免疫应答的增强的制作方法
【专利说明】
[0001] 相关申请的交叉引用
[0002] 根据35 U.S.C. § 119(e)，本申请要求2012年10月12日提交的美国临时申请 No. 61/713, 203的优先权，以引用的方式将其内容整体并入本文。
[0003] 政府支持
[0004] 本发明是在美国国立卫生研宄院授予的基金No. DK051362的政府支持下完成的。 美国政府对本发明享有一定的权利。
[0005] 序列表
[0006] 本申请包含序列表，所述序列表已经以ASCII格式电子提交，并在此以引用的方 式将其整体并入。所述ASCII副本创建于2013年10月10日，命名为043214-075201_ SL. txt，大小为29, 715字节。
技术领域
[0007] 本发明涉及分子免疫学和细胞生物学。更具体而言，本文所述的技术涉及T细胞 耐受的调节。
【背景技术】
[0008] 免疫系统的存在是为了保护身体免受外来入侵者和病变细胞的侵害。健康的免疫 系统能够识别外来细胞或者异常细胞并靶向它们以进行破坏。作为免疫系统的天然控制的 一部分，识别健康宿主细胞的免疫系统的组成（例如，T细胞）被破坏或者被迫进入不活化 状态（inactive state)，这是一种称为"T细胞耐受"的现象。T细胞耐受阻止免疫系统攻 击宿主有机体自身的健康细胞。
[0009] 然而，在慢性疾病的情况下，免疫系统对慢性疾病的长期应答可能导致事与愿违 的T细胞耐受。识别和攻击外来细胞或者病变细胞的T细胞通过T细胞耐受可被"关闭 (turned off) "。这明显降低了宿主对慢性疾病应答的能力和宿主从慢性疾病中康复的能 力。
[0010] 慢性免疫紊乱，特别是与T细胞耐受相关的慢性免疫紊乱（例如癌症），可能会肆 虐。根据来自世界卫生组织的最新数据，在2000年全世界有一千万人被诊断为患有癌症， 并有六百万人死于癌症。此外，统计表明，癌症发病率在全球范围内上升。举例来说，预测 表明在美国今天还活着的人中的百分之五十在他们生命中的某些时间点将会被诊断为患 有某种形式的癌症。因此，仍然迫切需要对T细胞耐受介导的免疫紊乱进行治疗的组合物 和手段。
【发明内容】
[0011] 本文提供的是用于在受试者中增强免疫应答和/或降低T细胞耐受的组合物和方 法。如本文所述，本发明人发现，T细胞的某些亚群能够共表达两种以上的CEACAMUPD1和 /或LAP，CEACAM1、PDl和/或LAP通过不同的信号通路促进T细胞耐受。T细胞能够共表 达这些分子的这一发现是本文所述技术的基础，本文所述的技术涉及给予这些分子中的两 种以上的抑制剂，以获得相比通过抑制仅一条通路可能获得的T细胞耐受的降低程度，更 大程度的T细胞耐受降低。
[0012] 因此，在一些方面中，本文所述的组合物和方法通过同时（concurrently)抑制由 CEACAM1、PDl和/或LAP中的至少两者所控制的信号通路的活性，来提高受试者中T细胞 介导的免疫应答（即，降低T细胞耐受）。例如，在免疫功能低下（immunocompromised)的 受试者或患有癌症的受试者中，减轻对免疫系统的阻遏（suppression)是非常可取的。
[0013] 在一个方面中，本文所述的是用于在受试者中增强免疫应答或者降低T细胞耐受 的组合物，所述组合物含有选自于由以下药剂所组成的组中的至少两种药剂：CEACAM1抑 制药剂、PDl抑制药剂和LAP抑制药剂。在一些实施方式中，所述两种药剂可为CEACAM1抑 制药剂和PDl抑制药剂。在一些实施方式中，所述两种药剂可为CEACAM1抑制药剂和LAP 抑制药剂。在一些实施方式中，所述两种药剂可为PDl抑制药剂和LAP抑制药剂。在一些 实施方式中，所述组合物可包含CEACAM1抑制药剂、PDl抑制药剂以及LAP抑制药剂。
[0014] 在一些实施方式中，所述组合物可包含双特异性药剂（bispecific agent)，所述 双特异性药剂含有作为CEACAM1抑制药剂的第一部分和作为PDl抑制药剂的第二部分。在 一些实施方式中，所述组合物可包含双特异性药剂，所述双特异性药剂含有作为CEACAM1 抑制药剂的第一部分和作为LAP抑制药剂的第二部分。在一些实施方式中，所述组合物可 包含双特异性药剂，所述双特异性药剂含有作为LAP抑制药剂的第一部分和作为PDl抑制 药剂的第二部分。
[0015] 在一些实施方式中，所述抑制药剂中的一种或多种可为抑制性核酸。
[0016] 在一些实施方式中，所述抑制药剂中的一种或多种可为抗体试剂。在一些实施方 式中，所述抗体试剂可结合选自于由以下靶标所组成的组中的靶标：CEACAM1、PDl和LAP。 在一些实施方式中，所述抗体试剂可抑制由所述靶标所介导的信号转导。
[0017] 在一些实施方式中，CEACAM1抑制药剂可结合具有SEQ ID NO:32中所示序列的 CEACAM1分子或者SEQ ID N0:32的等位基因变体或剪接变体。在一些实施方式中，CEACAM1 抑制药剂可结合CEACAM1配体相互作用位点。在一些实施方式中，CEACAM1抑制药剂可 结合至氨基酸残基，所述氨基酸残基对应于SEQ ID NO:32的氨基酸残基1-429中的任意 氨基酸残基。在一些实施方式中，CEACAM1抑制药剂可结合CEACAM1的胞外结构域。在一 些实施方式中，CEACAM1抑制药剂可结合CEACAM1的同嗜性相互作用结构域（homophilic interaction domain)，并抑制CEACAM1分子的同嗜性相互作用。
[0018] 在一些实施方式中，PDl抑制药剂可结合具有SEQ ID NO: 1中所示序列的PDl分 子或者SEQ ID NO: 1的等位基因变体或剪接变体。在一些实施方式中，PDl抑制药剂可结 合PDl配体相互作用位点。在一些实施方式中，PDl抑制药剂可结合至氨基酸残基，所述氨 基酸残基对应于SEQ ID NO: 1的氨基酸残基41-136中的任意氨基酸残基。
[0019] 在一些实施方式中，LAP抑制药剂可结合具有SEQ ID N0:34中所示序列的LAP分 子或者SEQ ID N0:34的等位基因变体或剪接变体。在一些实施方式中，LAP抑制药剂可结 合LAP配体相互作用位点。在一些实施方式中，LAP抑制药剂可结合至对应于SEQ ID N0:33 中的氨基酸残基218的氨基酸残基。
[0020] 在一个方面中，本文所述的是用于对慢性疾病进行治疗的方法，所述方法包括向 有治疗需要的受试者给予有效量的本文所述的组合物。在一些实施方式中，所述慢性疾病 可选自于由以下慢性疾病所组成的组：癌症、持续性感染和慢性病毒感染。
【附图说明】
[0021] 图1示出了野生型（WT)小鼠中AOM-DSS模型的示意图。
[0022] 图2示出了 FACS分析测量⑶4和⑶8T细胞中PDl和??Μ-3的表达的结果。
[0023] 图3示出了 FACS分析测量⑶4和⑶8T细胞中PDl和CEACAM1的表达的结果。
[0024] 图4示出了 FACS分析测量⑶4和⑶8T细胞中CEACAM1和??Μ-3的表达的结果。
[0025] 图 5A-图 5B 不出 了表明 CEACAM1 和 F1Dl 在长期活化的（chronically activated) CD4+(图5A)肿瘤浸润性T淋巴细胞和CD8+(图5B)肿瘤浸润性T淋巴细胞的细胞表面上 共表达的图。
[0026] 图6A-图6C表明，CEACAM1-4S在循环⑶4+T细胞和肠道⑶4+T细胞二者的特定亚 群上优先表达。图6A示出了 FACS分析的图表，该图表表明了 CEACAM1的表达与特定的细 胞表面分子的富集有关。直方图门（histogram gates)上的百分比分别表明了在来自于WT 小鼠的MLN CD3+T细胞中的CD4+CEACAM1-细胞群和CD4+CEACAM1+细胞群中对于给定标志 物而言呈阳性的细胞的频率。图6B示出了 FACS分析的图表，该图表表明在来自naive WT 小鼠的MLN的CD4+T细胞中，CEACAM1表达与潜伏相关肽（latency associated peptide， LAP)表达共分离（c〇-segregate)，并与Foxp3表达无关。图6C示出了说明CEACAM1-S异 形体（isoform)在表达LAP的⑶4+CEACM1+T细胞上富集的图表。在图6C中，T细胞分离 自合并的脾脏和淋巴结（LN)。图6A-图6C显示了来自3个独立实验（每组η = 5-6只小 鼠）的代表性数据。
[0027] 图7Α-图7F表明，CEACAM1-S直接增强CD4+LAP+的产生。图7Α-图7D示出了 FACS 分析结果的图表，该图表表明在特别在T细胞中过表达这种异形体的naiVe CEACAM1-4S转 基因（4S Tg)小鼠（图 7A