一种枯草芽孢杆菌喷雾剂及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种喷雾剂及其应用。
【背景技术】
[0002] 烧伤无论在和平时期和战争时期都是常见疮伤，一般以热力烧伤（包括热液、如 水、汤、油等、蒸汽、高温气体、火焰、炽热金属或塑料液体和固体，如钢水、钢锭或高温塑料 等）为主。随着现代工农业生产技术的发展，化学和电子烧伤呈现增多的趋势，在森林火 灾、易燃易爆、公共场所失火及现代战争均可造成成批的伤员。
[0003] 烧伤感染是造成创面加深和败血症的重要原因，为此预防和控制创面感染是烧伤 研宄的一项内容。由于烧伤引起的组织坏死，形成微生物生长繁殖的良好培养环境，加上局 部循环受到损害，影响了免疫因子和抗菌药物的进入，使针对全身感染的防治措施难以收 到理想的结果，因此，大量使用外用抗菌药物进行治疗烧伤感染是目前的趋势。然而，随着 耐药菌株的不断增加，致使一些药物收不到长期稳定理想的效果，由于伤口不能保湿使得 创面容易结痂，清创比较痛苦，给要不太方便等缺陷。
[0004]目前用于治疗烧伤烫伤的烧伤灵酊，具有清热藻湿、解读消肿、收敛止痛的功能。 对烧伤的治疗有着明显功效，由于其制剂为酊，用乙醇作为挥发性，需在患处多次喷洒，为 患者带来著多不便。
[0005] 而人们从健康人的皮肤上分离到一株枯草芽胞杆菌BS224菌株，经过多年大量实 验室研宄，发现由该菌株培养液制成悬浮组合物喷洒于创伤或烧伤表面上后，可在短时间 内明显防治包括绿脓杆菌在内的其他致病菌的感染，并有利创面结痂的形成及愈合，而未 见任何明显的毒副作用。但枯草芽胞杆菌BS224菌株普遍存在活菌浓度不够高、稳定性较 差的缺点。而活菌的数量直接影响枯草芽孢杆菌对创伤的治疗效果，因此如何提高枯草芽 孢杆菌制剂中枯草芽孢杆菌的活菌数是现在急需解决的问题，并且该菌成膜是依靠自身成 膜，成膜效果差，并不能够很好地起到生物屏障的作用，且该菌剂的使用过于单一，只是起 到抑菌作用，并没有结合其他组分共同应用，因此，在止血方面其并没有特殊的作用。
[0006] 芦荟是百合科芦荟属肉质草本植物，在全世界范围内，大约有360多种的不同品 种的芦荟分布在北美、亚洲、欧洲和非洲的干旱地区，其中库拉索芦荟无论在商业用途还是 在治疗学研宄中都是应用地最广泛的一种。芦荟富含多种生物活性物质，其中，芦荟多糖 是芦荟凝胶的主要生物活性组分，一般来说，芦荟多糖的含量与组成随芦荟品种、采收季 节和生长地区不同而异。芦荟多糖（AloePolysaccharide，AP)为百合科植物，库拉索芦 荟（AloebarbadensisMiller)、木立芦荟（AloeArboresecensMiller)、元江芦荟（Aloe yuan-jiangensis)、华芦荟（Aloechinenesis)及其他近缘植物中提取分离得到的多糖。芦 荟多糖是一大类具有不同生理功能的大分子化合物，主要由甘露糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、 阿拉伯糖和鼠李糖组成，其中以甘露糖、半乳糖和葡萄糖含量居多，芦荟叶肉中的黏性物质 以甘露聚糖为主。同其他植物多糖一样，芦荟多糖具有免疫调节、抗肿瘤、保肝护肝、抗辐 射、抗溃疡、抗氧化、抗衰老和降血糖等保健功能。目前尚未有因使用芦荟多糖而出现过敏 反应的报道，且其本身的毒副作用小，因而是近年来芦荟研宄的重点之一。被联合国粮农组 织（FAO)誉为"21世纪最佳保健食品"。芦荟多糖多用于增稠剂、稳定剂、胶凝剂、黏结剂。
[0007] 薄荷为唇形科多年草本植物的茎叶，具有疏散风热，清利头目，利咽，透瘆，疏肝解 郁的功效。临床多用于风热感冒，温病初起，头痛目赤，咽喉肿痛等证。现代药理学研宄表 明薄荷具有抗菌、镇静止痛、驱虫等作用。
[0008] 薄荷具有刺激中枢神经的功效，对感觉神经末梢有抑制和麻痹的作用，对皮肤瘙 痒具有抗过敏和止痒的作用。
【发明内容】
[0009] 本发明的其中一个目的是为了解决现有治疗烧伤药物存在耐药性，枯草芽孢杆菌 菌剂应用到烧伤治疗时，存活率低且成膜效果差的问题，而提供了一种枯草芽孢杆菌喷雾 剂。
[0010] 本发明另外一个目的是为了解决现有枯草芽孢杆菌菌剂应用到烧伤治疗时，作用 过于单一，止血效果差的问题，而提供了 一种枯草芽孢杆菌喷雾剂的应用。
[0011] 本发明一种枯草芽孢杆菌喷雾剂，它由枯草芽孢杆菌和基质组成；所述枯草芽孢 杆菌喷雾剂中枯草芽孢杆菌的含菌量为5. 6~5. 9X108CFU/mL;所述的基质是按质量百分 比由85~94%的营养液、5~10%的甘油和1~5%的分散剂组成，所述的营养液是由碳 源、氮源、无机盐及水混合而成，其中，营养液中碳源的浓度为3~5mg/mL、营养液中氮源浓 度为10~13mg/mL、营养液中无机盐浓度为0. 05~0.lmg/mL;戶斤述的碳源是由葡萄糖、芦 荟多糖和薄荷多糖按质量比为1 :(2~3) :(2~3)的比例组成；所述的氮源为大豆蛋白胨、 酵母粉、牛肉膏或大豆粉；所述的分散剂为萘磺酸钠甲醛缩合物或吐温-80。
[0012] 本发明一种枯草芽孢杆菌喷雾剂的应用，它用于烧伤的抗菌感染中。
[0013] 本发明包含以下有益效果：
[0014] 本发明的枯草芽孢杆菌（BS224)喷雾剂，对烧伤创面能够有效控制感染、防止感染 加重；加速了创面愈合的速度，缩短了治愈时间，在短时间内抑制创面细菌的生长，有效的 防止了创面脓毒症的发生，还能防止败血症发生，为保护创面植皮手术的成功创造了良好 的条件。且使用方便，可大量减轻医务人员的劳动强度，节省大量的抗生素和资金。在本发 明的枯草芽孢杆菌（BS224)喷雾剂进行烧伤治疗时，并不会对周围环境造成污染，也不会对 人体产生副作用。
[0015] 本发明的枯草芽孢杆菌（BS224)喷雾剂通过对创面植入优势菌，以迅速形成菌膜和 利用其生物拮抗作用，对烧伤创面起到生物屏障和抑菌作用，达到防治由金黄色葡萄球菌、 绿脓杆菌、鲍氏不动杆菌等外袭菌感染的目的。
[0016] 通过本发明的优化枯草芽孢杆菌（BS224)的方法，能够使枯草芽孢杆菌（BS224)的 芽孢数明显增加，使枯草芽孢杆菌（BS224)的芽孢数达5. 6~5. 9X108CFU/mL。采用该枯草 芽孢杆菌（BS224)制得的喷雾剂对金黄色葡萄球菌的抑菌率为：95%~98%，对绿脓杆菌的 抑菌率为：75%~78%，对鲍氏不动杆菌的抑菌率为：76%~79%。
[0017] 并且，本发明的优化培养方法，缩短了枯草芽孢杆菌（BS224)菌株的培养时间，控 制其在对数生长期内，提高了菌株的活性；在发酵培养基中添加1%琼脂粉既延长抑菌时 间，又省去离心收集菌体的步骤，缩短了工时。原始工艺的工时为140h，改进工艺的工时为 122h，缩短了 18h。
[0018] 而且，由于芦荟多糖是由葡萄糖、甘露糖、半乳糖、果糖及微量的岩藻糖、木糖组 成，在枯草芽孢杆菌活菌制剂中加入芦荟多糖，既可以为枯草芽孢杆菌活菌提供营养物质， 又可以促进伤口愈合，同时帮助枯草芽孢杆菌在创口形成一层保护膜，为枯草芽孢杆菌营 造厌氧的生长环境。
[0019] 薄荷多糖中主要含有葡萄糖，半乳糖和阿拉伯糖，另外还含有甘露糖和鼠李糖；薄 荷多糖可以为枯草芽孢杆菌提供营养物质；薄荷多糖具有低分子量糖类的特性，具有渗透 性和锁水性强的能力，可以即时成膜，具有较好的保湿效果；因此，薄荷多糖既可以为枯草 芽孢杆菌活菌提供营养物质，又可以促进伤口愈合，同时帮助枯草芽孢杆菌在创口形成一 层保护膜。因此，芦荟多糖和薄荷多糖又可以为枯草芽孢杆菌提供碳源，一举两用。
[0020] 本发明的枯草芽孢杆菌喷雾剂同时还具有如下功能：
[0021] 1、喷雾剂本身具有抑制菌类生长的功能；2、膜剂产生生物粘附性，牢牢地粘附于 患处；3、由于在喷雾剂中加入甘油，能够对烧烫伤后产生的组织液有吸附作用；4、有抑制 纤维细胞生长，减少疤痕的作用；5、不粘连皮肤，揭开取容易，不会造成二次出血和伤害； 6、加入分散剂后，使喷雾剂更容易喷出。
【具体实施方式】
【具体实施方式】 [0022] 一：本实施方式是一种枯草芽孢杆菌喷雾剂，它由枯草芽孢杆菌和 基质组成；所述枯草芽孢杆菌喷雾剂中枯草芽孢杆菌的含菌量为5. 6~5. 9XIO8CFUAiL; 所述的基质是按质量百分比由85~94%的营养液、5~10%的甘油和1~5%的分散剂组 成，所述的营养液是由碳源、氮源、无机盐及水混合而成，其中，营养液中碳源的浓度为3~ 5mg/mL、营养液中氮源浓度为10~13mg/mL、营养液中无机盐浓度为0. 05~0.lmg/mL;所 述的碳源是由葡萄糖、芦荟多糖和薄荷多糖按质量比为1 : (2~3) : (2~3)的比例组成； 所述的氮源为大豆蛋白胨、酵母粉、牛肉膏或大豆粉；所述的分散剂为萘磺酸钠甲醛缩合物 或吐温-80。
[0023] 本实施方式的基质经灭菌后与枯草芽孢杆菌混合后，得枯草芽孢杆菌喷雾剂。
[0024] 本实施方式包含以下有益效果：
[0025] 本实施方式的枯草芽孢杆菌（BS224)喷雾剂，对烧伤创面能够有效控制感染、防止 感染加重；加速了创面愈合的速度，缩短了治愈时间，在短时间内抑制创面细菌的生长，有 效的防止了创面脓毒症的发生，还能防止败血症发生，为保护创面植皮手术的成功创造了 良好的条件。且使用方便，可大量减轻医务人员的劳动强度，节省大量的抗生素和资金。在 本实施方式的枯草芽孢杆菌（BS224)喷雾剂进行烧伤治疗时，并不会对周围环境造成污染， 也不会对人体产生副作用。
[0026] 本实施方式的枯草芽孢杆菌（BS224)喷雾剂通过对创面植入优势菌，以迅速形成菌 膜和利用其生物拮抗作用，对烧伤创面起到生物屏障和抑菌作用，达到防治由金黄色葡萄 球菌、绿脓杆菌、鲍氏不动杆菌等外袭菌感染的目的。
[0027] 通过本实施方式的优化枯草芽孢杆菌（BS224)的方法，能够使枯草芽孢杆菌（BS224) 的芽孢数明显增加，使枯草芽孢杆菌（BS224)的芽孢数达5. 6~5. 9X108CFU/mL。采用该枯 草芽孢杆菌（BS224)制得的喷雾剂对金黄色葡萄球菌的抑菌率为：95%~98%，对绿脓杆菌 的抑菌率为：75 %~78%，对鲍氏不动杆菌的抑菌率为：76 %~79%。
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