专利名称：8-氯腺苷抗肿瘤的应用的制作方法
技术领域：
本发明属于已知化合物新医疗用途专利范围。
背景技术：
我们在研究已知化合物8-氯腺苷-3′5′环磷酸三脂(8-Cl-cAMP)(Free，C.A.and Paik，V.S.Endocrinology，100∶1287-1293，1977)的抗癌作用中证实，8-Cl-cAMP的酶解产物8-氯腺苷亦具有明显的抗肿瘤活性且优于8-Cl-cAMP，我们在中国首先合成了8-氯腺苷，并且首先采用体内和体外医学药理学方法，系统地研究了8-氯腺苷的抗肿瘤活性，证明了我们合成的8-氯腺苷对人的白血病细胞HL-60和K562细胞系，小鼠白血病L1210细胞(腹水型)，人胃癌MGc80-3细胞和小鼠肝癌实体瘤H22等多种恶性肿瘤的治疗效果均达到中国卫生部新药审批法规的要求，证明了8-氯腺苷作为Ⅰ类抗肿瘤新药的应用价值，经中国专利局查新检索，未发现与本研究新颖性相关的文献。
8-氯腺苷特征如下1.分子式C10H8N5O4Cl2.分子量301.753.结构式
4.合成途径AdenosineNCS8-Cl-Adenosine5.抗肿瘤活性(1)体外实验实验材料细胞株人白血病HL-60，人胃癌MGc80-3培养基RPMI1640培养基，含10-15%小牛血清。
药物及配制8-氯腺苷由北京医科大学药学院天然药物和仿生药物国家重点实验室合成(批号930401)按不同浓度将药物溶于生理盐水，高温(100℃)灭菌或通过0.22μ混和纤维树脂滤膜过滤除菌。
实验方法将细胞悬液按一定浓度(HL-606×104/ml，K5621.5×105/ml，MGc80-31×105/ml)接种于24孔板内，2.0ml/孔。置于CO2培养箱(37℃)培养3h.后按不同浓度加药，于不同时间取材计数，计算细胞生长抑制率和半数抑制浓度(iC50)。
实验结果(表1-3)表1.8-氯腺苷对人白血病细胞HL-60的生长抑制作用药物浓度(μM)生长抑制率%(48h.)6.0683.6632.2581.3480.8320.518iC50＝1.8μM表2.8-氯腺苷对人白血病细胞K562的生长抑制作用药物浓度(μM)生长抑制率%(48h)16.665.510.061.56.056.13.648.02.245.51.342.2iC50＝4.2μM
表3.8-氯腺苷对人胃癌细胞MGc80-3的生长抑制作用药物浓度(μM)生长抑制率%(48h)8.0824.0642.0551.0410.5320.2512iC50＝1.56μM(2)体内实验实验材料瘤株小鼠白血病L1210和小鼠肝癌H22动物DBA/2纯系小鼠(L1210宿主)和昆明种小白鼠(H22宿主)，体重18-22g，♀、♂各半。
药物及配制8-氯腺苷(同前，批号930721)，按不同浓度将药物溶于生理盐水中，高温(100℃)灭菌。
实验方法瘤株接种将L1210细胞(1.5×104/0.2ml/只)接种于DBA/2小鼠腹腔内;H22细胞(3×106/0.2ml/只)接种于昆明种小白鼠右前腋窝皮下。接种后24h，称体重并随机分组，按不同浓度给药(i.p.或i.v.)，1次/日，共7次，H22荷瘤鼠于末次给药次日剥离肿瘤，称瘤重，计算抑瘤率;L1210荷瘤鼠观察小鼠生存期(至60天止)计算生命延长率。
实验结果(表4-5)表4. 8-氯腺苷对小鼠肝癌实体瘤H22的疗效剂量给药途径动物数动物体重(g)瘤重(g)抑制率%P值(mg/kg/日)及次数开始结束开始结束治疗对照100i.p.×7101021.028.70.681.5656.4<0.05i.v.×78819.622.70.421.0861.1<0.0160i.p.×7101020.128.70.811.5648.1<0.01i.v.×78819.424.30.731.0832.4<0.0536i.p.×7101021.029.51.031.5634.0<0.01i.v.×78820.225.50.821.0824.1>0.05EC50＝63.6mg/kg(i.p.)和70.8mg/kg(i.v.)表5.8-氯腺苷对小鼠白血病L1210的序效剂量给药途径动物数平均生命延长率P值(mg/kg/天)及次数生存天数100i.p.×7641.2122.7<0.01i.v.×7640.0119.8<0.0160i.p.×7641.0121.6<0.01i.v.×7623.830.8<0.0136i.p.×7638.0105.4<0.01i.v.×7621.518.1>0.05
6.8-氯腺苷对小鼠的急性毒性实验实验材料动物昆明种小白鼠，体重18-22g，每组10只(♂，♀各半)。
药物及配制同体内实验。
实验方法将不同浓度药物(共设10个剂量组)一次腹腔注射，观察动物急性反应并记录死亡时间和死亡动物数，共观察7天，计算死亡率和半数致死剂量(LD50)。
实验结果(表6)表6. 8-氯腺苷对小鼠的急性毒性及LD50剂量(mg/kg)动物数(只)死亡率%20001010018001010016201010014581095131210801181106510631060957104586110207751010LD50＝1025mg/kg
表7. 8-氯腺苷与已知有效抗肿瘤化疗药的LD50比较药物 LD50(mg/kg) 资料来源8-氯腺苷1025.0本资料MTX13.3中国科学院5-Fu92.6上海药物研CYT540.0究所TSPA23.3"A-13015.0"PCB430.0"BUS27.1"亚硝脲氮芥31.6"COLC2.02"VLB3.6"VCR2.21"CPT59.0"DACT0.703"MC10.38"7.8-氯腺苷与8-Cl-cAMP抗肿瘤活性比较实验材料细胞人白血病HL-60药物8-氯腺苷和8-Cl-cAMP均为北京医科大学药学院天然药物和仿生药物国家重点实验室合成(批号930401)。
培养基RPMI1640，含15%小牛血清。
实验方法细胞常规接种后分别加入相同浓度的8-氯腺苷和8-Cl-cAMP，逐日取材计算细胞数和细胞生长抑制率。
实验结果药物细胞生长抑制率%8-氯腺苷(10μM)76.
8-Cl-cAMP(10μM)57.5
结果表明，8-氯腺苷比相同浓度的8-Cl-cAMP对白血病HL-60细胞抑制率大33.4%。
从以上药效学和毒理学实验结果说明，8-氯腺苷对多种肿瘤有较好疗效，其抗瘤谱广，抗肿瘤活性高于8-ClcAMP，并且毒性远低于很多用于临床的化疗药。
本发明实施方法8-氯腺苷可与相应药用载体结合制备成各种剂型用于肿瘤治疗。其实施例子如下表剂型规格辅料给药途径备注注射剂250mg注射用水或肌内注射,包括粉针剂及-1000mg其他溶媒静脉注射或滴注,溶液注射剂及局部注射片剂100mg,药用淀粉或内服包括糖衣片,250mg,其他辅料薄膜衣片等。
500mg.
胶囊剂100mg,药用胶囊内服包括普通胶囊250mg,及微型胶囊500mg.
糖浆及50mg/ml糖浆,纯水内服包括其他口服溶液剂液栓剂100mg,脂肪性,水溶肛门包括阴道栓250mg,性及亲水性500mg/基质3g
权利要求
1.用结构式如下的8-氯腺苷制备抗肿瘤药物
2.根据权利要求1.的方法，其中所述药物剂型是注射剂(包括粉针剂及溶液注射剂)、片剂(包括糖衣片、薄膜衣片等)、胶囊剂(包括普通胶囊及微型胶囊)、糖浆及其他口服液、栓剂(包括肛门栓及阴道栓)等各种剂型。
全文摘要
8-氯腺苷结构式如下我们首先采用体内外医学药理学实验方法证明了8-氯腺苷对多种人和哺乳动物恶性肿瘤有生长抑制或宿主生命延长的治疗作用，其抗肿瘤活性大于8-Cl-cAMP，毒性远低于已知化疗药，可制成多种药用剂型(注射剂、片剂、胶囊剂、糖浆及其他口服液、栓剂等)用于肿瘤治疗。
文档编号A61K31/70GK1088094SQ9311870
公开日1994年6月22日 申请日期1993年10月15日 优先权日1993年10月15日
发明者方家椿, 张礼和 申请人:北京市肿瘤防治研究所, 北京医科大学