，G.Raicevic, H.F.Kazan，C.De Bruyn?
D.Bron，M.Toungouz，L.Lagneaux:^Immune-related antigens，surface molecules andregulatory factors in human-derived mesenchymal stromal cells:the express1nand impact of inflammatory priming(来源于人的间充质干细胞中的免疫相关抗原、表面分子和调节因子:炎症启动的表达和影响)” Stem Cell Rev.2012，8，1188-98 ；S.Tipnis，C.Viswanathan，A.S.Majumdar “Immunosuppressive properties of human umbilicalcord-derived mesenchymal stem cells:role of B7-H1 and IDO(来源于人脐带的间充质干细胞的免疫抑制特性)”，Immunol Cell B1l (免疫细胞生物学).，2010，88，795-806 ；P.F1rina，M.Jurewicz，A.Augello，A.Vergani? S.Dada，S.La Rosa，M.Selig，J.Godwin，K.Law，C.Placidi，R.N.Smith，C.Capella，S.Rodig，C.N.Adra，M.Atkinson，Μ.H.Sayegh，R.Abdi Immunomodulatory funct1n of bone marrow-derived mesenchymal stemcells in experimental autoimmune type ldiabetes (来源于骨髓的间充质干细胞在实验性自动免疫I型糖尿病中的免疫调节功能)”，J Immunol.2009，183，993-1004 ；C.J.Chang,M.L.Yen，Y.C.Chen，C.C.Chien，H.1.Huang，C.H.Bai? B.L.Yen:^Placenta-derivedmultipotent cells exhibit immunosuppressive properties that are enhanced in thepresence of interferon_gamma(来源于胎盘的多能干细胞在γ干扰素存在下免疫抑制性增强)”，Stem Cells (干细胞)，2006，24，2466-77)。
[0024]只要没有其他说明，“血管炎性疾病“是指但不限于引起血管组织炎症的免疫应答，所述血管组织包括大动脉和小动脉、静脉和淋巴管。
[0025]如本文所使用，“受试者”是指任何动物，比如人、非人灵长类、小鼠、大鼠、豚鼠或兔子。优选地，受试者是人。
[0026]如本文所使用，“保护血管内皮细胞层”是指减缓、停止或逆转针对任何血管组织的免疫介导的细胞毒性反应的发展。
[0027]发明详述
[0028]血管内皮细胞层是各种血管炎症疾病的主要对象。本发明的发明人从风险适应、个性化预防和/或治疗性介入的角度考虑，认识到内皮细胞层的特异性保护具有巨大的临床和健康经济价值。
[0029]发明人针对血管内皮细胞层的活化状态和活力进行了细致研究，并且，发现CD34阴性祖细胞能够以药理学用途和剂量依赖性方式抑制内皮细胞层特异性细胞毒性反应。
[0030]所以，在第一方面中，本发明提供一种人CD34阴性祖细胞，用于保护处在血管炎性疾病风险或患有血管炎性疾病的受试者的血管内皮细胞层避免免疫介导的细胞毒性反应。
[0031 ] 在本发明的一种实施方式中，血管炎性疾病包括⑶8+细胞毒性T淋巴细胞造成的血管内皮细胞层特异性细胞裂解。发明人阐释了在血管炎性疾病的某些情况下，内皮细胞层是⑶8+细胞毒性T淋巴细胞的直接靶。⑶34阴性祖细胞的治疗性用途在干扰⑶8+细胞毒性T淋巴细胞介导细胞毒性反应中特别有效。
[0032]在本发明的【具体实施方式】中，CD8+细胞毒性T淋巴细胞包括内皮细胞层特异性细胞毒性T淋巴细胞，其是⑶27阴性和⑶28阴性。发明人惊讶地发现了存在⑶27阴性和CD28阴性且不识别造血靶的内皮细胞层特异性细胞毒性T淋巴细胞的证据。这些细胞展示出表型和功能上的显著特点。例如，它们的裂解活性被⑶4+/⑶25+/FoxP3+调节T淋巴细胞(TRegs)增强。当施用CD34阴性祖细胞时，发明人对通过该具体类型的CTL引起的内皮细胞裂解实现了明显抑制。
[0033]本发明所以提供了 CD34阴性祖细胞的分层治疗性用途，确保用CD34阴性祖细胞的风险适应的、个性化的预防和/或疗法。相应地，根据本发明的CD34阴性祖细胞的有利医学用途包括下面限定的临床病况。
[0034]在本发明的一种实施方式中，血管炎性疾病包括针对相对于受试者是同种异体的实体器官移植的血管内皮细胞层的同种异体反应。
[0035]在另一实施方式中，血管炎性疾病包括同种异体造血干细胞移植之后移植相关并发症。
[0036]例如，移植相关并发症包括移植物抗宿主病(GvHD) ο尤其是，移植物抗宿主病的特征可在于胃肠道、肝脏、包括粘膜的皮肤、肺系统和其组合的主要选择性损伤。在本发明的某些实施方式中，移植物抗宿主病包括类固醇难治愈的急性或慢性GvHD。
[0037]移植相关并发症的另一例子是微血管疾病，比如，作为一个例子有肝静脉闭塞疾病(VOD) ο
[0038]人⑶34阴性祖细胞也可用于保护血管炎性疾病中的血管内皮细胞层，所述血管炎性疾病包括由于自体免疫应答引起的急性、炎症或过敏性血管炎。该用途包括但不限于过敏性肉芽肿病、巨细胞动脉炎、韦格纳肉芽肿病、大动脉炎、J11崎疾病、血栓闭塞性脉管炎(Buerger疾病)、结节性多动脉炎、Churg-Strauss-综合症、显微镜下多血管炎、冷球蛋白性脉管炎、荨麻疹性血管炎、眼-口 -生殖器三联综合征、肺出血肾炎综合征、感染后血管炎和药物诱导的血管炎。
[0039]在另一实施方式中，血管炎性疾病包括血管内皮细胞层的慢性炎症。举例而言，慢性炎症可包括动脉粥样硬化。慢性炎症也可包括与类风湿性疾病相关的血管炎。
[0040]在本发明优选的实施方式中，⑶34阴性祖细胞包括⑶34阴性间充质干细胞/基质细胞。CD34阴性祖细胞可选自例如骨髓、脐带、胎盘和脂肪组织CD34阴性祖细胞和它们的组合。在本发明优选的实施方式中，CD34阴性祖细胞是骨髓CD34阴性祖细胞。尤其优选的是骨髓CD34阴性间充质干细胞/基质细胞。
[0041]优选地，相比不受CD34阴性祖细胞保护的内皮细胞，CD34阴性祖细胞能够将针对血管内皮细胞的免疫介导细胞毒性反应减少至少50%。下面进一步详述，根据本发明减少免疫介导细胞毒性反应的适当的测定方法。
[0042]人⑶34阴性祖细胞是优选的但不是仅适于注射至受试者的血流，例如通过将这样的细胞经注射引入受试者的静脉或动脉之一。例如，这样的给药也可进行一次或多次和/或在一个或多个延长的时间段内实施。单次注射是优选的，但是在一些情况下，随着时间推移的重复的注射可能是必要的。优选地，CD34阴性祖细胞与药学上可接受的载体混合。药学上可接受的载体是本领域技术人员熟知的，并且包括但不限于0.01摩尔至0.1摩尔、优选为0.05摩尔的磷酸缓冲液或0.8%的生理盐水。而且，这样的药学上可接受的载体可以是水性或非水性溶液、悬浮液、和乳液，非水性溶剂的例子是丙烯、乙二醇、聚乙二醇、植物油比如橄榄油和可注射的有机酯比如油酸乙酯。水性载体包括水、含酒精溶液/水溶液，乳液和悬浮液包括生理盐水和缓冲液媒介。肠胃外媒介包括氟化钠溶液、林格右旋糖、右旋糖和氯化钠、乳酸化的林格和不挥发油。静脉内媒介包括流体和养分补充剂、电解质补充剂比如林格右旋糖，基于林格右旋糖的物质等。通常用于静脉内给药的流体参见例如Remington:The Science and Practice of Pharmacy (药学的科学与实践)，第 20 版，808页，Lippincott, Williams 和 Wilkins(2000)。
[0043]可使用不同的施用方案。优选地，人⑶34阴性祖细胞适于以治疗上有效的量注射至受试者的血流。治疗上有效的量例如可包括下述范围=IXlO2至约I X 10 8细胞每千克体重、约I X 13至约10X10 7细胞每千克体重、约I X 10 4至约I X 10 6细胞每千克体重、约I X 14至约I X 10 5细胞每千克体重、约I X 105至约I X 10 6细胞每千克体重、约5X 10 4至约0.5X 15细胞每千克体重、约I X 103细胞每千克体重、约I X 104细胞每千克体重、约5X 104细胞每千克体重、约IX15细胞每千克体重、约5 X 10 5细胞每千克体重、约IX 10 6细胞每千克体重和约I X 17细胞每千克体重。发现⑶34阴性祖细胞的这些数值对于移植在治疗上是尤其有效的。
[0044]在本发明的变型例中，预防性使用CD34阴性祖细胞，用于保护处于血管炎性疾病风险中受试者的血管内皮细胞层。如本文所使用，预防性使用应包括但不限于将细胞施用至打算接受相对于该受试者是同种异体的实体器官移植的受试者。在另一例子中，预防性使用包括将CD34阴性祖细胞施用至打算接受同种异体造血干细胞移植的受试者。预防性使用的进一步的例子包括将CD34阴性祖细胞施用至已经接受同种异体移植但是还未发展内皮并发症的受试者。血管炎性疾病的风险也可包括例如遗传病、自身免疫性疾病、癌症、吸烟、酗酒和它们的组合。从风险适应、个性化预防角度考虑，发明人认识到血管内皮细胞层的靶向保护具有重要的临床和健康经济价值。
[0045]这样的风险分层用途例如可包括但不限于处在移植后内皮并发症发展风险下的患者预防性地即事先接受⑶34阴性祖细胞。例如，⑶34阴性祖细胞可就在介入例如同种异体细胞或器官移植之前、期间和/或达约六周之前和/或之后施用至受试者。CD34阴性祖细胞的施用也可扩展至介入之后内皮并发症的急性阶段和/或慢性阶段多达约100天。另外，当发展或当前发展内皮并发症和/或其症状特征时，CD34阴性祖细胞可治疗性地施用至受试者。
[0046]CD34阴性祖细胞相对于受试者可以是同种异体的。CD34阴性祖细胞相对于受试者也可以是自体的。可选地，可使用同种异体和自体CD34阴性祖细胞的组合。
[0047]在一个实施例中，CD34阴性祖细胞相对于实体器官移植是自体的且相对于受试者是同种异体的。在另一实施例中，CD34阴性祖细胞相对于造血干细胞移植是同种异体的且相对于受试者是自体的。也包括其中CD34阴性祖细胞相对于受试者和实体器官移植或造血干细胞移植是同种异体的情况。
[0048