猪融合干扰素的制作方法
【专利摘要】本发明提供一种猪融合干扰素，该猪融合干扰素具有如下所示的氨基酸序列:(猪干扰素多肽)-(连接子)n-(猪免疫球蛋白Fc片段)；或(猪免疫球蛋白Fc片段)-(连接子)n-(猪干扰素多肽)；其中n为0或1至10的整数，且该猪融合干扰素可与抗猪干扰素的抗体专一性结合，并且与抗猪免疫球蛋白Fc段的抗体专一性结合。本发明并提供一种含有上述猪融合干扰素及/或猪干扰素的猪只抗病毒医药组合物、一种上述猪融合干扰素在制备动物抗病毒药物中的用途，以及一种猪干扰素在制备动物抗病毒药物中的用途。
【专利说明】猪融合干扰素
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种猪融合干扰素的制备，以及这种猪融合干扰素在抗病毒上的应 用。
【背景技术】
[0002] 长期以来，动物感染毒性疾病往往无特效药可以用来治疗，通常都是以支持性疗 法来耐过病毒侵袭，靠自身免疫力来抵御病毒。随着生技产业的发展，人类已经出现多种抗 病毒药物，可以用来治疗病毒性疾病，而这些抗病毒药物主要分为三类：生化药物、核苷酸 类似物、干扰素。这三类抗病毒药物中，目前以干扰素被认为是最具有潜力的选择用药，因 为干扰素具有多重生物活性，不但有抗病毒活性，也具有免疫调节、促进细胞分化和抗肿瘤 功能；其中，干扰素的抗病毒作用，主要是由第一型干扰素（IFNCI/3 )所负责。
[0003] 目前市面上的干扰素制剂，多为针对人类所开发设计，例如：用来治疗人类B型与 C型肝炎等病毒性疾病以及卡波西氏瘤（Kaposi' S sarcoma, KS)、黑色素肿瘤（malignant melanoma)等肿瘤疾病上的干扰素。
[0004] 至于经济动物方面，对于病毒性的疾病，并没有像人类一样具有商品化的抗病毒 药物。若无有效的疫苗来预防某一动物病毒，当畜群受该病毒感染时，只能使用支持性疗法 处理，但效果往往不彰，而造成畜牧业重大损失；因此，动物干扰素的开发，对动物保健产业 而言，可说是刻不容缓且极为重要的事。
【发明内容】
[0005] 本发明提供一种猪融合干扰素，该猪融合干扰素具有如下所示的氨基酸序列：
[0006] (猪干扰素多肽）_(连接子）n_(猪免疫球蛋白Fc片段）；或 [0007](猪免疫球蛋白Fc片段）-(连接子） n_ (猪干扰素多肽）；
[0008] 其中n为0或1至10的整数；且
[0009] 该猪融合干扰素可与抗猪干扰素的抗体专一性结合，并且与抗猪免疫球蛋白Fc 段的抗体专一性结合。
[0010] 该猪干扰素多肽与如SEQ ID N〇S:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16& 17所示之氨基酸序列其中至少一者具有至少80%序列同源性，较佳者，具有85%序列同源 性，更佳者，具有90%序列同源性，甚至是91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%序列同 源性。于一实施例中，该猪干扰素多肽选自于由如SEQ ID Nos:l、2、3、4、5、6、7、8、9、10、ll、 12、13、14、15、16及17所示之氨基酸序列所组成之群组中至少一者。
[0011] 该猪免疫球蛋白Fc段与如SEQ ID Nos: 18、19、20、21及22所示之氨基酸序列其 中至少一者具有至少80%序列同源性，较佳者，具有85%序列同源性，更佳者，具有90%序列 同源性，甚至是91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%序列同源性。于一实施例中，该猪 免疫球蛋白Fc段选自于由如SEQ ID Nos: 18、19、20、21及22所示之氨基酸序列所组成之 群组中至少一者。
[0012] 该连接子至少含有一个以上的甘氨酸（Glycine，Gly)，该连接子包含但不限于： Gly-Gly、Gly-Ser、如 SEQ ID Nos:23、24、25、26、27、28、29、30、31、32 所示的氨基酸序列。 [0013] 本发明所提供的猪融合干扰素是藉由基因重组技术而得。先将编码猪融合干扰素 蛋白的DNA序列选殖到表现载体中，形成含有编码猪融合干扰素蛋白的DNA序列的质体，再 将该质体选殖到表现系统中，经过诱导蛋白质表现后得到猪融合干扰素。
[0014] 该表现载体可为原核生物表现载体或真核生物表现载体。该原核生物表现载体包 含但不限于PET系列表现载体以及pGEX系列表现载体。该真核生物表现载体包含但不限于 pSecTag系列表现载体。表现载体包含但不限于：pcDNA系列、pVAX系列、pAd系列、pLenti 系列。
[0015] 该表现系统可为原核生物表现系统（如：细菌）或真核生物表现系统（如：酵 母菌、昆虫细胞、植物细胞和哺乳动物细胞等）。细菌的实例包括，但不限于，大肠杆菌 (Escherichia coli)。哺乳动物细胞的实例包括，但不限于，3T3细胞、中国仓鼠卵巢细 胞（Chinese hamster ovary cells，CH0 cells)、幼鼠肾细胞（baby hamster kidney cells, BHK cells)、人类子宫颈癌细胞（HeLa cells)，以及人类肝癌细胞〇fepG2cells)等。 [0016] 本发明亦提供一种猪只抗病毒医药组合物，包含：一猪干扰素与一上述的猪融合 干扰素至少其中之一，以及一医药上可接受的载剂。其中该猪干扰素具有如SEQ ID Nos:l、 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16及17所示之一的氨基酸序列，且该猪干扰素可 与抗猪干扰素的抗体专一性结合。
[0017] 本发明并提供一种猪融合干扰素在制备抗病毒药物中的用途，该猪融合干扰素 可有效抑制DNA病毒与RNA病毒在宿主细胞内的增殖，该病毒包含但不限于猪伪狂犬病 病毒（pseudorabies virus, PRV)、猪繁殖与呼吸道综合症病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)、猪小病毒（parvovirus)、猪传染性胃肠炎 病毒（Transmissible gastroenteritis coronavirus, TGEV)、日本脑炎病毒（Japanese encephalitis virus, JEV)、猪轮状病毒（Rotavirus)、猪环状病毒第二型（Porcine circovirus type2，PCV2)、猪口蹄疫病毒（foot and mouth disease virus, FMDV)、猪癌 病毒（hog cholera virus, HCV)、非洲猪癌病毒（African swine fever virus)、猪痘病毒 (swinepox virus)、猪细胞巨大性病毒（porcine cytomegalovirus)、猪流行性下痢病毒 (porcine epidemic diarrhea virus)、猪水痛病病毒（swine vesicular disease virus)、 猪铁士古病毒（porcine teschovirus)、猪星状病毒（procine astrovirus)。
[0018] 本发明又提供一种猪干扰素在制备抗病毒药物中的用途，该猪干扰素可有效 抑制DNA病毒与RNA病毒在宿主细胞内的增殖，该病毒包含但不限于猪伪狂犬病病 毒（pseudorabies virus, PRV)、猪繁殖与呼吸道综合症病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)、猪小病毒（parvovirus)、猪传染性胃肠炎 病毒（Transmissible gastroenteritis coronavirus, TGEV)、日本脑炎病毒（Japanese encephalitis virus, JEV)、猪轮状病毒（Rotavirus)、猪环状病毒第二型（Porcine circovirus type2，PCV2)、猪口蹄疫病毒（foot and mouth disease virus, FMDV)、猪癌 病毒（hog cholera virus, HCV)、非洲猪癌病毒（African swine fever virus)、猪痘病毒 (swinepox virus)、猪细胞巨大性病毒（porcine cytomegalovirus)、猪流行性下痢病毒 (porcine epidemic diarrhea virus)、猪水痛病病毒（swine vesicular disease virus)、 猪铁士古病毒（porcine teschovirus)、猪星状病毒（procine astrovirus)。
[0019] 本说明书中所述之所有技术性及科学术语，除非另外有所定义，皆为该所属领域 具有通常技艺者可共同了解的意义。
[0020] 本发明系以下面的实施例予以示范阐明，但本发明不受下述实施例所限制。
【专利附图】
【附图说明】
[0021] 图1 :为以不同抗体侦测带有编码猪融合干扰素基因的CHO细胞所表现的蛋白中 是否含有猪融合干扰素（SEQ ID No:l-SEQ ID No:23-SEQ ID No:22)的结果；M:蛋白质标 记；第1道：带有编码猪融合干扰素基因的CHO细胞所表现的蛋白的SDS-PAGE分析图；第2 道：以mouse anti porcine IFNa单株抗体分析；第3道：以mouse anti His单株抗体分 析；第4道：以goat anti porcine IgG抗体分析。
[0022] 图2 (A) - (C):为以不同抗体侦测带有编码猪融合干扰素基因的CHO细胞所表现的 蛋白中是否含有猪融合干扰素的结果；M:蛋白质标记，第1道：猪干扰素（SEQ ID N〇:2); 第2道：猪免疫球蛋白Fe片段（SEQ ID No:22);第3道：猪融合干扰素（SEQ ID No:2-SEQ ID No:33-SEQ ID No:22);图 2(A)为 SDS-PAGE 分析图；图 2(B)为以 mouse anti porcine IFNa单株抗体分析图；图2(C)为以goat anti porcine IgG抗体分析图。
【具体实施方式】
[0023] 实施例一猪干扰素基因选殖
[0024] 取三品系杂交猪（LXY-D)的血液分离周边血液单核细胞（Peripheral blood mononuclear cel 1，PBMC)，并以异硫氰酸狐（guanidine thiocyanate，GTC)法萃取总 RNA (total RNA)。接着将萃取的总RNA进行反转录聚合酶连锁反应（reverse polymerase chain reaction, RT-PCR)以进行cDNA合成；再将合成后的cDNA进行聚合酶连锁反应 (polymerase chain reaction，PCR)以选殖猪干扰素基因。以如下所示的猪干扰素特异性 引子进行PCR :
[0025] 正向引子（IFN-Fl):
[0026] 5，-CCCAAGCTTATGGCCCCAACCTCAGCC-3， (SEQ ID NO:34)
[0027] HindIII
[0028] 反向引子（IFN-Rl):
[0029] 5? -CCGCTCGAGCAGGTTTCTGGAGGAAGA-3' (SEQ ID NO:35)。
[0030] XhoI
[0031] PCR反应条件为先以95° C5分钟将DNA变性，接着以95° Cl分钟、55° C30秒、 72° C30秒进行30个循环，最后以72° C5分钟完成PCR反应。
[0032] 将PCR反应产物以洋菜胶电泳（agarose electrophoresis)分析确认产物片段大 小，接着以DNA纯化套组（台湾波仕特公司）进行PCR产物纯化。再分别将纯化后的PCR 产物以及表现载体pET20b以限制酶HindIII以及XhoI进行酶切反应后，再以DNA纯化套 组（台湾波仕特公司）纯化酶切后的PCR产物及表现载体，接着进行接合反应，将PCR产物 选殖到pET20b载体中并转殖（transformation)至表现宿主大肠杆菌（E.coli)中，选出带 有猪干扰素基因的质体的大肠杆菌，并进行定序确认选殖的PCR产物序列确实为猪干扰素 基因；结果共有17种不同的猪干扰素被选殖出来，其氨基酸序列分别如SEQ ID Nos: 1，2, 3 ，4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11，12, 13, 14, 15, 16 及 17 所示。
[0033] 实施例二猪免疫球蛋白IgG Fc片段基因选殖
[0034] 取新鲜猪脾脏，并以GTC法萃取总RNA。接着以RT-PCR进行cDNA合成，再将合成 后的cDNA进行PCR反应以选殖猪免疫球蛋白IgG Fc片段基因。以如下所示的猪免疫球蛋 白IgG Fc片段特异性引子进行PCR :
[0035] 正向引子（IgG-Fl):
[0036] 5' -CGGGATCCGGGAACAAAGACC-3' (SEQ ID NO:36)
[0037] BamHI
[0038] 反向引子（IgG-Rl):
[0039] 5' -CCCAAGCTTTTTACCCGGAGTC-3' (SEQ ID NO:37)。
[0040] HindIII
[0041] PCR反应条件为先以95° C5分钟将DNA变性，接着以95° Cl分钟、55° C30秒、 72° C30秒进行30个循环，最后以72° C5分钟完成PCR反应。
[0042] 将PCR反应产物以洋菜胶电泳分析确认产物片段大小，接着以DNA纯化套组（台 湾波仕特公司）进行PCR产物纯化。再分别将纯化后的PCR产物以及表现载体pET20b以 限制酶BamHI以及HindIII进行酶切反应后，再以DNA纯化套组（台湾波仕特公司）纯化 酶切后的PCR产物及表现载体，接着进行接合反应，将PCR产物选殖到pET20b载体中并 转殖至表现宿主大肠杆菌（E. coli)中，选出带有猪免疫球蛋白IgG Fc片段基因的质体的 大肠杆菌，并进行定序确认选殖的PCR产物序列确实为猪免疫球蛋白IgG Fc片段基因； 结果共有5种不同的猪免疫球蛋白IgG Fc片段被选殖出来，其氨基酸序列分别如SEQ ID Nos: 18, 19, 20, 21 及 22 所示。
[0043] 实施例三猪融合干扰素基因的构筑
[0044] 以PCR反应以及基因选殖技术连接由实施例一及实施例二选殖到的猪干扰素基 因及猪免疫球蛋白IgG Fc片段基因，以形成猪融合干扰素蛋白的DNA序列，该猪融合干扰 素蛋白具有以下结构：
[0045] (猪干扰素多肽）_(连接子）n_(猪免疫球蛋白Fc片段）；或
[0046] (猪免疫球蛋白Fc片段）_ (连接子）n_ (猪干扰素多肽）。
[0047] 其中n为0或1至10的整数。
[0048] 该猪干扰素多肽具有如 SEQ ID Nos:l、2、3、4、5、6、7、8、9、10、ll、12、13、14、15、16 及17所示之一的氨基酸序列。
[0049] 该连接子至少含有一个以上的甘氨酸，该连接子包含但不限于：Gly-Gly、 Gly-Ser、如 SEQ ID Nos:23、24、25、26、27、28、29、30、31、32 所示之一的氨基酸序列。
[0050] 该猪免疫球蛋白Fc段具有如SEQ ID Nos: 18、19、20、21及22所示之一的氨基酸 序列。
[0051] 将该DNA序列选殖到表现载体pcDNA3内，形成各种带有编码猪融合干扰素蛋白 的DNA序列的质体，并将该些质体转殖到表现宿主大肠杆菌（E. coli)中。接着将上述带有 编码猪融合干扰素蛋白的DNA序列的质体以脂质体试剂（Lipofectamine，Invitrogen公 司，美国）转染（transfection)至中国仓鼠卵巢细胞株（CH0 cells),依照脂质体试剂的 使用方式进行转染，并将转染后的CHO细胞以含有10%胎牛血清（FBS)的F12培养基、置于 37° C、5%C02培养箱内继续培养48小时。
[0052] 接着，以Zeocin抗生素筛选带有猪融合干扰素基因的CHO细胞。将经过转染的CHO 细胞株继代培养于24孔细胞培养盘中，以含有10%FBS、lOOUnits/ml青霉素（Penicillin)、 100Units/ml 链霉素（Streptomycin)和不同浓度（100 ?1000 u g/ml)的 Zeocin 抗生素 的F12培养基培养以进行筛选。接着将细胞以磷酸盐缓冲液（PBS)清洗两次后加入0. 125% 胰蛋白酶（Trypsin)进行消化，待细胞圆化后，摇晃角瓶使细胞脱落，以培养基将细胞冲散 悬浮，细胞培养于37° C、5%C02培养箱，继代多次后，将细胞培养基替换成含有10%FBS的 F12培养基，待细胞恢复原来生长速度后，以西方墨点法确认细胞是否带有猪融合干扰素基 因并且表现猪融合干扰素。
[0053] 西方墨点法方法如下，取上述细胞上层培养液以十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺胶 电泳分析（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE) 后，将胶体上的蛋白转印至PVDF膜上，并将转印后的PVDF膜置于blocking buffer (5%Skim milk，in TBST)中，于4° C作用16?24小时，以去除非特异性反应，再以TBST(10mM Tris-HCl pH8.0，150mM NaCl, 0.3%Tween20)清洗三次，每次五分钟，随后加入 mouse anti IFN a单株抗体（SANTA CRUZ)，该抗体事先以含有0. 5%skin milk的TBST稀释500倍，于室 温下轻轻摇晃作用1小时后，以TBST清洗六次，每次5分钟，再加入已标记碱性磷酸酶（AP) 的goat anti mouse抗体，该抗体事先以含有0.5%skin milk的TBST稀释2000倍，于室温下 轻轻摇晃作用1小时后，以TBST清洗6次，每次5分钟，再加AP受质NBT/BCIP (Bio-Rad)呈 色约5分钟后，倒掉显色剂以清水冲洗终止呈色反应。另外也使用已标记碱性磷酸酶（AP) 的goat anti-Porcine IgG之抗体（KPL)以及已标记碱性磷酸酶（AP)的mouse anti6XHis 单株抗体（invitrogen)侦测猪融合干扰素。西方墨点法分析结果分别如图1及图2(A)-(C) 所示。
[0054] 图1中的猪融合干扰素具有以下结构：
[0055] (猪干扰素多肽）_ (连接子）厂（猪免疫球蛋白Fc片段）；
[0056] 其中该猪干扰素多肽具有如SEQ ID N〇:l所示的氨基酸序列，该连接子具有如SEQ ID No:23所示的氨基酸序列，且该猪免疫球蛋白Fc段具有如SEQ ID No:22所示的氨基酸 序列。如图1所示，带有猪融合干扰素（SEQ ID No:l-SEQ ID No:23-SEQ ID No:22)基因的 CHO细胞分泌物可分别被mouse anti porcine IFNa 单株抗体、goat anti-Porcine IgG之 抗体（KPL)以及mouse anti6XHis单株抗体辨认，显示该细胞分泌物含有猪融合干扰素。
[0057] 图2 (A)-(C)中的猪融合干扰素具有以下结构：
[0058] (猪干扰素多肽）_ (连接子）r (猪免疫球蛋白Fc片段）；
[0059] 其中该猪干扰素多肽具有如SEQ ID N〇:2所示的氨基酸序列，该连接子具有如SEQ ID N〇:33所示的氨基酸序列，且该猪免疫球蛋白Fc段具有如SEQ ID N〇:22所示的氨基 酸序列。如图2(B)及（C)所示，带有猪融合干扰素（SEQ ID No:2-SEQ ID No:33-SEQ ID No:22)基因的CHO细胞分泌物可分别被mouse anti porcine IFNa单株抗体以及goat anti-Porcine IgG之抗体（KPL)辨认，显示该细胞分泌物含有猪融合干扰素。
[0060] 实施例四猪融合干扰素的制备
[0061] 将实施例三制得带有猪融合干扰素基因的CHO细胞以2X IO6颗细胞数接种 培养于25平方公分细胞培养瓶（25T-f lask)中，并以含有10%FBS以及lOOUnits/ml Penicillin和IOOUnits/ml Streptomycin的F12培养基培养24小时后，去除原培养 基，以 PBS 清洗一次后，加入含有 1%FBS 以及 100Units/ml Penicillin 和 100Units/ml Str印tomycin的F12培养基，每隔72小时更换新的培养基（含有1%FBS以及100Units/ml Penicillin和100Units/ml Streptomycin)，并且收集被更换的细胞生长液，以1，OOOrpm 离心10分钟，将细胞以及细胞碎片去除，取其上清液，即获得猪融合干扰素。
[0062] 实施例五猪融合干扰素抗PRRS病毒活性的分析
[0063] 分别将实施例四获得的猪融合干扰素以及未与猪免疫球蛋白IgG-Fc片段融合的 猪干扰素，以含有 1%FBS 以及 100Units/ml Penicillin 和 100Units/ml Streptomycin 的 MEM培养基进行10倍、20倍、40倍、80倍、160倍、320倍、640倍、1，280倍、2, 560倍序列稀 释。并取MARC-145细胞接种至96孔细胞培养盘（I. 5X IO4颗/孔），培养于37° C、5%C02 培养箱中，培养16?24小时待细胞贴附后，移除培养基，加入上述稀释后的猪融合干扰素 或猪干扰素，每个样品100 Ul/Vell，每个稀释倍数的样品分别接种于4个孔中，于37° C、 5%C02恒温培养箱中培养细胞24小时后，移除上清液，并于每孔加入100 ill含有IOOTCID5q 的PRRS病毒；另外，亦有其他不同处理的组别：未攻毒未添加干扰素、有攻毒未添加干扰 素、添加干扰素未攻毒处理等其他三组；于37° C、5%C02培养箱中，经4-5天后，以MTT法判 读活性，进行干扰素抗病毒活性的测定。
[0064] 干扰素抗病毒活性的测定首先将细胞上清液移除，以PBS清洗两次后，加入 100iil80%丙酮（-20° C)，并于4° C下固定30分钟，接着移除丙酮以PBS洗三次后，加入 1%氯化甲基玫瑰苯胺（methylrosaniline chloride)染色20分钟，再以蒸馈水洗5次，去 除未染上细胞的氯化甲基玫瑰苯胺，最后将蒸馏水吸干并加入100%乙醇将氯化甲基玫瑰 苯胺的颜色溶出来，作用10分钟后，再以ELISA reader在吸光值波长（0.D)550nm下读取 吸光值，并以下列公式计算干扰素抗病毒活性。
【权利要求】
1. 一种猪融合干扰素，包含下列氨基酸序列： (猪干扰素多肽）-(连接子）n_ (猪免疫球蛋白Fc片段）；或 (猪免疫球蛋白Fc片段）-(连接子）n-(猪干扰素多肽）； 其中η为0或1至10的整数； 其中该猪干扰素多肽具有如 SEQ ID Nos:l、2、3、4、5、6、7、8、9、10、ll、12、13、14、15、16 及17所示之一的氨基酸序列； 其中该连接子具有如 Gly-Gly、Gly-Ser、如 SEQ ID Nos:23、24、25、26、27、28、29、30、 31、32、33所示之一的氨基酸序列； 其中该猪免疫球蛋白Fc段具有如SEQ ID Nos: 18、19、20、21及22所示之一的氨基酸 序列；且 该猪融合干扰素可与抗猪干扰素的抗体专一性结合，并且与抗猪免疫球蛋白Fc段的 抗体专一'I"生结合。
2. -种猪只抗病毒医药组合物，包含： 一如权利要求1所述的猪融合干扰素；以及 一医药上可接受的载剂。
3. 如权利要求2所述的猪只抗病毒医药组合物，其特征在于，该猪干扰素具有如SEQ ID Nos:l、2、3、4、5、6、7、8、9、10、ll、12、13、14、15、16 及 17 所示之一的氨基酸序列，且该猪 干扰素可与抗猪干扰素的抗体专一性结合。
4. 一种如权利要求1所述的猪融合干扰素在制备动物抗病毒药物中的用途。
5. 如权利要求4所述的用途，其特征在于，该病毒为猪伪狂犬病病毒（pseudorabies virus, PRV)、猪繁殖与呼吸道综合症病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)、猪小病毒（parvovirus)、猪传染性胃肠炎病毒（Transmissible gastroenteritis coronavirus, TGEV)> 日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)、猪轮状病毒（Rotavirus)、猪环状病毒第二型（Porcine circovirus type2，PCV2)、猪口蹄疫病毒（foot and mouth disease virus，FMDV)、猪癌病毒（hog cholera virus, HCV)、非洲猪癌病毒（African swine fever virus)、猪痘病毒（swinepox virus)、猪细胞巨大性病毒（porcine cytomegalovirus)、猪流行性下痢病毒（porcine epidemic diarrhea virus)、猪水疱病病毒（swine vesicular disease virus)、猪铁士古 病毒（porcine teschovirus)、猪星状病毒（procine astrovirus) 〇
6. -种如权利要求1所述的猪融合干扰素在制备动物抗病毒药物中的用途。
7. 如权利要求6所述的用途，其特征在于，该病毒为猪伪狂犬病病毒（pseudorabies virus, PRV)、猪繁殖与呼吸道综合症病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)、猪小病毒（parvovirus)、猪传染性胃肠炎病毒（Transmissible gastroenteritis coronavirus, TGEV)> 日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)、猪轮状病毒（Rotavirus)、猪环状病毒第二型（Porcine circovirus type2，PCV2)、猪口蹄疫病毒（foot and mouth disease virus, FMDV)、猪癌病毒（hog cholera virus, HCV)、非洲猪癌病毒（African swine fever virus)、猪痘病毒（swinepox virus)、猪细胞巨大性病毒（porcine cytomegalovirus)、猪流行性下痢病毒（porcine epidemic diarrhea virus)、猪水疱病病毒（swine vesicular disease virus)、猪铁士古 病毒（porcine teschovirus)、猪星状病毒（procine astrovirus) 〇
【文档编号】C07K19/00GK104292337SQ201310300830
【公开日】2015年1月21日 申请日期:2013年7月17日 优先权日:2013年7月17日
【发明者】郭村勇, 吴忠晋, 陈汉婷 申请人:施怀哲维克生物科技股份有限公司