专利名称：：免疫应答的调制的制作方法
技术领域：
：本发明涉及人体中与不适当的免疫应答相关的疾病的治疗。更具体地说，本发明涉及其中不适当的免疫应答与不适当的免疫细胞代谢活动相关的疾病的治疗，不适当的免疫细胞代谢活动又被介导，或者至少被认为与酪氨酸激酶级联(其中，蛋白质酪氨酸激酶(下文称它为“PTK”)起重要作用)相关，或者与免疫细胞中依赖于细胞周期蛋白的激酶(下文称它为“CDK”)相关。因此，本发明提供了与动物体(本文的该术语旨在包括人体)内不适当的免疫应答相关的多种疾病的治疗以及用于该治疗的药剂。人们熟知，免疫细胞在动物体的免疫系统中起重要作用。已鉴定了多种这样的细胞。在这些细胞中，人们公认T淋巴细胞(也称为T细胞)和B淋巴细胞(也称为B细胞)在动物体对外源感染的免疫应答中的重要作用。此外，能产生免疫介体的其它细胞也具有免疫功能。这类细胞对新异刺激物(例如动物体的病毒感染或细菌感染)或者对内源性免疫刺激物(例如致癌性转化)正常的或适当的应答会引起所述细胞代谢途径的活化，导致产生免疫介体(包括细胞因子、淋巴因子、趋化因子、生长因子和细胞毒性细胞)，并且通常还引起这类免疫细胞的增殖。免疫介体又履行或补充抑制功能，即抑制感染剂或由它释放的毒素，作为身体的自然感染对抗过程或康复过程的一部分。这些途径涉及复杂的生化系统和信号系统(下文将进一步涉及它们)。还熟知(目前未完全弄清其原因)，免疫系统的应答有时是异常的并且引起被认为不适当的产物的免疫细胞表达和分泌。虽然这种异常可能与这类细胞的异常增殖相关，但情况不一定如此。这种免疫细胞活性的异常可能仅仅由不适当量的免疫细胞产物的分泌表现，不一定与这类细胞的增殖活性的增大相关。不适当的免疫应答与影响人体和动物体的多种疾病相关。本发明涉及这类疾病的治疗(下文将阐明)。在所述疾病中，不适当的免疫应答的表现(包括存在细胞毒性细胞和／或不适当量的、对抗特定的感染或疾病所需的免疫细胞产物)，导致什么可能被认为是免疫系统对自身身体特定器官的攻击，或者甚至对整个身体的非特异性免疫攻击，而不是该攻击被适当地导向外部的或内源的抗原或介质或代谢物(例如由此产生的毒素)。这种不适当攻击的靶器官有多种并且从下文列举的疾病可看出包括皮肤、肌肉、骨骼结构、关节、血液、脑和神经系统，内部器官包括肠、肾、肺、肝，以及甚至感觉器官(包括眼睛)。在本发明涉及的一些疾病或综合征中，鉴定了免疫应答的初级或起始的病原体或刺激物。但是，这类疾病或综合征的一个特征在于，即使所述病原体或刺激物(例如病毒感染或微生物感染或者抗原的其它形式)已被身体的自我防御机制(即免疫系统)消除后，或者借助于药物或者通过这两者的结合消除后，免疫应答可能继续存在。在其它情况下，不知道或者至少尚未知道被识别的病原体。所有这些疾病都被认为是免疫介导的疾病。为了清楚地理解本发明的性质和影响效果，有必要简单地解释目前对体内免疫应答活动的性质的理解。免疫细胞(尤其是T淋巴细胞)就它们的生物功能来说依赖于通过T细胞受体(它是T淋巴细胞独有的并且只存在于T淋巴细胞表面)的信号转导。所述T细胞受体是复杂的一组表面分子，它包括CD4或CD8表面分子。CD4、CD8和某些其它的表面分子能从该细胞膜的外表面发送信号至细胞的内环境(即发送至细胞的细胞质)。这些信号是通过被称为酪氨酸激酶级联的酶途径发送的。活化的酪氨酸激酶使某些蛋白质磷酸化，导致新的信号中间体的产生。在该级联中，被称为蛋白质酪氨酸激酶[PTK]的酶起重要作用。该酶是一种以游离巯基为特征的蛋白质。酪氨酸激酶级联最后终止于T细胞内特定基因的表达。这些基因分别编码各种免疫介体(包括细胞因子)和细胞增殖所需的结构蛋白。如前所述，本发明涉及的免疫应答介导的疾病与免疫介体由免疫细胞的无控制表达以及无控制的细胞毒性细胞活性有关。二甲基甲酰胺或DMF在室温下是一种挥发性的非离子液体，人们熟知其作为工业溶剂的应用。它尤其被用于供人消费的各种产品的生产过程中，包括药物制品的生产过程。它的毒性被充分研究过了。已知它在比本发明所涉及的含量高很多倍的含量下是无毒的。DMF在人体内高浓度值下具有的这种毒性是由于它使肝中肝细胞内谷胱甘肽耗竭，导致肝细胞坏死。CryopreservationTechnologiesCC在1997年6月26日以WO97／22248公布的PCT申请PCT／US96／19697中声称二甲基甲酰胺和有关化合物可被用于病毒感染和／或微生物感染的治疗。该公布列举的实施例表明，可以经皮给患者施用DMF而使血液中DMF浓度达到100ppm的目标值，但据报导，在HIV阳性患者中实际达到的值不同于该目标值。它进一步报导了，在应用DMF的这种治疗不到三周之后，患者携带的病毒从120000／ml降到500／ml。它还报导了，用DMF治疗而使血液中DMF含量达到50～100ppm的患者中痤疮和风疹症状的改善。该公开涉及DMF作为抗病毒剂和抗微生物剂的应用，并且对于本发明涉及的化合物的免疫应答调节性能保持沉默，而且对于这类化合物在治疗免疫细胞相关的疾病方面的应用或者这类化合物在生产用于治疗这类病的药剂的应用方面保持沉默。本发明的一个目的是提供一种调制动物或人体内的免疫应答以及治疗与动物(包括人)体内不适当的免疫应答相关的疾病的方法。现已意外地发现了，与关于DMF的毒性以及抗病毒和抗细菌性能的现有技术知识不同的是，这样的产品能以亚毒性剂量(sub-toxicdosage)用来调制具有免疫功能的细胞中的免疫应答性代谢过程，即通过对身体施用DMF影响这样的过程而刺激或抑制由这类细胞表达或分泌免疫介体又不破坏该细胞。所以，本发明提供了一种影响动物的免疫应答的方法，该方法包括如下步骤给这样的动物施用无毒、免疫调制有效量的化合物，该化合物选自化学通式(Ⅰ)的化合物R1-CO-NR2R3(Ⅰ)其中，R1选自H和低级[即C1～C3]烷基和C2～C3链烯基；R2和R3相同或不同，并且各自选自H、低级[即C1～C3]烷基和C2～C3链烯基，它们任选可被卤化或羟基化，或者它们可以相互连接构成-(CH2)n-基(其中，n是2～5的任意数)或-(CH2)2-O-(CH2)2基，及其代谢物和前体药物。通过上述方法影响的免疫应答可能是构成身体免疫系统的一部分的免疫细胞的免疫应答。所述免疫细胞可能是T淋巴细胞和／或B淋巴细胞。可进行该方法而减少体内免疫细胞产物的表达或分泌。本发明另一方面提供了一种治疗患有疾病的动物(该疾病与该动物中不适当的免疫应答有关)的方法，该方法包括如下步骤给这样的动物施用无毒、治疗有效量的化合物，该化合物选自化学通式(Ⅰ)的化合物R1-CO-NR2R3(Ⅰ)其中，R1选自H和低级[即C1～C3]烷基和C2～C3链烯基；R2和R3相同或不同，并且各自选自H、低级[即C1～C3]烷基和C2～C3链烯基，它们任选可被卤化或羟基化，或者它们可以相互连接构成-(CH2)n-基(其中，n是2～5的任意数)或-(CH2)2-O-(CH2)2基，及其代谢物和前体药物。本发明又一方面涉及化合物在制备用于治疗患有疾病的动物(所述疾病与该动物中不适当的免疫应答有关)的方法中的药剂方面的应用，所述化合物选自化学通式(Ⅰ)的化合物R1-CO-NR2R3(Ⅰ)其中，R1选自H和低级[即C1～C3]烷基和C2～C3链烯基；R2和R3相同或不同，并且各自选自H、低级[即C1～C3]烷基和C2～C3链烯基，它们任选可被卤化或羟基化，或者它们可以相互连接构成-(CH2)n-基(其中，n是2～5的任意数)或-(CH2)2-O-(CH2)2基，及其代谢物和前体药物。本发明还涉及一种呈药物上可接受的剂型、用于治疗患有疾病的动物(所述疾病与该动物中不适当的免疫应答有关)的药物组合物，该组合物包含一种化合物，该化合物选自化学通式(Ⅰ)的化合物R1-CO-NR2R3(Ⅰ)其中，R1选自H和低级[即C1～C3]烷基和C2～C3链烯基；R2和R3相同或不同，并且各自选自H、低级[即C1～C3]烷基和C2～C3链烯基，它们任选可被卤化或羟基化，或者它们可以相互连接构成-(CH2)n-基(其中，n是2～5的任意数)或-(CH2)2-O-(CH2)2基，及其代谢物和前体药物。在本发明的与治疗相关的各方面中，待治疗的疾病可能是下列任一种系统性红斑狼疮[SLE]硬皮病[全身性硬化症]血管炎综合征[包括瓦格纳氏血栓形成和各种形式的巨细胞关节炎]皮肌炎(dermatomiositis)哮喘成人呼吸窘迫综合征[ARDS]系统性炎症反应综合征[SIRS]炎性肠病慢性肝炎类风湿性关节炎风湿热重症肌无力多发性硬化症牛皮癣湿疹多发性骨髓瘤赖特尔综合征肾小球肾炎多肌痛风湿病关节强硬性脊椎炎结节性多动脉炎过敏性鼻炎糖尿病眼神经炎急性Transversmielitis头损伤脊髓损伤蛛网膜下出血后的血管痉挛。在前述本发明的各方面中，选定的化合物是二甲基甲酰胺及其代谢物，即N-甲基甲酰胺、N-甲胩(N-methyl-isocyanite)及其氨基甲酸酯，以及N-乙酰-S-(N-甲基甲氨酰)半胱氨酸和这类代谢物的任何前体药物。此外，按本发明，是这样实施所述方法的给待治疗的患者施用一定量的DMF，该用量足以保持血浆DMF含量为0．001％～0．1％，最优选为0．01％～0．05％。同样，本发明的药剂适用于给患者以如此速率施用一定量的DMF从而达到并保持血浆DMF含量为0．001％～0．1％，最优选为0．01％～0．05％。还有，在本发明的各方面中，可通过任何施药途径施用所述化合物，例如经口、经鼻、经直肠、静脉内、肌内、皮下或经皮。施用化合物的优选途径是经皮施用。但是，优选通过经皮贴片(transdermalpatch)施用。从下文的实施例将会看出，混合淋巴细胞暴露于每200μl1～10μg淋巴细胞的非特异性刺激物(例如PHA)中。当这些淋巴细胞还同时暴露于很低浓度的DMF时，实验证实了代谢活动的减少，因为事实上这些细胞不太能够还原获得专利的[美国专利NO．5，501，959]氧化还原指示剂。该代谢活动的抑制不是由于直接细胞毒性的结果，因为事实证明对代谢活动(从而对增殖)产生抑制的治疗浓度低于引起细胞代谢的活化(从而引起增殖)的浓度。通过使需要调制的免疫活性细胞与治疗浓度的DMF或其任何代谢物接触，有可能减少具有免疫功能的细胞的代谢活动。通过减少T淋巴细胞的代谢活动，将会严重抑制这些T淋巴细胞对某些T淋巴细胞特异性抗原和抗原，主要组织相容性复合体分子组合体的应答性。就是T淋巴细胞应答的抗原特异性抑制构成了由本发明提出的DMF调制免疫细胞介导的疾病的临床应用基础。至于按本发明给需要治疗的患者经皮施用DMF，建议应用能送递各种药物(包括DMF和上述相关的治疗化合物)的多功能经皮给药系统。认为重要的贴片设计参数包括下列1．该贴片必须具有预定的尺寸，因为它决定在一定时间吸收的活性组分[药物]的量。2．给药必须不依赖于时间。3．药物浓度应根据患者生活型(patientprofile)而变。4．该贴片必须是稳定的，并且送递可重复治疗浓度的被施给的药剂[药物]。5．给药[药剂]的节律(tempo)由皮肤确定，所以药物穿过膜的解吸应与皮肤的吸收节律相同或很接近。6．该贴片和药物必须具有较长的存放期。为了达到上述要求，设计了一种具有下列特性的贴片1．高密度尼龙背衬材料。2．由PATFE[Teflon]的尼龙构成的安全边界。3．低密度septaNYLON或PTFE。4．亲水性或疏水性NYLON或PTFE膜[取决于施给的药物]。5．膜孔径为0．05～0．45微米，它取决于施给的药物。6．硅藻土[SiO2]吸附材料。7．稳定剂[成盐剂，减少蒸发以及穿过膜的均匀的重量分布]。8．合适的皮肤粘合剂(它不与药物应答)。9．抗刺激剂-维生素E[该抗刺激剂可在保护皮肤而抗副作用的应用之前、应用期间或应用之后应用]。更具体地说，一种贴片由下列成分构成1．背衬材料和septa<tablesid="table1"num="001"><table>说明圆形半透明尼龙片，0．1～0．4mm厚直径20-100mm平均质量100mg-600mgSepta说明圆形软聚丙烯／聚乙烯具有尼龙或PTFE背衬Septa直径5-25mmSepta厚度0．2-1mm</table></tables>2．Teflon膜<tablesid="table2"num="002"><table>说明圆形白色膜直径20-100mm平均质量50-500mg孔径0．2-0．8微米</table></tables>3．Teflon边界环<tablesid="table3"num="003"><table>说明圆形半透明0．1～0．4mm厚内径10-90mm外径20-100mm平均质量20-200mg</table></tables>4．吸收材料<tablesid="table4"num="004"><table>说明二氧化硅[硅藻土]质量／片1-10g稳定剂说明氯化钠和碳酸镁／钙</table></tables>施用方法间接施用药物(例如DMF)可这样进行在将贴片贴到皮肤上之后，用注射器将已知量的活性剂注入所述二氧化硅吸附物质中。通过应用该方法获得如下优点1．从安瓿／容器到贴片上的受控施药。2．可按患者生活型预定治疗剂剂量。3．通过将所述药剂变成浓度依赖性，在治疗过程中治疗时间和皮肤暴露的面积就保持恒定。4．可以有信心地施用贴片和药剂而不会对患者过量用药。5．贴片和药剂都容易施用，并且患者在施药后可以出院。6．贴片很稳定，具有无限的存放期，并且，除非另有规定，从安瓿施用的药剂具有至少两年的失效期。现在将参照如下实施例阐述本发明，但不是借此将本发明的范围限定于该阐述性的实施方案。实施例1通过应用免疫研究文献中被很好地描述过并且为人所知的密度梯度分离法从健康志愿者的全血分离人外周淋巴细胞。简单地说，通过该方法，用磷酸盐缓冲盐水或细胞培养基(例如RPMI1640)1∶2稀释外周全血。然后，密度梯度(例如Histopaque1077[SigmaCat#1077])就在稀释后的外周血液下方分层，务必小心使之形成明显的界面。然后在600g下离心该密度梯度20～25分钟。离心后容易看到一层含大部分淋巴细胞的清亮的暗黄色表层。再将该层分离并进一步处理，即将该暗黄色表层置于另一支试管中，用PBS或细胞培养基将细胞洗涤3次。每个洗涤步骤后都在400g下将细胞离心9分钟。第三次洗涤后，从粒状沉淀收集淋巴细胞。计数该细胞并稀释到所需的细胞浓度。应用完全细胞培养基作为稀释剂配制种种DMF浓度。配制了如下浓度1％、0．1％、0．05％、0．01％和0．001％。应用完全细胞培养基将分离的淋巴细胞稀释到所要求的浓度。在上述步骤中应用的完全细胞培养基含RPMI1640(含HEPES)20～25mM，L-谷氨酰胺1mM，二巯基乙醇2X10-5mM和10％热灭活的胎牛血清。将配制的淋巴细胞以每孔150，000个细胞的浓度置于96孔细胞培养板中。往每个试验孔添加浓度为1～10μg／200μl的PHA[植物凝集素]。同时，往每个试验孔添加预定浓度的DMF，在37℃下，在5％CO2、95％O2气氛中将所述培养孔保温1～4天。以10％体积体积往每个培养孔添加以商标“AlamarBlue”出售的氧化还原指示剂。将培养物与AlamarBlue一起保温18小时，然后以630nm为参比测定570nm处的吸光度。可将结果归纳如下培养物(其中，得自健康志愿者的外周淋巴细胞暴露于PHA和浓度为％的DMF达24小时)还原了处于正常PHA生长孔中的培养物所还原AlamarBlue量的102％。但是，添加了浓度只有0．05％的DMF的培养物只还原了含PHA刺激的淋巴细胞的培养物所还原AlamarBlue量的52％。这表明了培养物孔中代谢活动的显著抑制，它与该特定孔中细胞增殖的水平密切相关。当比较未刺激的淋巴细胞与暴露于低浓度DMF的未刺激的淋巴细胞还原AlamarBlue所指示的代谢活动时，观测到暴露于0．05％DMF浓度的淋巴细胞还原的AlamarBlue减少了40％。[见图1和2，这两幅图表示了一些重复实验的代表性结果]。实施例2为了阐明DMF在引起对淋巴细胞代谢活动的抑制方面假定的作用机制，进行了另一系列的实验。在这些实验中，应用实施例1中描述的方法分离了健康志愿者的淋巴细胞。在分离了淋巴细胞之后，将该淋巴细胞暴露于不同浓度的DMF达不同长度的保温时间。应用的DMF浓度是0．1％、0．01％和0．001％，保温时间是5、15、30、75、120和180分钟。应用可商购的酪氨酸激酶分析试剂盒(可得自BoehringerMannheim[分类号为1534505])测定了酪氨酸激酶活性。结果如图3和4中所示。暴露于浓度为0．01％的DMF3小时后，受试验淋巴细胞的酪氨酸激酶活性被抑制了71％。应指出的是，在该图中，吸光度读数越低，酪氨酸激酶活性抑制的程度就越高。该图的大体形状保持相同，这与显色反应的显色时间无关。该结果支持了作为本发明基础的假设，即淋巴细胞与之接触达一定时间的、一定浓度的DMF，起阻滞酪氨酸激酶活性的作用。有这种可能性，在受试验的淋巴细胞中观察到的酪氨酸激酶活性的降低可能是由于刺激某些酪氨酸磷酸酶的缘故。给出的图是获得的很多图的典型实例。实施例3进一步用实验证实了DMF及其两种代谢物的PTK抑制活性，即通过比较它与可商购的PTK抑制剂Piceattanol(由BoehringerMannheim以#1534505销售的)对两种细胞系[即HELA(一种子宫颈癌细胞系)和HEP3B(一种肝癌细胞系)]的作用。获得了如下结果所述抑制剂是以10％DMSO溶液应用的。试验是在下列条件下进行的，得到如下所示的结果Slank0，043FunctCntrl内源性磷酸酶20．3％内源性磷酸化0．14活性平均抑制HELA抑制剂0，076[Pilleattanol+10％DMSO]66％75％29，5％清洁细胞0，115100％0％2％代谢物Ⅰ0，09986％95％9，5％0，2％谢物Ⅱ0，07464％80％28，5％2％代谢物Ⅱ0，05548％55％48，5％0，2％DMF0，07363％83％27％2％DMF0，04237％47％58％HEP3B抑制剂0，05560％60％40％[Pilleattanol+10％DMSO]66％75％29，5％清洁细胞0，091100％0％2％代谢物Ⅰ0，09099％81％10％0，2％代谢物Ⅱ0，03640％32％64％2％代谢物Ⅱ0，09560％51％44，5％0，2％DMF0，08088％66％33，3％2％DMF0，04044％34％61％IC501，7-17μM被确定IC501，7-17μM被确定符号代谢物Ⅰ-N-甲基甲酰胺代谢物Ⅱ-N-甲胩DMF-二甲基甲酰胺权利要求1．一种影响动物中免疫应答的方法，该方法包括如下步骤给这类动物施用无毒、免疫调制有效量的化合物，该化合物选自化学通式(Ⅰ)的化合物R1-CO-NR2R3(Ⅰ)其中，R1选自H和低级[即C1～C3]烷基和C2～C3链烯基；R2和R3相同或不同，并且各自选自H、低级[即C1～C3]烷基和C2-C3链烯基，它们任选可被卤化或羟基化，或者它们可以相互连接构成-(CH2)n-基，其中n是2～5的任意数，或-(CH2)2-O-(CH2)2基，及其代谢物和前体药物。2．权利要求1的方法，其中，受该方法影响的免疫应答是构成身体免疫系统的一部分的免疫细胞的免疫应答。3．权利要求2的方法，其中，所述细胞选自T淋巴细胞和B淋巴细胞。4．权利要求1的方法，进行该方法是为了减少体内免疫细胞产物的表达和分泌。5．一种治疗患有疾病的动物的方法，该疾病与该动物中不适当的免疫应答有关，所述方法包括如下步骤给这样的动物施用无毒、治疗上有效量的化合物，该化合物选自化学通式(Ⅰ)的化合物R1-CO-NR2R3(Ⅰ)其中，R1选自H和低级[即C1～C3]烷基和C2～C3链烯基；R2和R3相同或不同，并且各自选自H、低级[即C1～C3]烷基和C2～C3链烯基，它们任选可被卤化或羟基化，或者它们可以相互连接构成-(CH2)n-基，其中n是2～5的任意数，或-(CH2)2-O-(CH2)2基，及其代谢物和前体药物。6．一类化合物在制备用于治疗患有疾病的动物的方法中的药剂方面的应用，该疾病与该动物中不适当的免疫应答有关，所述化合物选自化学通式(Ⅰ)的化合物R1-CO-NR2R3(Ⅰ)其中，R1选自H和低级[即C1～C3]烷基和C2～C3链烯基；R2和R3相同或不同，并且各自选自H、低级[即C1～C3]烷基和C2～C3链烯基，它们任选可被卤化或羟基化，或者它们可以相互连接构成-(CH2)n-基，其中n是2～5的任意数，或-(CH2)2-O-(CH2)2基，及其代谢物和前体药物。7．一种用于治疗患有疾病的动物的药物组合物，该疾病与该动物中不适当的免疫应答有关，所述组合物包含一种化合物，该化合物选自化学通式(Ⅰ)的化合物R1-CO-NR2R3(Ⅰ)其中，R1选自H和低级[即C1～C3]烷基和C2～C3链烯基；R2和R3相同或不同，并且各自选自H、低级[即C1～C3]烷基和C2～C3链烯基，它们任选可被卤化或羟基化，或者它们可以相互连接构成-(CH2)n-基，其中n是2～5的任意数，或-(CH2)2-O-(CH2)2基，及其代谢物和前体药物，呈药物上可接受的剂型。8．权利要求5的方法、权利要求6的应用或权利要求7的组合物，其中，所述疾病选自下组系统性红斑狼疮[SLE]硬皮病[全身性硬化症]血管炎综合征[包括瓦格纳氏血栓形成和各种形式的巨细胞关节炎]皮肌炎哮喘成人呼吸窘迫综合征[ARDS]系统性炎症反应综合征[SIRS]炎性肠病慢性肝炎类风湿性关节炎风湿热重症肌无力多发性硬化症牛皮癣湿疹多发性骨髓瘤赖特尔综合征肾小球肾炎多肌痛风湿病关节强硬性脊椎炎结节性多动脉炎过敏性鼻炎糖尿病眼神经炎急性Transversmielitis头损伤脊髓损伤蛛网膜下出血后的血管痉挛。9．权利要求1～8任一项的方法、应用或组合物，其中，所述化合物是二甲基甲酰胺。10．权利要求9的方法，其中，给待治疗的患者以一定的速率和一定量的施用二甲基甲酰胺，所述量和速率足以保持血浆DMF含量为0．001％～0．1％。11．权利要求9的方法、应用或组合物或权利要求10的方法，其中，所述药剂被经皮给药或者适合经皮给药。12．权利要求11的方法、应用或组合物，其中，DMF借助于大致如本文所述的经皮贴片施用或者适合这样施用。全文摘要一种根据动物中对外界免疫刺激物或内源性免疫刺激物的免疫应答而影响或调制免疫细胞产物的刺激或抑制的方法,该方法包括如下步骤:给这类动物施用无毒、免疫调制有效量的化合物,该化合物选自化学通式(Ⅰ)R文档编号A61P43/00GK1279612SQ98810397公开日2001年1月10日申请日期1998年9月16日优先权日1997年9月16日发明者C·J·兰多尔,G·J·杜普瑞兹,V·R·施拉克,D·C·阿特费尔德,J·B·范丹伯加尔丹申请人:弗朗戈德控股有限公司