中剂量组、水红花子低剂量组、水红花子 和通天草组、通天草组昆明小鼠制备痛风性关节炎模型。
[0070] 模型制备过程：抓取昆明小鼠，10%水合氯醛麻醉，固定小鼠，消毒小鼠右侧下肢， 无菌的注射器吸取2. 5%的尿酸钠溶液，在小鼠一侧后足右侧足底皮下及其同侧后足右侧 背侧足趾部注射0. 05ml 2. 5%尿酸钠溶液，尿酸钠注射后，小鼠足趾部明显肿胀，无液体溢 出，提示痛风性关节炎小鼠模型肿胀明显，痛风性关节炎小鼠模型制备成功，可以开展后续 的实验研宄。同时选择对照组小鼠8只同侧、同部位给予同体积生理盐水进行处理，无液体 溢出，生理盐水很快被小鼠关节周围组织吸收。
[0071] 2. 3 给药
[0072] 水红花子每天临床使用药物剂量是6_9g，最大可以给予30g 口服，根据黑龙江 中医药大学第一附属医院栗明医生及其黑龙江中医药大学中医药研宄院周忠光教授的建 议，水红花子临床患者标准体重的剂量选择20g，实验根据人与小鼠的体表面积比值是1 : 0.0026的换算关系，确定每20g小鼠的剂量是20 X 0.0026 = 0.052g，通过换算成kg，得到 每kg标准体重小鼠的给药剂量是2. 6g · kg4 · 0-1，选择2. 6g · kg4 · (T1为水红花子的中剂 量，选择5. 2g · kg4 · 0-1为水红花子的高剂量，选择I. 3g · kg 4 · 0-1为水红花子的低剂量。
[0073] 另外参考文献（杜徽，费洪新，张英博，等.通天草对阿尔茨海默病小鼠海马 白介素_1β水平的影响[J].黑龙江科学，2015,6(1) :14-15.)确定通天草的剂量是 2. Og · kg4 · d'0. 5g · kg4 · 0-1开展对阿尔茨海默病的治疗，其中2. Og · kg< · 0-1的通天 草治疗效果较好，0. 5g · kp · Cf1的通天草治疗效果较差。因此本发明开展预实验，发现 0. 5g · kg4 · 0-1对痛风性关节炎的治疗效果也较差。
[0074] 因此本次实验选择水红花子和通天草中药组合物（水红花子生药量 1. 3g · kg4 · 0-1和通天草生药量0. 5g · kg< · 0-1)，开展对痛风性关节炎的实验研宄。
[0075] 造模后2h开始给药，对照组、模型组给予生理盐水灌胃5d;别嘌呤醇组给予 0. 02g · kg4 · Cf1别嘌呤醇灌胃5d ;水红花子高剂量组给予水红花子生药量5. 2g · kg η · Cf1 灌胃5d ;水红花子中剂量组给予水红花子生药量2. 6g · kg4 · Cf1灌胃5d ;水红花子低剂量 组给予水红花子生药量I. 3g · kg4 · Cf1灌胃5d ;水红花子和通天草组给予水红花子生药 量I. 3g · kg4 · Cf1和通天草生药量0. 5g · kg η · Cf1灌胃5d ;通天草组给予通天草生药量 0· 5g · kg-1 · Cf1 灌胃 5d。
[0076] 2. 4评价痛风性关节炎小鼠足趾关节肿胀度
[0077] 灌胃治疗结束2h后，采用乙醚麻醉小鼠，随时观察昆明小鼠的一般状态，避免麻 醉过度，实验前在每只昆明小鼠的膝关节弯曲部用记号笔标记一条横线，在这条横线以下 部位的小鼠足部均剪下来，放入装有生理盐水的IOml量筒中，精确观察小鼠足部容积刻 度。
[0078] 足趾关节肿胀度（ml)=实验后足趾部容积（ml) -实验前足趾部容积（ml)。
[0079] 2. 5评价痛风性关节炎小鼠的炎症指数
[0080] 痛风性关节炎的评分分级是0级0分，1级2分，2级4分，3级6分。这包括0级 表示小鼠足部无红肿、红斑，可见小鼠足部骨性标志，显示足趾部正常；1级表示小鼠足部 轻度肿胀，关节周围皮肤红斑，可以看到小鼠足部的骨性标志；2级小鼠足部局限性肿胀、 关节红肿，小鼠足部的骨性标致不清楚；3级足趾部关节以外的部位出现肿胀。
[0081] 2. 6测定痛风性关节炎小鼠脾脏和肾脏指数
[0082] 灌胃治疗结束2h后，超净工作台上放置冰台，冰台上操作取材，抓取昆明小鼠，迅 速断头处死各组小鼠，取材小鼠脾脏和肾脏，电子天平精确称取小鼠脾脏和肾脏脏器质量， 计算小鼠脾脏和肾脏的脏器指数。
[0083] 脏器指数（mg · f1)=脏器质量（mg) /小鼠体重（g)
[0084] 2. 7测定痛风性关节炎小鼠的血尿酸含量
[0085] 灌胃治疗结束2h后，各组小鼠断头，眼科镊子摘除小鼠眼球，眼球采血，静置， 3000rpm · rnirT1离心10min，取上清液，分装，-20°C冰箱保存备用。按照试剂盒说明书的操 作步骤，采用磷钨酸法测定小鼠血尿酸的含量。
[0086] 2. 8测定痛风性关节炎小鼠血尿素氮和肌酐的含量
[0087] 灌胃治疗结束2h后，心脏采血，静置，4000rpm · mirT1离心10min，取上清液，分 装，-20°C保存。自动生化检测仪器测定小鼠血尿素氮和肌酐的含量。
[0088] 2. 9测定痛风性关节炎小鼠足趾部组织IL-I β、IL-6、IL-12的含量
[0089] 灌胃治疗结束2h后，各组小鼠断头处死，迅速取小鼠的足趾部组织，去除小鼠的 足部皮肤，匀浆足趾部组织，取上清液体，4°C静置，5000rpm · mirT1离心10min，吸取上清 液，分装，_20°C低温保存。按酶联免疫试剂盒说明书进行操作，使用6100型RT-雷杜酶标 仪450nm波长处测定培养板各孔吸光度（A)，根据标准曲线求得足趾部组织IL-Ιβ、IL-6、 IL-12蛋白的含量。
[0090] 2. 10测定痛风性关节炎小鼠的体重
[0091] 灌胃治疗结束2h后，电子天平测定各组小鼠体重为实验统计数据，计算比较各组 小鼠的体重差异。
[0092] 2. 11统计学处理
[0093] 实验数据采用i±S表示，采用SPSS19. O软件进行统计学处理，多组间采用单因素 方差分析实验数据。P〈〇. 05认为差异有统计学意义。
[0094] 3 结果
[0095] 3. 1水红花子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠足趾关节肿胀度的影响
[0096] 结果表明，与对照组比较，模型组痛风性关节炎昆明小鼠的足趾部关节肿胀度明 显升高（P< 0.05);与模型组比较，别嘌呤醇组、水红花子高剂量组、水红花子中剂量组、水 红花子和通天草组痛风性关节炎昆明小鼠的足趾部关节肿胀度明显降低（P< 0.05);与模 型组比较，水红花子低剂量组、通天草组痛风性关节炎昆明小鼠的足趾部关节肿胀度降低 不明显（P > 0. 05)(见表1、图1)。
[0097] 表1水红花子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠足趾关节肿胀度的影响 (X 士S)
【主权项】
1. 一种用于防治痛风性关节炎的中药组合物，其特征在于其有效成分由水红花子和通 天草组成。
2. 如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于所述水红花子和通天草的重量比为 1-1. 5 :0· 5-1〇
3. 如权利要求2所述的中药组合物，其特征在于所述水红花子和通天草的重量比为 1. 3 ：0. 5〇
4. 一种临床上适宜的用于防治痛风性关节炎的中药组合物，其特征在于由权利要求 1-3任一项所述的中药组合物加入制剂成型所需的辅料，按照制备药物制剂的常规方法制 成。
5. 如权利要求4所述的中药制剂，其特征在于所述的制剂为水煎剂、胶囊剂、丸剂、颗 粒剂、片剂或口服液。
6. -种制备权利要求1所述的中药组合物的方法，其特征在于包括以下步骤： (1) 分别称取水红花子以及通天草，切碎，所述水红花子和通天草的重量比为1-1. 5 : 0. 5-1 ； (2) 药材均匀后放入高颈圆底烧瓶中，加入药材重量10-15倍的蒸馏水，玻璃棒搅拌均 勾，封闭环境下浸泡8-12小时，加热蒸煮1-3小时，冷却8-15分钟，米用5层纱布过滤药材 组合物，纱布过滤残渣，直到药物没有药液流出，得到第一次滤液； (3) 再将药物残渣放到高颈圆底烧瓶中，加入与步骤（2)相同重量的蒸馏水，重复步骤 (1)进行第二次过滤处理，得到第二次滤液，合并两次的滤液； (4) 得到的中药组合物滤液放入70°C的电热恒温鼓风干燥箱内，干燥时间为4-5d，所 得到的残留物就是中药组合物干膏。
7. 如权利要求6所述的方法，其特征在于还包括将得到的中药组合物干膏放在粉碎机 内粉碎，进行研磨，反复分子筛处理，得到中药组合物的干粉，密封放置在-80 °C冰箱内长期 保存。
8. 如权利要求6所述的方法，其特征在于所述水红花子和通天草的重量比为1. 3 :0. 5。
9. 如权利要求1-3任一项所述的中药组合物在制备防治痛风性关节炎药物中的用途。
【专利摘要】本发明提供了一种用于防治痛风性关节炎的中药组合物及其制备方法和应用。本发明的中药组合物，其有效成分由水红花子和通天草组成。动物实验显示该中药组合物可以降低昆明小鼠足趾部的关节肿胀程度，改善昆明小鼠的关节炎症反应，脾脏指数，肾脏指数，血尿酸水平、血肌酐水平以及血尿素氮水平，同时降低昆明小鼠IL-1β、IL-12、IL-6蛋白的表达水平，并且对痛风性关节炎小鼠模型的体重无明显影响。以上结果表明水红花子和通天草组成的中药组合物对痛风性关节炎的治疗效果良好，本发明的提出为临床上治疗痛风性关节炎奠定了理论基础，也为进一步研发治疗痛风性关节炎的中药新药组合提供了客观依据。
【IPC分类】A61P19-02, A61P19-06, A61K36-89
【公开号】CN104825715
【申请号】CN201510181232
【发明人】周忠光, 杜鑫, 田嘉琦, 姜波, 吴娟, 李宝龙, 刘旭, 韩玉生, 王晓源, 仲丽丽, 白云, 贾博宇, 李松滨, 田明
【申请人】黑龙江中医药大学
【公开日】2015年8月12日
【申请日】2015年4月16日