专利名称：：天然产物及相关合成化合物在治疗心血管疾病中的用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及天然产生的酚类化合物及相关合成化合物在治疗或预防心血管疾病中的用途，本发明还涉及新的酚类化合物及其在治疗和预防心血管疾病中的用途。
背景技术：
：在澳大利亚和多数发达国家，心血管疾病是严重的健康问题，并且是主要的死亡因素。已有报道，钙是心血管功能的中枢，即钙离子控制心肌收缩和血管的紧张性。某些药物已经用于增加细胞内的钙，以刺激衰竭的心脏(强心剂)。过去用于充血性心力衰竭的主要药物是从洋地黄中得到的，是植物例如洋地黄中天然产生的。但是，其升高细胞中内钙的作用是间接的，因为它们抑制Na+、K+-ATPase，从而导致细胞内Na+的增加，然后刺激细胞外的钙流入，并继而刺激衰竭的心脏。这些药物并不理想，因为仅在略高于强心治疗浓度的剂量时，它们即是有毒的。近年来还对其它强心剂进行了活性研究，并且仍然需要治疗和预防各种心血管疾病的有效药物。在多数动物细胞中，Ca2+具有多种功能。胞浆间隙中的游离钙离子(Ca2+)浓度在电子和非电子应机细胞中均起着细胞内信使的作用。Ca2+的这种重要作用与细胞收缩和增生有关，特别是与心脏收缩和舒张有关。Ca2+穿过细胞的移动受到各种机制的调节。如果有一种从药理学上控制这些过程的方法，则可以改变细胞内游离Ca2+的含量，从而改变细胞的应答。在相当多的钙储库可以提供胞浆间隙中的Ca2+浓度。两个重要的储库是细胞外储库和细胞内储库，后者也称作肌浆网(SR)储库。细胞外Ca2+的进入，降低其电化学梯度，不仅仅升高细胞内的Ca2+，也引发从SR储库中释放Ca2+。这种现象解释了细胞的快速收缩。细胞内Ca2+的升高通过各种机制得到补偿以从胞浆间隙中除去Ca2+，或者通过由钙离子泵从细胞中挤出Ca2+得到补偿(挤出的Ca2+与Ca2+-ATPase和Ca2+/Na+交换器生物化学上偶合)，或者通过SRCa2+-ATPase将Ca2+反储于SR储库中。这些去除机理是能量依赖过程，利用ATP作为能量来源。本发明人发现，一些天然产生的酚类化合物和相关合成化合物控制血浆膜Ca2+-ATPase过程(下文称作血浆膜Ca2+-ATPase)。预期它们可以改变SRCa2+-ATPase，使该酶与这种血浆膜Ca2+-ATPase类似。所发现的化合物可以抑制血浆膜Ca2+-ATPase，后者可引起细胞内游离Ca2+的含量升高。同时，可以选择一些化合物刺激SRCa2+-ATP-ase，从而增加摄取到细胞内SR储库中的Ca2+，并且使更多的Ca2+可以从SR中释放出来。这些化合物的总体作用是增加心细胞(特别是衰竭的心细胞)的收缩率和收缩力。已有报道，许多非特异性药物抑制血浆膜Ca2+-ATPase。还有报道，多数长链醇、氯化血红素和非氯化血红素铁以及脂肪酸部分抑制红细胞膜的Ca2+-ATPase。已表明，Retinoids具有抗调钙蛋白作用，因此间接作用于Ca2+-泵酶。已发现，倍半萜内酯thapdsig-argin是外骨骼肌肉内浆网的Ca2+-ATPase的特异性抑制剂。本发明的公开一方面，本发明提供了式(I)化合物、其可药用盐或酯在抑制Ca2+-ATPase酶中的用途其中，Ar是芳环系，它含有一个或多个任意取代或不取代的苯基环，该苯基环可以是不与其它环连接或稠合的，也可以是任意地与一个或多个其它任意取代或不取代的苯基环或者与一个或多个5或6元的、任意地被取代或不取代的杂环(其中杂原子是氧)连接或稠合；和其中的环系含有1-4个苯基环，和其中Ar可以通过基团X与另一个Ar连接，其中Ar是独立选择的；其中的X可以是任意地取代或不取代的C1-20亚烷基、C2-20亚烯基或C2-20亚炔基；R是氢；C1-20烷基、C2-20链烯基、C2-20链炔基、C2-20链烷酰基、C2-20链烯酰基、C2-20链炔酰基，它们各自可以被取代或不取代；R1独立地选自氢；任意取代或不取代的C1-12烷基、C2-12链烯基、C2-12链炔基；-COOR′、-NR′R′、卤素、-OR′、-COR′、-CONR′R′、＝O、-SR′、-SO3R′、-SO2NR′R′、-SOR′、SO2R′、-NO2、-CN、苷、甲硅烷基；其中R′独立地为氢；各自任意地被取代或不取代的烷基、链烯基或链炔基；和其中两个基团R1可以连接在一起；其中任意的取代基可以是一个或多个独立地选自下列基团的取代基C1-10烷基、C2-10链烯基、C2-10链炔基；-COOR″、-NR″R″、卤素、-OR″、-COR″、-CONR″R″、-SR″、＝O、-SO3R″、-SO2NR″R″、-SOR″、SO2R″、-NO2、-CN；其中R″独立地为氢、烷基、链烯基或链炔基；n＝1、2或3m＝1、2、3或4。优选式(I)化合物用于抑制血浆膜Ca2+-ATPase。第二方面，本发明提供了式(I)化合物、其可药用盐或酯在治疗或预防心血管疾病中的用途。第三方面，本发明提供了新的式(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)化合物或其可药用的衍生物其中l＝1、2或3r＝7-14，其中l＝18-16，其中l＝2或3R2是(1)2-羟基(2)2-羟基-4′-羟基(3)2-羟基-3-甲基(4)4-羟基-3-甲基(5)2，4-二羟基(6)3，5-二羟基-4-甲基(7)2，6-二羟基-4-甲基(8)2，4-二羟基-3-甲基(9)3-羟基-4-甲基条件是(1)当R2是2-羟基并且1＝1时，r不是7-10，和(2)当1＝3且R2是3，5-二羟基-4-甲基时，n不是14，和(3)当1＝2且R2是2-羟基-3-甲基时，n不是10，和(4)当1＝2且R2是2，4-二羟基时，r不是8-10和13，和(5)当1＝2且R2是4-羟基-3-甲基时，r不是10；其中s＝8-16其中t＝6-15其中p＋q＝12其中p＋q＝12第四方面，本发明提供了制备式(II)化合物的方法，该方法包括(a)如果1＝1且R2是OH，则(i)如下用合适的试剂处理相应的二酸，得到酰二氯(ii)如下用苯酚处理相应的酰二氯(iii)如下重排二酰基(iv)然后还原酰基，得到式(II)化合物；(b)如果1＝2且，R2是OH，则(i)用氯化锌和间苯二酚处理相应的二酸；和(ii)然后还原酰基，得到式(II)化合物；(c)如果1＝2，R2是2-羟基-3-甲基，则进行上述(a)步骤(i)-(iv)，只是在(ii)中用邻甲酚代替苯酚；(d)如果1＝2且R2是3-羟基-4-甲基，则(i)将下式相应的二酮化合物硝化，得到相应的二-3-硝基化合物(ii)还原二-3-硝基化合物得到二-3-氨基化合物，然后(iii)进行重氮化和水解，得到二-3-羟基化合物(iv)然后还原酮基到所需的二-3-羟基化合物；(e)如果1＝3且R2是2，6-二羟基-4-甲基(i)用LDA处理下式化合物得到二价离子，然后(ii)用下式的所需被护链烷醛进行处理得到(iii)脱水、脱羧化，然后还原，得到下式的中间体化合物(iv)氧化，得到(v)然后用步骤(i)的二价阴离子处理，得到(vi)脱水、脱羧化，然后脱保护，并还原，得到所需的产物；(f)如果1＝3且R2是3，5-二羟基-4-甲基，则(i)在四氢呋喃和六甲基磷酰胺(HMPA)中用二异丙基酰胺锂(LDA)处理α-N，N-二甲基氨基-α-氰基-(3，5-二甲氧基-4-甲基)亚苄基，得到阴离子，然后(ii)用α，ω-二溴烷烃处理，得到(iii)与30％草酸水溶液一起回流，得到相应的二酰基化合物(iv)还原酰基(v)然后在乙酸中用溴化氢脱甲基，得到式(II)化合物；(g)如果1＝3，且R2是2，4-二羟基-3-甲基，则(i)进行的(b)中的步骤(i)和(ii)，只是在(i)中用2-甲基间苯酚代替间苯二酚；(h)如果1＝2且R2是4-羟基-3-甲基，则(i)在多磷酸存在下，用邻甲酚处理相应的二酸，得到相应的二酰基化合物(ii)然后还原酰基，得到式(II)化合物。第五方面，本发明提供了制备式(III)化合物的方法，该方法包括(i)用合适的试剂处理相应的二酸，得到酰二氯(ii)用2-萘酚处理相应的酰二氯，然后(iii)重排二酰基，和(iv)然后还原酰基，得到式(III)化合物。第六方面，本发明提供了制备式(IV)化合物的方法，该方法包括在酸催化剂存在下，用乙酰乙酸乙酯处理4-烷基间苯二酚，得到式(IV)化合物。优选的是，Ar是苯基、萘、蒽、并四苯或菲。更优选的是Ar是苯基。所有烷基、链烯基或链炔基的碳链可以是直链或支链的。卤素包括溴、氯、氟或碘。5或6-元杂环可以是饱和的、部分不饱和的或不饱和的。可药用的衍生物包括可药用的醚、酯和酸加成盐。式(II)化合物的制备中，优选通过用亚硫酰氯处理相应的二酸而形成二氯酸。可以试用任何其它适合的试剂。在式(IV)化合物的制备中，优选的催化剂是三氟化硼醚合物或类似物。酰基重排到在苯基环上的所需位置优选使用CS2和AlCl3作为催化剂进行。催化剂一般可以是任何Lewis酸如BF3、ZnCl2、FeBr3等。酰基的还原反应优选使用汞齐化锌和盐酸与任意的乙酸的混合物进行。硝化反应优选按照常规方法，使用硝酸与硫酸(HNO3/H2SO4)进行。硝酸盐还原成胺优选使用氯化亚锡和盐酸(SnCl2/HCl)进行。重氮化优选通过用硫酸/亚硝酸钠水溶液处理进行，水解一般通过用10％硫酸进行。脱水脱羧化作用优选通过使用N-乙氧基羰基-2-乙氧基-1，2-二氢喹啉进行，脱保护通过使用p-TsOH/MeOH进行。另一面，本发明提供了式(I)化合物或其可药用的衍生物以用于制备抑制Ca2+-ATPase、优选血浆膜Ca2+-ATPase用的药物。本发明的再一方面是提供式(I)化合物或其可药用衍生物以用于制备治疗或预防心血管疾病用的药物。本发明的简要说明图1表明合成烷基酚的浓度对血浆膜抑制作用的依赖关系。□2-壬基酚▲3-壬基酚●2-辛基酚○4-辛基酚_2-癸基酚■4-壬基酚_4-癸基酚图2表明合成二(羟基苯基)烷烃的浓度对红细胞浆膜抑制作用的依赖关系。●1，10-二(2-羟基苯基)癸基□1，12-二(2-羟基苯基)十二烷○1，14-二(2-羟基苯基)十四烷▲1-(2-羟基苯基)-10-(4-羟基苯基)癸基_1-(2-羟基苯基)-12-(4-羟基苯基)十二烷△1-(2-羟基苯基)-14-(4-羟基苯基)十四烷■1，10-二(4-羟基苯基)癸基_1，14-二(4-羟基苯基)十四烷图3表明间苯二酚衍生物的浓度对红细胞浆膜抑制作用的依赖关系。□3，5-二溴-2，4-二羟基-6-壬基苯甲酸乙酯●3，5-二溴-2，4-二羟基-6-癸基苯甲酸乙酯△2，4-二羟基-6-壬基苯甲酸乙酯▲2，4-二羟基-6-癸基苯甲酸乙酯图4表明了叔丁酚的浓度对红细胞浆膜抑制作用的依赖关系。●2，3-二叔丁基-4-甲基酚□2，6-二叔丁基酚▲2，4，6-三叔丁基酚图5表明2-壬基酚衍生物的浓度对Ca2+-ATPase抑制作用的依赖关系。●2-壬基酚/○(+CaM)_3-甲基-6-壬基酚/_(+CaM)■4-甲基-6-壬基酚/□(+CaM)●4-硝基-2-壬基酚/○(+CaM)_4-溴-2-硝基-6-壬基酚(+CaM)□2-溴-4-硝基-6-壬基酚(+CaM)▲4-溴-2-壬基酚/△(+CaM)■4-壬基间苯二酚图6表明α，ω-二[2-羟基(3、4和5-甲基)苯基]烷烃的浓度对Ca2+-ATPase抑制作用的依赖关系。●1，8-二(2-羟基苯基)辛烷/○(+CaM)_1，9-二(2-羟基苯基)辛烷/_(+CaM)■1，10-二(2-羟基苯基)癸烷/□(+CaM)▲1，12-二(2-羟基苯基)十二烷/△(+CaM)◆1，10-二(2-羟基-3-甲基苯基)癸烷/◇(+CaM)●1，10-二(2-羟基-4-甲基苯基)癸烷/○(+CaM)■1，10-二(2-羟基-3-甲基苯基)癸烷/□(+CaM)图7表明α，ω-二[2，4-二羟基苯基]烷烃的浓度对Ca2+-ATPase抑制作用的依赖关系。●1，8-二(2，4-二羟基苯基)辛烷/○(+CaM)_1，10-二(2，4-二羟基苯基)辛烷/_(+CaM)■1，11-二(2，4-二羟基苯基)十一烷/□(+CaM)▲1，12-二(2，4-二羟基苯基)十二烷/△(+CaM)图8表明α，ω-二[羟基(甲基)苯基和萘基]癸烷的浓度对Ca2+-ATPase抑制作用的依赖关系。◆1，10-二(3-羟基苯基)癸烷/◇(+CaM)●1，10-二(3-羟基-4-甲苯基)癸烷/○(+CaM)_1，10-二(4-羟基-3-甲苯基)癸烷/_(+CaM)■1，10-二(2-羟基-1-萘基)癸烷/□(+CaM)▲1，1-二(2-羟基苯基)癸烷/△(+CaM)图9表明酚类天然产物的浓度对Ca2+-ATPase抑制作用的依赖关系。5，7，2′，6′-四羟基-8-熏衣草烷基(lavandulyl)黄烷酮5，7，6′-三羟基-8-熏衣草烷基黄烷酮5，2′，6′-三羟基-8-熏衣草烷基-7-甲氧基黄烷酮实施本发明的方式式(I)化合物包括天然产生的化合物和合成制备的相关化合物。式(I)的天然产生化合物的是采用标准文献的技术，从Proteaceae科的地方性澳大利亚植物中提取出来的，例如参见RitchieE，TaylorWC和VautinSTK(1965)，ProteaceaeI的化学研究Aust.J.Chem.，18，2015-2020；RasmussenM等(1968)Proteace-aeIII的化学研究Aust.J.Chem.，21，2989-3000和RidleyDD等(1970)ProteaceaeIV的化学研究Aust.J.Chem.，23，147-183。从Grevillea和Persoonia中提取代链烷基酚。从在澳大利亚，悉尼(Sydney，Australia)收集的Graviilearobusta中提取并分离具有结构式(II)和(III)的新化合物。从Sydney大学的DepartmentofPharmacy的检查部(inspection)得到有保证的样品。简单地说，通过用氯仿/乙醇(1∶1)渗滤3天，提取出2公斤样品。真空浓缩提取物后，使用短硅胶柱对残余物进行真空色谱。其它落入式(I)范围的化合物可以按照文献的方法制备或者可以购买到。合成的原料是可以购买到的或者可以按照文献的方法制备。按照公开的方法制备2-和4-取代的烷基酚和α，ω-二(羟基苯基)烷烃(参见EMillerandWHHartung，Organicsynth-eses(1943)，collectivevolumeII，543-545andRRReadandJWood，Organicsyntheses(1955)，collectivevolumeIII，444-446)。合成分三个阶段连续进行首先，由酸和苯酚形成酯；第二，用AlCl3作催化剂重排酰基，使其位于苯酚环上相对于羟基的2-和4-位；以及第三，用汞齐化锌和盐酸还原酰基。重排是时间依赖反应，并且一般在短时间内得到位于对羟基的4-位的酰基。在每一合成反应阶段，使用短柱真空色谱以从反应混合物中分离和纯化产物。还使用TLC法来鉴定产物以及确定柱色谱所需的洗脱溶剂。每一阶段产物还需通过NMR和CI-MS分析确定其特征。按照另一种方法制备3-取代的苯酚衍生物，该方法描述于ItokawaH，etal(1989)，Aquantitativestructureactivityrelationshipforantitumorlong-chainphenolsfromGinkgobilobaL.Chem.Pharm.Bull.37，1619-1621中d该方法用于制备3-壬基酚，以用于将其与2-和4-取代的异构体进行Ca2+-ATPase抑制活性比较。由此，可以确定酚环上的取代基对于Ca2+-ATPase抑制作用的重要性。采用与上述对烷基酚所述类似的方法制备、分离和纯化联苯酚化合物，不同的是分两个步骤制备酯。其中R2是2-羟基-3-甲基的式(II)化合物按照与二羟基苯基烷类似的方法制备，不同的是按照KKaKemi等在AntioxidantsIIIYakugakuZasshi86[9]，791-796(1966)中所述的方法，使用邻甲酚代替苯酚。按照上述KKakemi等所述的方法，采用与制备α，ω-二-(3-羟基苯基)烷烃类似的方法，制备式(II)的3-羟基-4-甲基化合物，不同的是使用α，ω-二(4-甲基苯基)-α，ω-链烷二酮代替α，ω-联苯基-α，ω-链烷二酮。在氯化锌存在下，通过间苯二酚与相应的二羧酸反应得到中间体链烷二酮，然后将其还原而制备(II)的2，4-二羟基化合物。按照SOhta等在AtotalsynthesisofgrifolinChem.Phar.Bull.36[6]2239-2243(1988)中所述的方法，采用与制备奇果菌至素类似的方法，制备其中R2是2，6-二羟基-4-甲基的式(II)化合物。按照上述SOhta等的方法，得到步骤(e)(i)中的起始化合物。通过用苄基溴(或苄基碘)将式X-CH2-(CH2)r-6CH2-OR(其中R＝H，X＝Cr或Br)的市售化合物烷基化，得到其中R＝CH2Ph的中间体化合物，然后将其水解得到HOCH2(CH)r-6CH2OCH2Ph，然后氧化得到OH(CH2)r-6CH2OCH2Ph而制备步骤(e)(ii)中的醛。按照与上述K.Takahashi等在J.Org.Chem.1983，48，1909-1912中所述类似的方法，制备其中R2是3，5-二羟基-4-甲基的式(II)化合物。按照与上述J.vonBraun等在Ber.(1941)，74B，1772-1783中所述类似的方法，制备其中R2是2，4-二羟基-3-甲基的式(II)化合物，不同的是用2-甲基间苯二酚代替间苯二酚。控制K.Kakemi等在YakugakuZasshi(1966)，86，791-796中的所述的方法，采用与制备α，ω-二(2-羟基苯基)烷烃的类似的方法，制备式(III)化合物。按照SPStarkov，GAGoncharenko和AIPanasenko在Zh.Obshch.Khim(1993)，63(5)，1111-1115中所述的方法，采用与制备6-烷基-7-羟基-4-甲基香豆素类似的方法，制备(IV)化合物。其它式(I)化合物按照下列文献中的方法制备双酚类1，10-二(2-羟基苯基)癸基和1，10-二(3-羟基苯基)癸烷AntioxidantsIII.KKakemi，TArita，RHori，andHTakenakaYakugakuZasshi86(1966)791-7961，10-二(4-羟基苯基)癸烷α，ω-二-p-羟基苯基烷烃EMRichardsonandEEReidJ.Am.Chem.Soc.(1940)62413-415癸二酸与酚类缩合物的Fries转变1，8-二苯甲酰基辛烷JPVarmaandJSAggarwalJ.IndianChem.Soc.(1959)3641-45α，ω-二(对羟基烷烃)的合成YEDoroshenkoandVASergeevZh.OrganKhim.(1965)1(9)1602-16041，12-二(4-羟基苯基)十二烷α，ω-二(对-羟基烷烃)的合成YEDoroshenkoandVASergeevZh.Organ.Khim(1965)1(9)1602-16041，14-二(4-羟基苯基)十四烷HGoldmannetal.J.Am.Chem.Soc.(1988)110(20)6811-68171，10-二(4-羟基-3-甲基苯基)癸烷PSchlackandWKollerGer.1,086,711Aug11，1960.1，1-二(2-羟基苯基)癸烷GCasiraghietal.JCHem.Soc.PerkinTrans1(1982)，3805-808.烷基酚芳族羟基酮的合成。I.具有正C4-C9链的邻和对酰基酚。GSandulescoandAGirardBull.Soc.Chim.Fr(1930)47(4)1300-1314杀真菌活性和化学组成DWoodJ.Chem.Soc.(1955)，4391-4393用1-十二烷和1-癸醇使苯酚烷基化。文献勘误BCampbell，SDonaldetal.Bull.Cnem.Soc.Japan(1990)63(12)3665-3669癸基酚和十二烷基酚环己基酚(邻和对)在三氟化硼存在下用环己烯将苯酚直接烷基化HLejebureandELevasCompt.Rend.(1945)220782-784and826-827HLejebureandELevascompt.Rend.(1945)221301-303α，ω-二(2，4-二羟基)化合物的合成。脂族二羧酸与间苯二酚的反应，JvonBraunetalBer.74B1772-1783(1941)。癸二酸与酚类缩合物的Fries转变1，8-二苯基酰辛烷，JPVarmaetal，J.IndianChem.Soc.3641-45(1959).位于血浆膜上的Ca2+-刺激的、Mg2+-依赖性腺苷三磷酸酶(Ca2+-ATPase)根据其电化学Ca2+梯度排出Ca2+。已有报道，Ca2+-ATPase不仅仅在总的细胞Ca2+浓度调节中起着根本的作用，而且还调节和介导Ca2+移动激素和神经传递质的作用。(参见PripicV，GreenKC，BlackmorePRandExtonJHVasopressin-，angi-otensinII-，andα1-adrenergic-inducedinhibitionofCa2+-transportationbyratliverplasmamembranevesicles，(1984)J.Biol.Chem.259，1382-1385andRegaAF，Gara-hanPJ，(1986)TheCaPumpofPlasmamembranes，CRCPresInc.，Florida.测定天然和合成的式(I)化合物影响人红细胞血浆膜Ca2+-ATP-ase的能力。先前对人红血细胞浆膜中的酶Ca2+-ATPase进行过研究，并且已经公开了通过调钙蛋白的刺激作用和通过类脂的活化作用以及蛋白分解作用和其主要的结构(参见CarafoliE(1991)，血浆膜钙泵，PhysiologicalReviews71，129-153)。式(I)化合物抑制Ca2+-ATPase的活性示于表1中，并且图示于图1、2、3和4。表1天然和合成式(I)化合物的结构和抑制Ca2+-ATPase的IC50值(以100μm的浓度测定抑制％)Ca2+-ATPase的抑制作用化合物来源百分数(％)IC502-辛基酚b100322-壬基酚b95302-壬酰酚b32＞1002-癸基酚b8542壬基酚(市售)a10027.54-辛基酚b28924-叔辛基酚a94603-壬基酚b69644-壬基酚b221144-癸基酚b241702-环己基酚h281864-环己基酚h162711，10-二(2-羟基苯基)b100i7.6-癸烷1，12-二(2-羟基苯基)e100i8.3-十二烷1，14-二(2-烃基苯基)十四烷e8428Ca2+-ATPase的抑制作用化合物来源百分数(％)IC501-(2-羟基苯基)-10-(4-羟基苯基)e100j12-癸基1-(2-羟基苯基)-12-(4-羟基苯基)e9918.8十二烷1-(2-羟基苯基)-14-(4-羟基苯基)e6081-十四烷1，10-二(4-羟基苯基)b5293-癸烷注i-在25μMj-在50μMk-在37μMCa2+-ATPase的抑制作用化合物来源百分数(％)IC501-(3，5-二羟基苯基)-14-(3，5-二羟基-4-c100j17甲基苯基)十四烷(grebustol-A)1，14-二(3，5-二羟基-4-甲基苯基)f9816-十四烷(striatol)striatol-Bf10040norstriatol-Bc61k355-壬基间苯二酚f441081，14-二(4-羟基苯基)b5280-十四烷1，14-二(3，5-二羟基苯基)f35＞100十四烷(bisnorstiatol)1，14-二(3.5-二羟基苯基)c9050十四-Z-6-烯(grebustol-B)Ca2+-ATPase的抑制作用化合物来源百分数(％)IC502，4-二羟基f7362-6-壬基苯甲酸乙酯3，5-二溴2，4-二羟基f9544-6-壬基苯甲酸乙酯)grevillolc441435-癸基间苯三酚f301352，4-二羟基-6-癸基苯甲酸乙酯f60853，5-二溴-2，4-二羟基-6-f7369癸基苯甲酸乙酯2-E，E法呢基-5-甲基间苯二酚d10022.5(奇果菌素)4-E，E法呢基-5-甲基间苯二酚d10023.3(neogrifolin)4-十二烷基间苯二酚a68694-己基间苯二酚a17259Ca2+-ATPase的抑制作用化合物来源百分数(％)IC502，4，6-三-叔丁基酚a79153，5-二叔丁基-儿茶酚a76842，6-二叔丁基a6966-4-甲基酚(BHT)2，6-二-叔丁基酚a61792，6-二叔丁基-a44＞4004-甲氧基酚(BHA)2，2′-亚甲基g7445(4-甲基-6-叔丁基酚)在调用蛋白有(CaM)或没有(-CaM)的情况下，合成的和天然的化合物在抑制Ca2+-ATPase中的活性示于下面表1A，并图示于图5、6、7、8和9。表1A来源化合物IC50(-CaM)(+CaM)b2-壬基酚3640b2-甲基-6-壬基酚--b3-甲基-6-壬基酚5260b4-甲基-6-壬基酚8075b2-溴-6-壬基酚--b4-溴-6-壬基酚5255b2，4-二溴-6-壬基酚--b2-硝基-6-壬基酚--b4-硝基-6-壬基酚8070表1A来源化合物IC50(-CaM)(+CaM)b2-溴-4-硝基-6-壬基酚-70b4-溴-2-硝基-6-壬基酚-65.5b4-壬基间苯二酚125NDa4-十二基间苯二酚80100b2-溴-6-壬基间苯二酚400400b4-6-溴-壬基间苯二酚400400b2，4-二溴-6-壬基间苯二酚--b1，8-二(2-羟基苯基)辛烷2424b1，9-二(2-羟基苯基)壬烷13.514表1A来源化合物IC50(-CaM)(+CaM)b1，10-二(2-羟基苯基)癸烷8.49.0e1，12-二(2-羟基苯基)十二烷12.513b1，10-二(2-羟基-3-甲基苯基)5055-癸烷b1，10-二(2-羟基-4-甲基苯基)2929-癸烷b1，10-二(2-羟基-5-甲基苯基)2220.5-癸烷b1，8-二(2-二羟基苯基)辛烷5048b1，10-二(2，4-二羟基苯基)1016癸烷表1A来源化合物IC50(-CaM)(+CaM)e1，11-二(2，4-二羟基苯基)2521.7十一烷e1，12-二(2，4-二羟基苯基)1220十二烷e1，10-二(2，4-二羟基-3-甲基100100苯基)癸烷b1，10-二(3-羟基苯基)癸烷3032e1，10-二(3-羟基-4-甲基苯基)5148癸烷b1，10-二(4-羟基-3-甲基苯基)10094癸烷b1，1-二(2-羟基苯基)癸烷7468表1A来源化合物IC50(-CaM)(+CaM)e1，10-二(2-羟基-1-萘基)9290癸烷e6-癸基-7-羟基-4-甲基香NANA豆素b2-甲基-5-壬基-间苯二酚NANAi5，7，2′，6′四羟基-8-熏衣20ND草烷基黄烷酮i5，7，，6′三羟基-8-熏衣26.5ND草烷基黄烷酮i5，2′，6′三羟基-8-熏衣45.3ND草烷基-7-甲氧基黄烷酮NA无抑制活性；ND未测来源a＝由Aldrich，Milwaukee，WI，USA出售b＝按文献的方法合成制备c＝从Grevillea中提取d＝由ProfShibata提供的天然产物[MisasaH，MatsueY，VeharaH，TanakaH，IshiharaM，ShibataH，(1992)TyrosinaseinhibitorsfromAlbatrellusconflurns，Biosci.Biotech.Biochem.，561660-1661]e＝本发明的式(II)新化合物f＝由ProfWCTaylor提供的天然和合成物质，参见第9页第25-30行CleaverL，CroftJA，RitchieEandTaylorWC(1976)ChemicalstudiesoftheProteaceaeIXAust.J.Chem.，291980-2001]g＝由Merck，Darmstardt，Germany出售h＝由ProfKanzoSakata，ShizuokaUniversity，ShizuokaJapan提供的合成物质[参见环己基酚(邻和对)第17页i＝由Assoc.Prof.CChaichantipyuth，ChulalongkornUniversi-tyofThailand提供的天然物质(参见RuangrungsiNetal，Photochemistry，31，999-1001，1992andIinumaMetal，Photochemistry，33，203-208，1993。化合物抑制Ca2+-ATPase的能力以其单剂量的抑制％为特征，或者以由剂量应答曲线得到的IC50值为依据。因此，最有效的化合物其曲线位于图的左手侧。由图2可以看出，1，10-二(2-羟基苯基)癸烷和至少1，12-二(2-羟基苯基)癸烷在合成的酚类化合物中具有最强的Ca2+-ATPase抑制作用。其抑制活性是天然产物1，14-二(3，5-二羟基-4-甲基苯基)十四烷(striatol)的2倍高，并且优于2-烷基酚系列。烷基酚中以2-壬基酚的活性为最大(IC50＝30μM)。壬基酚和辛基酚的结果表明烷基酚的效力顺序为2-烷基酚、4-分枝的烷基酚、和4-烷基酚。类似地，在所实验的烷基间苯二酚中，4-十二烷基间苯二酚的效力最强，并且在实验的烷基间苯二酚和链烯基间苯二酚烷中，奇果菌素和新奇果菌素(neogr-ifolin)是最有效的。结果还表明，在酚的2-位取代对于加强Ca2+-ATPase抑制作用的重要性。结果表明在邻位和对位取代的化合物之间，效力有显著的差别，而间位取代的化合物活性居于二者之间。结果还表明合成化合物抑制效力的结构优势，以及二化合物的最佳亚甲基链长度是十。1，10-二(2-羟基苯基)癸烷和1，10-二(2，4-二羟基苯基)癸烷在合成物质中是最有效的血浆Ca2+-ATPase抑制剂。通常，在存在或缺乏调钙蛋白(CaM)时，合成化合物的抑制活性没有明显差别(指表1A)。但是，已经发现，较高浓度的实验化合物对血浆膜Ca2+-ATPase比没有CaM时有略高的抑制作用(指图5、7、8、9)。这说明该化合物可以抑制CaM刺激活性。培养的血管平滑肌细胞中的45Ca流出由两种主要机理组成；一种机理是依赖于细胞外的钠，由Na+-Ca2+交换器介导(Ca2+流出依赖于Na+)，另一种机理是不依赖于细胞外的钠，但是由Ca2+泵介导(Ca2+流出非依赖于Na+)。研究了striatol对培养物中大鼠胸主动脉平滑肌细胞中的钙(45Ca2+)流出的作用。45Ca2+流出是在完整(全)细胞中血浆膜Ca2+-ATPase的量度(加Na+Ca2+交换器)。结果如下20μM5分钟-部分抑制20μM10分钟-部分抑制20μM30分钟-完全抑制式(I)化合物对血浆膜Ca2+-ATPase具有显著的抑制活性，并且通常适用于治疗心血管疾病。由于这些化合物对Ca2+-ATPase酶的总的作用或者对NA+，K+-ATPase酶的作用，因此这些化合物是有用的。特别是，式(I)化合物质适用于治疗或预防慢性心力衰竭、绞痛、高血压或心率失常。因此，另一方面，本发明提供了式(I)化合物或其可药用衍生物在制备治疗或预防心血管疾病用的药物中的用途。用于上述疾病的所需活性化合物的有效量将根据给药途径、所治疗的疾病和进行治疗的主体而变化，并且最终由医生决定。在上述治疗中，活性成分优选以药物制剂的形式存在。本发明的药物制剂含有活性成分和一种或多种可药用载体以及可有可无的其它治疗成分。该制剂可以方便地制成单位剂量形式，并且可以按照常规制药技术制备。因此，该制剂可以包括一种或多种辅助成分，例如稀释剂、缓冲剂、调味剂、粘结剂，崩解剂、表面活性剂、增稠剂、润滑剂和防腐剂等。典型的片剂含有1-50mg活性成分、50-200mg乳糖、7-28mg小麦淀粉和0.25-1mg硬脂酸镁。优选地，该片剂含有1-50mg活性成分、约97mg乳糖，约14mg小麦淀粉和约0.5mg硬脂酸镁。式(I)化合物也可以通过抑制H+，K+-ATPase(胃壁细胞中的质子泵)，用于治疗溃疡(消化溃疡)，或者可以用作脱色素剂、抗糖尿病、抗血栓溶解、抗动脉粥样硬化、抗氧化剂、抗癌、抗炎或抗病毒剂。试验-合成仪器薄层层析板通过使用UVSL-58矿质光灯，多区域UV-254/366nm而目视测定。使用予涂层硅(PrecoatedSi)胶板(Merck，Art5554)。高效液相色谱分析是用带有PC-3800调节器的Beckman110B溶剂组件来进行。检测是用Spectra-PhysicsSpectra100可变波长检测器进行。分析柱是Activonexsil100/10ODS，250×4.6mm内经(反相C18)。制备性短柱为连结有一个一升玻璃钟罩的70×65mm内径的柱。1H-和13C-NMR谱是使用CDCl3作溶溶剂并以四甲基硅烷为参照物，在VarianGemini300和JoelFX90Q(用于银桦醇)分光计上获得。UV谱是在PerKin-ElmerLambda5UV/VIS分光光度计上测量。化学离子和电子冲击质谱是在FinniganTSQ46分光计上完成。所有的化学离子谱都是用甲烷作为试剂体来完成的。材料乙酸乙酯和石油(70-75℃)在使用前蒸馏。亚硫酰氯在75-80℃蒸馏。二氯甲烷、氯仿、甲醇为HPLC级。Merck硅胶60H(Art.7736)用于制备TLC和短柱色谱。3，4，5-三甲氧基苯甲醛，n-丁基锂，十一烷二酸，1，6-二溴己烷，1，8-二溴辛烷，1，10-二溴癸烷，1，12-二溴十二烷，2-甲基间苯二酚，1，10-癸烷二羧酸和1，12-十二烷二羧酸购自ALdrich化学公司。I、合成烷基苯酚1、制备2-和4-辛烷基苯酚1.1、制备苯基辛酸酯通过将亚硫酰氯(10ml)慢慢加入到纯苯酚(6.5g)和辛酸(10g)的混合物中而制备酯。加热反应混合物以除去二氧化硫和氯化氢气体。粗品混合物在95-100℃/5mmHg蒸馏。苯基壬酸酯和苯基癸酸酯同样制备。所得酯在105-110℃和120-125℃/5mmHg分别蒸馏。酯的产率为81-84％。1.2、制备2-和4-辛酰基苯酚将无水氯化铝(7g)和二硫化碳置于装有回流冷凝器、50ml滴液漏斗和强磁力搅拌器的三颈圆底烧瓶中。苯基辛酸酯(10g)通过滴液漏斗慢慢加入到搅拌的悬液中。在所有酯加毕后，混合物再用蒸汽浴加热至轻微回流直至几乎停止产生氯化氢(约1/2Hr)。回流冷凝器转为向下并蒸馏出二硫化碳。蒸汽浴改为油浴，将其加热至140℃并在140-150℃保持一小时。混合物变稠并最终冻凝成为树脂状物质。冷却固体，通过先慢慢加入浓盐酸(6ml)和水(6ml)的混合物再加入水(10ml)将铝的复合物分解。混合物放置过夜，收集表面的大的固体部分(主要是4-辛酰基苯酚)。液体部分用乙酸乙酯萃取。萃取物与固体部分合并，所得混合物用无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发得到粗品混合物。2-和4-辛酰基苯酚产品根据其极性不同通过短柱真空色谱分离。2-辛酰基苯酚产率为29-34％，4-辛酰基苯酚为46-50％。产品再通过NMR和CI-MS分析鉴定(参考表3&4)。通过短柱真空色谱分离产品粗品混合物先溶解于二氯甲烷(一份)然后溶于石油(四份)。所得混合物(25ml)在真空下置于(直径70mm×30mm)的硅胶床上并用石油(40ml)连续洗涤。用于分离产品的洗脱液溶剂混合物为石油溶剂油/乙酸乙酯自9∶1至1∶1(20级分)的梯度溶剂。在UV光下通过TLC检测馏分以确定产品间的分离程度。对馏分#5-10(确定为2-辛酰基苯酚)和#14-20(确定为4-辛酰基苯酚)进行NMR和CI-MS分析。1.3、制备2-和4-辛基苯酚将汞齐化锌(10g)置于100ml装有搅拦器和回流冷凝器的圆底烧瓶中。加入乙酸(10ml)和浓盐酸(10ml)的混合物，然后加入2-辛酰基苯酚(2g)(或4-辛酰基苯酚)的乙酸(5ml)溶液。混合物搅拌并回流2天。加入20％(w/v)的氯化钠水溶液(20ml)，用石油(20ml)提取混合物，石油部分用无水硫酸钠干燥，过滤并通过短柱真空色谱纯化。得到82-84％的产率。所用柱色谱方法按照上述相同的方法。通过NMR和CI-MS分板检定产品(参考表3&4)。注1锌在反应瓶中的通过用氯化汞(0.2g)的水(15ml)溶液淹没并在30分钟内偶尔搅拌而转化成汞齐化的形式。倾去溶液并用水漂洗锌一次。2加入20％(w/v)的氯化钠水溶液以增加水相的离子强度，以便辛基苯酚能被萃取到有机相中。壬基和癸基按照辛基苯酚的描述制备。每个阶段的产品通过NMR和CI-MS分析鉴定(参考表3&4)。2、制备3-壬基苯酚2.1、制备3-苄氧基苯甲醛在100ml圆底烧瓶中装入3-羟基苯甲醛(5g)、苄基氯(6g)、碘化钠(8g)和碳酸钾(10g)。反应混合物密封并搅拌一天。粗产品用乙酸乙酯(20ml)萃取。有机部分用蒸馏水洗涤两次以除去所有水溶性物质。乙酸乙酯部分用无水硫酸钠干燥并蒸发得到粗品固体。通过按照辛基苯酚描述的柱色谱方法纯化该固体。通过NMR和CI-MS分析鉴定产品(参考表3&4)。2.2、制备3-壬基苯酚在无水乙醚(5ml)中用镁(248mg)和1-溴辛烷(1.8)制备格利雅(Grignard)试剂。加入微量的固体碘以引发反应。再加入乙醚(10ml)。反应搅拌至所有镁溶解，再将3-苄氧基苯甲醛(10g)加入到反应混合物中。反应在室温回流4小时。然后加入冰水。分离有机相并用含有1.5M硫酸(2×25ml)、10％碳酸钾(2×25ml)、水(20ml)、1M盐酸(20ml)的氯化钠溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥并蒸发得到产品(产率79％)。部分产品(500mg)在含浓硫酸(10滴)的乙酸乙酯(50ml)中，在10％披钯碳(130mg)上催化还原而氢化。反应混合物在室温搅拌一天，混合物然后过滤，蒸发并通过柱色谱方法纯化。通过NMR和CI-MS分析鉴定产品(参考表3&4)。II、合成α，ω-二(羟基苯基)烷烃1、制备二苯基癸烷双酸制备、分离及纯化的方法与辛基苯酚的描述相似，除酯的制备如上所示是两个分离的步骤中完成，以代替苯基辛酸酯中所述的一步法。首先，酰基二氯通过二羧酸(5g)和亚硫酰氯(20ml)的混合物在60-70℃回流两小时而制备。然后通过蒸发除去亚硫酰氯，剩余的产品溶于甲苯(5ml)。蒸发甲苯以除去全部痕量的亚硫酰氯。其次，苯酚(酰基氯的2×克分子)加入酰基氯中。温热混合物以除去氯化氢气体。冷却固化产品并通过柱色谱纯化。酯的产率为96-98％。2、制备1，10-二(羟基苯基)癸烷-1，10-二酮3、制备1，10-二(2-羟基苯基)癸烷产器通过NMS和CI-MS分析鉴定(参考NMR和CI-MS表3&4)。III、合成α，ω-二[2-羟基-(3-，4-或5-甲基苯基]烷烃按照KKakemi等在《抗氧化剂(Antioxidants)III.》KKake-mi，YArita，RHori和HTakenaka.YakugakuZashi86，791-796(1966)所述脂肪族二羧酸酰氯(1摩尔)(如癸二酰氯)加入到含有无水氯化铝(2.5摩尔)的苯酚(2.2摩尔)的四氯乙烷溶液中。混合物在70-80℃搅拌5-6小时。用冰水和浓盐酸(1∶1)分解产品。分离有机层并减压浓缩。残余物用乙酸乙酯萃取并用水洗涤两次。除去溶剂后，产品进行梯度色谱以分离相应的二酮，用Clemmensen还原该二酮得到标题化合物。产品自石油或石油-乙酸乙酯中重结晶得到无色晶状固体。此方法与制备二(2-羟基-1-萘基)癸基的相似。IV、1，10-二(4-羟基-3-甲基苯基)癸烷制备是通过Schlack和Koller在《芳基脂肪基二酮》，PSchl-ack和WKoller.Ger.1086711Aug.11，1960中报道的方法。标题化合物通过在多磷酸(3摩尔)存在下以癸二酸(1摩尔)处理邻甲酚(2.2摩尔)而制备。混合物在80℃搅拌4小时并冷却后倒入冰水中。沉淀物过滤、溶解于乙酸乙酯中并用水洗涤三次。蒸发除去溶剂得到粗品1，10-二(4-羟基-3-甲基苯基)癸烷-1，10-二酮，然后将其进行Clemmensen还原得到标题化合物。产品重结晶得到无色白色结晶。V、合成α，ω-二[2，4-二羟基-(3-甲基)苯基]烷烃按照《脂肪族二羧酸与间苯二酚反应》JvonBraun，EAnton和FMeyer.Ber.74B，1772-1783(1941)的文献中记载的方法制备脂肪族二羧酸(1摩尔)与无水二氯化锌(2摩尔)在140℃加热，然后分批加入间苯二酚(10摩尔)。搅拌混合物，在140-160℃(除2-甲基间苯二酚在170℃搅拌外)维持4-5小时。用冰水分解产品。在真空中收集固体，用10％的碳酸钠洗涤然后用水洗涤。粗品进行Clemmensen还原得到标题化合物，由乙醇-水中重结晶得到无色晶体。VI、合成1，10-二[3-羟基-4-甲基苯基]癸烷按照上述(III)制备1，10-二(4-甲基苯基)癸烷-1，10-二酮。将该二酮溶于浓硫酸中，在-5℃，将其逐渐加入到发烟硝酸和浓硫酸(2∶1)的混合物中。混合物在0℃搅30拌分钟，并倒入冰水中。过滤沉淀物并自乙酸乙酯中重结晶得到1，10-二(3-硝基-4-甲基苯基)癸烷-1，10-二酮，然后在浓盐酸的存在下在90℃的高混下将其SnCl2·2H2O进行的30分钟。收集冷却形成的沉淀物，用盐酸洗涤并溶于氢氧化钠中。收集加入稀盐酸后的固体沉淀并自乙醇中重结晶得到1，10-二(3-氨基-4-甲基苯基)癸烷-1，10-二酮。此产品在5℃用NaNO2的3M硫酸溶液重氮化。混合物再用10％硫酸在160℃水解。所得溶液用乙酸乙酯萃取，蒸发除去溶剂得到1，10-二(3-羟基-4-甲基苯基)癸烷-1，10-二酮，将其进行Cle-mmensen还原得标题化合物，自石油-二氯甲烷中重结晶。VII、合成α，ω-二[2，5-二羟基-4-甲基苯基]烷烃a、3，5-二甲氧基-4-甲基苯甲醛是按照公布在《3，4，5-三甲氧基-苯甲醛和二甲基乙缩醛的配向性还原烷基化》(UAzzena，SCossu，TDenurra，GMelloni和AMPiroddi，Sythesis1990，313)和《3，4，5-三甲氧基-苯甲醛的衍生物的亲电取代的配向性还原》(UAzzena，GMelloni，AMPiriddi，EAzara，SCon-tini和EFenude.J.Org.Chem57，3101-3106(1992)中的方法而制备。二乙缩醛中间体在130℃/0.8mmHg蒸馏，3，5-二甲氧基-4-甲基苯甲醛(化合物A)自石油中重结晶。b、制备α-N，N-二甲基氨基-α-氰基-(3，5-二甲氧基-4-甲基)亚苄基(化合物B)(见《通过碱金属的α-二甲基氨基-苯乙腈的苄基化作用及相关的烷化作用》CRHauser，HMTaylor和TGLedford.J.Chem.Soc.82，1786(1960))。在搅拌的亚硫酸氢钠(1摩尔)的400ml水溶液中，加入在甲醇中的化合物A(1摩尔)，然后加入无水二甲胺(1.2摩尔)的甲醇(80％)水溶液。反应混合物冷却后加入氰酸钠(1.2.摩尔)水液。混合物在室温搅拌20小时，然后再加入乙醚(50ml)。乙醚层用水洗涤两次并蒸发得到化合物B(＞90％)，其纯度足以在下步反应。c、制备α，ω-二[3，5-二甲氧基-4-甲基苯基]烷烃-α，ω-二酮(见《通过α-氨基-α-芳基乙腈与烷基二溴化物反应合成对称的二酮有效方法》KTakahashi，MWatsuzaki，KOgura和HIida.J.Org.Chem.48，1909-1912(1983))。在无水氮气氛中，将二异丙基胺(1.5，9mmol)溶于分别为5ml的无水THF和HMPA的混合物中，用n-丁基锂(4ml2.5M己烷溶液，10mmol)在-78℃处理。加入溶于THF(2ml)的化合物B(8mmol)，反应混合物在-78℃搅拌15会钟，在0℃搅拌1小时。向冷却至-20℃的混合物中滴加α，ω-二溴烷烃(4mmol)。混合物在-20℃搅拌20分钟后，在室温搅拌过夜。反应混合物倒入冰水中并用乙醚(3×50ml)萃取。用盐水洗涤合并的乙醚层并减压浓缩。残余物溶于分别为3ml的THF和30％草酸水溶液中，回流90分钟然后用乙醚萃取。蒸发溶剂后，产品自乙醇中重结晶得到二酮(化合物C)。d、制备α，ω-二[3，5-二羟基-4-甲基苯基]烷烃化合物C进行Clemmensen还原，然后用在乙酸中的47％的HBr在130℃去甲基化10小时。产品进行梯度色谱并自苯中重结晶得到无色结晶。1，1-二(2-羟基苯基)癸烷按照GCasiraghi，等《在配向性中的金属酚盐的反应中合成2，2-亚烷基二苯酚》，GCasiraghi，GCasnati，APochini和RUngaro.J.Chem.Soc.，PerkinTrans.11982)，3，805-808的方法制备。产品在210℃/0.4mmHg蒸馏。6-十二烷基-7-羟基-4-甲基香豆素是按照SPStar-kov等《在三氟化硼乙醚化合物存在下乙酰乙酸乙酯和苯甲酰乙酸乙酯与4-烷基间苯二酚的缩合》(SPStarkov，GAGoncharenko和AIPanasenko.Zh.Obshch.Khim.(1993)，63(5)，1111-1115)中的方法制备。产品自乙醇中重结晶。2-壬基苯酚的溴化是按照DERearson等《苯酚的邻位溴化》(DERearson，RDWysong和CVBreder.J.Org.Chem.(1967)，35(19)，3221-3231)文献中的方法进行。壬基苯酚的硝基化是按照DSRoss等《通过氮的低价氧化物催化芳族硝基化》(DSRoss，GpHum和WGBlucher.J.Chem.Comm.1980，532-533)的方法进行。4-十二烷基间苯二酚的溴化是按照EKiehlmann和RWLauener《溴代间苯三酚及其甲基醚》(EKiehlm-ann和RWLauenerCan.J.Chem.(1989)，67，335-344)中的方法进行。4-溴-6-十二烷基间苯二酚是按照上述的方法8《邻位溴代苯酚》(DERearson，RDWysong和CVBreder.J.Org.Chem.(1967)，35(19)，3221-3231)中的方法制备。*Clemmensen还原按如下进行酮化合物溶于甲苯中，将其加入到含汞齐化锌的浓盐酸和乙酸(1∶1)的混合物中。反应混合物在剧烈搅拌下回流10小时或在室温搅拌2天。表2合成酚的产物化合物(No)％产率2-辛基苯酚(1)2-癸基苯酚(3)19.8-23.34-辛基苯酚(4)m.p.40-42℃4-壬基苯酚(5)m.p.27-38℃31.5-34.24-癸基苯酚(6)m.p.53-55℃3-壬基苯酚(7)10.01，14-二(2-羟基苯基)20.8-23.3十四烷(14)1-(2-羟基苯基)-10-(4-羟基苯基)癸基(9)1-(2-羟基苯基)-12-(4-羟基苯基)十二烷(12)22.5-251-(2-羟基苯基)-14-(4-羟基苯基)十四烷(15)表2(续)合成酚的产物化合物(No)％产率1，10-二(4-羟基苯基)癸基(10)1，12-二(4-羟基苯基)十二烷(13)6.7-8.31，14-二(4-羟基苯基)十四烷(16)表2续化合物熔点℃％产率2-壬基苯酚(2)liq.58-602-甲基-6-壬基苯酚liq.563-甲基-6-壬基苯酚liq.524-甲基-6-壬基苯酚liq.502-溴-6-壬基苯酚liq.404-溴-6-壬基苯酚45-4785表2续化合物熔点℃％产率2，4-二溴-6-壬基苯酚liq.＞952-硝基-6-壬基苯酚liq.454-硝基-6-壬基苯酚liq.382-溴-4-硝基-壬64-65基苯酚＞90a4-溴-2-硝基-壬61-63基苯酚4-壬基间苯二酚70-71802-溴-6-十二烷基68-6970b间苯二酚4-溴-6-十二烷基61-6282间苯二酚表2续化合物熔点℃％产率2，4-二溴-6-十二烷基58-59＞95间苯二酚6-十二烷基-7-羟基135-13675-4-甲基香豆素1，8-二(2-羟基苯基)74辛烷1，9-二(2-羟基苯基)64-65壬烷40-451，10-二(2-羟基苯基)81-82烷基(8)1，12-二(2-羟基苯基)88.5-十二辛烷(11)1，10-二(2-羟基-3-82-8338甲基苯基)癸烷表2续化合物熔点℃％产率1，10-二(2-羟基-4-102-10340甲基苯基)癸烷1，10-二(2-羟基-5-8625甲基苯基)癸烷1，8-二(2，4-二羟基167-168苯基)辛烷1，10-二(2，4-二羟基155-156苯基)癸烷75-801，11-二(2，4-二羟基136-137苯基)十一烷1，12-二(2，4-二羟基146-147苯基)十二烷1，10-二(2，4-二羟基138-14070-3-甲基苯基)癸烷表2续化合物熔点℃％产率1，10-二(3-羟基71-73苯基)癸烷18-201，10-二(3-羟基100-102-4-甲基苯基)癸烷1，10-二(4-二羟基82-8378-3-甲基苯基)癸烷1，1-二(2-羟基liq70苯基)癸烷1，10-(2-羟基101-10340-1-萘基)-癸烷2-甲基-5-壬基-91-9270间苯二酚1，8-二(3，5-二羟基173-175-4-甲基苯基)癸基表2续化合物熔点℃％产率1，10-二(3，5-二羟基139-140-4-甲基苯基)癸基65-701，12-二(3，5-二羟基123-124-4-甲基苯基)十二烷1，14-(3，5-二羟基-4-甲基苯基)十四烷130-131合成的烷基苯酚和α，ω-二(羟基苯基)烷基的结构表3合成产物的1H-NMR谱缩略字是s，单峰；d，双重峰；t，三重峰；m，多重峰；b，宽谱。中间产物的1H-NMR谱注只有芳香族质子的偶合常数有报道表3续注只有芳香族质子的偶合常数*13C-NMR(δppm)谱的概略2-壬基苯酚衍生物13C-NMRofn-C9H19链14.19(1C)；22.75(1C)；29.41(1C)；29.55(1C)；29.58(1C)；29.64(2C)；30.86(1C)；31.97(1C)；取代苯酚的芳族13C-NMR2-溴-6-壬基苯酚110.52(1C)；121.30(1C)；129.34(1C)；129.63(1C)；130.75(1C)；150.1(1C).4-溴-2-壬基苯酚1ol.112.71(1C)；116.83(1C)；129.59(1C)；131.07(1C)；132.68(1C)；150.09(1C).2，4-二溴-6-壬基苯酚ol.110.(1C)；125.08(1C)；125.52(1C)；129.62(1C)；132.1(1C)；150.2(1C).2-硝基-6-壬基苯酚119.31(1C)；122.6(1C)；132.37(1C)；134.04(1C)；137.41(1C)；153.36(1C).4-硝基-2-壬基苯酚115.19(1C)；119.3(1C)；123.54(1C)；126.02(1C)；130.73(1C)；159.47(1C).4-溴-2-硝基-6-壬基苯酚109.92(1C)；125.07(1C)；125.51(1C)；131.18(1C)；141.26(1C)；155.58(1C).4-十二烷基间苯二酚衍生物13C-NMRofn-C12H25chain.14.13(1C)；22.7(1C)；29.37(1C)；29.41(1C)；29.53(1C)；29.62(1C)；29.65(1C)；29.68(2C)；29.85(1C)；30.17(1C)；31.93(1C).取代的间苯二酚的芳族13C-NMR2-溴-6-十二烷基间苯二酚99.63(1C)；107.37(1C)；122(1C)；129.38(1C)；150.24(1C)；150.61(1C).4-溴-6-十二烷基间苯二酚100.52(1C)；103.17(1C)；123(1C)；132.17(1C)；150.79(1C)；154(1C).2，4-二溴-6-十二烷基间苯二酚98.68(1C)；99.62(1C)；123.46(1C)；131.1(1C)；147.3(1C)；150.52(1C)6-十二烷基-7-羟基-4-甲基香豆素(n-C12H35的13C-NMR与间苯二酚的相似)芳族13C.102.62(1C)；110.7(1C)；112.37(1C)；125(1C)；127.28(1C)；153.35(1C)；159.12(1C)；162.3(1C).1，11-二(2，4-二羟基苯基)十一烷29.37(2C)；29.41(2C)；29.43(3C)；29.46(2C)；30.13(2C)；102.93(2C)；106.68(2C)；120.50(2C)；130.29(2C)；155.24(2C)；155.57(2C).1，12-(2，4-二羟基苯基)十二烷28.91(2C)；29.02(2C)；29.05(4C)；29.09(2C)；29.69(2C)；102.39(2C)；105.79(2C)；119.68(2C)；129.54(2C)；155.11(2C)；155.45(2C).1，10-二(2，4-二羟基-3-甲基苯基)癸烷8.51(2C)；29.43(2C)；29.47(2C)；29.49(2C)；29.86(2C)；30.06(2C)；107(2C)；110.42(2C)；119.76(2C)；126.6(2C)；152.65(2C)；153.55(2C).1，10-二(3-羟基-4-甲基苯基)癸烷15.31(2C)；29.25(2C)；29.46(2C)；29.5(2C)；31.41(2C)；35.47(2C)；114.92(2C)；120.59(2C)；120.76(2C)；130.72(2C)；142.31(2C)；153.52(2C).2-甲基-5-壬基间苯二酚7.73(1C)；14.12(1C)；22.69(1C)；29.3(1C)；29.35(1C)；29.54(1C)；31.21(1C)；31.91(1C)；107.31(1C)；107.8(2C)；142.05(1C)；154.46(2C).1，8-二(3，5-二羟基-4-甲基苯基)辛烷8.37(2C)；29.93(2C)；30.18(2C)；32.11(2C)；36.24(2C)；107.34(2C)；107.47(4C)；141.59(2C)；156.89(4C).1，10-二(3，5-二羟基-4-甲基苯基)癸烷8.34(2C)；29.94(2C)；30.32(4C)；32.13(2C)；36.25(2C)；107.34(2C)；107.45(4C)；141.59(2C)；156.9(4C).1，12-二(3，5-二羟基-4-甲基苯基)十二烷8.37(2C)；29.97(2C)；30.26(2C)；30.34(2C)；30.38(2C)；32.15(2C)；36.27(2C)；107.34(2C)；107.45(4C)；141.58(2C)；156.9(4C).表4合成烷基苯酚及α，ω-二(羟基苯基)烷烃的化学电离质谱中间产物的质谱m/e强度(％)结论2-辛酰基苯酚2614M＋4124911M＋29221100M＋11276丧失苯酚2-壬酰基苯酚2755M＋4126310M＋29235100M＋11419丧失苯酚2-癸酰基苯酚2895M＋4127716M＋29249100M＋115515丧失苯酚121162-OH-苯甲酰基阳离子4-辛酰基苯酚221100M＋112713丧失苯酚1136丧失庚烷4-壬酰基苯酚235100M＋12215丧失甲基1416丧失苯酚1357丧失庚烷4-癸酰基苯酚2895M＋4127712M＋29249100M＋12218丧失乙烯15510丧失苯酚1358丧失辛烷3-苄氧基苯甲醛2535M＋4124112M＋29213100M＋113516丧失苯二苯基癸烷双酸酯3837M＋2935512M＋1261100丧失苯酚二苯二十二烷双酸酯41120M＋293835M＋1289100丧失苯酚二苯基十四烷双酸酯43915M＋294114M＋1317100丧失苯酚1，10-二(2-羟基苯基)庚烷-1，10-二酮3836M＋29355100M＋126110丧失苯酚1，12-二(2-羟基苯基)十二烷-1，12-二酮4238M＋4141120M＋29383100M＋12895丧失苯酚1，14-二(2-羟基苯基)十四烷-1，14-二酮4516M＋4143916M＋29411100M＋13175丧失苯酚1-(2-羟基苯基)-10-(4-羟基苯基)癸烷-1，10-二酮3838M＋29355100M＋132710丧失28质量单位26114丧失苯酚13525C6H4(OH)COCH2+离子12115C6H4(OH)CO+离子1-(2-羟基苯基)-12-(4-羟基苯基)十二烷-1，12-二酮4238M＋4141120M＋29383100M＋128910丧失苯酚1215C6H4(OH)CO+离子1-(2-羟基苯基)-14-(4-羟基苯基)十四烷-1，14-二酮4516M＋4143918M＋29411100M＋135518丧失丁烯31710丧失苯酚1，10-二(4-羟基苯基)癸烷-1，10-二酮3956M＋4138315M＋29355100M＋12618丧失苯酚12115C6H4(OH)CO+离子1-12-二(4-羟基苯基)十二烷-1，12-二酮4236M＋4141116M＋29383100M＋12898丧失苯酚13718C6H4(OH)C(OH)+CH312312C6H4(OH)C(OH)+H1-14-二(4-羟基苯基)十四烷-1，14-二酮4515M＋4143918M＋29411100M＋13178丧失苯酚121124-OH-苯甲酰基阳离子烷基苯酚和α，ω-二(羟基苯基)烷烃的质谱2-和4-辛基苯酚2478M＋4123516M＋29207100M＋110720C6H4(OH)CH2+离子2-，3-和4-壬基苯酚2616M＋4124912M＋29221100M＋110718C6H4(OH)CH2+离子2-和4-癸基苯酚2755M＋4126316M＋29235100M＋110716C6H4(OH)CH2+离子1，10-二(羟基苯基)癸烷和1-(2-羟基苯基)-10-(4-羟基苯基)癸烷3676M＋4135520M＋29327100M＋110715C6H4(OH)CH2+离子1，12-二(羟基苯基)十二烷和1-(羟基苯基)-12-(4-羟基苯基)十二烷3955M＋4138320M＋29355100M＋11076C6H4(OH)CH2+离子1，14-二(羟基苯基)十四烷和1-(2-羟基苯基)-14-(4-羟基苯基)十二烷4235M＋4141120M＋29383100M＋11075C6H4(OH)CH2+离子注强度小于5％的信号未列入表4续</tables>注强度低于5％的信号未列入天然产物实验来自银桦的新的间苯二酚及其对红细胞Ca2+-ATP的酶的抑制活性总的提取和分离的实验方法流动相为MeOH/H2O(82∶18)。流速为1.0ml/min；用安装有254nm的AltexUV测器Aetex100溶剂传递系统进行制备性HPLD，并使用9×500mm的ActivonPartis-ilODS-3柱。流动相的梯度是在60分钟内从MeOH/H2O(3∶7)到MeOH，或者流动相为65％的CH3CN在水中的常液流动相，流速为2.5ml/min，通过这些系统分离6251，6252。植物材料从澳大利亚、悉尼，收集银桦茎。确证样品购自theDepartmentofPharrmacy，TheUniversityofSydney的检定处。用电刨将直径为5-10cm的木茎切成薄片并在空气中干燥。提取和分离通过渗滤用CHCl3/EtOH(1∶1)将2kg样品提取3天共两次。在真空浓缩提取液后，将残渣(20g)经硅胶短柱真空色谱层析法进行色谱层析，收集250ml馏分。在0.5mg/ml浓度下进行Ca2+-ATP酶测定，获得50％的抑制活性。用石油醚/EtcAc(9∶1-2∶1)洗脱馏分1到4(3.82g)。在测定中，由CHCl3/MeOH(2∶1)洗脱的馏分7-9(11.91g)是非活性的。对他们不再进行研究。分别用CHCl3/EtoAc(2∶1)、CHCl3/MeOH(9∶1)、(8∶2)洗脱馏分5(2.78g)、6(0.13g)、6b(1.38g)并获得强的抑制活性。将馏分5用CHCl3/EtOH(95∶5)进一步进行短柱真空色谱层析并得到银桦酚。将馏分6b用CH2Cl2/EtoAc(4∶1)进行类似的色谱层析获得6b2(37.4mg)。将馏分6用石油醚/EtoAc(2∶1)、CH2Cl2/EtoAc(2∶1)、(1∶1)、(1∶2)、EtoAc、EtoAc/CH3CN(1∶1)类似地分成10个馏分(各50ml)。仅由CH2Cl2/EtoAc(2∶1)洗脱的馏分4-5(63.5mg)具有强的抑制活性。在0.04mg/ml浓度时，为74％的抑制活性。然后将该馏分用梯度HPLC分离而获得突触(Synapic)醛(623，1.8mg)和非极性馏分625，馏分625通过制备性TLC、用CHCl3/EtOH(95∶5)作溶剂最终分成6251(6.6mg)和6252(1.3mg)。甲基化和臭氧分解是来自BarrowRA，CaponRJ(1991)AlkylandalkenylresorcinolSfromanAustralianmarine，sponge，HaliclonaSP.Aust.J.Chem441393-1409的一种方法。在室温下，将要甲基化的样品(2-8mg)在含有K2CO3(200mg)和CH3I(0.5ml)的丙酮(3ml)中搅拌20小时。通过制备性TLD，将甲基化产物用CHCl3/EtOH(9.3∶0.7)分出6b2，用石油醚/EtoAc(8∶2)分出6251，6252。在-78℃温度下，将甲基化的化合物(0.5-1mg)的CS2(2ml)液用O3气流进行臭氧分解并加入三苯基膦(2mg)。用CI-MS直接分析反应混合物。暴露在I2蒸汽中并在实验台放置过夜后，长链间苯二酚在TLC上产生有特征的紫色，而间苯二酚、间苯二甲酸(resorcinylicacid)和苔黑酚产生灰棕色。Grebustol-A(6251)呈无色油状；RfO.51(CHCl3/EtOH9∶1)；1H-NMR(CDCl3，ppm)1.26-1.35(m，12H，CH2)，1.55(m，4H，ArCH2CH2)，2.00(m，4H，CH＝CHCH2)，2.10(s，3H，ArCH3)，2.42-2.50(m，4H，ArCH2)，4.70(br.s.，OH)，5.32-5.39(m，2H，CH＝CH)，6.17(t，J＝2.0Hz，1H，ArH)，6.24(br.s.，4H，ArH)；13C-NMR156.5，154.4，142.6，142.0，130.0，129.7，108.1，107.9，100.2，35.9，35.6，31.3，31.1，29.8，29.7，29.6，29.4，29.2，29.1，27.2，7.9；CI-MS(CH4)m/z427{M＋1}，397，285，257，229，207；UVmax(MeOH)208.4(log∈4.48)，274.4(3.35)，279.4(3.33).甲基化Grebustol-A(6251m)-1H-NMR1.26-1.38(m，12H，CH2)，1.55(m，4H，ArCH2CH2)，2.00(m，4H，＝CHCH2)，2.06(s，3H，ArCH3)，2.55(m，4H，ArCH2)，3.78(s，6H，2XOCH3)，3.81(s，6H，2XOCH3)，5.32-5.41(m，2H，CH＝CH)，6.29(t，J＝2.3Hz，1H，2-H)，6.34(d，J＝2.3Hz，2H，4，6，-H)，6.36(s，2H，4′6′-H)；CI-MS{M＋1}＋483，EI-MS482{M}+(32)，410(6)，386(13)，368(8)，353(3)，341(8)，149(12)，109(9)；Ozonolysisof6251m，1H-NMR3.81，3.78，9.76，9.77(CHO)，CI-MS279，237.Norstriatol-B(6252)-呈无色油状oil，Rf0.55(CHCl3/EtOH9∶1)；1H-NMR(CDCl3，ppm)1.25(m，12H，CH2)，1.58(m，4H，CH2)，1.91(m，4H，＝CHCH2)，2.26(m，2H，1-CH2)，2.60(m，2H，14-CH2)，5.30(m，2H，CH＝CH)，4.66(br.s.，OH)，6.45-6.49(m，4H，ArH)；CI-MS411{M＋1}+，317，285，257；UVmax(MeOH)206.4(log∈4.61)，279.2(3.49).甲基化norstriatol-B(6252m)-1H-NMR1.25(m，12H，CH2)，1.54(m，4H，CH2)，1.87(m，4H，CH＝CHCH2)，2.23(m，2H，1-CH2)，2.66(m，2H，14-CH2)，3.68(d，J＝3.0Hz，3H，22-OCH3)，3.69(d，J＝1.40Hz，6H，17，19-OCH3)，3.83(d，J＝1.45Hz，3H，24-OCH3)，5.30(m，2H，CH＝CH)，6.42-6.45(m，4H，ArH)；CI-MS467{m＋1}+；EI-MS466{m}+(100)，451(2)，302(5)，149(10)；13C-NMR，56.0，56.1，96.5，104.8，105.0；甲基化striatol-B-13C-NMR56.0，56.1，96.5，105.0，130.3，145.5.结果与讨论Grebustol-A(6251)化合物(II)Grebustol-A(6251)(6.6mg，3.3ppm)，分子量426(CI-MS)，UV最大量吸收峰274nm，是不同于striatol，如1H-NMR在5.32-5.99ppm(m，2H)和2.10PPm(S，3H)信号所示，它在烷基链具有双键和一个单个苯基甲基基团。甲基化产物的质谱和1H-NMR谱揭示了存在有4个OCH3基团(EI-MS482)，1H-NMR3.78ppm(S，6H)，3.81(S，6H)，1H-NMRH-HCOSY发现信号1.6-1.55，1.26-2.00，1.55-2.42，2.00-5.35ppm的偶合，但没有信号1.55和2.00ppm间的偶合。这排除了C-10，11位上有双键的可能性。1H-NMR数据表明了非对称结构。臭氧分解产物的CI-CM表明分子量278和236的醛，与C-8，9(m＝7，n＝5)或C-9，10(m＝8，n＝4)位上的双键相一致。Norstriatol-B(6252)化合物(III)Norstriatol-B(6252)(1.3mg，0.65ppm)是一种striatol-B的脱甲基产物。CI-MS(CH4试剂气体)揭示其分子量为410。UV极大吸收峰279nm。norstriatol-B的1H-NMR，UV，质谱与所报导的striatol-B的数据相一致[RidleyDD，等(1970)ChemicalStudiesoftheProteaceaeIVAust.J.Chem.23，147-183]并与StriatolB的可信样品相一致。它是联二苯衍生物而不是象robus-tol的二苯基醚衍生物[CannomJR，等(1973)Phenolicconstitue-ntsofGrevillearobusta(proteaceae).TheStructureofrobustol，anovelmacrocyclicphenolAust.J.Chem.，26，2257-2275]。norstriatol-B的甲基化获得四甲基norstriatol-B，它与可信的Striatol-B甲基化所形成的物质相同。表1表明，银桦醇对Ca2+-ATP酶的抑制效果是弱的。最强的化合物是Striatol和grebustol-A，其IC50分别为16和17μm。如在grebustol-B中没有苄甲基基团时，其活性是弱的。Bisnorstriat-ol在500μm浓度时的抑制率仅为69.1％。酚羟基甲基化之后，gre-bustolB失去活性。用纯化的红细胞Ca2+-ATP酶证实了Striatol的抑制活性。这些结果表明酚羟基对产生抑制作用是必要的。羟基之间的苄甲基增强这种活性。烷基链中的双键也增强对Ca2+-ATP酶的抑制活性。红细胞膜按WSPrice，BDRoufogalis，PWKuchel(1989)在ASim-pleandinexpensivemethodforpreparingerythrocytememb-ranesbyfilfrationthroughahollow-filtersytem，Anal.Biochem.，179，190-193所述方法，通过Ashahi血浆分离器。连续滤过空心纤维而制备缺失调钙蛋白的红细胞膜。从悉尼NewSouthWalesRedCrossTramsfusinService，获得包装细胞。整个制备都在40℃温度下进行。用含有130mMKCl，20mMTris-HCl(PH7.4)的等渗缓冲液洗涤1单位的包装红细胞3次，并在4,000RPM下离心分离收集细胞。用含1mMEDTA，10mMTris-HCl(PH7.4)，0.5mMPMSF(苯甲基磺酰氟)的缓冲液使细胞溶血。将细胞溶血物混合物通过空心纤维系统直到细胞膜呈白色，然后用10mMHep-es钾(PH7.4)洗涤。经在10,000RPM下离心分离20分钟收集细胞膜，将该细胞膜重新悬浮在含130mNKCl、2mMdithiothreitol、0.5mMMgCl220mMHepes钾(PH7.5)的贮备缓冲液中。在-80℃温度下贮存其浓度为1.5-5.4mg/ml蛋白质的膜，备用。Ca2+-ATP酶测定试验在总体积为0.4ml的65mMKCl、20mMHepes钾、5mMMgCl2、50μMCaCl2、0.1μm调钙蛋白、0.1mMEGTA溶液中并在37℃温度下，将红细胞膜(0.071-0.098mg/ml)培养1小时。加入2mMATP(PH7.4)开始反应。按BURaess，FFVincenzi(1980)(ASemi-automatedmethodforthedeterminationofmultiplemenbr-aneATPaseactivities，J.PharmacologicalMethocls4，273-283)的方法，光谱测定释放到介质中的磷酸酯。由Ca2+存在下所分析的总活性中减去Mg2+-ATP酶的活性(不加CaCl2下测定的)。将苯酚溶解在二甲基亚砜(DMSO)中，样品混合物中DMSO的最终浓度为2.5％。DMSO本身对ATP酶活性没有影响。在加入ATP前，将试验物质的浓溶液加到反应介质中。按OHLowrg，NJRosebrough，ALFarr，RJRandall(1951)(J.Bio.Chem.193，265-275)的方法测定蛋白质浓度；用牛血清白蛋白作标准。使用DAGoldstein(1979)(CalculationoftheConcentrationsoffreecationsandCation-ligandcomplexesinSolutionscontainingmulti-pledivalentcationsandligands，Biophys.J.，26，235-742)的程序，用计算机计算游离Ca2+的浓度。对照的ATP酶特异活性为(单位nmodes/mg蛋白质/min)Ca2+-ATP酶为25.8±4.0(n＝20)，调钙蛋白刺激的Ca2+-ATP酶为63.5±7.9(n＝16)，而Mg2+-ATP酶为7.4±1.0(n＝20)。如A.Minocher-bomjee，BDRoufogalis(1982)(SelectiveantagonismoftheCatransportATPaseoftheredcellmembrancebyN-(4-azi-do-2-nitrophenyl)-2-aminoethylsulfonate(NAP-taurine).J.Biol.Chem.257，5426-5430)所示，该酶在25μm浓度下被NAP-牛磺酸抑制60％。Ca2+-ATP酶测定(微滴板法)在37℃温度下，在总体积60μl的65mMKCl，50mMHEPES(PH＝7.4)，5mMMgCl2，50μMCaCl2，0.1mMEGTA并在调钙蛋白(0.3μm)不存在和存在下，将红细胞膜培养1小时。将试验化合物溶于二甲基亚砜DMSO中并在加入ATP之前，将其2μl加到测定混合物中。DMSO在测定混合物中的最终浓度为3％。加入2mMATP(PH＝7.4)后开始反应。培养1小时后，加入着色剂(180μl)并在37℃温度下培养1/2小时。用微滴板读数器在750nm光谱法测定释放到测定样品介质中的磷酸酯。从Ca2+存在下测得的总活性中减去Mg2+-ATP酶的活性(在不加CaCl2下测定)。结果示于表1A中。缩写ATP三磷酸腺苷ATPase三磷酸腺苷酶BHT2，6-二-叔丁基-4-甲基苯酚CI-MS化学电离质谱DMSI二甲基亚砜EI-MS电子撞击质谱EGTA1，2-亚乙基二(氧亚乙基次氮基)四乙酸HEPES4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸HPLC高效液相色谱LDA二异丙酰胺锂NAPN-(4-叠氮-2-硝基苯基)-2-氨基乙烷磺酸NMR核磁共振PMSF苯甲基磺酰基氟SDS十二烷基硫酸钠TLC薄层色谱层析毒性盐水小虾测定(brineshrimpassay)用盐水小虾测定法确定活性化合物的LC50值。用对盐水小虾(ArtemiaSalinaLeach)的毒性证实已知化合物广谱活性。使用许多测定，包括毒性物质、麻醉剂、吗啡样物质和佛波醇酯协同致癌性的分析。测定表明某些细胞毒性和其作为用于最近已证实的某些抗肿瘤活性的预筛选物之间具有良好的相关性。选择DMSO(二甲基亚砜)作为溶剂，这是因为其良好的溶解特性，也因为在Ca2+-ATP酶抑制研究中的酚物质早已使用DMSO制备。试验所用溶剂的毒性的方法基本上是按J.LMclaughlin在MethodsofPlantBiochemisfry(1991)，Vol.6(K.Hostettman，ed.)，AcademPress，London，1-32中所报道的。将要试验的物质的DMSO溶液直接加到含有盐水小虾的小瓶中。我们希望使用的DMSO浓度高于推荐的1％(v/v)，所以，DMSO的毒性试验是必需的。表5中列出了在小虾上试验的DMSO浓度，以及重复实验的测定结果。表5所试验的DMSO浓度浓度(％v/v)％死亡00102030405971291811571396151002010025100在24小时期间内，盐水中DMSO的浓度直到4％(v/v)时，未观察到对盐水小虾有毒性。生物测定分析了盐水小虾毒性，除了某些小的修改以外，按照McLaurh-lin等在BrineShrimp中所报道的方法(Aconvenientgeneralbi-oassayforactiveDlantconstituents，BNMeyer，NRFerr-igni，JEPutman，LBJacobsen，DENhols和JLMclaughlin.PlantaMedica(1982)，45，31-34和CrowngalltumoursonpotatodiscsandbrineShrimpLethalityTwosimplebioas-sayforhigherplantScreeningandfractionation，JLMcl-aughlin，MethodsofPlantBiochemistry(1991)，Vol.6(KHo-stettmaned.)，AcademPress，London，1-32)。将10个小虾转移加到各个小瓶中并将体积调至4.9ml。各剂量重复三次，包括对照。在试验溶液达到合适体积之前，快速连续地将另外适当体积的DMSO加到各剂量中，使DMSO最终浓度达到2％。将小瓶轻轻混合并记录时间。24小时后，计算存活数并确定％死亡率。试验化合物的测定浓度为100μm、25μm、5μm、1μm和0.2μm(而适当的浓度为0.04μm和0.08μm)。不供食物之下，盐水小虾能在小瓶中存活24小时以上，所以是不喂的。使用Sigmaplot计算机程序来绘制剂量效能曲线并由曲线与50％死亡率线的交叉点计算LC50值。LC50是以μm和μg/ml两种单位表示。表6由盐水小虾生物测定获得的Lc50值分子量化合物LC50μMμg/ml2062-辛基苯酚1.50.312202-基苯酚0.480.112342-癸基苯酚0.680.162203-壬基苯酚0.320.0702204-基苯酚0.400.0882344-癸基苯酚0.270.0642342-壬酰基苯酚0.630.152344-壬酰基苯酚0.100.0241762-环己基苯酚＞25＞4.4表6(续)由盐水小虾生物测定获得的Lc50值分子量化合物LC50μMμg/ml1764-环己基苯酚＞25＞4.42981，8-二(2-羟基苯基)30.89辛基3261，10-二(2-羟基苯基)1.90.62癸基3261，10-(3-羟基苯基)30.98癸基3261，1-二(2-羟基苯基)144.6癸基3541，10-(2-羟基-4145-甲基苯基)癸烷3541，10-二(2-羟基-35.82.1-甲基苯基)癸烷表6(续)由盐水小虾生物测定获得的Lc50值分子量化合物LC50μMμg/ml3541，10-二(3-羟基-4113.9-甲基苯基)癸烷3541，10-二(4-羟基-34.21.5-甲基苯基)癸烷3541-(2-羟基-3-甲2.20.78基苯基)-10-(4-羟基-3-甲基苯基)癸烷3541，12-二(2-羟基苯基)2.60.94十二烷3821，14-二(2-羟基苯基)1.90.72十四烷3261，10-二(4-羟基苯基)0.810.26癸烷表6(续)由盐水小虾生物测定获得的Lc50值分子量化合物LC50μMμg/ml3541，12-二(4-羟基苯基)3.81.4十二烷3821，14-二(4-羟基苯基)7.93.7十四烷3261-(2-羟基苯基)-10-0.350.11(4-羟基苯基)癸烷3541-(2-羟基苯基)-2-0.0540.019(4-羟基苯基)十二烷3821-(2-羟基苯基)-143.71.4-(4-羟基苯基)十四烷4261，10-二(2-羟基-1＞25＞11-萘基)癸烷表6(续)由盐水小虾生物测定获得的Lc50值分子量化合物LC50μMμg/ml3581，8-二(3，5-二羟基-4＞25＞9-甲基苯基)辛烷3861，10-二(3，5-二羟基-4＞25＞9.7-甲基苯基)癸烷4141，12-二(3，5-二羟基-4＞25＞10-甲基苯基)十二烷4421，14-二(3，5-二羟基-4114.9-甲基苯基)十四烷(striatol)4141，14-二(3，5-二羟基苯4017基)十四烷(bisnorstriatal)3301，8-二(2，4-二羟基7424苯基)辛烷表6(续)由盐水小虾生物测定获得的Lc50值分子量化合物LC50μMμg/ml3581，10-二(2，4-二羟基3713苯基)癸烷3721，11-二(2，4-二羟基＞25＞9.3苯基)十一烷3861，12-二(2，4-二羟基145.4苯基)十二烷3861，10-二(2，4-二羟基-3＞25＞9.7-甲基苯基)癸烷1944-己基间苯二酚62122364-壬基间苯二酚102.42784-十二烷基间苯二酚8.82.4表6(续)由盐水小虾生物测定获得的Lc50值分子量化合物LC50μMμg/ml1805-戊基间苯二酚＞100＞18(olivetol)2365-壬基间苯二酚＞100＞182502-甲基-5-壬基8.32.1间苯二酚2745-癸基间苯二酚54152925-十三烷基间苯二酚2.80.80(grevillol)3485-十七烷基间苯二酚＞100＞183082，4-二羟基-6-壬基2.60.8苯甲酸乙酯表6(续)由盐水小虾生物测定获得的Lc50值分子量化合物LC50μMμg/ml4663，5-二溴-2，4-二羟0.780.36基-6-壬基苯甲酸乙酯3222，4-二羟基-6-癸基2.30.75苯甲酸乙酯4803，5-二溴-2，4-二羟0.780.37基-6-癸基苯甲酸乙酯3246-十二烷基-7-羟基＞25＞8.1-4-甲基香豆素328奇果菌素2.30.75328新奇果菌素289.04245，7，2′，6′-四羟基-＞100＞428-熏衣草基黄烷酮表6(续)由盐水小虾生物测定获得的Lc50值分子量化合物LC50μMμg/ml414鬼臼毒3.81.6*(5.8)(2.4)溶剂二甲基亚砜(DMSO)11％v/v*LC50是用Meyer等(Plantamedica(1982)，45，31-34)的方法测定讨论在本生物测定中，试验化合物的LC50估计值表明其对盐水小虾的毒性。通过观察表6中所列的μM而不是μg/ml浓度，可更好地比较其效能。具有某些烷基链长度的简单烷基苯酚是很毒的。与所测量的所有化合物中活性最大的1-(2-羟基苯酚)-12(4-羟基苯酚)十二烷(LC50＝0.054μM)相比较，所测量的烷基苯酚中活性最大的是4-癸基苯酚(LC50＝0.27μM)。发现酮基苯酚的毒性比简单的烷基酚高，如，4-壬酰基苯酚(LC50＝0.10μM)。除5-十三烷基间苯二酚(gr-evillol)(LC50＝2.8μM)具有中等毒性之外，4-和5-烷基间苯二酚呈低的毒性。α，ω-二羟基苯烷烃，如1，10-二(2-羟基苯基)癸烷(LC50＝1.9μM)具有中等毒性。1，10-(2-羟基-4-甲基苯基)癸烷(LC50＝14μM)和在苯基上有甲基的其它物质的毒性降低。α，ω-双间苯二酚烷烃，包括Striatol(LC50＝11μM)，bisnor-striatol(LC50＝40μM)和1，10-二(2，4-二羟基苯基)癸烷(LC50＝37μM)显示相当低的毒性。在奇果菌素和新奇果菌素之间存在着显著不同的毒性(分别为LC50＝2.3μM和LC50＝28μM)。新奇果菌素比奇果菌素约弱10倍。另一方面。这两个化合物的对Ca2+-ATP酶的抑制作用都较强并且是一样的(奇果菌素(IC50为22.5μM而新奇果菌素的IC50＝23.3μM)。为了检查生物测定结果是否类似于Meyer等中所用的那些化合物，对鬼臼毒进行了试验。该研究中LC50为3.8μM，合理地接近于Meyer等测定的LC50值5.8μM。权利要求1.式(I)化合物或其可药用衍生物在制备抑制Ca2+-ATPase酶用的药物中的用途其中，Ar是芳环系，它含有一个或多个以任意取代或不取代的苯基环，该苯基环可以是不与其它环连接或稠合的，也可以是任意地与一个或多个其它任意取代或不取代的苯基环或者与一个或多个5或6元的、任意地被取代或不取代的杂环(其中杂原子是氧)连接或稠合；和其中的环系含有1-4个苯基环，和其中Ar可以通过基团X与另一个Ar连接，其中Ar是独立选择的；其中的X可以是任意地取代或不取代的C1-20亚烷基、C2-20亚烯基或C2-20亚炔基；R是氢；C1-20烷基、C2-20链烯基、C2-20链炔基、C2-20链烷基、C2-20链烯酰基、C2-20链炔酰基，它们各自可以被取代或不取代；R1独立地选自氢；任意取代或不取代的C1-12烷基、C2-12链烯基、C2-12链炔基；-COOR′、-NR′R′、卤素、-OR′、-COR′、-CONR′R′、＝O、-SR′、-SO3R′、-SO2NR′R′、-SOR′、SO2R′、NO2、-CN、苷、甲硅烷基；其中的R′独立地为氢；各自任意地被取代或不取代的烷基、链烯基或链炔基；和其中两个基团R1可以连接在一起；其中任意的取代基可以是一个或多个独立地选自下列基团的取代基C1-10烷基、C2-10链烯基、C2-10链炔基；-COOR″、-NR″R″、卤素、-OR″、-COR″、-CONR″R″、SR″、=O、-SO3R″、-SO2NR″R″、-SOR″、SO2R″、-NO2、-CN；其中R″独立地为氢、烷基、链烯基或链炔基；n＝1、2或3m＝1、2、3或4。2.权利要求1的用途，其中的酶是血浆膜Ca2+-ATPase。3.权利要求1定义的式(I)化合物在制备治疗或预防心血管疾病用的药物中的用途。4.权利要求1、2或3的用途，其中式(I)化合物是式(V)化合物或式(VI)化合物。5.权利要求1、2或3的用途，其中式(I)化合物是5，7，2′，6′-四羟基-8-熏衣草烷基黄烷酮、5，7，6′-三羟基-8-熏衣草烷基黄烷酮，5，2′，6′-三羟基-8-熏衣草烷基-7-甲氧基黄烷酮或其可药用的衍生物。6.式(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)化合物或其可药用的衍生物其中，l＝1、2或3r＝7-14，其中l＝18-16，其中l＝2或3R2是(1)2-羟基(2)2-羟基-4′-羟基(3)2-羟基-3-甲基(4)4-羟基-3-甲基(5)2，4-二羟基(6)3，5-二羟基-4-甲基(7)2，6-二羟基-4-甲基(8)2，4-二羟基-3-甲基(9)3-二羟基-4-甲基条件是(1)当R2是2-羟基并且1＝1时，r不是7-10，和(2)当1＝3且R2是3，5-二羟基-4-甲基时，n不是14，和(3)当1＝2且R2是2-羟基-3-甲基时，n不是10，和(4)当1＝2且R2是2，4-二羟基时，r不是8-10和13，和(5)当1＝2且R2是4-羟基-3-甲基时，r不是10；其中s＝8-16其中t＝6-15其中p＋q＝12其中p＋q＝12.7.权利要求6所定义式(II)化合物的制备方法，包括(a)如果1＝1且R2是OH，则(i)如下用合适的试剂处理相应的二酸，得到酰二氯(ii)如下用苯酚处理相应的酰二氯(iii)如下重排二酰基(iv)然后还原酰基，得到式(II)化合物；(b)如果1＝2，R2是OH，则(i)用氯化锌和间苯二酚处理相应的二酸；和(ii)然后还原酰基，得到式(II)化合物；(c)如果1＝2，R2是2-羟基-3-甲基，则进行上述(a)步骤(i)-(iv)，只是在(ii)中用邻甲酚代替苯酚；(d)如果1＝2且R2是3-羟基-4-甲基，则(i)将下式相应的二酮化合物硝化，得到相应的二-3-硝基化合物(ii)还原二-3-硝基化合物得二-3-氨基化合物，然后(iii)进行重氮化和水解，得到二-3-羟基化合物(iv)然后还原酮基，得到所需的二-3-羟基化合物；(e)如果1＝3且R2是2，6-二羟基-4-甲基(i)用LDA处理下式化合物得到二价离子，然后(ii)用下式的所需被护链烷醛进行处理得到(iii)脱水、脱羧化，然后还原，得到下式的中间体化合物(iv)氧化，得到(v)然后用步骤(i)的二价阴离子处理，得到(vi)脱水、脱羧化，然后脱保护，并还原，得到所需的产物；(f)如果1＝3且R2是3，5-二羟基-4-甲基，则(i)在四氢呋喃和六甲基磷酰胺(HMPA)中用二异丙基酰胺锂(LDA)处理α-N，N-二甲基氨基-α-氰基-(3，5-二甲氧基-4-甲基)亚苄基，得到阴离子，然后(ii)用α，ω-二溴烷烃处理，得到(iii)与30％草酸水溶液一起回流，得到相应的二酰基化合物(iv)还原酰基(v)然后在乙酸中用溴化氢脱甲基，得到式(II)化合物；(g)如果1＝3，且R2是2，4-二羟基-3-甲基，则(i)按(b)中的步骤(i)和(ii)进行，只是在(i)中用2-甲基间苯二酚代替间苯二酚；(h)如果1＝2且R2是4-羟基-3-甲基，则(i)在多磷酸存在下，用邻用酚处理相应的二酸，得到相应的二酰基化合物(ii)然后还原酰基，得到式(II)化合物。8.权利要求6所定义的式(III)化合物的制备方法，该方法包括(i)用合适的试剂处理相应的二酸，得到酰二氯(ii)用2-萘酚处理相应的酰二氯，然后(iii)重排二酰基，和(iv)然后还原酰基，得到式(III)化合物。9.权利要求6所定义的式(IV)化合物的制备方法，该方法包括在酸催化剂存在下，用乙酰乙酸乙酯处理4-烷基间苯二酚，得到式(IV)化合物。10.抑制患者Ca2+-ATPase酶作用的方法，该方法包括给患者施用权利要求1所定义的式(I)化合物。11.权利要求10的方法，用于抑制血浆膜Ca2+-ATPase。12.治疗或预防患者心血管疾病的方法，该方法包括给患者施用权利要求1所定义的式(I)化合物。13.权利要求10、11或12的方法，其中式(I)化合物是式(V)化合物或式(VI)化合物。14.药物制剂，该制剂含有式(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)化合物或其可药用的衍生物以及可药用载体。15.药物制剂，该制剂含有5，7，2′，6′-四羟基-8-熏衣草烷基黄烷酮、5，7，6′-三羟基-8-熏衣草烷基黄烷酮、5，2′，6′-三羟基-8-熏衣草烷基-7-甲氧基黄烷酮或其可药用的衍生物以及可药用的载体。全文摘要式(I)化合物、其可药用衍生物在制备用于抑制Ca文档编号A61K31/365GK1124922SQ94192317公开日1996年6月19日申请日期1994年6月3日优先权日1993年6月3日发明者巴兹尔·D·鲁弗格里斯,科林·C·杜克,李钳申请人:悉尼大学