专利名称：β－淀粉样前体蛋白和泛素－B的移码突变体和它们的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及治疗和/或预防早老性痴呆和唐氏综合症的肽。早老性痴呆和唐氏综合症的治疗都与β淀粉样前体蛋白(βAPP)和泛素-B(Ubi-B)的编码过程中转录水平上或RNA的转录后编辑中发生的移码突变相关。这样的移码突变产生了特征为在羧基末端处的异常蛋白质序列的突变βAPP和Ubi-B蛋白质产物。包含突变βAPP或Ubi-B蛋白质产物的异常部分的全部或部分的肽引发了T细胞免疫性，所以可以用于治疗早老性痴呆和唐氏综合症的组合物中。另外，本发明的肽可以用作预防性的抗早老性痴呆疫苗。
本发明还涉及编码对应于早老性痴呆和唐氏综合症患者中发现的异常βAPP和Ubi-B蛋白质序列的肽的DNA序列，并涉及含有至少一个插入位点的载体，所述插入位点含有编码至少一个这样的肽的DNA序列。
另外，本发明涉及治疗和/或预防早老性痴呆的方法，该方法是通过施用至少一个突变βAPP和/或Ubi-B肽或者含有至少一个插入位点的重组病毒载体，所述插入位点含有编码至少一个突变βAPP和/或一个突变Ubi-B肽的DNA序列。
本发明体现了治疗和/或预防早老性痴呆的方法的发展，它基于利用肽来激活身体自己的免疫系统的T细胞臂(T cellular arm)抵抗产生与早老性痴呆相关的突变βAPP和Ubi-B蛋白产物的细胞。
早老性痴呆的治疗方法的开发和应用也可以直接用于患有唐氏综合症的患者的治疗。
背景技术：
对应于从癌细胞的基因中的移码突变产生的异常蛋白质序列的肽引发了特异性T细胞免疫性，并且可以用作抗癌疫苗(参见NorskHydro ASA在与本发明相同的日期递交的挪威专利申请)。以同样的方式，可以将对应于从与其它疾病相关的移码突变产生的异常蛋白质序列的肽用于基于产生特定性T细胞免疫性而开发这些疾病的治疗方法。
移码突变在蛋白质的C末端部分产生了全新的氨基酸序列，在成熟之前终止在新的终止密码子出现的地方。这产生了两个重要的后果1)从移码产生的截短的蛋白质通常是没有功能的，在大多数情况下，导致重要的细胞功能的“剔除”。异常的蛋白质也可以获得新的功能如聚集和形成斑块的能力。在这两种情况中，移码导致了疾病。
2)对于身体而言，从移码产生的异常的新的C末端氨基酸序列是外来的。它在突变之前是不存在的，它只存在于具有突变的细胞中。因为蛋白质的突变部分完全是新的，所以对载体的免疫系统是外来的，它们可以被载体的所有组成成分中的T细胞识别。迄今，还没有人着重研究移码突变的这一方面，并且还没有报道把蛋白质的编码区产生的移码肽鉴定为抗原。所以，这一构思是新的，并且形成了开发基于这些序列的疫苗的基础。由此可见，这些疫苗也可以在遗传了缺陷性基因，或以其它方式倾向于移码突变的人中预防性地使用。所以，这样的疫苗将填充抵抗遗传形式的疾病的治疗装备中的空缺。
已经显示，在细胞内的“自身”蛋白质中的单个氨基酸的取代可以产生肿瘤排斥抗原，其中包括与正常肽在氨基酸序列上有区别的肽。识别在肿瘤细胞表面上的主要组织相容性(MHC)分子中的这些肽的T细胞能够杀死肿瘤细胞，所以从宿主排斥肿瘤。
与B细胞产生的抗体相反，T细胞只有抗原被结合并且由MHC分子呈递时才识别抗原，而B细胞通常识别呈天然构象的游离抗原并且进一步可能识别抗原表面上暴露的差不多所有位点。通常这一结合只发生在适当的抗原加工后，该过程包括蛋白质的蛋白酶裂解，所以产生的肽片段与MHC分子的沟相适合。因此，T细胞还能够识别起源于细胞内的蛋白质的肽。所以，T细胞能识别细胞表面的MHC分子中起源于细胞任何地方的异常肽，并且随后能够被激活而消除含有异常蛋白质的细胞。
M.Barinaga，科学(Science),257,880-881,1992提供了一篇MHC如何结合肽的短综述。在D.Male等人1987年的《高等免疫学》(Advanced Immunology)J.B.lippincott Company,Philadelaphia中可以发现对这一发明的技术背景的更综合性的解释。这两篇文献都全文在此并入本文。
人的MHC分子通常被称为HLA(人白细胞抗原)分子。它们是由人6号染色体上的HLA区编码的。
根据编码它们的染色体的区和与它们相互作用从而最初地激活的T细胞亚群，HLA分子表现为两个不同的类别。Ⅰ类分子是由HLA A,B和C亚基因座(subloci)编码的，它们最初激活CD8+细胞毒性T细胞。HLAⅡ类分子是由DR,DP和DQ亚基因座编码的，最初激活CD4+T细胞，既有辅助细胞又有细胞毒性细胞。
通常，每个个体具有6个HLAⅠ类分子，通常两个来自A,B和C三个组的各组。相应地，所有个体也选择自己的HLAⅡ类分子，同样其中两个来自DP,DQ和DR三个组的各组。组A,B,C和DP,DQ和DR的每一个再分为几个亚组。在一些情况下，由于两个HLA亚组的交叠，不同的HLAⅠ类或Ⅱ类分子的数目减少了。
所有的基因产物是高度多态性的。所以，不同的个体表达区别于其它个体的不同HLA分子。这是寻找移植时HLA匹配器官供体中的困难的根源。HLA分子作为免疫应答基因的作用反映了它们的遗传变异在免疫生物学中的意义。通过它们的肽结合能力，某些HLA分子的有无控制了个体应答肽表位的能力。结果，HLA分子决定了对疾病的抗性或敏感性。
T细胞可以通过各种机制控制产生异常蛋白质的细胞的发育和生长。细胞毒性T细胞，既有限制在HLAⅠ类的CD8+又有限制在HLAⅡ类的CD4+，可以直接杀死携带适当抗原的细胞。CD4+辅助T细胞是细胞毒性CD8+T细胞应答以及抗体应答，和诱导巨噬细胞和LAK细胞杀伤所需要的。
HLAⅠ类和Ⅱ类结合两者都需要肽必须含有通常在不同的HLA组和亚组中不同的结合基序。结合基序的特征在于，需要某些类型的氨基酸，例如在肽的确定位置携带大的和疏水性或带正电的侧基从而获得与HLA结合沟的口袋的严格配合的那些氨基酸。这以及在结合沟中的肽长度限制在8-10个氨基酸的结果是，结合一个类型的HLAⅠ类分子的肽同样结合另一类型是不太可能的。所以，例如，HLA-A1和HLA-A2亚组(二者都属于Ⅰ类)的肽结合基序与HLA-Al和HLA-B1分子的基序同样不同是非常可能的。
因为同样的原因，完全相同的氨基酸序列定位于不同的Ⅱ类分子的结合沟中是不可能的。在HLAⅡ类分子的情况中，肽的结合序列可能更长，并且已经发现它们通常含有10到16个氨基酸，其中在一个或两个末端的一些氨基酸不是HLA沟的结合基序的一部分。
但是，可能发生几个HLAⅠ类和Ⅱ类分子的不同肽结合基序的交叠。据说在至少两个不同的HLA分子的结合序列中存在交叠的肽含有“嵌套的T细胞表位”。在“嵌套表位肽”中含有的各种表位可以通过抗原呈递细胞对肽的加工而形成，然后被呈递给结合到不同HLA分子上的T细胞。在人的HLA分子的个别种类使含有嵌套表位的肽比只能够结合一个类型的HLA分子的肽更加可用作通用的疫苗。
只有在患者中至少一个类型的HLAⅠ类和/或Ⅱ类分子可以结合全长的或被患者自身的抗原呈递细胞加工和修整后的疫苗肽时，才能获得个体的有效接种。
肽作为大多数群体的通用疫苗的效用随着它以其全长或在被抗原呈递细胞加工后可以结合的不同的HLA分子的数目而增强。
为了将起源于细胞中的突变事件产生的异常蛋白质的肽用作产生CD4+和/或CD8+T细胞的疫苗或治疗剂，有必要研究讨论中的突变蛋白质，并且鉴定最终被抗原呈递细胞加工成更短的肽后能够刺激T细胞的肽。
定义本发明解决的问题到目前为止，还没有药物或其它治疗方法能够消除在患有早老性痴呆的患者的脑中产生引起变性过程的异常蛋白质的细胞。治疗和预防早老性痴呆始终是需要的。本发明将提供新的能够用作早老性痴呆的治疗和预防的肽。我们的方法的目的是直接消除引起变性过程的细胞。
该肽也可以用于患有唐氏综合症的患者的治疗。
本发明的定义本发明的主要目的是获得可以用于刺激T细胞的对应于早老性痴呆和/或唐氏综合症患者中发现的异常βAPP和Ubi-B蛋白质的肽片段的肽。
本发明的另一个主要目的是开发一种治疗早老性痴呆的方法，该方法基于可以在患者中利用本发明的肽体内或从体内刺激T细胞来诱导的T细胞免疫性。
本发明的第三个目的是开发一种唯一地或部分地基于对应于本发明的肽的肽的、预防早老性痴呆的产生的疫苗，这些肽可以用于产生和激活T细胞，该T细胞产生对抗产生突变βAPP和突变Ubi-B蛋白质的细胞的细胞毒性T细胞免疫性。
本发明的第四个主要目的是设计一种特异地适用于需要治疗或预防早老性痴呆的人个体的治疗或预防早老性痴呆的方法，包括施用至少一种本发明的肽。
本发明的第五个目的是获得一种利用与治疗早老性痴呆相同的方法治疗患有唐氏综合症的患者的方法。
本发明的这些和其它目的由所附权利要求书实现了。
移码突变可以在基因水平，转录水平或RNA的转录后编辑中发生，并且产生了成熟前的终止密码子，所以往往缺失了蛋白质的一些大的部分。从移码突变产生的异常蛋白质通常没有被认为是免疫原性的，因而也没有被视为免疫治疗的靶。于是，现在已经惊人地发现，对应于与早老性痴呆和唐氏综合症相关的移码突变产生的异常蛋白质的一组新肽可用于引发抵抗产生这些异常蛋白质的细胞的T细胞应答。
含有单核苷碱基重复序列(如脱氧腺苷碱基的)或二核苷碱基重复序列(如脱氧胞嘧啶-脱氧胸苷单位的)的基因对移码突变是敏感的。分别通过在重复序列中插入一个或两个单核苷碱基残基或者一个或两个二核苷碱基单位，或通过在重复序列中缺失一个或两个单核苷碱基残基或者一个或两个二核苷碱基单位，产生移码突变。移码突变将从突变点开始编码含有新的和完全不同的氨基酸序列的蛋白质(与正常的蛋白质相比)。在羧基末端含有新氨基酸序列的这一突变蛋白质将是特异于已经发生这样的移码突变的所有细胞的。
在这一说明书和权利要求书的其余部分，移码突变肽的定义将包括这些蛋白质和其肽片段。
这些肽至少是8个氨基酸长并且对应于与早老性痴呆和/或唐氏综合症相关的移码突变βAPP和/或Ubi-B蛋白质序列。
本发明的肽的其特征在于，它a)至少长为8个氨基酸，并且是从与早老性痴呆或唐氏综合症相关的移码突变产生的突变βAPP和/或Ubi-B的片段；和b)含有突变βAPP和/或Ubi-B蛋白质的突变部分的至少一个氨基酸；和c)含有对应于在突变序列的氨基末端前面的蛋白质序列的正常部分的羧基末端的0-10个氨基酸，并且可以进一步延伸到如相关的移码突变产生的新的终止密码子所确定的蛋白质的突变部分的羧基末端；和d)以它的全长或在被抗原呈递细胞加工后，诱导T细胞应答。
本发明的肽优选地含有8-25,9-20,9-16,8-12或20-25个氨基酸。它们例如可以含有9,12,13,16或21个氨基酸。
本发明的肽最优选地至少是9个氨基酸长，例如9-18个氨基酸长，但由于抗原呈递细胞的加工可能性，更长的肽也是非常适合本发明的。所以，如果整个突变氨基酸序列含有8个氨基酸或更多，它可用作本发明的移码突变肽。本发明进一步涉及倾向于患早老性痴呆的人的接种方法，包括以足够诱导对突变βAPP和/或Ubi-B蛋白质的T细胞免疫性的量，一次或多次施用本发明的至少一个肽。
本发明也涉及治疗患有早老性痴呆的患者的方法，包括以足以诱导对突变βAPP和/或Ubi-B蛋白质的T细胞免疫性的量，一次或多次施用本发明的至少一个肽。
本发明也涉及治疗患有唐氏综合症的患者的方法，包括以足以诱导对突变βAPP和/或Ubi-B蛋白质的T细胞免疫性的量，一次或多次施用本发明的至少一个肽。
本发明的详细说明在本发明的说明书和权利要求书中，如本领域已知，氨基酸是用单字母缩写表示的。
本发明的肽是由与早老性痴呆和唐氏综合症相关的βAPP和Ubi-B移码突变举例说明的
在早老性痴呆和唐氏综合症患者中，在缠结，神经纤维网线和神经炎斑中蛋白质的细胞内和细胞外的沉积是与导致痴呆的神经元功能障碍相关的(R.D.Terry等人在《早老性痴呆症》(Alzheimer Disease)中，R.D.Terry,R.Katzman,K.L.Bick编辑(Raven，纽约，1994)pp.179-196)。已经显示这些蛋白质沉积物含有在羧基末端处异常的β淀粉样前体蛋白质(βAPP)和泛素-B(Ubi-B)的形式，并且进一步显示这些异常的蛋白质序列是可能在转录水平上或RNA的转录后编辑中发生的移码突变的结果(F.W.van Leeuwen等人，科学，279卷，242-247页)。
在βAPP的情况中，已经观察到两个移码突变，一个是从外显子9中的(ACC)GAGAGAGA(ATG)序列中缺失二核苷脱氧鸟苷-脱氧腺苷(GA)单位而产生的，一个是从外显子10中的(CAT)GAGAGA(ATG)序列中缺失GA单位而产生的。表1中表示了从这些移码突变产生的突变βAPP肽。含有seq id nos 1和4的肽是βAPP蛋白质序列的突变部分，含有seq idnos 2,3和5的肽代表了延伸到氨基末端的正常βAPP序列的突变肽。
表1正常βAPP；RLEAKHRERMSQVMREWEEAERQAKNLPKseq id no 1，NVPGHERMGRGRTSSKELAseq id no 2；RLEAKHRENVPGHERMGRGRTSSKELAseq id no 3；RLEAKHRENVPGHERMGseq id no 4；MGRGRTSSKELAseq id no 5；ERMSQVMRMGRGRTS同样，在Ubi-B的情况中，已经观察到两个移码突变，一个是从外显子中的(TCT)GAGAGGT(GGT)序列中缺失二核苷脱氧鸟苷-脱氧胸苷(GT)单位而产生的，一个是从外显子3中的(TCA)CTCT(GGA)序列中缺失二核苷脱氧胞嘧啶-脱氧胸苷(CT)单位而产生的。表2中显示了从这些移码突变产生的突变Ubi-B肽。含有seq id nos 6和9的肽是Ubi-B蛋白质序列的突变部分，含有seq id nos 7,8和10的肽代表了延伸到氨基末端的正常Ubi-B序列的突变肽。
表2．正常Ubi-B；HLVLRLRGGMQIFVKTLTGKTITLEVEPSDseq id no 6；YADLREDPDRQDHHPGSGAQseq id no 7；HLVLRLRGYADLREDPDRQDHHPGSGAQseq id no 8； HLVLRLRGYADLREDPDseq id no 9；GGGAQseq id no10；TLTGKTITGGGAQ突变βAPP和Ubi-B蛋白质只是相应的移码突变已经发生的细胞编码的，并且所以是早老性痴呆和唐氏综合症的特异免疫治疗的靶。
根据本发明，对应于突变βAPP和突变Ubi-B蛋白质的肽可以用于引发T细胞免疫性和特异地杀死产生突变βAPP和突变Ubi-B蛋白质的细胞，这些蛋白质在早老性痴呆和唐氏综合症患者中是与导致呆痴的神经元功能障碍相关的。本发明的其它肽可以是上面的表1和表2中列出的肽的片段。这样的片段最优选地是9-16个氨基酸长，并且包括来自蛋白质的突变部分的至少一个氨基酸。
如本说明书和权利要求书中所用，术语“片段”是指更长的肽或蛋白质的较短部分。
合成利用连续流动固相肽合成法合成这些肽。利用具有适当侧链保护的N-a-Fmoc-氨基酸。激活Fmoc-氨基酸，作为五氟苯基酯偶联，或在偶联之前利用TBTU或二异丙基碳二亚胺活化。在DMF中的20％吡啶被用于在每次偶联之后选择性地除去Fmoc。用95％的含有适当清除剂的TFA将侧链保护从树脂裂解和最后除去。纯化肽并且利用反相(C18)HPLC分析。利用电喷雾质谱法证实了这些肽的同一性(Finniganmat SSQ 710)。
本领域的技术人员可以应用几个其它的公知方法合成肽。
本发明的肽可以用于具有产生移码突变βAPP和Ubi-B蛋白质的细胞的早老性痴呆和唐氏综合症患者的治疗方法中，该治疗方法包括对需要这样的治疗的患者体内或从体内施用本发明的至少一个肽。
在另一个实施方案中，本发明的肽可以用于接种倾向于患早老性痴呆的人，方法是对所述的人施用本发明的至少一个肽。
另外，人们认为对人施用本发明的肽的混合物是有利的，这样本发明的每个肽就可以结合个体的不同类型的HLAⅠ类和/或Ⅱ类分子。
为了加强如本领域已知的免疫应答，认为可以将这些肽同时或分别地与化合物(如细胞因子和/或生长因子，即，白介素-2(IL-2)，白介素-12(IL-12)，粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)，或诸如此类)一起施用。
可以将本发明的这些肽单独地或与其它物质(例如标准佐剂)组合地或以如本领域已知的可以诱导高亲和力的细胞毒性T淋巴细胞的脂肽共轭物的形式用于疫苗或治疗组合物中(K.Deres，自然(Nature)，342卷(nov,1989))。
本发明的肽包括在基于肽或重组片段的疫苗中可能是有用的。
本发明的肽可以与常用的添加剂、稀释剂、稳定剂或如本领域已知的那些组分一起包括在药物组合物或疫苗中。
根据本发明，药物组合物或疫苗可以含有单独的肽或与至少一种药物可接受载体或稀释剂组合的肽。
另外，疫苗或治疗组合物可以含有选择的肽，它们是与早老性痴呆和唐氏综合症相关的突变βAPP和Ubi-B蛋白质的片段。
本发明的疫苗还可以作为产生T细胞免疫性的肽混合物对普通群体给药，所述T细胞免疫性是抵抗可能发生与早老性痴呆和唐氏综合症相关的βAPP和Ubi-B移码突变的细胞的。
本发明的肽可以作为单个肽或作为肽的混合物给药。或者，肽可以共价地相互连接，形成更大的多肽或甚至环多肽。
作为主要的目的，为了引发抵抗与早老性痴呆和唐氏综合症相关的突变βAPP和Ubi-B基因产物的特异性T细胞免疫性，可以体内或从体内采用本发明的早老性痴呆和唐氏综合症的治疗方案。
另外，可以通过各种途径，包括但不限于皮下、肌内、皮内、腹膜内、静脉内或诸如此类，对患者施用本发明的移码突变肽。在一个实施方案中，通过皮内施用本发明的肽。可以以治疗或预防有效量在单个或多个注射位点对患者施用本发明的肽。
根据被治疗的患者的需要，可以只一次或几次，例如重复在1-2个月的时期内每周一次施用本发明的肽。
对待接种的一般病人或个体可以施用1微克(1μg)到1克(1g)范围内的本发明的肽。每次给药利用范围在1微克(1μg)到1毫克(1mg)范围内的更小剂量是优选的。
本发明另外也包括编码移码突变肽的DNA序列。
对个体可以施用DNA疫苗形式的本发明的肽。编码这些肽的DNA可以呈克隆化质粒DNA或合成寡核苷酸的形式。DNA可以与细胞因子(如IL-2)和/或其它共同刺激分子一起递送。细胞因子和/或共同刺激分子本身可以质粒或寡核苷酸DNA的形式递送。已经显示，对DNA疫苗的应答将因免疫刺激DNA序列(ISS)的存在而加强。这些可以采取含有甲基化CpG的六聚体基序的形式，通式5’-嘌呤-嘌呤-CG-嘧啶-嘧啶-3’。所以，我们的DNA疫苗可以在编码肽的DNA中，在编码细胞因子或其它共同刺激分子中或在两者中掺入这些或其它ISS。Tighe等人提供了DNA接种的优点的综述(1998，今日免疫学(Immunologytoday),19(2),89-97)。
在一个实施方案中，编码突变βAPP和突变Ubi-B肽的DNA序列含有正常的βAPP基因序列(外显子9和10)。
重复1GAG AGG CTT GAG GCC AAG CAC CGA GAG AGA ATG TCC CAG GTC ATG重复2AGA GAA TGG GAA GAG GCA GAA CGT CAA GCA AAG AAC TTG CCT AAA突变βAPP基因序列，其中从重复1中缺失了GA。GAG AGG CTT GAG GCC AAG CAC CGA GAG AAT GTC CCA GGT CAT GAGAGA ATG GGA AGA GGC AGA ACG TCA AGC AAA GAA CTT GCC TAA突变βAPP基因序列，其中从重复2中缺失了GA。GAG AGG CTT GAG GCC AAG CAC CGA GAG AGA ATG TCC CAG GTC ATGAGA ATG GGA AGA GGC AGA ACG TCA AGC AAA GAA CTT GCC TAA正常的Ubi-B基因(外显子)序列。
缺失基序CAC CTG GTC CTG CGT CTG AGA GGT GGT ATG CAG ATC TTC GTG AAGACC CTG ACC GGC AAG ACC ATC ACC CTG GAA GTG GAG CCC AGT GAC突变Ubi-B基因序列，其中从缺失基序中缺失了GT。CAC CTG GTC CTG CGT CTG AGA GGG TAT GCA GAT CTT CGT GAA GACCCT GAC CGG CAA GAC CAT CAC CCT GGA AGT GGA GCC CAG TGA正常的Ubi-B基因(外显子2)序列。CAC CTG GTC CTG CGT CTG AGA GGT GGT ATG CAG ATC TTC GTG AAGCT重复ACC CTG ACC GGC AAG ACC ATC ACT CTG GAG GTG GAG CCC AGT GAC突变Ubi-B基因序列，其中从CT重复中缺失了CT。CAC CTG GTC CTG CGT CTG AGA GGT GGT ATG CAG ATC TTC GTG AAGACC CTG ACC GGC AAG ACC ATC ACT GGA GGT GGA GCC CAG TGA本发明进一步包括载体和质粒，它们含有编码至少一个移码突变βAPP和/或Ubi-B肽的DNA序列。这些载体包括但不限于大肠杆菌质粒，李斯特菌属载体和重组病毒载体。重组病毒载体包括但不限于含有编码突变βAPP和/或Ubi-B肽的DNA序列的正痘病毒，金丝雀病毒，山羊痘病毒，猪痘病毒，牛痘，杆状病毒，人腺病毒，SV40，牛乳头瘤病毒。
通过对患者施用有效量的重组病毒载体或质粒也可以达到对早老性痴呆和唐氏综合症的治疗或早老性痴呆的预防，所述载体或质粒包含至少一个含有编码移码突变肽的DNA序列的插入位点，从而将患者的抗原呈递细胞转移到载体/质粒的宿主细胞，并且实现HLA/移码突变肽复合物的呈递。
本领域的技术人员将发现与本发明的肽相关的其它可能的用途，这些用途包括在权利要求书的范围内。
通过本领域的常规方法，如化学肽合成，重组DNA技术或由移码突变βAPP基因和Ubi-B基因编码的蛋白质或肽的蛋白酶裂解可以生产本发明的肽。在下面的叙述中阐述了一个化学合成法。
通过本发明可以获得下面的优点本发明提供了治疗患有与移码突变βAPP和Ubi-B基因产物相关的早老性痴呆和唐氏综合症的患者的可能性，目前知道这些患者还没有任何好的治疗替代方法。
另外，本发明提供了为抵抗早老性痴呆的发作而对人进行预防性接种的可能性。
序列表所有序列的共同点序列类型肽序列单位氨基酸拓扑结构线性SEQ ID NO: 1序列长度19个氨基酸N V P G H E R M G R G R T S S K E L A1 5 1015SEQ ID NO: 2序列长度27个氨基酸R L E A K H R E N V P G H E R M G R G R T S S K E L A1 510 152025SEQ ID NO: 3序列长度17个氨基酸R L E A K H R E N V P G H E R M G1 5 1015SEQ ID NO: 4序列长度12个氨基酸M G R G R T S S K E L A1 5 10SEQ ID NO: 5序列长度15个氨基酸E R M S Q V M R M G R G R T S1 5 1015SEQ ID NO: 6序列长度20个氨基酸Y A D L R E D P D R Q D H H P G S G A Q1 5 101520SEQ ID NO: 7序列长度28个氨基酸H L V L R L R G Y A D L R E D P D R Q D H H P G S G A Q1 5 10152025SEQ ID NO: 8序列长度17个氨基酸H L V L R L R G Y A D L R E D P D1 5 1015SEQ ID NO: 9序列长度5个氨基酸G G G A Q1 5SEQ ID NO: 10序列长度13个氨基酸T L T G K T I T G G G A Q1 5 10
权利要求
1．一种肽，其特征在于，它a)至少长为8个氨基酸，并且是从与早老性痴呆和/或唐氏综合症相关的移码突变产生的突变βAPP和/或Ubi-B蛋白质的片段；和b)含有突变βAPP和/或Ubi-B蛋白质的突变部分的至少一个氨基酸；和c)含有对应于在突变序列的氨基末端前面的蛋白质序列的正常部分的羧基末端的0-10个氨基酸并且可以进一步延伸到如相关移码突变产生的新的终止密码子所确定的蛋白质的突变部分的羧基末端；和d)以它的全长或在被抗原呈递细胞加工后，诱导T细胞应答。
2．根据权利要求1所述的肽，其特征在于，它含有8-25个氨基酸。
3．根据权利要求1所述的肽，其特征在于，它含有9-20个氨基酸。
4．根据权利要求1所述的肽，其特征在于，它含有9-16个氨基酸。
5．根据权利要求1所述的肽，其特征在于，它含有8-12个氨基酸。
6．根据权利要求1所述的肽，其特征在于，它含有20-25个氨基酸。
7．根据权利要求1所述的肽，其特征在于，它含有9个氨基酸。
8．根据权利要求1所述的肽，其特征在于，它含有12个氨基酸。
9．根据权利要求1所述的肽，其特征在于，它含有13个氨基酸。
10．根据权利要求1所述的肽，其特征在于，它选自具有下面序列号的一组肽seq id no.1-seq id no.10或其中任何一个的片段。
11．含有上面的权利要求中任何一个所述的肽和药物可接受载体或稀释剂的药物组合物。
12．含有权利要求1-10中任何一个所述的肽和药物可接受载体或稀释剂的用于早老性痴呆的疫苗。
13．根据权利要求1-10中任何一个所述的肽在制备用于治疗或预防早老性痴呆或者治疗唐氏综合症的药物组合物中的用途。
14．接种患有或倾向于患早老性痴呆的患者的方法，包括以足以诱导对与早老性痴呆和/或唐氏综合症相关的突变βAPP和/或突变Ubi-B肽的特异性T细胞免疫性的量一次或多次施用权利要求1-10中至少一种肽。
15．根据权利要求14所述的方法，其中肽的每次施用量范围是1微克(1μg)到1克(1g)，优选范围是1微克(1μg)到1毫克(1mg)。
16．治疗患有早老性痴呆或唐氏综合症的患者的方法，该方法是通过用权利要求1-10所述的肽体内或从体内刺激进行的。
17．根据权利要求16所述的方法，其中肽的每次施用量范围是1微克(1μg)到1克(1g)，优选范围是1微克(1μg)到1毫克(1mg)。
18．含有编码权利要求1所述的移码突变肽的DNA序列或其变异体的分离的DNA序列。
19．编码含有seq.id.no:1-10或其变异体的肽的权利要求18所述的分离的DNA序列。
20．根据权利要求18-19中任何一个所述的DNA序列在制备用于治疗或预防早老性痴呆或者治疗唐氏综合症的药物组合物中的用途。
21．治疗患有或倾向于患早老性痴呆或者患有唐氏综合症的患者的方法，该方法通过用权利要求18-19所述的DNA序列体内或从体内刺激进行的。
22．一种质粒或病毒载体，它含有编码与早老性痴呆或唐氏综合症相关的移码突变βAPP肽和/或Ubi-B肽的权利要求18所述的DNA序列。
23．根据权利要求22所述的载体，其中载体是大肠杆菌质粒，李斯特菌属载体和重组病毒载体。重组病毒载体包括但不限于正痘病毒，金丝雀病毒，山羊痘病毒，猪痘病毒，牛痘，杆状病毒，人腺病毒，SV40或牛乳头瘤病毒。
24．权利要求22所述的质粒或病毒载体在制备用于治疗或预防早老性痴呆或者治疗唐氏综合症的药物组合物中的用途。
25．治疗患有或倾向于患早老性痴呆或者患有唐氏综合症的患者的方法，该方法是通过用权利要求22所述的质粒或病毒载体体内或从体内刺激进行的。
全文摘要
用于治疗和/或预防早老性痴呆和/或唐氏综合症的组合物中的、引发T细胞免疫性的、与早老性痴呆和唐氏综合症相关的移码突变体β－淀粉样前体肽和突变体泛素－B。
文档编号A61K35/66GK1300294SQ99805976
公开日2001年6月20日 申请日期1999年4月30日 优先权日1998年5月8日
发明者G·高德纳克, J·A·艾里克森, M·莫勒 申请人:诺尔斯海德公司