专利名称：苯基环巳基酰胺的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及苯基环己基酰胺的新用途、新物质和它们的制备方法，特别是涉及苯基环己基酰胺作为治疗再狭窄的药物的用途。
现已发现通式(I)苯基环己基酰胺及其盐能令人惊讶地强烈抑制平滑肌细胞的增生，因而适宜用于控制再狭窄；所述通式(I)如下 式中D代表-CH基团或氮原子，R1代表苯基，具有3至6个碳原子的环烷基，或具有至多5个碳原子的直链或支链烷基，R2代表具有至多5个碳原子的直链或支链烷氧基羰基或式-CO-NH2或-CH2-OH基团。
按照本发明，所述苯基环己基酰胺还可以其盐的形式存在。一般来讲，这里可提及与有机或无机碱或酸形成的盐。
在本发明的范围中，优选生理上可接受的盐。按照本发明的化合物的生理上可接受的盐可以是按照本发明的物质与无机酸、羧酸或磺酸形成的盐。特别优选的盐是例如与下述酸形成的盐盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、丙酸、乳酸、酒石酸、柠檬酸、富马酸、马来酸或苯甲酸。
生理上可接受的盐还可以是具有游离羧基的按照本发明的化合物的金属盐或铵盐。特别优选的盐是例如钠、钾、镁或钙盐，和衍生自氨或有机胺的铵盐；所述有机胺有例如乙胺、二或三乙胺、二或三乙醇胺、二环己基胺、二甲氨基乙醇、精氨酸、赖氨酸、乙二胺或2-苯基乙胺。
按照本发明，可使用以立体异构形式存在的所述化合物，或者表现为像和镜像(对映体)，或者不表现为像与镜像(非对映体)。本发明涉及对映体和非对映体及其各自的混合物。象非对映体、外消旋形式还可按已知方法分离成立体异构相同的成分。
在控制再狭窄方面优先选用的通式(I)化合物是式中取代基如下定义的化合物及其盐D代表-CH基团或氮原子，R1代表苯基，环丙基，环戊基，环己基或具有至多4个碳原子的直链或支链烷基，R2代表具有至多4个碳原子的直链或支链烷氧基羰基，或者式-CO-NH2或-CH2-OH基团。
用于控制再狭窄的特别优选的通式(I)化合物是式中取代基如下定义的化合物及其盐D代表-CH基团或氮原子，R1代表苯基，环丙基，乙基或异丙基，R2代表具有至多4个碳原子的直链或支链烷氧基羰基，或者式-CO-NH2或-CH2-OH基团。
本发明还涉及具有下表中所示意义的取代基的通式(I)新化合物
通式(I)化合物按下述方法制备将通式(II)化合物水解，并使该酸(若合适，预先活化)在惰性溶剂中，若合适，在碱和/或脱水剂存在下与通式(III)苯基甘氨酸衍生物反应，并且，若R2/R2’＝-CO-NH2，若合适，由相应的酯出发，进行在醇中与氨的反应；所述通式(II)和(III)如下 式中R1和D的定义同上，和R3代表直链或支链的C1-C4烷氧基， 式中R2的定义同上。
按照本发明的方法可用以下反应图解举例说明
该方法适用的溶剂是在反应条件下不变化的常规有机溶剂，最好包括醚类，例如乙醚、二氧六环、四氢呋喃、乙二醇二甲醚，或烃类，例如苯、甲苯、二甲苯、己烷、环己烷或石油馏分，或卤代烃类，例如二氯甲烷、三氯甲烷、四氯甲烷，二氯乙烯、三氯乙烯或氯苯，或乙酸乙酯，三乙胺，吡啶，二甲亚砜，二甲基甲酰胺，六甲基磷酰胺，乙腈，丙酮或硝基甲烷。还可以使用所述溶剂的混合物。优选二氯甲烷和四氢呋喃。
可用于按照本发明的方法的碱一般是无机或有机碱，最好包括碱金属氢氧化物，例如氢氧化钠或氢氧化钾，碱土金属氢氧化物，例如氢氧化钡，碱金属碳酸盐，例如碳酸钠、碳酸钾或碳酸铯，碱土金属碳酸盐，例如碳酸钙，或醇的碱金属盐或碱土金属盐，例如甲醇钠或钾、乙醇钠或钾或叔丁醇钾，或有机胺类(三烷基(C1-C6)胺)，例如三乙胺，或杂环化合物，例如1，4-二氮杂二环〔2.2.2〕辛烷(DABCO)、1，8-二氮杂二环〔5.4.0〕十一碳-7-烯(DBU)、吡啶、二氨基吡啶、甲基哌啶或吗啉。还可以使用碱金属例如钠或其氢化物例如氢化钠作为碱。优选的碱是氢化钠，碳酸钾，三乙胺，吡啶和叔丁醇钾。
碱的用量一般为每摩尔式(III)化合物0.05-10mol，优选1-2mol。
按照本发明的方法一般在-50-+100℃、优选-30-+60℃范围内的温度实施。
按照本发明的方法一般在常压下实施。但也可以在加压或减压(例如在0.5-5巴范围内)下实施。
酰胺化可任选地借助于酰卤或混合的酸酐的活化步骤来进行，它们可由相应的酸通过与亚硫酰氯、三氯化磷、五氯化磷、三溴化磷或草酰氯或甲磺酰氯反应制得。
对此适宜的碱，除上述碱外，优选三乙胺和/或二甲氨基吡啶，DBU或DABCO。
碱的用量为每摩尔通式(III)化合物0.5-10mol，优选1-5mol。
用于该酰胺化反应的酸结合剂可以是碱金属或碱土金属碳酸盐，例如碳酸钠、碳酸钾，碱金属或碱土金属氢氧化物，例如氢氧化钠或氢氧化钾，或有机碱，例如吡啶、三乙胺、N-甲基哌啶，或二环脒类，例如1，5-二氮杂二环〔4.3.0〕壬-5-烯(DBN)或1，5-二氮杂二环〔5.4.0〕十-碳-7-烯(DBU)。三乙胺是优选的。
适宜的脱水剂是碳化二亚胺类，例如二异丙基碳化二亚胺、二环己基碳化二亚胺或N-(3-二甲氨基丙基)-N’-乙基碳化二亚胺盐酸盐，或羰基化合物，例如碳酰二咪唑，或1，2-噁唑鎓化合物，例如2-乙基-5-苯基-1，2-噁唑鎓-3-磺酸盐，或丙膦酸酐或氯甲酸异丁酯或六氟磷酸苯并三唑基氧基-三(二甲氨基)鏻或氨基磷酸二苯酯或甲磺酰氯，若合适，在碱例如三乙胺或N-乙基码啉或N-甲基哌啶或二环己基碳化二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺存在下。
酸结合剂和脱水剂的用量一般为每摩尔相应的羧酸0.5-3mol，优选1-1.5mol。
向相应的苯基甘氨酰氨基酰胺(R2/R2’＝-CONH2)的转化在室温用氨的醇溶液、优选氨饱和的醇如甲醇或乙醇、最好是甲醇溶液来进行。
通式(III)化合物是已知的，或者可按常规方法制备。
通式(II)化合物是新的，或者可按下述方法制备使通式(IV)化合物与通式(V)化合物在上述的溶剂中反应，若合适，在上述的碱存在下反应；所述通式(IV)和(V)如下 式中L代表典型的离去基团，例如氯、溴、碘、甲苯磺酸根或甲磺酸根，优选溴，和R3的定义同上， 式中R1和D的定义同上。
通式(I)化合物令人惊讶地显示出意想不到的有效的药理作用谱。
它们能抑制平滑肌细胞的增生，因此可用于治疗再狭窄。
此外，所述新物质还可用于治疗动脉硬化。本发明化合物抑制平滑肌细胞增生的研究。
为测定所述化合物的抗增生作用，使用用培养基移植技术(mediaexplant technique)〔R.Ross，J.Cell.Biol.50，172，1971〕由猪主动脉获得的平滑肌细胞。将这些细胞接种至适宜的培养皿通常是96孔平皿中并在培养基199和5％CO2中，于37℃培养2-3天；所述培养基含有7.5％FCS和7.5％NCS，2mM L-谷氨酰胺和15mM HEPES，pH7.4。然后通过除去血清2-3天使细胞同步化，然后用血清或其它因素刺激生长。同时，加入测试化合物。16-20小时后加入3H-胸苷，再过4小时后测定此物质渗入细胞的TCA-可沉淀的DNA中的情况。为测定IC50值，在连续稀释活性化合物时导致对由10％FCS所致胸苷渗入达到最大抑制的一半时计算该活性化合物的浓度。
表A实施例序号IC50(nM)16 0.2819 0.01本发明化合物抑制平滑肌细胞的c-fos基因表达的研究根据血清和生长因子中介的信号传递和平滑肌细胞信物系(reporter lines)中c-fos基因表达的诱导研究所述化合物的抗增生作用。这里所用的信物是虫荧光素酶，其表达受人c-fos启动子所控制。将c-fos启动子/虫荧光素酶构成物稳定地整合成大鼠平滑肌细胞系A10(ATCC CRL 1476)的染色体的DNA。将此信物细胞接种至96孔平皿中，并在含血清培养基(含有10％FCS、2mM L-谷氨酰胺和15mM HEPES的D-MEM，pH7.4)和5％CO2中于37℃培养1-2天。为抑制该c-fos启动子活性使其达到基值，通过去除血清将细胞抑制24小时。然后加入测试化合物，并用FCS或生长因子刺激该细胞以诱导虫荧光素酶活性。此处理期(4小时)过后，细胞被溶解，将其萃取物用于虫荧光素酶的测定。IC50值由在连续稀释活性化合物时导致对由特定刺激所致虫荧光素酶活性达到最大抑制的一半时的活性化合物的浓度来计算。
在空气灌注大鼠颈总动脉模型中抑制血管平滑肌细胞增生的活体研究用略改良的Fishman等人的方法(Lab.Invest.32，339-351，1975)进行在空气灌注大鼠颈总动脉模型中的抑制血管平滑肌细胞增生的活体研究；对动物的手术在Nembutal麻醉下进行。使右颈总动脉暴露并用2只血管钳在距颅侧约1.5cm距离的尾侧夹住。在此血管段的颅端插入插管，而将尾端通过用针刺穿孔。用生理盐水溶液清洗后，灌注空气流(25ml/分钟，4分钟)通过该段。然后除去血管钳，稍加压迫止血并将手术区域用伤口钳关闭。手术后8天将动物处死，并将上述空气灌注过的和作为对照的相应的对侧颈动脉段取出。
在该手术前2天开始给予测试物质(p.o.，i.v.，i.p.或s.c.)，然后在整个实验期间进行该处理(处理总持续时间10天)。
空气诱导的平滑肌细胞增生按照Helms等人的方法(DNA 43，39-49，1985)通过该颈动脉段的DNA含量来测定。为此，将该血管片用蛋白酶K进行酶降解，将DNA分离并用二苯甲酰亚胺(bisbenzimide)经荧光法测定(用来自鲱鱼精子的DNA作标准)。该血管的DNA含量最后以每mm颈动脉DNA的μg数表示。
为测定本发明化合物的抗增生作用，将囊状导管插入大鼠的颈动脉中，充气，并通过移动该导管而将该血管内部损伤〔Clowes A.W.，等人，Lab，Invest.第49卷，第3期，327页，1983〕。此损伤引起新内膜(neointimal)平滑肌增生，这引起狭窄。动物血管缩窄的程度这样来测定在2周后对该血管进行组织学处理，测量血管横切面上增生组织的表面积。
可将该新活性化合物按已知方法用惰性、无毒、适宜药用的赋形剂或溶剂转化成常规制剂，例如片剂、包衣片剂、丸剂、颗粒剂、气雾剂、糖浆剂、乳剂、悬浮剂和溶液剂。该治疗活性化合物在各制剂中存在的浓度应约为该总混合物重量的0.5-90％(重量)，即以足以达到所示剂量范围的量存在于各制剂中。
制剂例如按下述方法制备用溶剂和/或赋形剂扩充活性化合物，若合适，使用乳化剂和/或分散剂，例如在用水作稀释剂的情况下可以可选地使用有机溶剂作助溶剂。
按常规方式用药，优选口服或肠道外使用，特别是经舌或静脉内使用。
在肠道外使用的情况下，可采用适宜的液体赋形剂而使用活性化合物的溶液。
业已证明若静脉内给药，给药量一般为约0.001-20mg/kg体重、优选约0.01-5mg/kg体重，以获得有效的结果；若口服使用，则剂量为约0.01-50mg/kg体重，优选1-10mg/kg体重。
尽管如此，若合适，可能有必要偏离所述用药量，即根据体重或给药途径的类型、个体对药物的反应、其配制方式和给药时间或间隔来改变。因此，在某些情况下用低于上述最小量的量可能足以解决问题，而在其它情况下必需超过所述的高限。在使用较大量的情况下，最好将其分成若干单剂在一天内使用。
溶剂A＝二氯甲烷∶甲醇∶乙酸9∶1∶0.1B＝二氯甲烷∶甲醇∶氨 9∶1∶0.1C＝二氯甲烷∶甲醇起始化合物实施例I2-异丙基苯并咪唑 将6.54g(60mmol)2，3-二氨基吡啶、5.6g(60mmol)异丁酸和45ml多磷酸混合并在130℃加热6.5小时。6.5小时后，将混合物加至0.4l冰水中，用固体NaOH调至pH7。加入Na2CO3直至气体逸出完毕。将混合物用乙酸乙酯萃取3次。将合并的有机相用Na2SO4干燥并浓缩。产量8.45g(收率87％)Rf＝0.36(CH2Cl2/MeOH＝9∶1)实施例II反-2-〔4-(2-异丙基苯并咪唑基-1H-甲基)苯基〕-环己烷1-羧酸叔丁酯 将0.75gNaH(25mmol，浓度80％)悬浮于50ml DMF中，冷却至-10℃并在不超过0℃的温度下滴加4.03g(25mmol)2-异丙基苯并咪唑的DMF(60ml)溶液。搅拌15分钟后，在不高于0℃的温度下加入反-2-(对溴甲基苯基)环己烷-1-羧酸叔丁酯的DMF(110ml)溶液。于RT搅拌2.5小时后，将混合物用25ml 1N HOAc处理并浓缩。将残余物分配于乙醚/水中，将水相再萃取2次，将合并的有机相用Na2SO4干燥并浓缩，将产物用硅胶60(PE/EA＝3∶7)纯化。产量2.91g(收率28％)Rf＝0.73(CH2Cl2/MeOH＝9∶1)实施例III反-2-〔4-(2-异丙基苯并咪唑基-1H-甲基)苯基〕-环己烷羧酸 将2.91(6.7mmol)得自实施例II的化合物于RT与9ml三氟乙酸在9mlCH2Cl2中搅拌2.5小时。浓缩后，将残余物溶于二倍量乙醚中，并将溶液再次浓缩。将残余物分配于乙醚/H2O(pH10)中。使水相变为酸性并再萃取3次。将合并的有机相用H2O/NH4Cl振摇两次。用水振摇两次，用H2O/NaHCO3振摇1次并用H2O/NH4Cl振摇1次，然后用Na2SO4干燥并浓缩。产量2.2g(收率86％)Rf＝0.45(CH2Cl2/MeOH＝9∶1)制备实施例实施例1和实施例2反-2-{4-〔(2-环丙基苯并咪唑-1H-基-甲基)苯基〕}环己烷-1-羧酸-N-〔(S)-苯基甘氨醇〕酰胺 将0.39g(1mmol)反-2-{4-〔(2-环丙基苯并咪唑-1H-基)-甲基〕苯基}环己烷-1-羧酸加至0.14g(1mmol)L-苯基甘氨醇(glycinol)的CH2Cl2(10ml)溶液中。将混合物冷却至-10℃，用0.23g(1.2mmol)N’-(3-二甲氨基丙基)-N-乙基碳化二亚胺盐酸盐和0.3ml三乙胺处理并于室温搅拌过夜。关于后处理，将其用CH2Cl2处理，并用饱和NH4Cl、NaHCO3和(用H2O另外振摇后)NaCl水溶液各振摇1次。用Na2SO4干燥后将混合物浓缩，并将产物进行层析处理(硅胶60，CH2Cl2/MeOH＝20∶1)。产量0.16g(0.32mmol/Rf＝0.60(B)dia A(实施例1)0.18g(0.36mmol/Rf＝0.50(B)dia B(实施例2)按与实施例1和2类似的方法制得表1中所示的化合物
表1
实施例13反-2-〔4-(2-异丙基苯并咪唑基-1H-甲基)苯基〕环己烷-1-羰基(苯基甘氨酸甲酯)酰胺 将0.55g(1.46mmol)得自实施例III的化合物于-30℃在氩气下溶解，用在12ml DMF中的0.81ml(5.82mmol)三乙胺和0.12ml(1.6mmol)甲磺酰氯处理并搅拌1小时。然后滴加0.35g(1.7mmol)苯基甘氨酸甲酯、0.18g(1.46mmol)N，N-二甲氨基吡啶和0.24ml(1.72mmol)三乙胺溶于10ml DMF中的溶液，并将混合物在RT搅拌过夜。然后用H2O处理并用乙酸乙酯萃取3次。将合并的有机相用Na2SO4干燥并浓缩，将产物在硅胶60上层析(CH2Cl2/MeOH＝20∶1)。产量0.37g(收率48％)
Rf＝0.51(CH2Cl2/MeOH＝95∶5)实施例14和实施例15反-2-〔4-(2-异丙基苯并咪唑基-1H-甲基)苯基〕环己烷-1-羰基(苯基甘氨酰氨基)酰胺 将0.33g(0.64mmol)得自实施例13的化合物溶于1ml MeOH中并于RT与4ml NH3饱和的MeOH一起搅拌5天。然后将沉淀分出。并将溶液浓缩。将残余物用硅胶60(CH2Cl2/MeOH./NH3＝100∶5∶0.3)纯化。产量61mg(收率19％)dia A Rf＝0.36(CH2Cl2/MeOH.＝9∶1)实施例1435mg(收率11％)dia B Rf＝0.32(CH2Cl2/MeOH.＝9∶1)实施例15按与实施例14和15类似的方法制得表2中所示的化合物
表2
权利要求
1.通式(I)苯基环己基酰胺及其盐在制备治疗再狭窄的药物方面的用途，所述通式(I)如下 式中D代表-CH基团或氮原子，R1代表苯基，具有3至6个碳原子的环烷基，或具有至多5个碳原子的直链或支链烷基，R2代表具有至多5个碳原子的直链或支链烷氧基羰基或式-CO-NH2或-CH2-OH基团。
2.按照权利要求1的式(I)苯基环己基酰胺及其盐在制备治疗再狭窄的药物方面的用途，其中D代表-CH基团或氮原子，R1代表苯基，环丙基，环戊基，环己基或具有至多4个碳原子的直链或支链烷基，R2代表具有至多4个碳原子的直链或支链烷氧基羰基，或者式-CO-NH2或-CH2-OH基团。
3.按照权利要求1的式(I)苯基环己基酰胺及其盐在制备治疗再狭窄的药物方面的用途，其中D代表-CH基团或氮原子，R1代表苯基，环丙基，乙基或异丙基，R2代表具有至多4个碳原子的直链或支链烷氧基羰基，或者式-CO-NH2或-CH2-OH基团。
4.按照权利要求1的式(I)苯基环己基酰胺及其盐，其中取代基R1、R2和D具有下面所示的意义
5.按照权利要求4的苯基环己基酰胺的制备方法，其特征在于将通式(II)化合物水解，并使该酸(若合适，预先活化)在惰性溶剂中，若合适，在碱和/或脱水剂存在下与通式(III)苯基甘氨酸衍生物反应，并且，若R2/R2’＝-CO-NH2，若合适，由相应的酯出发，与氨醇反应；所述通式(II)和(III)如下 式中R1和D的定义同上，和R3代表直链或支链的C1-C4烷氧基， 式中R2的定义同上。
6.含有按照权利要求4的苯基环己基酰胺的药物。
7.按照权利要求6的药物用于治疗再狭窄。
8.按照权利要求6或7的药物的制备方法，其特征在于该将苯基环己基酰胺转化成适宜的给药形式，若合适，借助于常规助剂和赋形剂。
全文摘要
本发明涉及苯基环己基酰胺，其中一些是已知的，它们适宜在药物尤其是治疗再狭窄的药物中用作活性化合物。
文档编号A61P9/00GK1137380SQ9610257
公开日1996年12月11日 申请日期1996年2月1日 优先权日1995年2月1日
发明者M·米勒-格里曼, U·米勒, M·博克, S·蔡斯, C·格迪斯, A·东迪-贝蒂, R·格吕茨曼, S·洛马, S·沃尔费尔, O·亚金诺格鲁, J·艾尔丁, D·丹泽 申请人:拜尔公司