深ir用药创面保 持干燥，创缘无红肿，痂下无分泌物，大部分可达到痂下愈合，部分较深创面需脱痂换药后 愈合。ir多经切痂植皮或肉芽创面植皮愈合，部分晚期小创面用药后，感染轻，可较快愈 合。nr创面可保痂植皮。两组各种ir创面平均愈合天数见表1所示。两组实验前后G+ 菌检出率如表2所示，用药前后创面致病菌总检出率如表4所示，治疗第3天两组全身情况 比较结果如表5所示，仓Il面细菌定量CFU/g(x土s)值如表6所示。
[0169] 表1两组不同深度创面平均愈合天数比较
[0170]
[0171] *P<0.05
[0172] 表2两组实验前后G+菌检出率
[0173]
[0175]与试验组比A:p< 0? 05AAA:p< 0? 001
[0176]nr创面（包括nr清洁创面和感染创面）治疗前及治疗后第4天痂下组织致病 菌培养结果表明：治疗后第4天痂下组织致病菌培养阳性率及平均菌量两组相比，差别极 显著，有效率占92. 1% ;对照组痂下组织菌量彡105/g的有7例，其中金葡球菌4例，绿脓 杆菌3
[0177] 例，鲍氏不动杆菌2例，见表3。
[0178] 表3两组IIF创面治疗前及治疗后第4天痂下组织培养结果比较
[0179]
[0180] *P<0.01
[0181] 表4用药前后创面致病菌总检出率
[0182]
[0183]与试验组比A :p < 0? 05 AAA :p < 0? 001
[0184] 治疗后第3天两组全身情况比较见表3。
[0185] 表5治疗第3天两组全身情况比较
[0186]
[0190] A ：p < 0. 01
[0191] 由上述实验可知，在参加临床研宄的四家医院在烧伤创面诊断标准，用药方法，观 察指标，细菌学检测方法均一致，各医院患者基本情况的前提下，其研宄结果可以说明本枯 草芽孢杆菌BS224喷雾剂对致病菌的作用，具体如下：
[0192] 枯草芽孢杆菌BS224喷雾剂，对各种IF创面可控制感染、防止感染加重；由于创 面感染得以控制，则加速了创面愈合的速度，缩短了治愈时间，与对照组相比差别极显著， 说明抑菌生可在短时间内抑制创面细菌的生长，有效的防止了创面脓毒症的发生，为保护 创面植皮手术的成功创造了良好的条件。枯草芽孢杆菌BS224喷雾剂有较好的收敛作用，可 以形成薄痂，保护创面，创面感染轻，有利于愈合。浅11°愈合良好，大部分深11°可达到痂 下愈合，较国内外烧伤界公认疗效最好的磺胺喃啶银愈合速度快。
[0193] 同时结合羧甲基纤维素钠和海藻酸钠胶，具有很好地止血作用，由于羧甲基纤维 素钠和海藻酸钠胶能够形成致密的三维网状支架，具有钻石形亲水空间和大量亲水基团的 三维网状支架，使其具有高吸湿性，能够迅速地吸收创面的渗血和渗液，形成分子海绵，压 迫封堵创面，同时为血小板聚集提供框架，起到辅助止血作用。
[0194] 从机体的全身反应结果可以看到，实验组血培养无阳性数，对照组则为2. 50%，两 组差别显著。说明抑菌生不仅能抑制创面感染，还能防止败血症发生。
[0195] 并且，未发现本菌种导致的侵袭性感染以及脏器转移性感染，全身无感染。试验组 病人未发现心、肺、肾、血液的异常变化，也未发现过敏等全身及局部的不良反应。
【主权项】
1. 一种枯草芽孢杆菌喷雾剂，其特征在于它由枯草芽孢杆菌和基质组成；所述枯草芽 孢杆菌喷雾剂中枯草芽孢杆菌的含菌量为5. 6~5. 9X108CFU/mL;所述的基质是按质量百 分比由85~94%的营养液、5~10%的甘油和1~5%的分散剂组成，所述的营养液是由 碳源、氮源、无机盐及水混合而成，其中，营养液中碳源的浓度为3~5mg/mL、营养液中氮源 浓度为10~13mg/mL、营养液中无机盐浓度为0. 05~0.lmg/mL;所1述的碳源是由葡萄糖、 芦荟多糖和薄荷多糖按质量比为1 : (2~3) : (2~3)的比例组成；所述的氮源为大豆蛋白 胨、酵母粉、牛肉膏或大豆粉；所述的分散剂为萘磺酸钠甲醛缩合物或吐温-80。2. 根据权利要求1所述的一种枯草芽孢杆菌喷雾剂，其特征在于所述的无机盐是由质 量百分含量为〇. 05%的氯化钙水溶液、质量百分含量为0. 05%的氯化锰水溶液、质量百分 含量为〇. 1 %的硫酸镁水溶液和质量百分含量为〇. 2 %的磷酸氢二钠水溶液按等比例混合 而成。3. 根据权利要求1所述的一种枯草芽孢杆菌喷雾剂，其特征在于所述的碳源是由葡萄 糖、芦荟多糖和薄荷多糖按质量比为1 :2 :2的比例组成。4. 根据权利要求1或3所述的一种枯草芽孢杆菌喷雾剂，其特征在于所述的芦荟多糖 的提取是按以下步骤进行： 一、 芦荟前处理：取新鲜库拉索芦荟叶洗净去刺，横切成5mm薄片架在培养皿上，用鼓 风干燥箱55°C的条件下烘干12h，然后将烘干的芦荟叶放入粉碎机粉碎，得到芦荟粉，置于 棕色试剂瓶密封保存备用； 二、 按质量体积比为l:30g/mL的比例将芦荟干粉放入蒸馏水中，复水30min后用超声 波辅助进行提取，然后8000r/min离心15min，取上清液，再放入旋转发仪在0. 085MPa，65°C 的条件下浓缩至原体积的1/2~1/3,然后加入4倍体积的无水乙醇再置于4°C冰箱，静置 过夜，然后2500r/min离心lOmin，取沉淀，S卩完成。5. 根据权利要求1或3所述的一种枯草芽孢杆菌喷雾剂，其特征在于所述的薄荷多糖 是按以下步骤制备的： 一、称取干燥的薄荷药材，粉碎后过40目~60目筛，得到薄荷粉末；将薄荷粉末加入 到蒸馏水中浸泡12h~20h，再加热回流提取Ih~2h，得到混合物A;向混合物A中加入纤 维素酶，调节pH值至5~6,再在温度为40°C~55°C、pH值为5~6的条件下酶解0. 5h~ 3h，得到纤维素酶水解后的混合物A; 步骤一中所述的纤维素酶的加入量与混合物A的质量比为（0. 3~1. 5) : 100 ; 二、 向纤维素酶水解后的混合物A中加入蛋白酶和菠萝蛋白酶，调节pH至7~7. 5,再 在温度为55°C~60°C下酶解0. 5h~3h，得到提取液； 步骤二中所述的蛋白酶的加入量与纤维素酶水解后的混合物A的质量比为（0. 3~ 0. 8) : 100 ;步骤二中所述的菠萝蛋白酶的加入量与纤维素酶水解后的混合物A的质量比为 (0? 3 ~0? 6) :100; 三、 使用旋转蒸发仪在温度为62°C~68°C下将提取液的体积减压浓缩至原体积的 1/2~1/3,得到浓缩液；向浓缩液中加入无水乙醇，再在室温下静置8h~16h，再进行抽 滤，得到沉淀物质；依次使用无水乙醇、无水乙醚和丙酮洗涤对沉淀物质分别清洗3次~5 次，再在零下15°C~30°C，冷冻干燥5h~10h，得到薄荷多糖； 步骤三中所述的浓缩液的体积与无水乙醇的体积比为1: (4~6)。6. 根据权利要求1所述的一种枯草芽孢杆菌喷雾剂，其特征在于所述的枯草芽孢杆菌 是按照以下步骤进行优化培养的： 一、 取枯草芽孢杆菌接种于LB固体斜面培养基上，在37°C条件下，培养18~20h; 二、 取步骤一培养至第2~3代的枯草芽孢杆菌的菌种接种于LB液体培养基中，在温 度为37°C、转速为200rpm的条件下培养12~14h; 三、 取步骤二培养的枯草芽孢杆菌液接种至含有质量百分含量为0. 009~0. 08%的氯 化钙和质量百分含量为0. 01~0. 07%的氯化锰的LB液体培养基中，在培养温度为37°C、 转速为200rpm、pH为7. 2~7. 4、通气比例为1:1的条件下培养20h，然后将培养温度降至 15°C~20°C继续培养60h，即完成所述的枯草芽孢杆菌的优化。7. 根据权利要求1或6所述的一种枯草芽孢杆菌喷雾剂，其特征在于所述的枯草芽孢 杆菌为BS224菌株。8. 根据权利要求6所述的一种枯草芽孢杆菌喷雾剂，其特征在于所述的LB液体培养基 是由葡萄糖、酵母膏、蛋白胨、氯化钙和氯化锰混合而成，其中，LB液体培养基中葡萄糖的浓 度为4g/L、酵母膏的浓度为12g/L，蛋白胨的浓度为I. 5g/L。9. 一种枯草芽孢杆菌喷雾剂的应用，其特征在于它是作为烧伤的抗菌感染的药物。10. 根据权利要求9所述的一种枯草芽孢杆菌喷雾剂的应用，其特征在于它是按照以 下步骤进行的：将权利要求1的枯草芽孢杆菌喷雾剂直接喷涂在烧伤创面，或者先在其上 喷涂权利要求1的枯草芽孢杆菌喷雾剂，然后再烧伤创面涂抹羧甲基纤维素钠和海藻酸钠 胶；所述的羧甲基纤维素钠和海藻酸钠胶是按照以下步骤进行的： 一、 将羧甲基纤维素钠和海藻酸钠在温度为50~60°C条件下加入到水中搅拌至完全 溶解后，得混液； 二、 调节步骤一混液的渗透压摩尔浓度至300~350m0sm〇l/kg，然后加水调节羧甲基 纤维素钠的质量浓度至4%~10%，海藻酸钠质量浓度至0. 2%~0. 5%，得羧甲基纤维素 钠和海藻酸钠胶，将羧甲基纤维素钠和海藻酸钠胶灭菌后，即完成。
【专利摘要】一种枯草芽孢杆菌喷雾剂及其应用，它涉及一种喷雾剂及其应用。本发明的其中一个目的是为了解决现有治疗烧伤药物存在耐药性，枯草芽孢杆菌菌剂应用到烧伤治疗时，存活率低且成膜效果差的问题，本发明另外一个目的是为了解决现有枯草芽孢杆菌菌剂应用到烧伤治疗时，作用过于单一，止血效果差的问题。它由枯草芽孢杆菌、85～94％的营养液、5～10％的甘油和1～5％的分散剂制成。本发明一种枯草芽孢杆菌喷雾剂，它用于烧伤的抗菌感染中。本发明的枯草芽孢杆菌(BS224)喷雾剂通过对创面植入优势菌，以迅速形成菌膜和利用其生物拮抗作用，对烧伤创面起到生物屏障和抑菌作用。本发明制备的枯草芽孢杆菌喷雾剂用于烧伤的抗菌感染中。
【IPC分类】A61K31/715, A61K9/12, A61K31/734, A61P17/02, A61K31/717, A61K35/742
【公开号】CN104887715
【申请号】CN201510346090
【发明人】芦旭升, 杨慧, 冯媛, 肖颖, 于凯, 陈竹, 王巍, 董志玲, 吕雪
【申请人】哈高科白天鹅药业集团有限公司
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年6月19日