一种有效对抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的药物及其制备方法和使用方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及兽用药领域，特别是指一种有效对抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的药物 及其制备方法和使用方法。
【背景技术】
[0002] 猪繁殖与呼吸综合征（PRRS)，是由猪繁殖与呼吸系统综合征病毒（PRRSV)引起猪 的以繁殖障碍和呼吸道症状为主要特征的一种高度传染性疾病。该病既能垂直传染又能水 平传播，能够引起妊娠母猪发热、厌食、流产、早产、木乃伊胎、仔弱及诱发仔猪和育成猪的 多种呼吸系统疾病。1996年郭宝清等人确定了其在我国的存在PRRS具有传播迅速、流行广 泛和毒株变异能力强的特点，该病对养猪业造成严重威胁和巨大经济损失，防治主要靠疫 苗预防，目前尚无有效药物，其综合防制有很大难度。
【发明内容】
[0003] 本发明提出一种有效对抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的药物及其制备方法和使用 方法，解决了现有技术中市场上没有对抗猪繁殖与呼吸综合征病毒此类药物的问题。
[0004]本发明的技术方案是这样实现的：一种有效对抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的药 物，包括用以下重量份原料制得的冻干制剂：浒苔粉65~75重量份、黄芪6~9重量份、板 蓝根7~12重量份、五味子3~6重量份、连翅2~5重量份、穿心莲8~13重量份、黄连 2~5重量份。
[0005]作为进一步的优选，包括用以下重量份原料制得的冻干制剂：浒苔粉70重量份、 黄苗8重量份、板蓝根10重量份、五味子4重量份、连翘3重量份、穿心莲12重量份、黄连 3重量份。
[0006] 本发明提出了一种有效对抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的药物的制备方法，包括以 下步骤：
[0007] 1)将新鲜浒苔洗净，烘干至恒量，粉碎后过80目筛得浒苔粉；
[0008] 2)分别按各重量份称取原料，后加入所述原料总量10~15倍的水，在90°C下煎 煮4. 2小时，过滤后分别得滤渣、第一次煮液；
[0009] 3)向所述滤渣中加入所述滤渣重量10倍的水，重复煎煮和提取，后过滤得第二次 煮液，合并所述第一次煮液和所述第二次煮液，真空浓缩至两次煮液体积的50%，经细菌过 滤器过滤除菌，冻干，即得。
[0010] 本发明提出了一种有效对抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的药物的使用方法，其特征 在于：包含操作步骤用2倍浓度的DMEM培养基液将药物稀释至浓度范围20 %~55 %，对细 胞进行预处理，后接种猪繁殖与呼吸综合征病毒。
[0011] 作为优选的技术方案，包含操作步骤用2倍浓度的DMEM培养基液将药物稀释至浓 度范围40%，对细胞进行预处理，后接种猪繁殖与呼吸综合征病毒。
[0012] 本发明采用的浒苔富含多糖，浒苔多糖是浒苔的主要活性成分，存在于藻体细胞 中，具有降低胆固醇、抗菌和抗病毒、抗氧化、增强免疫功能等诸多药理作用，目前国外的研 宄报道藻类多糖具有抗多种病毒的作用。本发明前期研宄证实，浒苔对抗猪繁殖与呼吸病 毒具有明显的阻断和抑制作用。
[0013] 本发明采用的黄芪：增强免疫功能，促进机体代谢，增强机体耐缺氧及抗应激作 用、抗菌及抑制病毒作用。
[0014] 本发明采用的板蓝根：性寒，味微甜后苦涩，具有清热解毒、抗菌消炎的功效。
[0015] 本发明米用的五味子：果肉气微，味酸；种子破碎后，有香气，味辛、微苦，能增强 机体对非特异性刺激的防御能力和抗菌作用。本发明前期研宄证实，五味子具有明显的抗 猪繁殖与呼吸病毒的阻断作用。
[0016] 本发明采用的连翘：性味苦、凉，功能主治清热，解毒，散结，消肿。
[0017] 本发明采用的穿心莲：具有清热解表、解毒抗菌作用，对多种细菌有效，对流感也 有抑制作用。本发明前期研宄证实，穿心莲对抗猪繁殖与呼吸病毒具有明显的阻断和抑制 作用。
[0018] 本发明采用的黄连：其味入口极苦，清热燥湿，泻火解毒之功效。本发明前期研宄 证实，黄连具有明显的对猪繁殖与呼吸病毒的阻断作用。
[0019] 本发明采用原料分别为浒苔粉、黄芪、板蓝根、五味子、连翘、穿心莲和黄连，制备 的冻干制剂能明显降低猪繁殖与呼吸病毒的毒性，且采用水煎蒸煮的提取方法，更完全保 留各个物质的活性成分，当用2倍浓度的DMEM培养基液将药物稀释至浓度范围40%时，预 处理细胞，接种的猪繁殖与呼吸病毒的增殖被抑制。
【附图说明】
[0020] 为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现 有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本 发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可 以根据这些附图获得其他的附图。
[0021] 图1为实验组和对照组对PRRSV增殖的抑制效果图；
[0022]图2为不同药物浓度对PRRSV增殖的抑制效果图；
[0023]图3为实验组和对照组对PRRSV增殖的抑制效果图。
【具体实施方式】
[0024] 下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完 整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于 本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他 实施例，都属于本发明保护的范围。
[0025] 一种有效对抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的药物，包括用以下重量份原料制得的冻 干制剂：消 1苔粉65~75重量份、黄苗6~9重量份、板蓝根7~12重量份、五味子3~6 重量份、连翘2~5重量份、穿心莲8~13重量份、黄连2~5重量份。
[0026] 下述实施例中使用的实验材料与试剂：
[0027] Marc145细胞系由山东农业大学赠送；胰蛋白酶、DMSO为Invitrogen产品，新生 牛血清为杭州四季青生物工程材料有限公司，磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、氯化钠、氯化钾等 为国产分析纯，浒苔由黄岛海域采集。
[0028]实施例一
[0029]一种有效对抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的药物的制备方法，包括以下步骤：
[0030] 1)将新鲜浒苔洗净，烘干至恒量，粉碎后过80目筛得浒苔粉；
[0031] 2)分别按浒苔粉65重量份、黄芪6重量份、板蓝根7重量份、五味子3重量份、连 翘2重量份、穿心莲8重量份、黄连2重量份称取原料，后加入所述原料总量10~15倍的 水，在90°C下煎煮4. 2小时，过滤后分别得滤渣、第一次煮液；
[0032] 3)向所述滤渣中加入所述滤渣重量10倍的水，重复煎煮和提取，后过滤得第二次 煮液，合并所述第一次煮液和所述第二次煮液，真空浓缩至两次煮液体积的50 %，经细菌过 滤器过滤除菌，冻干，即得。
[0033] 本发明提出了一种有效对抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的药物的使用方法：包含操 作步骤用2倍浓度的DMEM培养基液将药物稀释至浓度范围20%~55%，对细胞进行预处 理，后接种猪繁殖与呼吸综合征病毒。
[0034]具体的实验步骤如下：
[0035]DMarc145细胞在12孔板上培养至单层，用2倍浓度的DMEM培养液将药物稀释 到浓度为40 %备用，设计实验组A和对照组a，实验组A将浓度为40 %的药液替换孔内培养 液，对照组a不替换，这两组分别置于浓度为5%二氧化碳培养箱中培养2h;
[0036] 2)再将实验组A内的药液弃掉，置换为维持液（含4%新生牛血清），对照组同样 替换为维持液，后对这两组分别接种猪繁殖与呼吸综合征病毒（〇. 01M0I)，置二氧化碳培养 箱继续培养，观察细胞变化，并于48h后收获病毒；
[0037] 3)将细胞板冻融三次，12000rpm