土荆芥全株植提取物的新用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及土荆芥全株植提取物的新用途，属于药物、天然药物技术领域。
【背景技术】
[0002] -直以来，恶性肿瘤都是严重威胁人类健康的主要疾病。在20多种常见癌症 中，肺癌己成为危害程度最大的恶性肿瘤之一。治疗及预后的不同，肺癌可分为小细胞 肺癌（smallcelllungcancer,SCLC)和非小细胞肺癌（non-smallcelllungcancer, NSCLC)。NSCLC占肺癌病例的80%-85%，是肺癌的主体，虽然恶性程度较低，局部发展慢， 但该种肺癌患者体内存在转移的威胁，给临床的诊断与治疗方案的确定带来巨大困难，因 此亟待开发有效的药物。我国药用植物资源丰富，为开发新的抗癌药物提供了丰富的资源。 近年来的一些的研宄证明，药用植物的提取物在体内和体外都显示出良好的抗癌活性。
[0003] 土荆芥應L.为藜科植物，一年生或多年生草本，广泛 分布于全世界温带至热带地区。在我国的南方，土荆芥也有着广泛的分布。经研宄表明土 荆芥中富含生物碱、皂苷和黄铜醇苷，具祛风、除湿、杀虫、通经、止痛功效。土荆芥在民间应 用广泛，国内外学者对土荆芥进行了多年的研宄，主要针对挥发油成分的分析和挥发油药 理作用的研宄。最近吴佳靓等学者研宄土荆芥中挥发油成分对人乳腺癌细胞系MCF-7生长 具有明显的抑制作用并诱导细胞的凋亡。但是，目前还没有关于土荆芥提取物抗肺癌活性 的研宄报道。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供土荆芥全株植物氯仿提取物的一种新用途，该新用途是土荆 芥全株植物提取物在制备抗非小细胞肺癌药物中的应用。
[0005] 本发明的另一目的在于提供所述土荆芥全株植物氯仿相提取物的制备方法，具体 包括以下步骤： (1)利用95%乙醇对土荆芥枝叶进行浸泡过夜，然后超声提取(在50~80°C，功率为200W条件下）至少3次，每次提取0. 5~2h，减压抽滤得到乙醇提液，再多次用相同体积的乙醇浸 泡并重复第一次的提取流程，直到乙醇提取液无色为止，最后合并所有的乙醇提取液。
[0006] (2)利用旋转蒸发仪对土荆芥全株植物的乙醇提取液进行减压蒸馏，得到乙醇提 取物浸膏，然后用蒸馏水对其进行溶解。
[0007] (3)利用石油醚有机溶剂对土荆芥枝叶乙醇提取物的水溶液进行多次萃取，直到 萃取相无色为止，再将萃取余液用氯仿进行多次萃取直至无色，合并多次萃取液得氯仿相 萃取物。
[0008] 本发明的有益效果： (1)本发明首次探索研宄土荆芥氯仿相提取物在抗非小细胞肺癌上的应用。
[0009] (2)试验证明，本发明的土荆芥全株植物氯仿相提取物对人非小细胞肺癌细胞 A549细胞的增殖具有一定程度的抑制作用，随着提取物作用浓度的增加及作用时间的延 长，对A549细胞生长的抑制作用呈现出明显的剂量-时间依赖效应；Hoechst染色及流式 细胞仪检测结果表明土荆芥氯仿相提取物可以引起染色质聚缩、细胞周期Gl期阻滞及诱 导早期凋亡的细胞比例增加，并且呈现明显的剂量依赖关系；因此本发明对于制备抗非小 细胞肺癌药物具有重要意义。
【附图说明】
[0010]图1为土荆芥全株植物氯仿相相提取物对A549细胞的生长抑制柱形图； 图2为土荆芥全株植物氯仿提取物对A549细胞克隆形成剂量曲线图； 图3为土荆芥全株植物氯仿相提取物对A549细胞核染色图； 图4为流式细胞仪检测氯仿提取物对A549细胞周期影响图； 图5为流式细胞仪检测氯仿提取物对A549细胞早期凋亡作用图。
【具体实施方式】
[0011] 下面结合附图和【具体实施方式】对本发明作进一步详细说明，但本发明的保护范围 并不限于所述内容。
[0012] 实施例1 土荆芥全株植物氯仿相提取物的制备，具体包括以下步骤： (1)对采集得到的全株土荆芥枝叶进行阴干，得到干燥的土荆芥全株植物213. 46g，与 浓度95%乙醇混合浸泡过夜，然后超声提取3次，超声提取的温度为50°C，功率为200W，每 次提取0. 5h，然后将超声提取液过滤得到滤液1，再以与初始比例相同的浓度95%乙醇浸泡 滤渣，不断重复上述相同的提取流程，得到滤液2-n，直到浓度95%乙醇提取液无色为止，最 后合并所有的滤液，得到总的浓度95%乙醇提取液。
[0013] (2)利用旋转蒸发仪对土荆芥总的浓度95%乙醇提取液进行减压蒸馏，得到浓度 95%乙醇提取物浸膏，然后用蒸馏水对其进行溶解。
[0014] (3)利用石油醚有机溶剂对土荆芥枝叶乙醇提取物的水溶液进行多次萃取，直到 萃取相无色为止，再将萃取余液用氯仿有机溶剂进行多次萃取直至无色，利用旋转蒸发仪 对上述氯仿萃取相进行减压蒸馏，得到土荆芥全株植物氯仿提取部分的浸膏。
[0015] 实施例2 (1)对采集得到的全株土荆芥枝叶进行阴干，得到干燥的土荆芥全株植物213. 46g，与 浓度95%乙醇混合浸泡过夜，然后超声提取4次，超声提取的温度为60°C，功率为200W，每 次提取lh，然后将超声提取液过滤得到滤液1，再以与初始比例相同的浓度95%乙醇浸泡滤 渣，不断重复上述相同的提取流程，得到滤液2-n，直到浓度95%乙醇提取液无色为止，最后 合并所有的滤液，得到总的浓度95%乙醇提取液。
[0016] (2)利用旋转蒸发仪对土荆芥总的浓度95%乙醇提取液进行减压蒸馏，得到浓度 95%乙醇提取物浸膏，然后用蒸馏水对其进行溶解。
[0017] (3)利用石油醚有机溶剂对土荆芥枝叶乙醇提取物的水溶液进行多次萃取，直到 萃取相无色为止，再将萃取余液用氯仿有机溶剂进行多次萃取直至无色，利用旋转蒸发仪 对上述氯仿萃取相进行减压蒸馏，得到土荆芥全株植物氯仿提取部分的浸膏。
[0018] 实施例3 (1)对采集得到的全株土荆芥枝叶进行阴干，得到干燥的土荆芥全株植物213. 46g，与 浓度95%乙醇混合浸泡过夜，然后超声提取5次，超声提取的温度为80°C，功率为200W，每 次提取I. 8h，然后将超声提取液过滤得到滤液1，再以与初始比例相同的浓度95%乙醇浸 泡滤渣，不断重复上述相同的提取流程，得到滤液2-n，直到浓度95%乙醇提取液无色为止， 最后合并所有的滤液，得到总的浓度95%乙醇提取液。
[0019] (2)利用旋转蒸发仪对土荆芥总的浓度95%乙醇提取液进行减压蒸馏，得到浓度 95%乙醇提取物浸膏，然后用蒸馏水对其进行溶解。
[0020] (3)利用石油醚有机溶剂对土荆芥枝叶乙醇提取物的水溶液进行多次萃取，直到 萃取相无色为止，再将萃取余液用氯仿有机溶剂进行多次萃取直至无色，利用旋转蒸发仪 对上述氯仿萃取相进行减压蒸馏，得到土荆芥全株植物氯仿提取部分的浸膏。
[0021] 实施例1~3中得到的土荆芥全株植物氯仿提取物在抑制癌细胞生长中的应用 将非小细胞肺癌细胞A549培养在含10%胎牛血清、1%青霉素和链霉素的混合液的 RPMI-1640完全培养基中，置于37°C，5%C02的培养箱中，待细胞进入对数生长期后，加入 0. 25%的EDTA-胰蛋白酶溶液消化细胞，然后用RPMI-1640完全培养基调整成浓度为5XIO4 个/ml的细胞悬液；再将其接种于96孔培养板中，每孔100W，于37°C，5%C02的培养箱中 培养24hrs使细胞贴壁。
[0022] (1)将实施例1、2、3中制得的土荆芥全株植物氯仿相提取物溶解于DMSO中，制成 浓度为lOOmg/ml的筛选母液备用。
[0023] (2)利用DMSO进行倍比稀释，分别得到氯仿相提取物终浓度为500吒/ml，250吒 /ml，125l^g/ml，62.5l^g/ml，31.25l^g/ml，15.63l^g/ml，7.81/ml的DMSO溶液，分别设置试 验组和对照组进行试验。
[0024] 试验组：将土荆芥氯仿相提取物加入到96孔板的A549细胞培养孔内，每孔加入 1W，再向每个