人干细胞因子皮肤修复液及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及损伤皮肤修复技术领域，尤其是一种人干细胞因子皮肤修复液，及其 制备方法。
【背景技术】
[0002] 人类的皮肤细胞长期处于外界环境的刺激和影响下，随着年龄的增加，皮肤细胞 呈现出老化趋势。皮肤基底层的生发细胞，也就是具有增殖和扩增潜力的细胞，是维持皮肤 保持色泽、光滑度、纹理、弹性的重要细胞。但遇到一些大的损伤或者持续存在的损伤时，生 发细胞的增殖力就不足W维持原有的皮肤质量，则出现了皮肤老化和退化的现象。
[0003] 现在市面上存在一些细胞因子的药物和化妆品，大多是单一细胞因子，比如表皮 生长因子巧GF)，碱性成纤维细胞生长因子炬FG巧等，虽然也能起到一定的作用，但因为过 于单一且用量和浓度也与人体内环境有差别，所W效果不明显。
【发明内容】
[0004] 本发明针对现有技术的不足，提出一种人干细胞因子皮肤修复液，搭配合理，效果 好。
[0005] 为了实现上述发明目的，本发明提供W下技术方案；一种人干细胞因子皮肤修复 液，由下述含量的成分构成：
[0006] 表皮生长因子 50~75ug/l 酸性成纤维细胞生长因子 巧~20ug/l 碱性成纤维细胞生长因子 1日~20ug^ 血管内皮生长因子4~6ug/l。
[0007] 优选的，血管内皮生长因子的含量为加g/1。
[000引优选的，表皮生长因子由53个氨基酸组成，分子量为6. 20化0。
[0009] 优选的，酸性成纤维细胞生长因子由147个氨基酸组成，分子量为15. 3邸。
[0010] 优选的，碱性成纤维细胞生长因子由155个氨基酸组成，分子量为16~18. 5邸。
[0011] 优选的，血管内皮生长因子由121个、165个、189个和206个氨基酸混合组成，分 子量为32~45邸。
[0012] 本发明还提供了上述人干细胞因子皮肤修复液的制备方法，其技术方案为；包括 W下步骤：
[0013] (1)、无菌采集初生儿厮带，采用组织块直接培养法进行培养；
[0014] (2)、弃组织块后，更换新鲜无血清培养基继续培养；
[0015] (3)、细胞融合90%后，收取上清液，再加入膜酶消化，离屯、，获得细胞；
[0016] (4)、将细胞接种于培养器中内进行培养，加入无血清培养基继续传代；
[0017] 巧）、收取的细胞培养液，离心0. 2um孔径滤器过滤；
[0018] 化）、将上清液W分子量为指标进行筛选，获得由分子量为6. 20化0的表皮生长因 子、分子量为15. 3KD的酸性成纤维细胞生长因子、分子量为16~18. 5KD的碱性成纤维细 胞生长因子和分子量为32~45KD的血管内皮生长因子构成的混合物。
[0019] 优选的，还包括向步骤化）的混合物中添加表皮生长因子、酸性成纤维细胞生 长因子、碱性成纤维细胞生长因子或血管内皮生长因子，使得各成分的含量分别为50~ 7加g/l、15 ~20ug/l、15 ~20ug/l 和 4 ~6ug/l，混匀保存。
[0020] 与现有技术相比，本发明具有W下优点：针对生发细胞快速增殖的一系列细胞因 子组合，按照合理的符合人体细胞生长并且加速生长的环境，可W达到快速修复受损皮肤， 恢复皮肤质量。
[0021] 本发明可应用于美容皮肤养护领域，还可W广泛应用于医学整形、烧伤创伤修复、 伤口愈合等方面，具有很大的经济和社会效益，对于改善生活质量，提高人民皮肤健康指数 也起到重要作用。
[0022] 本发明所设及的制备方法，工艺流程不复杂，具备大规模制备的条件。
【具体实施方式】
[0023] 下面结合实施例对本发明进行详细描述，本部分的描述仅是示范性和解释性，不 应对本发明的保护范围有任何的限制作用。
[0024] 一种人干细胞因子皮肤修复液，由下述含量的成分构成：
[0025] 表皮生长因子 50~75ug/l 酸性成纤维细胞生长因子 15~20ug^ 碱性成纤维细胞生长因子 15~20ug/l 血管内皮生长因子 4~6ug/l。
[0026] 上述人干细胞因子皮肤修复液的制备方法，包括W下步骤：
[0027] (1)无菌采集合格初生儿厮带，采用组织块直接培养法进行培养；
[002引 （2)弃组织块后，更换新鲜无血清培养基继续培养；
[0029] 做细胞融合90%后，收取上清液，再加入膜酶消化，离心获得细胞；
[0030] (4)将细胞接种于培养皿/瓶中内进行培养，加入无血清培养基继续传代；
[0031] 妨收取的细胞培养液，离心0. 2um孔径滤器过滤；
[0032] 做将上清液W分子量和直径为指标进行筛选。
[003引 （7)添加细胞因子配方，混匀保存。
[0034] 本制备方法在前六步所制得的产品，经滤膜过滤后将大于22-25邸的其他因子滤 除，（血管内皮生长因子保留氨基酸数量少的两个）因大分子或多氨基酸有可能发生过敏 反应，并且对于皮肤修复无直接或明显效果。
[0035] 按照目前过滤条件，经滤过后，组织液中各因子成分的数值：
[0036] 表皮生长因子；100-120UG/L
[0037] 酸性成纤维细胞生长因子；38-59UG/L [003引碱性成纤维细胞生长因子；47-64UG/L
[0039] 血管内皮生长因子；5-13UG/L
[0040] 与血清中含量对比，各因子在细胞修复液当中的浓度明显增多，但比值关系无明 显改变。因此根据目前的过滤条件，还需要根据滤过后液体四种因子成分的损失量添加该 四种因子。若在过滤条件合适的情况下，该过滤所得的四种因子含量应该与血清中含量相 同，也就是说无需再添加。
[0041] 本发明人干细胞因子皮肤修复液，是根据细胞培养过程中，细胞培养所处的液体 环境有利于细胞生长该个理论而延伸的。众所周知，干细胞是一类具有自我复制，自我更 新的原始细胞，具有向多种组织细胞分化的能力。而且干细胞相对于正常成体成熟细胞而 言更加脆弱，在培养过程中，如果外界条件不适合细胞的生长复制，干细胞就会调亡。本发 明配制的修复因子液，就是针对适合细胞存活和增殖的细胞液外环境进行处理，将大分子 蛋白和对皮肤生长修复无效的因子剔除，按照一定比例添加促进皮肤修复的一些因子，配 制出对皮肤修复具有良好效果的一种液体，适合人类皮肤细胞等正常成熟细胞在内复制存 活，且复制速度加快，细胞损伤修复加快。
[0042] 实施例1
[0043] 一种人干细胞因子皮肤修复液，由下述含量的成分构成：
[0044] 表皮生长因子 75ug/l 酸性成纤维细胞生长因子 巧ug/1 碱性成纤维细施生长因子 20ug/l 血管内皮生长因子 5ug/l。
[0045] 制备方法具体操作如下；
[0046] 一、厮带采集操作规程
[0047] 1厮带采集前，采集人员要严格核对产妇的姓名、年龄、身份证信息，产妇是否有己 肝、丙肝、艾滋病、梅毒感染疾病，符合保存标准者，方可进行厮带的采集。
[0048] 2厮带采集瓶必须是经批准用于人组织采集的无菌容器，W减少细胞丢失和微生 物污染的危险。
[0049] 3检查采集瓶是否完整、密闭、保持无菌，外包装是否有破损，如有破损，不可W使 用。
[0化0] 4所有采集厮带用的试剂和材料必须无菌。
[0化1 ] 5新生儿娩出后10秒钟内，在距新生儿厮部5-8厘米处用两把止血错夹住，从两错 间剪断厮带后结扎。
[0052] 6待胎盘娩出1分钟内，在靠近胎盘处结扎后剪断厮带，保证采集的厮带总长度不 小于15厘米。
[0053] 7厮带保持完整，无针眼及破损，尽量避免厮带与其他物品接触。
[0化4] 8用普通无菌管采集5ml厮血，用作病原学检测。
[0化5] 9将结扎的厮带用浸有0. 9%生理盐水的无菌医用纱布擦试两遍，清除血液及胎 粪等污物。
[0化6] 10将厮带放入一次性无菌采集瓶，梓紧瓶盖。
[0化7] 11将厮带采集瓶、抗凝管、采集登记表统一标识，并