索氟布韦倍半水合物胶囊及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本文公开核苷氨基磷酸酯晶体和它们作为用于治疗病毒性疾病的药剂的用途。这 些化合物是RNA-依赖性RNA病毒复制的抑制剂，并且可用作HCVNS5B聚合酶的抑制剂、 HCV复制的抑制剂、以及用于在哺乳动物中治疗丙型肝炎感染。
【背景技术】
[0002] 丙型肝炎病毒（HCV)感染是导致慢性肝脏疾病的主要健康问题，例如肝硬化和肝 细胞癌，在基本上大量感染的个体中，估计为2-15%的世界人口。根据美国疾病控制中心的 数据，单美国就估计有450万的感染人口。根据世界卫生组织的数据，全世界有超过2亿的 感染人口，并且每年有至少300-400万人口被感染。一旦被感染，约20%的人清除病毒，但 其余的人可能在其余下的生命中将携带HCV。10-20%的慢性感染个体最终发展为肝破坏性 肝硬化或癌症。病毒疾病是通过被污染的肠外血液和血液制品，受污染的针头经胃肠外传 播，或通过性行为和从被感染的母亲或携带者母亲垂直传播至其后代。HCV感染的现有治疗 局限于单用重组干扰素a或联合使用核苷类似物利巴韦林的免疫治疗，该治疗取得有限 的临床益处。而且，尚未建立用于HCV的疫苗。因此，急切需要一种可有效对抗慢性HCV感 染的改善的治疗药剂。
[0003]HCV病毒体是具有约9600个碱基的单寡核糖核苷酸基因序列的有包膜正链RNA病 毒，编码约3010个氨基酸的多聚蛋白。HCV基因的蛋白产物包括结构蛋白C、El和E2,以 及非结构蛋白NS2、NS3、NS4A与NS4B、NS5A和NS5B。据信非结构（NS)蛋白提供病毒复制 的催化作用。NS3蛋白酶释放NS5B，多聚蛋白链的RNA依赖性RNA聚合酶。HCVNS5B聚合 酶是从单链病毒RNA合成双链RNA所必需的，单链病毒RNA在HCV的复制循环中作为模板。 因此，认为NS5B聚合酶是HCV复制复合体中的必要组分（K.Ishi，等，H印tology(肝脏病 学），1999,29 :1227-1235 ;V.Lohmann，等?，Virology(病毒学），1998,249 :108-118)。HCV NS5B聚合酶的抑制防止形成双链HCVRNA，因而构成开发HCV特异性抗病毒疗法的具有吸 引力的方法。
[0004]HCV属于具有许多共性的病毒大科。
[0005] 黄病毒科 病毒的黄病毒科包括至少三种不同的属：癌病毒属，它导致牛和猪的疾病；黄病毒属， 它是导致例如登革热和黄热病的疾病的主要原因；和丙型肝炎病毒属（hepaciviruses)， 其唯一成员是HCV。基于血清学相关性分组，黄病毒属包括多于68个成员（Calisher等.， J.Gen.Virol(遗传病毒学杂志），1993, 70, 37-43)。临床症状各不相同，包括发热、脑炎和 出血热（FieldsVirology(费氏病毒学），编辑：Fields，B.N.，Knipe，D.M?，和Howley， P.M. ,Lippincott-RavenPublishers，Philadelphia，PA，1996，Chapter31，931_959)。全 球关注的与人类疾病相关的黄病毒属包括登革出血热病毒（DHF)、黄热病病毒、休克综合症 和日本脑炎病毒（Halstead，S.B. ,Rev.Infect.Dis.，1984,6, 251-264 ;Halstead，S.B., Science(科学），239 :476-481,1988 ;Monath，T.P.，NewEng.J.Me工（新英格兰医学 杂志）1988, 319,641-643)。
[0006]瘟病毒属包括牛病毒性腹泻病毒（BVDV)、猪瘟病毒（CSFV，也称为猪霍乱病毒） 和绵羊瘟病毒（BDV) (Moennig，V?等.Adv.Vir.Res. 1992,41，53-98)。家畜（牛、猪和羊） 的瘟病毒感染造成世界范围内巨大的经济损失。BVDV导致牛的粘膜病且对于家畜产业具 有显著的经济重要性（Meyers，G?和Thiel，H.J.，AdvancesinVirusResearch(病毒研 究进展），1996,47, 53-118;MoennigV.，等，Adv.Vir.Res. 1992,41，53-98)。尚未像动物瘟 病毒那样全面了解人瘟病毒。然而，血清学研究显示人类中有相当多的瘟病毒接触。
[0007] 瘟病毒和丙型肝炎病毒是黄病毒科内密切相关的病毒属。该科内其它密切相关的 病毒包括GB病毒A、GB病毒A-类似物、GB病毒-B和GB病毒-C(也称为G型肝炎病 毒，HGV)。丙型肝炎病毒属（丙型肝炎病毒；HCV)由许多可感染人体的密切相关但不同基 因型的病毒组成。至少有6种HCV基因型和大于50种亚型。由于癌病毒和丙型肝炎病毒 的相似性，加上丙型肝炎病毒在细胞培养中很难有效生长，所以，在HCV病毒研究中常常使 用牛病毒性腹泻病毒（BVDV)作为代用品。
[0008] 瘟病毒和丙型肝炎病毒的遗传组构非常相似。这些正链RNA病毒具有单个大的开 放式读码框（0RF)，编码所有病毒复制所需的病毒蛋白。这些蛋白表达为多聚蛋白，多聚蛋 白被细胞和病毒编码的蛋白酶同时翻译加工或翻译后加工，产生成熟的病毒蛋白。负责病 毒基因组RNA复制的病毒蛋白位于大致羧基末端之内。ORF的三分之二称为非结构（NS) 蛋白。瘟病毒和丙型肝炎病毒的ORF非结构蛋白部分的基因组构和多聚蛋白加工非常相 似。对于瘟病毒和丙型肝炎病毒，从非结构蛋白编码区域的氨基末端到ORF的羧基末端的 连续顺序，成熟非结构（NS)蛋白由p7,NS2,NS3,NS4A，NS4B，NS5A和NS5B组成。
[0009] 瘟病毒和丙型肝炎病毒的NS蛋白共有具有特殊蛋白质功能特征的序列结构域。 例如，两种病毒属中病毒的NS3蛋白都含有具有丝氨酸蛋白酶和解旋酶特征的氨基酸序列 基序（Gorbalenya等?，Nature(自然），1988, 333, 22;Bazan和FletterickVirology( 病毒学），1989,171,637-639;Gorbalenya等?，NucleicAcidRes?(核酸研究），1989, 17,3889-3897)。类似地，瘟病毒和丙型肝炎病毒的NS5B蛋白都具有以针对RNA的RNA聚 合酶为特征的基序（Koonin，E.V?和Dolja，V.V. ,Crir.Rev.Biochem.Molec.Biol. 1993， 28,375-430)〇
[0010] 瘟病毒和丙型肝炎病毒的NS蛋白在病毒生命周期中的实际作用和功能是 直接类似的。在两种情况下，NS3丝氨酸蛋白酶负责ORF中其位置下游的多聚蛋白 前体的所有蛋白水解加工（Wiskerchen和Collett,Virology(病毒学），1991，184， 341-350;Bartenschlager等.，J.Virol(病毒学杂志）? 1993,67,3835_3844;Eckart 等.Biochem.Biophys.Res.Comm.生物化学和生物物理学研究评论1993,192, 399-406 ;Grakoui等?，J.Virol(病毒学杂志）? 1993,67, 2832-2843;Grakoui等?，Proc. Natl.AcadSci.USA(美国国家科学院院刊）1993,90，10583-10587;Hijikata等?， 工￥丨1'〇1.(病毒学杂志）1993,67,4665-4675;1'〇1116等.，1￥11'〇1.(病毒学杂志）， 1993,67,4017-4026)。在两种情况下，NS4A蛋白起NS3丝氨酸蛋白酶的辅因子的作 用（Bartenschlager等?，J.Virol.(病毒学杂志）1994,68, 5045-5055;Failla等?， J.Virol.(病毒学杂志）1994,68, 3753-3760;Xu等?，J.Virol.(病毒学杂志），1997, 71 :5312-5322)。两种病毒的NS3蛋白还都作为解旋酶起作用（Kim等.，Biochem.Biophys. Res.Comm.(生物化学和生物物理学研究评论），1995,215，160_166;]111和？6丨618〇11,Arch.Biochem.Biophys. ,1995,323,47-53;Warrener和Collett,J.Virol?(病毒学杂 志）1995,69，1720-1726)。最后，瘟病毒和丙型肝炎病毒的NS5B蛋白都具有预见的针对 RNA的RNA聚合酶的活性（Behrens等.，EMB0,1996,15,12-22;Lechmann等.，J.Virol. (病毒学杂志），1997,71，841 6_8428;￥皿11等.，13;[0(3]16111.13;[(^]15^.1^8.(]〇111111(生物化 学和生物物理学研究评论）? 1997, 232, 231-235 ;Hagedorn，PCTW097/12033;Zhong等， J.Virol.(病毒学杂志），1998, 72,9365-9369)。
[0011]目前，对于感染丙型肝炎病毒的个体具有有限的治疗选择。目前批准的治疗选择 是单用重组干扰素a或联合使用核苷类似物利巴韦林的免疫治疗。该疗法的局限在于其 临床有效性，并且仅50%的治疗的患者对于疗法有反应。因此，非常需要更有效和新颖的疗 法来解决HCV感染所面临的未满足的医疗需要。
[0012] 现在已经鉴定了用于直接作用抗病毒剂的药物开发的许多潜在的分子靶作为 抗-HCV疗法，包括但不限于NS2-NS3自身蛋白酶、N3蛋白酶、N3解旋酶和NS5B聚合酶。 RNA-依赖性RNA聚合酶是单链正义RNA基因组的复制所绝对必需的，并且该酶已经在药 物化学师中引起极大的兴趣。
[0013] 作为HCV感染的潜在疗法的HCVNS5B抑制剂已经在下列文献中综述：Tan， S.-L，等?，NatureRev.DrugDiscov.(药物开发自然评论），2002，l，867-881;Walker,M.P.等?，Exp.Opin.InvestigationalDrugs(研究药物实验观点），2003,12， 1269-1280 ;Ni,Z-J?,等.，CurrentOpinioninDrugDiscoveryandDevelopment(现 代药物发现和开发观点），2004,7,446_459 ;Beaulieu，P.L，等?，CurrentOpinionin InvestigationalDrugs(现代研究药物观点），2004, 5,838-850 ;Wu，J.，等?，Current DrugTargets-InfectiousDisorders(现代药物革感染性病症），2003, 3, 207-219 ; Griffith，R.C.，等，AnnualReportsinMedicinalChemistry(药物化学年度报告），2004, 39,223-237 ;Carrol，S.，等?，InfectiousDisorders-DrugTargets(感染性病症药物 靶），2006,6,17-29。出现抗性HCV菌株的可能性和需要鉴定具有广泛基因型覆盖度的药 剂支持继续努力来鉴定新颖和更有效的核苷作为HCVNS5B抑制剂的需要。
[0014]NS5B聚合酶的核苷抑制剂可起到导致链终止的非天然底物的作用或和核苷酸竞 争结合聚合酶的竞争性抑制剂的作用。为了起到链终止剂的作用，核苷类似物必须被细胞 所摄取并且体内转化为三磷酸酯以竞争聚合酶核苷酸的结合位点。该转化至三磷酸酯通 常受到细胞激酶的介导，所述细胞激酶赋予潜在核苷聚合酶抑制