)、而非 CEACAM1-4L(4L Tg)小鼠（图 7B)的 MLN 中，CD4+LAP+ 细胞的百分比增加。CeacamivIs Tg小鼠（图7〇、而非ceacami+-4l Tg小鼠（图 7D)与它们的同窝对照（littermate controls)相比，富集了⑶4+LAP+T细胞。图7E示 出了FACS分析结果的图表，该图表表明，正如当与来自4S Tg小鼠的合并的脾和LN的 ⑶4+LAP+Treg细胞进行共培养时应答T细胞的增殖减少所示，CEACAM1-4S的过表达增强了 体外⑶4+LAP+Treg细胞的调节功能。图7F示出了表明口服喂食抗⑶3抗体显著增加 WT 小鼠、而非CEACAM1+小鼠的MLN中的CD4+LAP+Treg细胞的百分比的图表。连续五天每天 给小鼠喂食5 μ g抗⑶3 (或者同种型对照），并在七天后对⑶4+LAP+T细胞频率进行评价。
[0028] 图8示出了新的CEACAM1异形体鉴别qPCR分析的结果，所述结果示出了用于小鼠 CEACAM1-L和CEACAM1-S异形体扩增的qPCR引物的特异性和效率（使用mCEACAMl-4L和 mCEACAMl-4S质粒进行验证）。在图6C中使用了这种新的分析。
[0029] 图9A-图9B表明了 CD4+T细胞上CEACAM1-S的表达与表征Peyer氏结（Peyer' s patches，PP)和固有层（lamina propria，LP)中T细胞的特定亚群的分子的表达有关。 图9A和图9B示出了对WT小鼠的PP和LP中的CD4+CEACAM1+细胞和CD4+CEACAM1-细胞 上的细胞表面分子表达进行表征的FACS分析的图表。直方图门上的百分比分别表明在 ⑶4+CEACAM1-细胞群和⑶4+CEACAM1+细胞群中对于给定标志物而言呈阳性的细胞的频 率。代表性数据来自于3个独立实验，每组η = 5-6只小鼠。
[0030] 图10示出了通过选择性剪接生成的CEACAM1的异形体。
[0031] 图11示出了 CEACAM1-S和CEACAM1-L表达（使用图8中的qPCR分析）的图表。 用板结合的包被的抗⑶3或者抗⑶3加⑶28刺激来自于脾脏的总T细胞2天以及随后4 天。通过qPCR对CEACAM1-S、CEACAM1-L和总CEACAM1进行评估。图11显示，在静息T细 胞中低水平的两个主要CEACAM1异形体（S和L)均被经由TCR/CD3复合物进行的T细胞配 接（ligation)(信号1)转录调控；但是，当TCR/CD3复合物被由CD28提供的经典共刺激信 号（信号2)共接合（co-engaged)时，进行了负调控。
[0032] 图12A-图12E表明，CEACAM1-4S与原代T细胞的活化和针对活化诱导的细胞死 亡的敏化作用有关。图12A示出了表明与WT同窝出生者相比，4S Tg小鼠表现出较高的 ⑶3+Annexin V+/7AADlf亡细胞的百分比（每组η = 5只小鼠）的图表。图12B-图12C示 出了实验结果的图表，其中，将从4S Tg小鼠和它们的WT同窝出生者的脾脏中分离的CD3+T 细胞用指定浓度的抗CD3抗体进行培养、或者在指定时间过程中用1 μ g/ml抗CD3进行培 养。增殖分析通过[3H]-胸腺嘧啶核苷掺入进行（图12B)，细胞凋亡使用Annexin-V和 7-AAD染色进行测定（图12C)(每组η = 5只小鼠）。图12D示出了免疫印迹。⑶3+T细胞 分离自4S Tg小鼠或WT小鼠的脾脏，并用IL-2 (lOOU/ml)或抗CD3 (1 μ g/ml)包被的板进 行培养。在指定的时间制备细胞裂解物，使用免疫印迹对半胱天冬酶-3 (caspase-3)及其 活化形式进行测定。图12E示出了表明相比Ceacaml+小鼠，Ceacaml+-4S Tg小鼠具有较 高百分比的annexin V+/7AAD1周亡细胞（每组η = 5只小鼠）的图表。
[0033] 图13Α-图13C表明CEACAM1-S直接增强携带PD-I的滤泡辅助性T (Tfh)调节 细胞的生成。图13Α和图13C示出了当与它们的同窝对照相比时，脾、MLN和PP中的 CD4+PD1+CXCR5+TFH细胞的百分比在4S Tg小鼠中增加（图13Α)，在Ceacaml I小鼠中减少 (图13C)的图表。图13B示出了 FACS分析结果的绘图。与它们的WT同窝对照相比，在4S Tg小鼠的PP或LP内而非脾脏内的⑶4+T细胞表现出增加的⑶69、PD-1和⑶40L水平。所 有数据都代表3个独立实验，每组η = 3-6只小鼠。
[0034] 图14表明在生理条件下CEACAM1和HH在T细胞上共表达。在对HH和CEACAM1 的共表达进行染色的⑶3阳性细胞上设门（gating)后，从结肠、回肠、空肠和十二指肠、以 及肠系膜淋巴结（MLN)和脾脏分离固有层淋巴细胞。上部子图示出了阳性细胞量的汇总图 表，底部子图不出了流式细胞分析的直方图。
[0035] 图15表明浸润小鼠结肠的固有层淋巴细胞中CEACAM1和PD 1的共表达，所述小鼠 具有通过在Rag缺陷和CEACAM1缺陷动物中过继转移na_ive⑶4+T细胞诱导的结肠炎。在 对从近端、中段和远端结肠中获得的⑶3+淋巴细胞上设门之后，显示出CEACAM1和PDl的 共表达。
[0036] 图16表明，CEACAM1和PDl的封闭（blockade)增加来自肿瘤浸润性淋巴细胞 (TIL)中的TNF-α的产量。TIL分离自皮下肿瘤，所述皮下肿瘤与CT26结直肠癌细胞系有 关。在存在同种型对照抗体或者封闭不同共抑制细胞表面分子的抗体的情况下，用抗CD3 单克隆抗体和抗CD28单克隆抗体对TIL进行刺激。注意到用抗CEACAM1抗体和抗PDl抗 体处理的TIL的TNF- α产量协同增加。
【具体实施方式】
[0037] T细胞耐受部分地发挥提供识别自身主要组织相容性复合体（MHC)分子、但不识 别自身肽（self-peptides)的免疫系统细胞群体的功能。在慢性疾病（例如，慢性感染或 者癌症）中，当受试者仍然需要稳健（robust)的免疫应答时，T细胞耐受发生。以前的研 宄已表明，癌胚抗原相关细胞粘附分子I (CEACAM1)、程序性细胞死亡因子I (TOl)和TGF β 1 潜伏相关肽（LAP)是增加 T细胞耐受的免疫调节的重要组成。已观察到，这些分子在活化 的、特别是在长时间活化后的T细胞的独立亚群上表达。因此，虽然已证明CEACAMUPD1和 LAP在T细胞免疫调节中起作用，在本文所述的发现之前尚未建立或提出存在表达可检测 水平的CEACAM1、PDl和/或LAP中的两种以上的T细胞群。
[0038] 如本文所述，发明人发现T细胞的某些亚群共表达可检测水平的（i)CEACAMl和 LAP，（ii)CEACAMl 和 PD1，（iii)PDl 和 LAP，或（iv)CEACAMl、PDl 和 LAP。此类细胞的发现 是本文所述的如下概念的基础：通过抑制这些T细胞耐受促进分子中的至少两种来降低T 细胞耐受。靶向对T细胞耐受有贡献的多种通路的能力例如可通过协同作用对T细胞耐受 产生更大效应，导致T细胞耐受的治疗性降低。因此，对CEACAMUPD1和/或LAP中的两种 以上的抑制可增强免疫系统的应答性。
[0039] 本文所用的"CEACAM1"（也称为CD66a或者胆汁糖蛋白）是指具有单个Ig可变域 样氨基末端、一至三个Ig恒定域样区域以及单个跨膜区段、接着是短的（CEACAM1-S)或长 的（CEACAM1-L)胞质域两者之一的多肽（Hinoda等，85PNAS 6959(1988);以引用的方式将 其整体并入本文）。已证明该N-末端结构域促进同嗜性细胞间结合，所述同嗜性细胞间结 合影响与细胞活化和/或细胞周期进程相关的广谱细胞过程；并且该N-末端结构域也是病 毒（鼠肝炎病毒）以及细菌（淋病奈瑟氏菌（Neisseria gonorrhoeae)和脑膜炎奈瑟氏菌 (N. meningitidis)、卡他莫拉菌（Moraxella catarrhalis)和流感嗜血杆菌（Haemophilus influenzae))病原体的异嗜性粘附蛋白（heterophilic adhesins)的革El点，允许它们感染 体内多种系列的表达CEACAM1的人体细胞和组织。
[0040] 在表达时，CEACAM1的特征为明显的选择性RNA剪接，导致人中有^^一种异形体， 小鼠中有至少四种异形体。这些异形体在胞质尾部的长度和胞外Ig样结构域的数量方面 不同，并相应地命名。正如所指出的，大多数CEACAM1异形体具有长的（CEACAM1-L)或短的 (CEACAM1-S)胞质尾部（CT)两者之一（Azuz-Lieberman 等，17Intl. Immunol. 837 (2005); Gray-0wen&Blumberg，2006;Moller 等，65Int.J. Cancer 740(1996) ;Nakajima 等，168J. Immunol. 1028(2002) ;S