专利名称：人白细胞干扰素喷雾剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种新的天然或重组人白细胞干扰素[HuIFN-α]的液态或冻干另附溶剂的喷雾剂，它除含有人白细胞干扰素外，还含有保护剂，防腐剂和稳定剂的白蛋白，苯酚和EDTA-2Na。该药物剂型属聚射用药，与人白细胞干扰素的传统注射剂型相比，据有较高的生物利用度和较强的稳定性。该剂型可用于预防和治疗呼吸道病毒性感染或局部喷雾治疗带状疱疹，单纯性疱疹等局部病毒感染。
干扰素自1957年问世以来，仅有30多年历史，可发展十分迅速。已有多种治疗用的干扰素(IFN)得到各国批准上市，就美国而言，90年新上市的6种重组蛋白质新药，其中就有2个是IFN。已有大量事实证明，人IFN对许多严重病毒性疾病和恶性肿瘤确有一定疗效，这就引起医学界的极大重视。
IFN的本质是一种糖蛋白，为大分子活性物质。在胃肠道难以吸收并降解。与iv相比，它们的绝对生物利用度低于0.05％。原因是大分子活性物质进入消化道后，被各种酶降解；另一方面由于大分子活性物质不能通过消化道粘膜而进入血循环。这样寻找非注射途径给药成为众多学者研究的方向。IFN的使用途径和剂量是一个比较复杂的问题。至今尚无统一的规格和标准。首先在用药方法上有新的观点形成，以德国学者V.Zimmerman为突出代表，他认为现在的用药方法基本上是中世纪的用药方法，他提出的IFN的“聚射疗效”(杜平等现代临床病毒学，人民军医出版社，1991/12第一版P209)，即将药物直接送到所需的器官和细胞中去。这样可以避免中途损耗，从而达到使最小剂量的药物发挥最大疗效。IFN防治呼吸道感染报导最早的是在1973年由英国的Meigen Tyrrell提出的，他们发现用相对粗制的IFN-α能预防和降低实验性鼻病毒的感染率。
国外还有多家文献报道，用IFN-α喷雾治疗既有效又省药。LethemMichbelI(Ad DugDehevery Rer 11[3]271，1993)报道用气雾方式将IFN-α喷于支气管粘膜，其作用更为显著；Meigen Tyrrell发现用相对粗制的IFN-α喷鼻就能有效地防治呼吸道鼻病毒感染；Fenner F(Medical Virklogy2nd ed P246 Academic Press，New York 1976)研究证明呼吸道感染用局部疗法更好，并且认为干扰素作用于被病毒感染的部位，可以获得更大的疗效，而且作用还比较持久，药物容易达到靶细胞发挥疗效，从而可以避免全身性给药所致之不良反应；Tyrrel DA等国外学者(Medical Tribune 2228，1981)还纷纷报道干扰素防治病毒性疾病(流感、肺炎)都取得了显著疗效。
国内亦有多家文献报道用IFN-α喷雾，药量小，疗效好。陆高明(江苏医药299，1994)应用小剂量(2.5-5万IU)干扰素与病毒唑7.5mg/kg加生理盐水25ml超声雾化吸入治疗小儿病毒性肺炎120例，显效90例，总有效率95％，比常规治疗对照组总有效率60％高0.6倍，P＜0.01；史秀英(实用儿科临床杂志4312，1993)曾用小剂量干扰素(一次1.5万IU，每日2次，连用3-7天)喷雾吸入治疗毛细支气管炎48例，总有效率98％，特点是见效快，疗效好，安全，易行，适于临床推广；汪企惠(实用儿科临床杂志5292，1989)曾用IFN-α0.7万IU/ml，每周2次，连用4周，预防流行性腮腺炎163例，比对照组(无预防措施676例)发病率低近2倍，效果非常显著，且无任何不良反应；于国祥(中国免疫杂志152，1990)比较了肌注、滴鼻和雾化吸入等三种给药方法的粗制的IFN-α0.4-1.8万IU/ml，预防260名＜4岁小儿急性呼吸道病毒性感染的效果和空白对照相比，以雾化吸入者效果最好；胡新元(医药情报通讯217，1990)用IFN-α治疗肺结核在多种给药方法中雾化吸入治疗早期肺结核效果最好；范中善(第二军医大学学报5433，1990)用IFN-α局部喷雾治疗慢性宫颈炎275例，总有效率为93％。
鼻腔给药，与其他给药途径相比，鼻腔是蛋白质和肽类药物进入循环系统的有效方式。Igawa Takeshi等在小鼠、大鼠、兔和狗等动物上研究了HuIFN-β鼻腔给药吸收浓度，证明HuIFN-β能透过这四种动物的鼻粘膜，仅表现不同动物血浆HuIFN-β时间曲线的不同。至于气雾化的气溶胶形式对吸收更为有利。微粒直径在5μm以下的颗粒肺泡可以直接吸收，这样对肺部病毒感染有直接作用。由于是无刺激性和无毒性蛋白，呼吸道对它有很好的耐受性。Hagden Federich G等(Autiviral Res 19878(3)139-49)研究了健康受试者长期，低剂量给rIFN-α2a(Feron A)3或6MU/天，共28天，观察耐受性和病理变化。有几例产生抗IFN抗体。据大量文献报道，通常剂量在(is、im)3×106IU(3MU)以上均会出现全身副作用，如发热、寒战、头痛等感冒样症状。综上所述，小剂量IFN聚射疗法之所以起到如此大的作用，并非IFN直接杀病毒作用，而是IFN可启动自身IFN系统，使患者诱生自身产生IFN，因而增强抗病毒能力。
关于IFN的喷雾疗法(或称雾化吸入)国内外均有报道。但这些报道多限于极小范围个别医院病房内的治疗方法，还不是一种完善的产品，不能工业化生产。本发明的新药，在药剂的组成、工艺、毒理、药理和临床试用等临床前的各方面研究均已都取得了比较令人满意的结果。
本发明的人白细胞干扰素喷雾剂与传统的干扰素注射剂型相比具有制造工艺和设备简单、生产周期短、成本低、药物用量少、见效快、疗效好、无毒副反应和使用方便的优点。本发明制备的人白细胞干扰素喷雾剂主要用于防治呼吸道病毒感染喷于病毒感染局部，药物直接作用于靶细胞，集中于感染部位，使患者很快进入抗病毒状态，见效快，能迅速中止流行性腮腺炎的流行，对风疹、水痘的防治效果也很好。通常注射用的IFN-α，每次需用百万单位以上才见效。而本发明的药剂每次仅用2000-4000IU时就有效，该量仅为注射剂用量的1/500-1/250，大大节约了IFN-α。由于IFN-α本身价格比较高，因此从经济观点而言，本发明的制剂更易于被患者接受。并且，大量的资料表明IFN-α的剂量在百万单位以上者，会出现不同程度的毒付作用，常见的有寒战，发烧等“感冒”样症状，可逆性骨髓抑制等，而本发明的HuIFN-α喷雾剂为局部用量，剂量小，在千余名幼儿中使用，未见到任何毒副作用。另外，本发明的产品使用方便，患者可自行喷用且无痛苦，无刺激性。本品可避免注射时的疼痛，特别适于婴幼儿和老年人使用。
本发明的人白细胞干扰素喷雾剂含有活性成分人白细胞干扰素(HuIFN-α)、人血清白蛋白、苯酚和EDTA-2Na。其中，人白细胞干扰素的含量为2000-400,000IU/ml，优选为10,000-40,000IU/ml；人血清白蛋白的含量为0.1-3％，优选0.3％；苯酚的含量为0.15-0.5％，优选为0.15％；EDTA-2Na的含量为0.01-0.075％，优选为0.01％.本发明中所述含量％均指重量百分比。
用于本发明的人白细胞干扰素通过如下方法制备。健康献血员(不携带病菌和病毒)血液，分离白细胞层，经0.83％NH4CL裂解，洗脱制成白细胞悬液，在新城鸡瘟病毒NDV(100IU/ml)刺激和IFN-α诱导下生产出粗制干扰素，再经国产微孔玻璃粉吸附层析和CM柱层析纯化得纯化人白细胞干扰素，经有关检验合格，作为本发明的主要原料药，冻存或冻干备用。使用时，将合格冻存或冻干的人白细胞干扰素融化或溶解后，取小样，再测IFN-α效价，并做无菌试验。且以此效价为准，调整到所需浓度。将组成本发明喷雾剂的各组份按上述含量要求混合均匀后，除菌过滤，无菌分装到5ml，10ml或45ml/瓶的喷雾容器内，再以火棉胶密封。
实施例1按照人白细胞干扰素HuIFN-α40,000IU/ml，人白蛋白0.3％，苯酚0.15％，EDTA-2Na0.01％的组成比例，将它们充分混匀，除菌过滤后，无菌罐装到5ml，上海产茶色玻璃瓶硬塑料喷头的手压式微型喷雾器内，火棉胶密封。
实施例2-4按照实施例1的方法制备下述组成的喷雾剂，不同的只是实施例2-4中分别将制得的药液无菌罐装到45ml、10ml和5.0ml的手压式微型喷雾器内。
实施例 2 3 4人白细胞干扰素HuIFN-α(IU/ml)2,000 10,000100,000人白蛋白 0.1％ 0.3％ 3％苯 酚 0.15％ 0.15％0.5％EDTA-2Na 0.01％ 0.01％0.075％实施例5 预防上呼吸道病毒感染的疗效解放军总医院幼儿园在313人2-6岁儿童中使用实施例1制得的喷雾剂，平均每日吸入1次，疗效明显，结果见表1表1 HuIFN-α预防上呼吸道病毒感染疗效观察年龄病例数 发病数(％)(岁)给药组 对照组 给药组对照组5-6 38 39 3(7.89) 5(12.82)4-5 63 61 9(14.24) 21(34.43)3-4 58 54 10(17.24) 15(27.78)共计159 154 22(13.84) 41(26.62)从表中结果可见，给药组比对照组的发病低一半左右。六建幼儿园有1名5岁女孩，叫季璐，以前每10天半个月的总要感冒发烧1次，孩子瘦小、身质差。自用了本发明的IFN-α喷雾剂后，到现在半年未生病，身体状况明显好转。营房设计院有1名4岁女孩，天坛医院幼儿园有个1岁的男孩，情况同上。天坛医院幼儿园自9月初以来，流感流行，平均每天有10-15名儿童，特别是小班1岁的小孩流感伴发烧，但从9月8日开始使用本发明实施例1的喷雾剂后(2周内喷11次)到10月7日无1例发病。
实施例6 预防流行性腮腺炎、水痘、风疹的疗效本发明实施例3研制的HuIFN-α在上述三种病毒性疾病中也见到明显的疗效。天坛医院幼儿园于94年1月开始到5月30共有流行腮腺炎患儿22例，曾用板兰根、大青叶等6味中药煎服2周，加服Vc等措施，均未中止流行，从5月30日开始喷本发明的IFN-α喷雾剂，每日一次，在6月5日和6月6日仅有两例发病(已是流行腮腺炎腮的潜伏期)，之后，凡使用者无1例发病，有1名女孩，叫王琦，因家长拒绝接受IFN-α喷雾，全班就她1人发病，而且伴发烧，结果详见表2。
表2 HuIFN-α喷雾剂使用前后发病率的比较使用前使用后病种病例数％ 病例数 ％流行性腮腺炎 2212.90 21.2水痘 116.4700风疹 5 2.9400流感 158.8200▲水痘459.0000▲为六建幼儿园的资料其他为天坛幼儿园的资料以上结果可见，本发明研制的HuIFN-α对流感、流行腮腺炎、水痘、风疹等病毒性疾病均有较好的预防效果。并且使用中未见到任何毒副作用。
IFN-α对各种病毒性疾病的疗效已为国内外所公认[3]。本发明研制的IFN-α喷雾剂仅是剂型的改变。由于上述疾病均为小儿呼吸道常见的传染病，采用喷雾吸入，可使IFN-α直接作用到靶细胞上，使之发挥更大的作用。另外，鼻腔喷雾有吸收好、持续时间长的优点。低剂量IFN-α起到这样大的作用，除因直接作用在靶细胞上外，更重要的是少量IFN-α可激活自身的IFN-α系统，使儿童产生自身IFN，在病毒侵入和启动IFN诱生情况下，产生IFN极快，一般只需半小时[4]。反复上感的儿童，一般体内IFN含量低于正常儿童[5](仅约50％)。这样在小剂量IFN诱生下，可使体内产生大量的自身IFN。可提高抵抗各种病毒感染的能力，儿童少病，身体壮，吃的多，使之全身健康状况步入良性循环。
权利要求
1.一种天然或重组人白细胞干扰素HuIFN-α喷雾剂，其特征在于它含有有效量人白细胞干扰素HuIFN-α，人血清白蛋白，苯酚和EDTA-2Na。
2.根据权利要求1的喷雾剂，其中所述人白细胞干扰素的含量为2000-400,000IU/ml，人血清白蛋白的含量为0.1-3％，苯酚的含量为0.15-0.5％和EDTA-2Na的含量0.01-0.075％。
3.根据权利要求1的喷雾剂，其中所述人白细胞干扰素的含量为10,000IU/ml-40,000IU/ml，人血清白蛋白的含量为0.3％，苯酚的含量为0.15％和EDTA-2Na的含量0.01％。
4.一种天然或重组人白细胞干扰素HuIFN-α的制备方法，其特征在于将天然或重组人白细胞干扰素HuIFN-α，人血清白蛋白，苯酚和EDTA-2Na充分混匀，除菌过滤后，进行无菌封装或冻干另附溶剂封装。
5.一种如权利要求4所述的方法，其中所述的人白细胞干扰素的含量为2000-400,000IU/ml。
6.一种如权利要求4所述的方法，其中所述的人白细胞干扰素的含量为10,000IU/ml-40,000IU/ml。
7.一种如权利要求4所述的方法，其中除菌过滤后的药液，无菌分装到5.0ml/瓶的手压式微型喷雾器中。
8.一种如权利要求4所述的方法，其中除菌过滤后的药液，无菌分装到10.0ml/瓶的手压式微型喷雾器中。
9.一种如权利要求4所述的方法，其中除菌过滤后的药液，无菌分装到45ml/瓶的手压式微型喷雾器中。
全文摘要
本发明涉及一种人白细胞干扰素[HuIFN-α]的液态或冻干另附溶剂的喷雾剂，它除含有人白细胞干扰素外，还含有保护剂、防腐剂和稳定剂的白蛋白、苯酚和EDTA-2Na。该喷雾剂用于防治呼吸道病毒性感染或带状疱疹和单纯性疱疹等局部病毒性感染。
文档编号A61K38/21GK1132098SQ95102788
公开日1996年10月2日 申请日期1995年3月30日 优先权日1995年3月30日
发明者杨文德, 赵相, 薛政国, 蒋根荣 申请人:北京兴华生物新技术开发中心, 北京毕奥普罗生物工程有限公司