一种何首乌防褐化诱导培养基及其配制方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于何首乌组织培养技术，特别涉及一种何首乌防褐化诱导培养基，还涉 及一种何首乌防褐化诱导培养基配置方法。
【背景技术】
[0002] 何首乌，是寥科何首乌属多年生缠绕藤本植物，块根肥厚，长椭圆形，黑褐色，其块 根入药，可安神、养血、活络、消痈，是常见的中药材。
[0003] 目前何首乌快速繁殖多采用组织培养，然而由于外植体上存在伤口，伤口会分泌 大量酚类物质致使何首乌组织褐化死亡，造成大量浪费，影响诱导率。
【发明内容】
[0004] 基于现有技术存在上述问题，本发明提供一种何首乌防褐化诱导培养基，其以MS 培养基为基础培养基，并添加有6-BA(6_苄氨基腺嘌呤）、IBA(吲哚丁酸）、活性炭、蜂蜜、琼 脂粉、蔗糖，该培养基具有抑制何首乌诱导培养时产生的褐化现象，降低褐化率，提高诱导 率的优点。
[0005] -种何首乌防褐化诱导培养基，以MS培养基为基础培养基，并添加有6-BA(6_苄氨 基腺嘌呤）、IBA(吲哚丁酸）、活性炭、蜂蜜、琼脂粉、蔗糖。
[0006] 6-84(6-苄氨基腺嘌呤）的浓度为1-1.511^/1、184(吲哚丁酸）的浓度为0.2-0.8 mg/L，活性炭的浓度为5-15g/L，蜂蜜的浓度为100-200mg/L，琼脂粉的浓度为8~llg/L，蔗 糖的浓度为25~35g/L。
[0007] 6-BA(6-苄氨基腺嘌呤）的浓度为1 ·2-1 ·4mg/L，IBA(吲哚丁酸）的浓度为0·4-0·6 mg/L，活性炭的浓度为9-llg/L，蜂蜜的浓度为140-160mg/L，琼脂粉的浓度为9~10g/L，蔗 糖的浓度为28~32g/L。
[0008] 何首乌防褐化诱导培养基的pH值为6.2~6.6。
[0009] 何首乌防褐化诱导培养基的pH值为6.4。
[0010] 蜂蜜是中华蜜蜂出产的中蜂蜜，中蜂蜜具有抗坏血酸、类黄酮及一些酶等抗氧化 成分，可以抑制褐变，降低褐化率，同时中蜂蜜还具有大量的天然营养物质，可补充培养基 的不足。
[0011] -种何首乌防褐化诱导培养基的配制方法，其包括以下步骤： 步骤S10溶解配制培养基，用蒸馏水溶解MS基础培养基各成分，并添加6-BA(6-苄氨基 腺嘌呤）、IBA(B引噪丁酸）、活性炭、琼脂粉、鹿糖； 步骤S20灭菌，分别将步骤S10配制好的培养基和蜂蜜进行灭菌，放于无菌环境中，备 用； 步骤S30培养基混合，在无菌环境中，待步骤S20灭菌后的培养基冷却到60°C时，添加步 骤S20过滤灭菌的蜂蜜，混匀，冷却至凝固。
[0012] 步骤S10还包括步骤SI 1调节pH值，使用HCL和Κ0Η滴定调节培养基pH值至6.4。
[0013] 步骤S20还包括步骤S21高温灭菌和S22过滤灭菌； S21高温灭菌，将步骤S10配制好的培养基放于高压灭菌锅中，于120~121°C高温灭菌20 ~21分钟，冷却，备用； S22过滤灭菌，在无菌环境中使用无菌水对蜂蜜进行稀释，过滤灭菌，备用。
【具体实施方式】
[0014] 实施例一:配制何首乌防褐化诱导培养基。
[0015]根据表1所示的MS培养基配方以及表2所示的何首乌防褐化诱导培养基配方，配制 本发明所述的何首乌防褐化诱导培养基。
[0016] 用天平称取MS培养基中的各成分以及6-BA(6-苄氨基腺嘌呤）、IBA(吲哚丁酸）、活 性炭、琼脂粉、蔗糖，置于三角瓶中，加入适量蒸馏水，搅拌溶解，并使用HCL或者Κ0Η调节pH 值至6.4，定容至90〇111匕将三角瓶封口，置于高压灭菌锅中，于121°(3灭菌2〇1]1；[11，然后置于超 净工作台中自然冷却，备用。
[0017] 按表2所示的何首乌防褐化诱导培养基配方中的蜂蜜用量，在超净工作台中称取 蜂蜜，使用无菌水稀释，并过滤灭菌，备用。
[0018] 在无菌环境中，待灭菌后的培养基冷却到60°C时，向培养基加入经过滤灭菌的蜂 蜜，混匀，并将培养基分装至组织培养瓶中，晾凉，待其凝固后将组织培养瓶封口，备用。
[0019] 表1 MS培养基的成分及其用量。
[0020] 表2何首乌防褐化诱导培养基的成分及其用量。
[0021] 实施例二:本发明所述的何首乌防褐化诱导培养基的测试 根据表1所示的MS培养基配方以及表3所示的何首乌防褐化诱导培养基配方，参照实施 例一所述的培养基制备方法，分别配制各试验组、对照组的何首乌防褐化诱导培养基。
[0022] 表3何首乌防褐化诱导培养基。
[0023] 选择生长健康，品质优良的何首乌，取其1.5-2.5厘米茎尖，置于超净工作台中，用 质量浓度为75%的酒精浸泡30秒，用无菌水冲洗干净，再用质量浓度为0.1%的氯化汞溶液消 毒5分钟，用无菌水冲洗干净，将茎尖离伤口处0.5厘米部分切除，剩下部分接种于表3所示 各试验组、对照组的培养基中，黑暗培养5天，然后于光暗周期为12h光照/12h黑暗、光照强 度为20001UX、温度为25±2°C的条件下进行培养。培养30天后统计茎尖愈伤组织诱导率和 褐化率，结果如表4所示。
[0024] 表4何首乌防褐化诱导培养基测试结果。
[0025] 由表4的试验结果扣知，米用本友明所述的何苜马防褐化诱导培养基，能对何首乌 诱导组织培养褐化起到一定的抑制作用，能将褐化率降低至7.83%，另外从试验组1与2，、试 验组5与6,试验组7与9对比可以看出蜂蜜对抑制褐化具有明显作用，但用量超过150mg/L后 其抑制褐化的能力没有随着用量的添加而更加明显，所以蜂蜜的用量在150mg/L为最佳。
【主权项】
1. 一种何首乌防褐化诱导培养基，其特征在于，以MS培养基为基础培养基，并添加有6-BA(6-苄氨基腺嘌呤）、IBA(吲哚丁酸）、活性炭、蜂蜜、琼脂粉、蔗糖。2. 根据权利要求1所述的一种何首乌防褐化诱导培养基，其特征在于，6-BA(6-苄氨基 腺嘌呤）的浓度为1-1.511^/1、184(吲哚丁酸）的浓度为0.2-0.8 11^/1，活性炭的浓度为5-15g/L，蜂蜜的浓度为100-200mg/L，琼脂粉的浓度为8~llg/L，蔗糖的浓度为25~35g/L。3. 根据权利要求2所述的一种何首乌防褐化诱导培养基，其特征在于，6-BA(6-苄氨基 腺嘌呤）的浓度为1 · 2-1 · 4mg/L，IBA( B引噪丁酸）的浓度为0 · 4-0 · 6 mg/L，活性炭的浓度为 9-llg/L，蜂蜜的浓度为140-160mg/L，琼脂粉的浓度为9~10g/L，蔗糖的浓度为28~32g/L。4. 根据权利要求1至3的其中之一所述的一种何首乌防褐化诱导培养基，其特征在于， 所述的何首乌防褐化诱导培养基的pH值为6.2~6.6。5. 根据权利要求4的所述的一种何首乌防褐化诱导培养基，其特征在于，所述的何首乌 防褐化诱导培养基的pH值为6.4。6. 根据权利要求1至3的其中之一所述的一种何首乌防褐化诱导培养基，其特征在于， 所述的蜂蜜是中华蜜蜂出产的中蜂蜜。7. -种何首乌防褐化诱导培养基的配制方法，其特征在于，其包括以下步骤： 步骤S10溶解配制培养基，用蒸馏水溶解MS基础培养基各成分，并添加6-BA(6-苄氨基 腺嘌呤）、IBA(B引噪丁酸）、活性炭、琼脂粉、鹿糖； 步骤S20灭菌，分别将步骤S10配制好的培养基和蜂蜜进行灭菌，放于无菌环境中，备 用； 步骤S30培养基混合，在无菌环境中，待步骤S20灭菌后的培养基冷却到60°C时，添加步 骤S20过滤灭菌的蜂蜜，混匀，冷却至凝固。8. 根据权利要求7所述的一种何首乌防褐化诱导培养基的配制方法，其特征在于，所述 的步骤S10还包括步骤SI 1调节pH值，使用HCL和K0H滴定调节培养基pH值至6.4。9. 根据权利要求7所述的一种何首乌防褐化诱导培养基的配制方法，其特征在于，所述 的步骤S20还包括步骤S21高温灭菌和S22过滤灭菌； S21高温灭菌，将步骤S10配制好的培养基放于高压灭菌锅中，于120~121°C高温灭菌20 ~21分钟，冷却，备用； S22过滤灭菌，在无菌环境中对蜂蜜进行稀释，过滤灭菌，备用。
【专利摘要】本发明提供一种何首乌防褐化诱导培养基，属于何首乌组织培养技术领域，该培养基以MS培养基为基础培养基，并添加有6-BA(6-苄氨基腺嘌呤)、IBA（吲哚丁酸）、活性炭、蜂蜜、琼脂粉、蔗糖，该培养基具有抑制何首乌诱导培养时产生的褐化现象，降低褐化率，提高诱导率的优点。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105532464
【申请号】CN201610011324
【发明人】何志铿
【申请人】佛山市金蓝领教育科技有限公司
【公开日】2016年5月4日
【申请日】2016年1月9日