有效消除蛋白质的原有抗 原性，使蛋白质保持流动性和较好的理化性状，例如保持溶液性状。产率为约1〇〇%。
[0037] 在本发明中，除非另外说明，否则所述的变性动物血白蛋白中的动物是指温血动 物，包括但不限于哺乳动物，例如啮齿动物、水生哺乳动物、农场动物如鸡、羊、猪、牛和马， 优选选自牛和猪。
[0038] 除非另外说明，否则在本发明中所用的百分数为重量/体积（w/v)百分数。
[0039] 除非另外说明，否则在本发明中所用的"约"指的是大约，当其与数值一起应用时， 其表示在该数值上下可以延伸一定的范围。通常，"约"表示该数值+20%，优选+10%，更优选 +5%，最优选+2%，特别是+1%。
【附图说明】
[0040] 图1 :大鼠过碘酸雪夫染色图
[0041] 图2:大鼠电镜图
[0042] 图3 :试验结束时大鼠的过碘酸雪夫染色图
【具体实施方式】
[0043] 实施例1 :变性牛血白蛋白的制备
[0044] 称取牛血清白蛋白10g，加去离子水溶解后定容至IOOmL,加入0. 45mL的38%w/v 甲醒，摇匀后，静置30分钟,加入lmmol/L氢氧化钠调节pH至8. 9。于113°C放置1小时， 然后于4°C放置6周，最后于100°C放置1. 5小时。然后，加入0. 9g氯化钠，再加入Immol/ L盐酸调节pH至7.6。除菌后，在KKTC水浴中放置30分钟，即得变性牛血白蛋白（产率为 约 100%)。
[0045] 实施例2 :变性猪血白蛋白的制备
[0046] 称取猪血清白蛋白10g，加去离子水溶解后定容至IOOmL,加入0. 45mL的38%w/v 甲醒，摇匀后，静置30分钟,加入lmmol/L氢氧化钠调节pH至8. 9。于113°C放置1小时， 然后于4°C放置6周，最后于100°C放置1. 5小时。然后，加入0. 9g氯化钠，再加入Immol/ L盐酸调节pH至7.6。除菌后，在KKTC水浴中放置30分钟，即得变性猪血白蛋白（产率为 约 100%)。
[0047] 实施例3 :人血白蛋白的浓度对NS大鼠蛋白尿的影响
[0048] 本试验中所用的20%w/v注射用人血白蛋白来自德国杰特贝林制药有限公司，其 它各浓度的人血白蛋白以上述20%w/v注射用人血白蛋白制备而来。
[0049] 2. 5%w/v人血白蛋白的制备方法：取20%w/v注射用人血白蛋白3. 75mL，加无菌无 热原生理盐水26. 25mL，混匀即可。
[0050] 5%w/v人血白蛋白的制备方法：取20%w/v注射用人血白蛋白7. 5mL，加无菌无热原 生理盐水22. 5mL，混匀即可。
[0051] 10%w/v人血白蛋白的制备方法：取20%w/v注射用人血白蛋白15mL，加无菌无热原 生理盐水15mL，混匀即可。
[0052] 15%w/v人血白蛋白的制备方法：取20%w/v注射用人血白蛋白22. 5mL，加无菌无热 原生理盐水7. 5mL，混匀即可。
[0053] 动物造模：应用无特定病原体（specific pathogen free, SPF)级雄性SD大鼠，体 重130_150g，将大鼠适应性喂养一周，进行尿常规检测，将检测结果正常的大鼠分为正常对 照组和造模组。造模组大鼠第1次按4mg/kg尾静脉注射阿霉素（adriamycin，ADR)，相隔 1周，第2次按3. 5mg/kg注射ADR，正常对照组注射生理盐水。从第1次给ADR起第24天， 测定24huPro,将大于30mg者计入ADR肾病模型。
[0054] 分组：正常对照组6只（A组）；将ADR肾病模型大鼠随机分为：模型对照组8只 (B组）、2. 5%w/v人血白蛋白组6只（C组）、5%w/v人血白蛋白组8只（D组）、10%w/v人血 白蛋白组8只（E组）、15%w/v人血白蛋白组5只（F组）和20%w/v人血白蛋白组5只（G 组）。
[0055] 给药剂量和方式：各组均为尾静脉注射。C、D、E、F组动物均按照每kg体重给 0. 167g人血白蛋白给药，A和B组注射生理盐水。造模结束后给药1次。
[0056] 造模前、造模结束后和给药后7天，收集尿液，测定24huPro,结果如表1所示。
[0057] 表1 :人血白蛋白的浓度对NS大鼠24huPro的影响
[0058]
【主权项】
1. 包含约10%w/v或更低浓度的白蛋白的药物组合物。
2. 根据权利要求1的药物组合物,其中所述的药物组合物包含约2. 5%w/v-约10%w/v 的白蛋白，优选包含约2. 5%w/v-约5%w/v的白蛋白或包含约5%w/v-约10%w/v的白蛋白，更 优选包含约2. 5%w/v、约5%w/v或约10%w/v的白蛋白，进一步优选包含约5%w/v或约10%w/ V的白蛋白，最优选包含约10%w/v的白蛋白。
3. 根据权利要求1或2的药物组合物，其中所述的白蛋白选自人血白蛋白和变性动物 血白蛋白，优选所述的变性动物血白蛋白选自变性牛血白蛋白和变性猪血白蛋白。
4. 根据权利要求1-3中任意一项的药物组合物，该药物组合物还包含可药用赋形剂， 例如变性剂、增溶剂、湿润剂、乳化剂、缓冲剂、助悬剂、螯合剂、抗氧化剂、抑菌剂、等渗调节 齐U、填充剂，优选生理盐水。
5. 根据权利要求1-4中任意一项的药物组合物，其中该药物组合物每1-7天施用一次， 优选每1、2、3、4、5、6或7天施用一次，更优选每2、3或7天施用一次，最优选每3天施用一 次。
6. 白蛋白作为唯一的活性成分或者根据权利要求1-5中任意一项的药物组合物在制 备药物中的用途，所述的药物用于预防和/或治疗肾病，优选用于预防和/或治疗肾小球微 小病变、肾病综合征、肾小球硬化、糖尿病肾病和蛋白尿，用于预防微小病变型肾病向肾小 球硬化转化，以及用于降低尿蛋白。
7. 组合产品，该组合产品包含白蛋白或者权利要求1-5中任意一项的药物组合物，和 甲泼尼龙。
8. 根据权利要求7的组合产品在制备药物中的用途，所述的药物用于预防和/或治疗 肾病，优选用于预防和/或治疗肾小球微小病变、肾病综合征、肾小球硬化、糖尿病肾病和 蛋白尿，用于预防微小病变型肾病向肾小球硬化转化，以及用于降低尿蛋白，更优选用于预 防和/或治疗肾病综合征。
9. 制备变性动物血白蛋白的方法，该方法包括： (1) 称取动物血清白蛋白适量，加去离子水溶解至一定浓度，优选为约9%w/v-约12%w/ V； (2) 每g蛋白质加入约0. 04mL_约0. 06mL、优选约0. 045mL的约38%w/v甲醒，摇匀后， 静置，优选静置约30-约60分钟； (3) 用氢氧化钠调节pH至约8. 6-约9. 0,优选约8. 8,放置，优选所述的放置是：于约 113°C放置约1小时，然后于约4°C放置约6周-约8周，最后于约100°C放置约1. 5小时； (4) 加入氯化钠，优选每IOOmL加入约0. 9g氯化钠，并且用盐酸调节pH至约7. 6 ; (5) 除菌后放置，优选所述的放置是在约KKTC水浴中放置约30分钟。
【专利摘要】本发明涉及白蛋白、包含白蛋白的药物组合物及其用途，特别涉及包含10%w/v或更低浓度的白蛋白的药物组合物及其在制备用于预防和/或治疗肾病的药物中的用途。本发明还涉及制备变性动物血白蛋白的方法。
【IPC分类】C07K1-113, A61P13-12, A61K38-38, C07K14-765, A61K31-573
【公开号】CN104758924
【申请号】CN201410005143
【发明人】何美霞, 贺石林, 邢国兰, 阚全程, 张勇, 朱建立, 李晓天, 孔燕芳, 温战迎, 张彭俊, 华海婴, 李志刚, 赵瑛瑛, 杜斌, 张莉蓉, 张卫茹
【申请人】河南省医药科学研究院
【公开日】2015年7月8日
【申请日】2014年1月6日