一种他克林-8-羟（胺）基喹啉衍生物及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种他克林-8-径(胺）基哇嘟衍生物及其应用，具体设及一种他克 林-8-径(胺）基哇嘟衍生物及其在抗阿茨海默症药物中的应用，属于生物医药技术领域。
【背景技术】
[0002] 阿茨海默症（Alzheimer'Sdisease,AD)是一种起病隐匿的进行性发展的神经 系统退行性疾病。AD的特征在于认知功能例如记忆、思考、理解、计算、语言、学习能力W及 判断能力的逐渐降低，当降低到足W影响个人日常生活行为时确诊为痴呆，65岁W前发病 者，称早老性痴呆；65岁W后发病者称老年性痴呆，是一种多因素导致的疾病，确切病因至 今仍无结论性的阐明，相当多的证据证明AD的几种形式具有可遗传的倾向，家族史、女性、 头部外伤、低教育水平、甲状腺病、母育龄过高或过低、病毒感染等因素与该病发病有关，作 为一种常见的老年疾病，严重威胁着老年人的健康。
[0003] 该病起病缓慢或隐匿，病人及家人常说不清何时起病，多见于70岁W上(男性平 均73岁，女性为75岁）老人，少数病人在躯体疾病、骨折或精神受到刺激后症状迅速明朗 化，女性较男性多（女：男为3 :1)。主要表现为认知功能下降、精神症状和行为障碍、日常 生活能力的逐渐下降。据统计目前中国患者超过560万，并随着人口老龄化进程呈快速增 长的态势。AD不仅严重危害老年人的健康，而且还给患者家属带来沉重的精神负担，为社会 带来巨大的健康危机，更对经济造成巨大的影响，因而引起人们的普遍关注。
[0004] 目前公认的几大致病机理包括β-样淀粉蛋白（Αβ)胞外自聚集形成毒性低聚 物，tau蛋白过憐酸化在胞内聚集形成神经纤维缠结，胆碱能神经损伤导致胆碱能传导障 碍，脑内金属离子浓度过高引起氧化应激并可诱导Αβ聚合形成毒性复合物等等。
[0005] 目前临床使用的最有效治疗药物为W胆碱醋酶作为祀点的乙酷胆碱醋酶抑 制剂（AQiEIs)，包括galanthamine(REMINYL)，rivasti卵ine炮(EL0N)，donepezil (ARICEPT)。但由于只针对单个病因，不能逆转或治愈疾病，同时存在肝脏毒性大、生物利用 度低等不同程度的缺陷。
[0006] 其他祀点抑制剂包括Αβ聚集抑制剂、tau蛋白过憐酸化抑制剂、金属离子馨合剂 等目前尚无药物上市，但已受到越来越多的重视，对复杂病因的疾病，多祀点协同治疗是一 个更好的策略，而目前针对AD，多祀点候选药物的开发是其主要研究方向。
[0007] 中国发明"8-径基哇嘟衍生物"，申请号03821942. 5公开了一种治疗、改善和/或 预防神经变性疾病的化合物，但不是针对AD的多祀点药物。
【发明内容】
[0008] 本发明的目的是寻找一类能同时对乙酷胆碱醋酶和β-样淀粉蛋白聚合具有高 抑制作用，并对金属离子（化2+，化2+)具有一定馨合作用的他克林-8-径(胺）基哇嘟衍生 物，用于治疗阿茨海默症，W及提供该类化合物的制备方法和用途。
[0009] 为实现上述目的，本发明采用的技术方案为： 一类他克林-8-径(胺）基哇嘟衍生物具有W下通式：如式I所示：
其中X为C:0，邸2， Y为0,畑； m为整数1，2,4,5 ; R为:S、飘<、氣。
[0010] 上述结构通式中： 当X为齡葱时， R为氨、5-氯、5-氣、6-氯、5, 7-二氯，m=1， W及生理可接受的盐； 当X为細2时， R为氨、5-氣、5, 7-二氯，m= 1， 2， 4,5， W及生理可接受的盐。
[0011] 上述结构通式由W下路线合成制得： 反应式1:
化合物Id的制备：从商品化的邻氨基苯甲腊出发，与环己酬在Ξ氣化棚乙酸作用下缩 合生成亚胺，反应溶剂一般采用甲苯、氯苯、二甲苯等等，在120°C反应3-4小时，生成的亚 胺在反应液中析出，过滤洗涂后直接用于下步，然后在碱作用回流生成他克林Ib，碱一般采 用氨氧化钢、氨氧化钟的水溶液，Ib直接过滤水洗、干燥即得；Ib再经氯乙酷氯酷化可得 Ic，反应采用Ξ乙胺、二异丙基乙基胺等作为缚酸剂，在-10-100°C进行，一般在80°C反应 4-5小时，所得产物可经适当方法如柱层析、重结晶提纯；Ic再与赃嗦连接可得Id,反应一 般采用乙醇作为溶剂，在舰化钢或舰化钟催化下反应，80°C反应2-3小时，所得产物可经 适当方法如柱层析、重结晶提纯。
[001引反应式2:
化合物Π的制备：从商品化的邻氨基苯甲酸出发，与环己酬在Ξ氯氧憐作用下缩合生 成9-氯他克林，120°C反应3-4小时，产物经碱化后可直接析出，过滤即得，然后与醇胺在 惰性溶剂中回流得到化合物Ig，所述惰性溶剂采用高沸点惰性溶剂如正戊醇、苯酪、甲苯、 氯苯、二甲苯等，反应在60-150 °C之间进行，所得产物可经柱层析或重结晶提纯；Ig在氯 化亚讽中回流3-4小时即得化合物比，比再与赃嗦连接可得Π，一般采用乙醇作为溶剂，在 舰化钢或舰化钟催化下反应，在80 °C下反应2-3小时，所得产物可经适当方法如柱层析、 重结晶提纯。
[001引 反应式3:
化合物In/In'的制备：从商品化的邻氨基苯酪或苯胺出发，在酸催化下与乙醒缩合环 化生成2-甲基-8? (胺）基哇嘟化，反应在60-120 °C进行，所得产物可经柱层析或重 结晶提纯；Ik用苄基或叔下氧基二碳酸酢保护得化合物Im或Im'，然后再经二氧化砸氧化 2-位甲基得2-甲酯基-8-径（胺）基哇嘟衍生物In或In'，一般采用酸类如四氨巧喃、 1，4-二氧六环等作为溶剂，反应溫度在60-100 °C之间为宜，所得产物可经柱层析或重结 晶提纯。
[0014] 反应式4:
化合物Id或li与In或In'在合适溶剂中ΚΞ乙酷基棚氨化钢还原，再在酸中脱保护 可得最终产物I。
[0015] 还原步骤中，反应溶剂一般可选用二氯甲烧、四氨巧喃、1,2-二氯乙烧等，最佳溶 剂为1，2-二氯乙烧，反应在0-50°C之间进行，一般在室溫条件下反应，所得产物可经柱层 析分离提纯。脱保护步骤中，苄基一般采用浓盐酸脱保护，反应溫度为l〇〇°C，叔下氧酷基采 用Ξ氣乙酸或盐酸脱保护，反应在室溫条件下进行，所得产物可经适当方法如柱层析或重 结晶提纯。
[0016] 胆碱醋酶抑制活性测试方法： 乙酷胆碱醋酶酶源采用电經冻干粉，下酷胆碱醋酶采用马血清冻干粉，实验前用憐酸 二氨钟缓冲液（PH= 7. 4)稀释至0. 2U/mL,用比色法测定A化E和Bu化E的抑制活性。反 应总容量为250μ以内含舰化硫代乙酷胆碱或舰化硫代下酷胆碱25μL(1mmol/L)，PH =7. 4的憐酸二氨钟缓冲液25μL化合物溶液25μL显色剂二（3-簇基-4-硝基）苯基 二硫化物（即Ellman's试剂，DTNB) 125μL(Immol/L)，最后加入稀释的酶溶液，在37 °C保溫5分钟后于405皿用paradigm微孔板检测仪测定吸光度，设定测试时间50分钟， 每5分钟读取一次吸光度数据。所有样品均平行测Ξ次，W未加化合物的测定组吸光度作 为100%，未加化合物和酶的测定组为反应需扣除的背景吸光度，测定的化合物组吸光度与 未加化合物组相比较，降低的百分率即为酶抑制率。每个化合物先W几个浓度进行初筛，按 初筛结果选择化合物的6至8个浓度测定其酶抑制率，并W该化合物摩尔浓度的负对数与 酶抑制率进行线性回归，求得50%抑制时的摩尔浓度即为该化合物的ICjt。
[0017] β-淀粉样蛋白的自聚集抑制活性测试方法： 0-淀粉样蛋白（Αβ142)冻干粉溶解于六氣异丙醇，室溫静置16个小时进行解聚，再 在室溫下用氮气流吹除六氣异丙醇，得解聚的Aβ142用DMS0溶解配制成浓度为200μΜ溶 液，用巧光法测定化合物的Αβ自聚集抑制活性。反应总容量为10 内含样品的DMS0 溶液5yL(浓度为200μΜ)，解聚的A0i42DMSO溶液5yL(浓度为200μΜ)，在37°C保 溫72h后加入硫黄素T的憐酸二氨钟缓冲液（PH= 7. 4)溶液40μL(浓度为200μM)， 在paradigm微孔板检测仪上读取巧光值，激发波长为485nm，发射波长下为435nm。所有 样品均平行测Ξ次，W未加化合物的测定组吸光度作为100%，测定的化合物组巧光值与未 加化合物组相比较，降低的百分率即为在20μΜ浓度下Αβ自聚集抑制率。
[0018] 依照上述方法测试所得部分化合物的活性结果列表如下： 表1:胆碱醋酶抑制ICw及Αβ自聚集抑制率
金属离子（化2+，化2+)稳定常数测试方法： 分别在紫外分光光度计上全波长（190-700nm)扫描20μΜ的待测样品和待测样品/Μ"+的光谱数据，确定待测样品的最大吸收峰波长和待测样品和金属离子馨合物的最大吸收 峰波长，然后在馨合物的最大吸收波长下，依次金属离子/待测样品(摩尔比从0-1. 5,样品 总浓度控制在20μΜ)的吸光度值，实验中发现，金属离子/待测样品摩尔比大于0. 5后， 吸光度值变化趋缓，表明化合物与金属离子配未比为2:1，并且用化bs方法进行了验证，确 定配位比为2:1;金属离子/待测样品摩尔比大于1后吸光度值基本保持不变，可近似认为 待测样品发生完全配位。然后依据公式
计算出化合物与化2+，化2+形成馨合物的稳定常数K及1巧。所得结果如下表所示： 表2:化合物与金属离子形成馨合物的稳定常数1巧
a.Clioquinol馨合物稳定常数文献值（Afeyr<9i〇yic〇y〇^2007,之式 445) 从表一看，所有化合物都对胆碱醋酶具有一定的抑制活性，其中化合物1-6在微摩尔 级，化合物7-17在亚微摩尔级，同时，大部分化合物还对Αβ142的自聚集具有较好的作用； 从表二看，大部分化合物对金属离子（化2+，化2+)均具有馨合作用。综合Ξ方面的活性数 据，化合物11，14具有较好的效果，对乙酷胆碱醋酶和下酷胆碱醋酶的抑制活性与他克林相 当或略优于他克林，对Aβ142的自聚集抑制率高达80. 5%和93. 2%，同时，能馨合金属离子 如化2+，化2+，稳定常数在9-10间，有望成为多祀点抗阿茨海默症药物的先导化合物。
[0019] 本发明的有益效果是：本发明的化合物具有抗阿茨海默症活性，能够抑制乙酷胆 碱醋酶和下酷胆碱醋酶活性，同时能够抑制β-淀粉样蛋白的自聚合并对金属离子特别是 化2\化2+具有一定的馨合作用，从而起到延缓乙酷胆碱的水解和β-淀粉样蛋白的自聚合， 提高乙酷胆碱在突触的作用，并调节脑内金属离子W达到对症治疗阿茨海默症的目的；同 时具有肝脏毒性小、生物利用率高的特点。
【具体实施方式】
[0020] 下面通过实例对本发明做进一步详细说明，运些实例仅用来说明本发明，并不限 制本发明的范围。
[0021] 实施例1 合成2-[(4-(8-径基哇嘟）-2-甲基）赃晚]-Ν-α，2, 3, 4-四氨叮晚-9-胺基）乙酷 胺1 称取化合物Id(0. 5mmol)和化合物In(0. 5mmol,R=Η)于25mL圆底瓶中，加入NaBH(0Ac)3α.0mmol)，DCE(化y，5血)，氣气保护下加热至50°C反应，TLC监测反应结 束后冷却反应液至室溫，加水洗涂，DCM萃取，浓缩干后经硅胶柱分离，所得产物加入37%肥1 (2mL)，加热回流1h，冷却后加水，K2CO3调至弱碱性，DCM萃取后浓缩干经硅胶柱分离得 化合物1，白色固体，收率66%。
[0022] 1 (400MHz,CDC!3)δ= 9. 22(S,1H),8. 14 化 /= 10. 0Hz, 1H),8. 00 (d, /=8.0Hz,IH), 7.71 (d, /=8.4Hz,IH), 7.66-7.61 (m, 2H), 7.48-7.41 (m, 2H), 7.32 (d, / =8.4Hz,IH), 7.16 (d, / = 7.6Hz,IH), 3.88 (s, 2H), 3. 33 (s, 2H), 3. 15 扣 / =6.4Hz, 2H), 2.85 - 2.80 (m,6H), 2. 70 (brs, 4H), 1. 99 - 1. 95 (m, 2H), 1. 90 - 1. 85 卵m(m, 2H) ; 口CNMR(100MHz,CDCI3,）δ= 168.6, 159.9, 156.8, 152.0, 147.0, 138.1, 137.5, 136.6, 129.0, 128.8, 127.6, 127.4, 127.1, 126.0, 12