新研究表明肝素对恶性肿瘤的生长和转移有影响，可减少或防止癌细胞发展为癌灶或转移灶，特别是减少肺和肝的癌转移。肝素还在利尿而降低水肿、中和蛇毒、降低高血压、帮助治疗烧伤以及预防动脉硬化等方面有着一定的疗效，并在肝病、肾病等方面的治疗开发更多的用途。对肝素的提取国内外进行过许多研究并取得较好的效果，这些提取方法归纳起来有如下几种(1)盐解-季胺盐络合;(2)盐解-离子交换;(3)酶解-离子交换;(4)酶解-季胺盐络合。其共同原理是用无机盐或酶将动物脏器中的肝素和蛋白质拆开，然后用离子交换树脂交换回收或用季胺盐络合沉淀，最后洗脱或溶解用醇再沉淀而制得粗品。例如USP 3058884用硫酸钠盐解，用混合季胺盐络合沉淀，用乙醇沉淀粗肝素。而USP 3337409用氯化胺、氯化钠提取动物组织中的肝素，然后用季胺盐阴离子交换树脂沉淀肝素，用氯化钠溶液洗脱和用甲醇沉淀出肝素。如此提取的是粗品肝素，使用上受到限制而需要进一步精制，如USP 3135660用高锰酸钾或溴水氧化而制得脱色成品。由于肝素在消化道里会完成灭活或在体内被肝脏产生的肝素酶灭活而对疾病完全不能有治疗作用，因而口服是无效的。通常是将肝素制成针剂、滴鼻剂、栓剂、软膏等剂型，使用较多的是静脉注射针剂，效果较好。然而临床应用中曾发现在注射后15～30分钟患者血液中药量浓度急剧增加，易造成流血不止，严重者甚至造成死亡。由于肝素是由六糖或八糖重复单位组成的线形大分子(Silva ME J.Biolchem.2506841，1975)，研究发现分子量至少为7000的肝素组分才有明显的抗凝活性(McDuffie NM，etal，BioPolymers，14(7)1473，1975)，而不是所有的肝素都具有抗凝活性，如何提取和精制最有效的肝素和制取能满足最合理的给药途径的肝素剂型是实际生产和应用尚未解决的问题。
本发明的目的是研究出一种简易可行的有效肝素精制的方法，并创制一种新的肝素剂型-舌下含片，药物不经消化系统和肝脏而通过口腔粘膜吸收进入血液达到治疗疾病的目的。
本发明是以动物脏器粘膜用氯化钠提取、离子交换树脂交换、洗脱和乙醇沉淀而制得的粗肝素为原料，经除酸性蛋白、两步氧化、分级沉淀并干燥而得精品肝素。其方法是将粗肝素溶于15倍2%的氯化钠溶液中，用6M盐酸调PH为3～6，过滤，滤液用5M氢氧化钠调PH为8。将其置入氧化缶中，加入浓度为2～10%的高锰酸盐，其用量为每亿单位肝素用0.1～1.0M，在80℃下氧化1小时。冷却并过滤，滤渣用水洗涤数次，洗涤液与滤液合并，用5M氢氧化钠调PH为10，加2～5%双氧水(浓度为25～32%)，在10～30℃下封闭氧化24小时，继而再加1%双氧水封闭氧化一次，两次氧化必须保证PH为8.0～10.0，最好9.0～9.5氧化后的溶液用6M盐酸调PH为6.0～7.0，过滤，滤液按体积用0.8+(n-1)×0.2倍的95%乙醇沉淀n次，其中n＝2～5次，最好是3次。沉淀温度为0～10℃，时间每次至少12小时。沉淀再用少量水溶解，用四倍量的95%乙醇在10℃以下温度沉淀。沉淀经过滤，干燥，效价为120～180单位，收率为65～75%。
将精制肝素1200，000～1300，000单位，透明质酸酶或粘多糖水解酶15000单位，蔗糖，乳糖以及硬脂酸镁适量制成1000片含片，每片0.1克。以此含片对千余名患者临床应用观察，其对脑血栓形成有效率为88～89.7%，高血脂症有效率78.6～88%，高红细胞聚积症有效率94%，高凝血症有效率为97%，冠心病症状控制率71～86%。含片最大特点是舌下含化经粘膜吸收而直接进入血液循环，具有起效快、药量低、疗程短、无任何副作用，这是目前治疗同类疾病的其它药物无法比拟的。
本发明与现有技术相比具有特点是(1)两种氧化剂分步氧化，对杂质氧化充分，氧化后不留下有害、有色降解物。(2)分级沉淀可提取有效的肝素组分。(3)肝素含片是创制出新的给药途径的剂型，配方独特。
例1将效价为100～120单位/毫克的粗肝素溶解在15倍量的2%氯化钠溶液中，以6M盐酸调PH为3并搅拌均匀，过滤除去酸性蛋白。以5M氢氧化钠调PH为8，置入氧化缶中，加4%高锰酸钾，加量为每亿单位用0.4M。80℃下氧化1小时，冷却过滤，滤渣用少量清水洗两次，洗涤水与滤液合并。在30℃以下用5M氢氧化钠调PH为10，按体积加3%的双氧水(含量30%)此时需保证PH为9.0～9.5，密封氧化24小时。而后再加1%双氧水，同条件下氧化24小时。以6M盐酸调PH为6.2～6.5，过滤，滤液先用0.8倍95%乙醇在5～10℃沉淀12小时，取出沉淀，继而再用1.0、1.2倍95%乙醇沉淀两次。分级沉淀用少量水溶解，再用四倍量的95%乙醇沉淀，沉淀时PH为6.5。沉淀物吸去清液，剩余物用烧结玻璃漏斗减压过滤，用丙酮洗涤两次，并置于60℃下真空干燥即得肝素精品。效价为120～180单位/毫克，收率为70%。
例2取效价为130～140单位/毫克的精品肝素10克，透明质酸酶150000单位，乳糖、蔗糖和硬脂酸酶适量，以常规法制片1000片，每片重0.1克。
权利要求
1.以动物脏器提取的粗肝素为原料，进行氧化提取制得肝素精品的方法，本发明的特征是采用氧化剂进行两步氧化，并用乙醇进行分级沉淀的方法提取精制肝素。氧化剂是高锰酸盐和双氧水。
2.如权利要求1所述，本发明的特征是所述的两步氧化的第一步是用高锰酸钾，使用浓度为2～10%，其用量为每亿单位用0.1～1.0M。，最好为0.4～0.5M。第二步氧化为用25～32%双氧水进行两次氧化首次用量为2～5%，第二次用量为1%。第一步氧化温度为70～90℃，PH为8.0;第二步氧化温度为10～30℃，PH为8.0～10.0，氧化最好在封闭容器中进行。
3.如权利要求1所述，本发明的特征是所述的分级沉淀是指经过氧化后的肝素滤液按体积用0.8+(n-1)×0.2倍的95%乙醇沉淀n次，其中n＝2～5，最好为3。沉淀时温度为0～10℃，PH为6.0～7.0，时间12小时以上。分级沉淀用少量水溶解再用四倍量的95%乙醇再次沉淀。
4.以肝素为主配以辅料制成实用剂型的方法，本发明的特征是按常规方法制成舌下含片的配方为肝素 1200000～1300000单位透明质酸酶或粘多糖水解酶 150000单位蔗糖、乳糖、硬脂酸镁 适量制成一千片，每片0.1克。肝素的效价为120～180单位/毫克，最好是130～140单位/毫克。
全文摘要
以动物脏器粘膜采用无机盐提取、离子交换，乙醇沉淀法制得粗肝素，用高锰酸钾、双氧水两步氧化，又用乙醇分级沉淀而制得精制肝素。用透明质酸酶配伍而制得抗栓灵舌下含片。
文档编号A61K35/37GK1053361SQ9010030
公开日1991年7月31日 申请日期1990年1月17日 优先权日1990年1月17日
发明者王成忠 申请人:大连生物化学制药厂