用于治疗溶酶体贮积症的环糊精的制作方法
【专利说明】用于治疗溶酶体贮积症的环糊精
[0001] 联邦咨助的研究
[0002] 本工作得到联邦政府支持。政府具有对本发明的某些权利。
[0003] 相关申请
[0004] 本申请要求于2012年8月3日提交的美国临时申请第61/679, 668号的优先权， 在此将其全文并入作为参考。 发明领域
[0005] 本发明提供使用环糊精化合物以及结合其他药剂使用环糊精化合物治疗大量溶 酶体贮积症和/或降低非胆固醇脂类的方法。
【背景技术】
[0006] 环糊精（CD)是环形式的糖分子。a -CD (6糖）、β -CD (7糖）和γ -CD (8糖）是常 用的环糊精。羟丙基环糊精（ΗΡβ⑶）已被批准作为药物赋形剂用于制药用途。最近 的报道显示，包括HP β⑶和β -甲基环糊精（Μ β⑶）的β -环糊精在C型尼曼匹克（NPC) 疾病小鼠模型中降低胆固醇聚积和神经元细胞损失。在CD治疗之后这些NPC KO小鼠的寿 命也增加了 80-100%。在NPC疾病的猫科动物模型中也获得了类似的阳性结果。另有报道 β -CD增加了原代NPC成纤维细胞中的胞吐。
[0007] 最近已经发现，δ-生育酚增加胆固醇从NPC细胞的外排，并降低胆固醇聚积。已 经表明提高溶酶体胞吐是针对所有溶酶体贮积症开发新治疗的治疗策略，上述溶酶体贮积 症由因溶酶体蛋白质基因的基因突变导致的50种不同的疾病组成。这些疾病中的表型变 化是溶酶体中脂类、糖蛋白和/或其他大分子的聚积以及患者细胞中溶酶体尺寸的增大， 其可以导致受感染组织中的细胞功能障碍和细胞死亡。
【发明内容】
[0008] 在一方面，本发明提供治疗受试者中溶酶体贮积症的方法，其包括：确定受试者需 要降低非胆固醇脂类或降低非胆固醇主要脂类和大分子聚积，以及对有需要的受试者施用 有效量的环糊精化合物或其药学可接受的盐、酯、溶剂化物或水合物。
[0009] 另一方面，本发明提供治疗受试者中溶酶体贮积症的方法，其中受试者之前已经 识别为需要降低非胆固醇脂类或降低非胆固醇主要脂类和大分子聚积，上述方法包括对有 需要的所述受试者施用有效量的环糊精化合物或其药学可接受的盐、酯、溶剂化物或水合 物。
[0010] 另一方面，本发明提供治疗受试者中溶酶体贮积症的方法，其包括以下步骤：对受 试者施用有效量的环糊精化合物或其药学可接受的盐、酯、溶剂化物或水合物和额外的治 疗剂。
[0011] 在某些方面，本发明提供降低受试者中非胆固醇脂类或降低非胆固醇主要脂类和 大分子聚积的方法，该方法包括：对受试者施用环糊精化合物或其药学可接受的盐、酯、溶 剂化物或水合物；以及检测脂类降低的量。
[0012] 在另一方面，本发明提供一种药物组合物，其包括环糊精化合物或其药学可接受 的盐、酯、溶剂化物或水合物和维生素 E(例如δ-生育酚）以及药学可接受的载体或赋形 剂。
[0013] 在另一方面，本发明提供治疗患有溶酶体贮积症的受试者的方法，其包括结合其 他药剂使用如上所述的药物组合物。
[0014] 在任一上述方面的一实施方式中，施用环糊精化合物的步骤包括以大约0.0 lmg/ Kg/天至100mg/Kg/天的剂量将环糊精化合物施用于受试者例如人。
[0015] 在任一上述方面的另一实施方式中，以单一剂量或每天大约0. 5mg/Kg至8mg/Kg 的量将环糊精化合物施用于受试者例如人。
[0016] 在任一上述方面的一实施方式中，以单一剂量或每天大约3mg/Kg的量将环糊精 化合物施用于受试者例如人。在任一上述方面的又一实施方式中，以单一剂量或每天大约 I. 0mg/Kg、l. 25mg/Kg、l. 5mg/Kg、l. 75mg/Kg、2. 0mg/Kg、2. 25mg/Kg、2. 5mg/Kg、2. 75mg/Kg、 3. 25mg/Kg、3. 5mg/Kg、3. 75mg/Kg、4. 0mg/Kg、4. 25mg/Kg 或 4. 5mg/Kg 的量将环糊精化合物 施用于受试者例如人。
[0017] 在任一上述方面的又一实施方式中，以单一剂量或每天大约0. lmg/Kg至0. 3mg/ Kg、0. lmg/Kg 至 0· 4mg/Kg、0. lmg/Kg 至 0· 5mg/Kg、0. lmg/Kg 至 0· 6mg/Kg 或 0· lmg/Kg 至 0. 7mg/Kg的量将环糊精化合物施用于受试者例如人。
[0018] 在任一上述方面的又一实施方式中，以单一剂量施用环糊精化合物。
[0019] 在任一上述方面的一实施方式中，以单一剂量或每天大约0. 05-lmg/Kg的量将额 外的治疗剂（与环糊精化合物不同）施用于受试者例如人。在任一上述方面的另一实施方 式中，以单一剂量或每天大约 〇· lmg/Kg 至 0· 3mg/Kg、0. lmg/Kg 至 0· 4mg/Kg、0. lmg/Kg 至 0· 5mg/Kg、0. lmg/Kg至0· 6mg/Kg或0· lmg/Kg至0· 7mg/Kg的量将额外的治疗剂（与环糊精 化合物不同）施用于受试者例如人。
[0020] 在任一上述方面的一实施方式中，以单一剂量施用额外的治疗剂。
[0021] 在另一方面，本发明特征在于治疗受试者中溶酶体贮积症的方法，其包括：确定受 试者需要降低非胆固醇脂类或降低非胆固醇主要脂类和大分子聚积；以单一剂量或每天大 约0. 05mg/Kg至lmg/Kg的量对有需要的受试者施用有效量的环糊精化合物或其药学可接 受的盐、酯、溶剂化物或水合物；以及以单一剂量或每天大约〇. 〇5mg/Kg至lmg/Kg的量对受 试者施用与环糊精化合物不同的额外的治疗剂（例如维生素 E)。
[0022] 在另一方面，本发明特征在于治疗受试者中溶酶体贮积症的方法，其包括：确定受 试者需要降低非胆固醇脂类或降低非胆固醇主要脂类和大分子聚积；对有需要的受试者施 用有效量的环糊精化合物或其药学可接受的盐、酯、溶剂化物或水合物；以及对受试者施用 与环糊精化合物不同的额外的治疗剂（例如维生素 E)。
[0023] 在一实施方式中，以单一剂量或每天大约0· lmg/Kg至0· 3mg/Kg、0. lmg/Kg至 0· 4mg/Kg、0. lmg/Kg 至 0· 5mg/Kg、0. lmg/Kg 至 0· 6mg/Kg 或 0· lmg/Kg 至 0· 7mg/Kg 的量将环 糊精化合物施用于受试者例如人。
[0024] 在另一实施方式中，以单一剂量或每天大约0· lmg/Kg至0· 3mg/Kg、0. lmg/Kg至 0· 4mg/Kg、0. lmg/Kg 至 0· 5mg/Kg、0. lmg/Kg 至 0· 6mg/Kg 或 0· lmg/Kg 至 0· 7mg/Kg 的量将额 外的治疗剂（与环糊精化合物不同）施用于受试者例如人。
[0025] 在又一实施方式中，以单一剂量或每天大约50 μ M的量将环糊精化合物与10 μ M 的额外的药剂结合施用于受试者例如人。
[0026] 在进一步优选的实施方式中，以单一剂量或每天大约50 μ M的量将环糊精化合物 与10 μΜ δ-生育酚结合施用于受试者例如人。
[0027] 在其他方面，本发明提供一种试剂盒，其包括单位剂型的有效量的环糊精化合物 或其药学可接受的盐、酯、溶剂化物或水合物，以及用于将化合物施用于患有溶酶体贮积症 的受试者的说明书。
[0028] 本发明的各种优势包括以下：用环糊精包括羟丙基环糊精治疗所有的溶酶 体贮积症，但在某些方面C型尼曼匹克病除外；用环糊精包括羟丙基-β -环糊精与维生素 E结合治疗所有的溶酶体贮积症，用以协同或附加的治疗效果，用于降低使得环糊精治疗实 际上更加可行所需的环糊精的剂量，并通过减少两种药物的剂量使副作用更小；用环糊精 (例如β-和γ-形式）与修饰的环糊精结合治疗所有的溶酶体贮积症，效力更好，副作用 更小；用环糊精和修饰的维生素 E治疗所有的溶酶体贮积症，效力更好，副作用更小。
[0029] 而且，本发明提供以本发明的化合物给药，以便基于环糊精作用机制（增加溶酶 体胞吐）治疗40-50种溶酶体贮积症中的许多种。
[0030] 本发明的其他方面在下文中公开。
【附图说明】
[0031] 图1是一组显示用δ-生育酚、α-生育酚、甲基-β-环糊精、δ-生育酚和甲 基-β-环糊精的组合、以及α-生育酚和甲基-β-环糊精（MB⑶）的组合进行处理的 Wolman成纤维细胞（Wolman fibroblasts)中总胆固醇（包括胆固醇醋和游离胆固醇）的 降低的图。
[0032] 图2是一组显示用δ -生育酚（D-T)、α -生育酚（a-T)、甲基-β -环糊精、δ -生 育酚（D-T)和甲基-β-环糊精（MB⑶）的组合、以及α-生育酚和甲基-β-环糊精的组合 进行处理的Wolman成纤维细胞尼罗红染色的照片。
[0033] 图3是一组显示通过HEXB分泌所测量的Wolman成纤维细胞中胞吐水平的图。
[0034] 图4是一组显示在存在和不存在δ-生育酚、α-生育酚、甲基-β-环糊精、δ-生 育酚和甲基-环糊精的组合、以及α -生育酚和甲基-β -环糊精的组合的情况下野生 型成纤维细胞和溶酶体贮积症成纤维细胞中溶酶体钙外排的图。
[0035] 图5Α-?是多组显示使用Lysotracker检定所测量的各种形式的环糊精（a-CD、 r-⑶）、δ -生育酚（D-T)及组合在7种疾病和野生型成纤维细胞系中的效果的照片。高度 分枝的环糊精（HBCD)也称作Kl印tose。
[0036] 图6是一组显示环糊精减轻Wolman病细胞中病理学超微结构变化的照片。缩写： 甲基-β -环糊精（MBCD)、δ -生育酷（δ -toco)。
[0037] 图7是一组显示用甲基-β -环糊精（MB⑶）、α -环糊精（α -⑶）或γ -环糊精 (γ -⑶）处理的Farber成纤维细胞的电子显微镜分析的照片。
[0038] 图8是一组显示用甲基-β