专利名称：骨诱导素的制作方法
技术领域：
本发明是属于骨科和口腔科临床应用的一种生物材料，能替代自身植骨和促进骨后生长。
现有的制备方法一般是这样的取兔、鼠和狗等四肢长骨，去掉软组织和骨髓，分别依次放入氯仿、甲醇混合液中脱脂1小时，0.6N HCl脱钙24h，2M CaCl2浸泡1小时和0.5M EDTA浸泡1小时，然后用8M LiCl处理1小时，再在55℃水浴中1小时，所得产物称为骨基质明胶。上述制备方法的缺点在于(1)因各种试剂处理的时间短，不能充分去除脂肪和非胶原性蛋白，加上缺乏免疫抑制剂的处理，故不能明显降低最终产物“骨基质明胶”的抗原性，因而只能用于实验动物，而禁忌用于临床；(2)不能用于猪、牛等大动物骨的脱钙，而为了工业化批量生产，这是必不可少的；(3)8M LiCl使骨胶原纤维收缩剧烈，而且浓度太高，成本昂贵；(4)缺乏一套适合于工业化生产的规范的操作流程，也无规范的样品剂型、包装和消毒；(5)没有将骨干和骨骺分开进行处理(一般是不要骨骺)，这样不仅损失了一半的骨源，使成本上升，而且骨骺制成粒状后疗效较骨干更佳；(6)在制备程序上，本法是先将骨制备成条型和粒型后，再进一步脱指和非胶原蛋白的提取，这样由于面积扩大了，提取的效率也大大提高，而现有的方法缺乏先成型后制备的步骤。
本发明的目的是利用我国价廉易得的猪骨，制备一种能用于我国骨科和口腔科临床，明显促进折逾合和替代自身植骨的生物材料-骨诱导素。
本发明是这样实现的取新鲜后杀的猪四肢长骨，去除所有的软组织和骨膜，水洗后，在干骺端部位锯断，将骨干和骨骺分开。骨骺据成约0.5cm厚薄片状，将骨干内的内髓去除，并将其锯成约3-4cm长，用水彻底净残存血液。将骨干和骨骺分别浸泡入1∶1氯仿甲醇液中，体积比1∶3，共浸泡2-3天，每24小时换液一次。去除氯仿甲醇，用水将骨洗净，然后加入0.6N盐酸脱钙，体积比1∶3，每24-48小时换液，直至所有骨变软，时间约10-20天。去除HCl，充分洗去残存酸液后，骨干部分成型为1×1×40mm8颗粒状，再分别用1∶1氯仿、甲醇液浸泡2天，每24小时换液直至液体呈白色，无分层。去除氯仿、甲醇液后充分水洗，使其挥发干燥。分别加入2M氯化钙，体积比为1∶3，共48小时，每24小时换液。倾去氯化钙，流水充分冲洗后，加入饱和EDTA-Na2液，体积比1∶3，48小时，每24小时换液。去除EDTA-NA2液并用流水洗水残液后，加入4M氯化锂，体积比1∶2，共48小时，每24小时换液。倾去氯化锂液，用蒸馏水反复漂洗去除残存液体，然后冷冻干燥，用环氧乙烷消毒，安讯分装，存放于-18℃待用。
本发明的骨诱导素是利用牛骨、猪骨等动物的大块骨头制作的，充分去除抗原性成份，具有免疫抑制剂处理，能制作人体的骨头。
实施例将牛骨的四肢长骨去除所有软组织、骨膜和骨髓，用水洗干净，在干骺部分锯断，将骨干和骨骺分开，骨骺部分锯成3×2×2cm骨块，骨干锯成4×2×2cm骨块，骨干和骨骺分别浸泡在1∶1的氯仿和甲醇溶液中，体积比为1∶3，共浸泡2天，每天换液一次，去除氯仿、甲醇溶液，用水洗净，加入0.6N盐酸进行脱钙至变软，时间为15天，每天将变软的骨块取出，去除氯化氢，水洗，骨干部分成型为1×1×40mm3条状，骨骺部分成型为2×2×2mm3颗粒状，再分别用1∶1氯仿、甲醇浸泡2天，每天换液一次，滤去氯仿、甲醇，进行水洗，挥发干燥，分别加入2M氯化钙，进行2天浸泡，体积比为1∶3，每天换液一次，去除氯化钙后水洗，然后加入饱和EDTA-Na2，体积比为1∶3，浸泡2天，每天换液一次，去除EDTA-Na2溶液，进行水洗，加入4M氯化锂，体积比为1∶3，浸泡2天，每天换液，滤去氯化锂，用蒸馏水，漂洗，洗去残存液体，进行冷冻干燥，用环氯乙烷消毒后释放1天，存放在-18℃里。
权利要求
1.一种骨诱导素，其特征在于将骨干和骨骺分开，骨骺锯成薄片状，骨干锯成长条状，将骨干内的骨髓去除，清洗，然后将骨干和骺分别浸泡1∶1氯仿甲醇液中，共浸泡2-3天，每24小时换液一次，过滤，清洗，然后加入0.6N盐酸脱钙，时间为10-20，每24小时换液，过滤清洗；将骨干成型为条状，骨骺为颗粒状，再分别用1∶1氯仿、甲醇液浸泡2天，每24小时换液，过滤，水洗，干燥，再加入到2M氯化钙里，浸泡2天，每天换液一次，过滤、水洗，加入饱和EDTA-Na2溶液2天，每天换液一次；过滤，水洗，加入4M氯化锂X浸泡2天，然后过滤，用蒸馏水漂先，冷冻干燥，进行消毒而成。
2.根据权利要求，所述的骨诱导素，其特征在于骨干和骨骺与氯仿甲醇溶液的体和比为1∶3。
3.根据权利要求1所述的骨诱导素，其特征在于消毒剂是环氧乙烷。
全文摘要
本发明的骨诱导素，其特征在于将骨头锯成小片，浸汇在1∶1氯仿甲醇液中2天，然后过滤加入到0.6M盐酸进行脱钙10—20天过滤成型，再在1∶1氯仿甲醇液中浸泡2天，再加入到2M氯化钙里浸泡2天，水洗，加入饱和EDTA-Na 本发明的骨诱导素是利用牛、猪等动物的大块骨头制作的，充分去除抗原性成分具有免疫抑制剂处理，能代替人体的骨头。
文档编号A61L27/00GK1101573SQ9311868
公开日1995年4月19日 申请日期1993年10月13日 优先权日1993年10月13日
发明者胡晓波 申请人:胡晓波