包含噻吩并三唑并二氮杂卓化合物的药物制剂的制作方法

包含噻吩并三唑并二氮杂卓化合物的药物制剂的制作方法
【专利摘要】一种治疗淋巴细胞性白血病、急性骨髓性白血病、BCR?ABL阳性急性淋巴细胞性白血病或CD34阳性急性骨髓性白血病的方法，包括向患者施用药学可接受的量的组合物的步骤，该组合物包含由下式(1)表示的作为固体分散体的噻吩并三唑并二氮杂卓化合物、其可药用的盐、或其水合物；以及可药用的聚合物：其中X为卤素，R1为C1-C4烷基；R2为C1-C4烷基、a为1至4的整数；R3为C1-C4烷基、C1-C4羟烷基、C1-C4烷氧基、任选地具有取代基的苯基、或任选地具有取代基的杂芳基。在一个实施方案中，所述可药用的聚合物为HPMCAS。
【专利说明】包含喔吩并Ξ性并二氮杂卓化合物的药物制剂
[0001] 相关专利申请的交叉引用
[0002] 本专利申请要求2013年8月1日提交的美国临时申请No. 61/861，291、w及2013年8 月7日提交的美国临时申请No.61/863,118的优先权，所有运些申请的全文均W引用的方式 并入本文。
[0003] 序列表
[0004] 计算机可读的核巧酸/氨基酸序列表的全文通过引用的方式并入本文，该序列表 与本文同时提交并且标识如下：于2014年7月22日创建的名为吁ilename. txt"的XXX字节的 ASCII (Text)文件。
技术领域
[0005] 在一些方面，本发明设及药物组合物W及利用运些药物组合物治疗白血病的方 法。更具体而言，本发明设及含有嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓(thienot;riazolodiaz邱ine)化合 物的分散体的组合物W及治疗BCR-A化阳性急性淋己细胞性白血病和/或CD34阳性急性骨 髓性白血病的方法，所述嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物具有改善的溶解度和生物利用度。
【背景技术】
[0006] 下文所述的式（1)的化合物已经显示出可抑制乙酷化的组蛋白H4与包含串联的漠 结构域(BRD)的转录调节子家族(称为BET (漠结构域和额外末端)蛋白质，包括服D2、BRD3和 BRD4)的结合。参见美国专利申请公开No. 2010/0286127 A1，其全文W引用的方式并入本 文。Deni S , G . V .在文南犬"Bromodomain coactivators in cancer,obesity, type 2diabetes,and inflammation,"Discov Med 2010;10:489-499(该文献的全部内容W引用 方式并入本文）中报道了如下内容:BET蛋白质作为增殖和分化的主要的表观遗传调节子而 出现，并且还与倾向于血脂异常或脂肪生成不当调节、屯、血管病和2型糖尿病的升高的炎症 性质和风险、W及自体免疫疾病(例如类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮)的易感性增加有 关。因此，式(II)所示的化合物可W用于治疗多种癌症、屯、血管疾病、2型糖尿病和自体免疫 失调(例如类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮）。
[0007] 下文所述的式（1)的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物表现出与广泛施用和制备盖伦 组合物有关的非常特有的困难，尤其包括药物生物利用度W及患者间和患者内的剂量应答 的差异性的特定问题，由此迫切需要针对嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓的几乎不溶于水的性质而 开发非常规的剂型。
[000引之前，如美国专利申请公开No.20090012064 A1中所报告(该文献的全部内容W引 用方式并入本文），已经发现式（1)的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物可W使用载体丙締酸乙 醋-甲基丙締酸甲醋-Ξ甲基锭乙基甲基丙締酸醋氯化物（trimethylammonioethyl methac巧late chloride)的共聚物(；EiKlragit RS，由Rohm公司生产）来配制，从而提供在下 部肠道优先释放药物组分W用于治疗炎性肠病(例如溃瘍性结肠炎和克罗恩病）的口服制 剂。通过多种实验(包含动物测试），发现就炎性肠病而言，与式（1)的嚷吩并Ξ挫并二氮杂 卓化合物由胃肠道被吸收至循环中相比，式（1)的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物在病变部 位的释放及其对炎性病变的直接作用更为重要。但是，对于许多其他的病症而言，则要求将 式（1)的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物由胃肠道高度吸收至循环中。因此，需要可W使式 (1)的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物由胃肠道高度吸收至循环中的式（1)的嚷吩并Ξ挫并 二氮杂卓化合物的制剂。

【发明内容】

[0009] 在一个实施方案中，本发明提供了一种治疗急性淋己细胞性白血病的方法，包括 向患者施用药学可接受的量的组合物，该组合物包含嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物、或其 可药用的盐、或其水合物或溶剂化物，所述嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物由下式(1)表示：
[0010]
[0011] 其中Ri为具有1至4个碳的烷基;R2为氨原子、面素原子、或任选地被面素原子或径 基取代的具有1至4个碳的烷基;R3为面素原子;任选地被面素原子、具有1至4个碳的烷基、 具有1至4个碳的烷氧基、或氯基取代的苯基;一NRs--(C此)m-R6,其中Rs为氨原子、或具有1 至4个碳的烷基，m为0至4的整数，并且R6为任选地被面素原子取代的苯基或化晚基；或一 NR7--C0-(CH2)n-R8,其中化为氨原子或具有1至4个碳的烷基，η为0至2的整数，并且R功任 选地被面素原子取代的苯基或化晚基;并且R4为一(C出)a-C0-ΝΗ-R9,其中a为1至4的整 数，并且R9为具有1至4个碳的烷基;具有1至4个碳的径烷基;具有1至4个碳的烷氧基;或任 选地被具有1至4个碳的烷基、具有1至4个碳的烷氧基、氨基或径基取代的苯基或化晚基； 或一(师)广COORio,其中b为1至4的整数，并且Rio为具有1至4个碳的烷基;其中所述嚷吩并 Ξ挫并二氮杂卓化合物形成含有无定形嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物W及可药用的聚合 物的固体分散体，其中所述固体分散体展现出基本不存在与结晶的式（1)所示的嚷吩并Ξ 挫并二氮杂卓化合物有关的衍射线的X射线粉末衍射图案。在一个运样的实施方案中，所述 可药用的聚合物为醋酸径丙基甲基纤维素班巧酸醋，其中嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物与 醋酸径丙基甲基纤维素班巧酸醋化PMCAS)的重量比为1:3至1: 1。
[0012] 在一个实施方案中，所述由式（1)表示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物独立地选 自由W下化合物构成的组：（i)(S)-2-[4-(4-氯代苯基)-2,3,9-Ξ甲基-6H-嚷吩并[3,2-門 [1，2,4]Ξ挫并-[4,3-a][l，4]二氮杂卓-6-基]-Ν-(4-^苯基）乙酷胺或其二水合物；（ii) (S)-{4-(3'-氯基联苯-4-基）-2,3,9-Ξ 甲基-6H-嚷吩并[3,2-f][l，2,4]S 挫并[4,3-a] [1，4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲醋；（iii)(S)-{2,3,9-S甲基-4-(4-苯基氨基苯基)-6H-嚷吩 并[3,2-f][l，2,4]S挫并[4,3-a][l，4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲醋；W及（iv)(S)-{2,3,9- Ξ甲基-4-[4-(3-苯基丙酷基氨基）苯基]-6H-嚷吩并[3,2-f-][l，2,4]S挫并[4,3-a][l， 4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲醋。
[0013] 在另一个实施方案中，所述嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物为(S)-2-(4-(4-氯代苯 基）-2,3,9-ミ甲基-6H-嚷吩并[3,2-f][l，2,4]ミ挫并[4,3-a][l，4]二氮杂卓-6-基）-N- (4-?苯基）乙酷胺二水合物。
[0014] 在又一个实施方案中，所述固体分散体表现出约130°C至约140°C的单一的玻璃化 转变溫度(Tg)拐点。
[0015] 在一个实施方案中，本公开还提供了一种治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向 患者施用药学可接受的量的组合物的步骤，所述组合物包含嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合 物、或其可药用的盐、或其水合物或溶剂化物，所述嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物由下式 (1)表示：
[0016]
[0017] 其中Ri为具有1至4个碳的烷基;R2为氨原子、面素原子、或任选地被面素原子或径 基取代的具有1至4个碳的烷基;R3为面素原子;任选地被面素原子、具有1至4个碳的烷基、 具有1至4个碳的烷氧基、或氯基取代的苯基;一脆一 (C此)m-R6，其中Rs为氨原子、或具有1 至4个碳的烷基，m为0至4的整数，并且R6为任选地被面素原子取代的苯基或化晚基；或-- NR7--C0--(C出)η-Rs，其中化为氨原子或具有1至4个碳的烷基，η为0至2的整数，并且R8为任 选地被面素原子取代的苯基或化晚基;并且R4为一(C出)a-C0-ΝΗ-R9,其中a为1至4的整 数，并且R9为具有1至4个碳的烷基;具有1至4个碳的径烷基;具有1至4个碳的烷氧基;或任 选地被具有1至4个碳的烷基、具有1至4个碳的烷氧基、氨基或径基取代的苯基或化晚基； 或--(C出)b-COORio，其中b为1至4的整数，并且Rio为具有1至4个碳的烷基;其中所述嚷吩并 Ξ挫并二氮杂卓化合物形成含有无定形嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物W及可药用的聚合 物的固体分散体，其中所述固体分散体展现出基本不存在与结晶的式（1)所示的嚷吩并Ξ 挫并二氮杂卓化合物有关的衍射线的X射线粉末衍射图案。在一个运样的实施方案中，所述 可药用的聚合物为醋酸径丙基甲基纤维素班巧酸醋，其中嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物与 醋酸径丙基甲基纤维素班巧酸醋化PMCAS)的重量比为1:3至1: 1。
[0018] 在一个实施方案中，所述由式（1)表示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物独立地选 自由W下化合物构成的组：（i)(S)-2-[4-(4-氯代苯基)-2,3,9-Ξ甲基-6H-嚷吩并[3,2-門 [1，2,4]Ξ挫并-[4,3-a][l，4]二氮杂卓-6-基]-Ν-(4-^苯基）乙酷胺或其二水合物；（ii) (S)-{4-(3'-氯基联苯-4-基）-2,3,9-Ξ 甲基-6H-嚷吩并[3,2-f][l，2,4]S 挫并[4,3-a] [1，4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲醋；（iii)(S)-{2,3,9-S甲基-4-(4-苯基氨基苯基)-6H-嚷吩 并[3,2-f][l，2,4]S挫并[4,3-a][l，4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲醋；W及（iv)(S)-{2,3,9- Ξ甲基-4-[4-(3-苯基丙酷基氨基）苯基]-6H-嚷吩并[3,2-f-][l，2,4]S挫并[4,3-a][l， 4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲醋。
[0019] 在另一个实施方案中，所述嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物为(S)-2-(4-(4-氯代苯 基）-2,3,9-ミ甲基-6H-嚷吩并[3,2-f][l，2,4]ミ挫并[4,3-a][l，4]二氮杂卓-6-基）-N- (4-?苯基）乙酷胺二水合物。
[0020] 在一个实施方案中，所述固体分散体展现出基本不存在与结晶的式（1)所示的嚷 吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物有关的衍射线的X射线粉末衍射图案。在又一个实施方案中，所 述固体分散体表现出约130°C至约140°C的单一的玻璃化转变溫度(Tg)拐点。
[0021] 在一个方面，本发明提供了一种治疗BCR-A化阳性急性淋己细胞性白血病的方法， 包括向患者施用药学可接受的量的组合物的步骤，所述组合物包含嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓 化合物。在所述治疗BCR-A化阳性急性淋己细胞性白血病的方法的一些优选的实施方案中， 所述嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物由下式(1)的结构表示：
[0022]
[0023] 其中Ri为具有1至4个碳的烷基;R2为氨原子、面素原子、或任选地被面素原子或径 基取代的具有1至4个碳的烷基;R3为面素原子;任选地被面素原子、具有1至4个碳的烷基、 具有1至4个碳的烷氧基、或氯基取代的苯基;一NRs--(C此)m-R6,其中Rs为氨原子、或具有1 至4个碳的烷基，m为0至4的整数，并且R6为任选地被面素原子取代的苯基或化晚基；或一 NR7--C0-(CH2)n-R8,其中化为氨原子或具有1至4个碳的烷基，η为0至2的整数，并且R功任 选地被面素原子取代的苯基或化晚基;并且R4为一(C出)a-C0-ΝΗ-R9,其中a为1至4的整 数，并且R9为具有1至4个碳的烷基;具有1至4个碳的径烷基;具有1至4个碳的烷氧基;或任 选地被具有1至4个碳的烷基、具有1至4个碳的烷氧基、氨基或径基取代的苯基或化晚基； 或--(C此)b--COORio,其中b为1至4的整数，并且Rio为具有1至4个碳的烷基。或其可药用的 盐、或其水合物或溶剂化物。
[0024] 在治疗BCR-A化阳性急性淋己细胞性白血病的方法的一些优选的实施方案中，所 述由式（1)表示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物独立地选自由W下化合物构成的组：
[00 巧]Q)(s)-2-[4-(4-氯代苯基）-2,3,9-Ξ 甲基-6H-嚷吩并[3,2-f][l，2,4]S 挫并- [4,3-a][l，4]二氮杂卓-6-基]-N-(4-?苯基)乙酷胺或其二水合物；
[00%] Qi)(s)-{4-(3'-氯基联苯-4-基)-2,3,9-Ξ 甲基-6H-嚷吩并[3,2-f][l，2,4]S 挫并[4,3-曰][1，4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲醋；
[0027] Qii)(s)-{2,3,9-S 甲基-4-(4-苯基氨基苯基)-6H-嚷吩并[3,2-f][l，2,4]S 挫 并[4,3-a][l，4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲醋；W及
[002引 Qv)(S)-{2,3,9-S甲基-4-[4-(3-苯基丙酷基氨基)苯基]-6H-嚷吩并[3,2-f-] [1，2,4]^挫并[4,3-曰][1，4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲醋。
[0029] 在治疗BCR-A化阳性急性淋己细胞性白血病的方法的一些优选的实施方案中，所 述由式（1)表示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物为（S)-2-(4-(4-氯代苯基)-2,3,9-Ξ甲 基-6Η-嚷吩并[3，2-f ] [ 1，2，4];挫并[4，3-a] [ 1，4]二氮杂卓-6-基)-Ν-(4-^苯基）乙酷胺 二水合物。
[0030] 在治疗BCR-A化阳性急性淋己细胞性白血病的方法的一些优选的实施方案中，所 述由式（1)表示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物形成固体分散体，其中所述固体分散体包 含无定形的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物、和其可药用的盐、或其水合物；W 及可药用的聚合物。
[0031] 在治疗BCR-A化阳性急性淋己细胞性白血病的方法的一些优选的实施方案中，所 述由式（1)表示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物形成固体分散体，其中所述固体分散体包 含无定形的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物、和其可药用的盐、或其水合物；W 及可药用的聚合物，其中所述可药用的聚合物为醋酸径丙基甲基纤维素班巧酸醋，其中嚷吩 并S挫并二氮杂卓化合物与醋酸径丙基甲基纤维素班巧酸醋化PMCAS)的重量比为1:3至1:1。
[0032] 在治疗BCR-A化阳性急性淋己细胞性白血病的方法的一些优选的实施方案中，所 述包含式(1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物的固体分散体表现出约130°C至约14(TC的 单一的玻璃化转变溫度(Tg)拐点。在一个实施方案中，所述固体分散体展现出基本不存在 与结晶的式(1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物有关的衍射线的X射线粉末衍射图案。
[0033] 在另一方面，本发明提供了一种治疗CD34阳性急性骨髓性白血病的方法。在治疗 CD34阳性急性骨髓性白血病的方法的一些示例性实施方案中，所述方法包括向患者施用药 学可接受的量的包含嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物的组合物。在治疗CD34阳性急性骨髓性 白血病的方法的一些优选的实施方案中，所述方法包括向患者施用药学可接受的量的组合 物，该组合物包含:嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物、或其可药用的盐、或其水合物或溶剂化 物，所述嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物具有式(1)所示的结构：
[0034]
[0035] 其中Ri为具有1至4个碳的烷基;R2为氨原子、面素原子、或任选地被面素原子或径 基取代的具有1至4个碳的烷基;R3为面素原子;任选地被面素原子、具有1至4个碳的烷基、 具有1至4个碳的烷氧基、或氯基取代的苯基;一脆一 (C此)m-R6，其中Rs为氨原子、或具有1 至4个碳的烷基，m为0至4的整数，并且R6为任选地被面素原子取代的苯基或化晚基；或-- NR7--C0--(C出)η-Rs，其中化为氨原子或具有1至4个碳的烷基，η为0至2的整数，并且R8为任 选地被面素原子取代的苯基或化晚基;并且R4为一(C出)a-C0-ΝΗ-R9,其中a为1至4的整 数，并且R9为具有1至4个碳的烷基;具有1至4个碳的径烷基;具有1至4个碳的烷氧基;或任 选地被具有1至4个碳的烷基、具有1至4个碳的烷氧基、氨基或径基取代的苯基或化晚基； 或--(C出)b-COORio，其中b为1至4的整数，并且Rio为具有1至4个碳的烷基。
[0036] 在治疗CDW阳性急性骨髓性白血病的方法的一些优选的实施方案中，所述由式 (1)表示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物独立地选自由W下化合物构成的组：
[0037] Q) (s)-2-[4-(4-氯代苯基）-2，3，9-Ξ甲基-6H-嚷吩并[3，2-f ] [ 1，2，4]Ξ挫并- [4,3-a][l，4]二氮杂卓-6-基]-N-(4-?苯基)乙酷胺或其二水合物；
[003引 Qi)(s)-{4-(3'-氯基联苯-4-基）-2,3,9-Ξ 甲基-6Η-嚷吩并[3,2-f][l，2,4]S 挫并[4,3-曰][1，4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲醋；
[0039] Qii)(s)-{2,3,9-S 甲基-4-(4-苯基氨基苯基)-6H-嚷吩并[3,2-f][l，2,4]S 挫 并[4,3-a][l，4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲醋；W及
[0040] Qv)(S)-{2,3,9-S 甲基-4-[4-(3-苯基丙酷基氨基)苯基]-6H-嚷吩并[3,2-f-] [1，2,4]^挫并[4,3-曰][1，4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲醋。
[0041] 在治疗CDW阳性急性骨髓性白血病的方法的一些优选的实施方案中，所述由式 (1)表示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物为(S)-2-(4-(4-氯代苯基)-2,3,9-Ξ甲基-6H-嚷 吩并[3,2-f][l，2,4]Ξ挫并[4,3-a][l，4]二氮杂卓-6-基)-N-(4-径苯基)乙酷胺二水合物。
[0042] 在治疗CDW阳性急性骨髓性白血病的方法的一些优选的实施方案中，所述由式 (1)表示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物形成固体分散体，其中所述固体分散体包含无定 形的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物、和其可药用的盐、或其水合物；W及可药 用的聚合物。在一个实施方案中，所述固体分散体展现出基本不存在与结晶的式（1)所示的 嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物有关的衍射线的X射线粉末衍射图案。
[0043] 在一些优选的实施方案中，治疗CD34阳性急性骨髓性白血病的方法包括向患者施 用药学可接受的量的无定形的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物、及其可药用的 盐、或其水合物，其中式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物形成固体分散体，所述固 体分散体包含无定形的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物、及其可药用的盐、或其 水合物；W及可药用的聚合物，并且其中所述可药用的聚合物为醋酸径丙基甲基纤维素班 巧酸醋，其中嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物与醋酸径丙基甲基纤维素班巧酸醋化PMCAS)的 重量比为1:3至1:1。
[0044] 在一些优选的实施方案中，治疗CD34阳性急性骨髓性白血病的方法包括向患者施 用在可药用的聚合物中形成固体分散体形式的药学可接受的量的无定形的式（1)所示的嚷 吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物、及其可药用的盐、或其水合物，其中所述固体分散体表现出约 13(TC至约14(TC的单一的玻璃化转变溫度(Tg)拐点。在一个实施方案中，所述固体分散体 展现出基本不存在与结晶的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物有关的衍射线的X 射线粉末衍射图案。
【附图说明】
[0045] 参照示例性实施方案的附图来阅读时，将会更好的理解前面的发明概述W及下面 的对本发明的包含嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓制剂的药物组合物和方法的实施方案的详述。但 是，应该理解的是本发明不限于所示的精确设置和手段。
[0046] 在附图中：
[0047] 图1A示出了包含固体分散体的比较制剂的溶解情况，其中所述的固体分散体包含 25%的化合物（1-1)和化化agit L100-55。
[0048] 图1B示出了包含固体分散体的比较制剂的溶解情况，其中所述的固体分散体包含 50%的化合物（1-1)和化化agit L100-55。
[0049] 图1C示出了包含固体分散体的示例性制剂的溶解情况，其中所述的固体分散体包 含25%的化合物（1-1)和聚乙締化咯烧酬(PVP)。
[0050] 图1D示出了包含固体分散体的示例性制剂的溶解情况，其中所述的固体分散体包 含50 %的化合物(1 -1)和PVP。
[0051] 图1E示出了包含固体分散体的示例性制剂的溶解情况，其中所述的固体分散体包 含25%的化合物（1-1)和PVP-乙酸乙締醋(PVP-VA)。
[0052] 图1F示出了包含固体分散体的示例性制剂的溶解情况，其中所述的固体分散体包 含50%的化合物(1-1)和和?￥?-￥八。
[0053] 图1G示出了包含固体分散体的示例性制剂的溶解情况，其中所述的固体分散体包 含25%的化合物(1-1)和醋酸径丙基甲基纤维素班巧酸醋化PMCAS-M)。
[0054] 图1H示出了包含固体分散体的示例性制剂的溶解情况，其中所述的固体分散体包 含50 %的化合物(1-1)和HPMCAS-M。
[0055] 图II示出了包含固体分散体的示例性制剂的溶解情况，其中所述的固体分散体包 含25 %的化合物(1-1)和径丙基甲基纤维素邻苯二甲酸醋化PMCP-HP55)。
[0056] 图1J示出了包含固体分散体的示例性制剂的溶解情况，其中所述的固体分散体包 含50 %的化合物(1-1)和HMCP-HP55。
[0057] 图2A示出了示例性制剂的体内筛选结果，该示例性制剂包含25%化合物（1-1)和 PVP的固体分散体。
[0058] 图2B示出了示例性制剂的体内筛选结果，该示例性制剂包含25%化合物（1-1)和 HPMCAS-M的固体分散体。
[0059] 图2C示出了示例性制剂的体内筛选结果，该示例性制剂包含50%化合物（1-1)和 HPMCAS-M的固体分散体。
[0060] 图3示出了化合物(1-1)的固体分散体的X射线粉末衍射图谱。
[0061] 图4A示出了在环境条件下平衡的25%化合物（1-1)和PVP的固体分散体的修正的 差示扫描量热轨迹。
[0062] 图4B示出了在环境条件下平衡的25%化合物（1-1)和HPMCAS-M的固体分散体的修 正的差示扫描量热轨迹。
[0063] 图4C示出了在环境条件下平衡的50 %化合物（1-1)和HPMCAS-M的固体分散体的修 正的差示扫描量热轨迹。
[0064] 图5示出了 25 %化合物（1-1)和PVP或HPMCAS-M的固体分散体、W及50 %化合物（1- 1)和HPMCAS-MG的固体分散体的玻璃化转变溫度(Tg)对相对湿度(RH)的图。
[0065] 图6示出了在75%相对湿度下平衡的25%化合物（1-1)和PVP的固体分散体的修正 的差示扫描量热轨迹。
[0066] 图7A和7B示出了 Img/kg静脉定量给药后的化合物（1-1)(实屯、矩形）、3mg/kg 口服 定量给药的25 %化合物（1-1): PVP(空屯、圆圈）、3mg/kg 口服定量给药的25 %化合物（1 -1): HPMCAS-MG (空屯、Ξ角形)和3mg/kg 口服定量给药的50 %化合物（1 -1): HPMCAS-MG (空屯、倒Ξ 角）的血浆浓度对时间的曲线。插图描绘了在半对数标度上绘制的相同的数据。
[0067] 图8A和8B示出了化合物（1-1)作为25%化合物（1-1):PVP(空屯、圆圈）、25%化合物 (1 -1): HPMCAS-MG (空屯、Ξ 角形）和50 % 化合物（1 -1): HPMCAS-MG (空屯、倒Ξ 角）在3mg/kg 口 服定量给药后的血浆浓度对时间的曲线。插图描绘了在半对数标度上绘制的相同的数据。 [006引图9示出了在稳定性测试时间为0时，化合物（1 -1)在HPMCAS-MG中的固体分散体的 X射线粉末衍射图谱。
[0069] 图10示出了在40°C和75 %相对湿度的环境下暴露1个月后，化合物（1-1)在 HPMCAS-MG中的固体分散体的X射线粉末衍射图谱。
[0070] 图11示出了在40°C和75 %相对湿度的环境下暴露2个月后，化合物（1-1)在 HPMCAS-MG中的固体分散体的X射线粉末衍射图谱。
[0071] 图12示出了在40°C和75 %相对湿度的环境下暴露3个月后，化合物（1-1)在 HPMCAS-MG中的固体分散体的X射线粉末衍射图谱。
[0072] 图13A-13C示出了化合物（1-1)对AUi田胞系（Jurkat、RS 4-11和T0M-1细胞)诱导 的调亡动力学，运些细胞在处理后的不同时间点收获。调亡细胞定义为膜联蛋白V+具有或 不具有PI吸收。X轴示出化合物（1-1)的剂量，Y轴示出调亡细胞的百分比。示出了 Ξ个试验 中的一个代表性试验。
[0073] 图14A-14D示出了化合物（1-1)对AML细胞系化L60、K562、KG巧PKGla细胞)诱导的 调亡动力学，运些细胞在处理后的不同时间点收获。调亡细胞定义为annexin V+具有或不 具有PI吸收。X轴示出化合物（1-1)的剂量，Y轴示出调亡细胞的百分比。示出了两个试验中 的一个代表性试验。
[0074] 图15A-15C示出了化合物（1-1)对A化和AML细胞系诱导的细胞周期改变。（A)为未 处理化60和用lOOnM的化合物（1-1)处理24小时的细胞的流式细胞图谱的代表性柱状图。在 细胞周期分析之前用PI解育细胞。A化(图15B)和AML(图15C)细胞系的细胞周期改变。X轴示 出细胞系，并且Y轴示出细胞处于细胞周期时相的百分比。
[0075] 图16示出了由较低剂量的化合物（1-1)诱导的调亡。用lOnM化合物（1-1)解育KG1 细胞。调亡细胞定义为Snnexin V+具有或不具有PI吸收。示出了代表性点图（PI:化2， Annexin V:FL1)。
[0076] 图17A-17C示出了白血病细胞系和患者样品中的BRD基因表达。B畑2、BRD3和BRD4 在白血病细胞系中的表达水平（图17A)，A化(图17B)和AML(图17C)患者样品中的表达水平。 X轴示出细胞系，Y轴示出相对于ABL的cDNA的量。通过利用磁珠的阳性选择（positive selection)得到了CD34+细胞。
[0077] 图18A和18B示出了通过化合物（1-1)处理，BRD蛋白和c-MYC的下调。从不同的ALL 和AML细胞系得到细胞裂解物和cDNA提取物。通过免疫印迹（图18A)和QT-PCR(图17B)研究 蛋白质和cDNA水平。
[007引图19A-19D示出了用化合物（1-1)处理后BRD2、BRD3和B畑4的cDNA动力学。从不同 的A化和AML细胞系得到cDNA提取物。通过QT-PCR研究表达水平。
[0079] 图20示出了化合物（1-1)对原发性细胞(primary cell)的影响。通过用抗体标记 的磁珠的阳性选择得到CD34+和CD34-厮血细胞、W及AML细胞。用不同剂量的化合物（1-1) 处理细胞并在24小时后收获细胞。Y轴示出了具有或不具有PI吸收的Annexin V。
[0080] 图21A-21T示出了短暂暴露于lOnM和lOOnM浓度的化合物（1-1)96小时后，对A化细 胞系(Jurkat和RS 4-11)?及AML细胞系化L60和K562)调亡的流式细胞分析。
[0081 ] 图22A-2化示出了短暂暴露于OnM、lnM和lOnM浓度的化合物（1-1)后，对AML细胞系 化60的调亡的流式细胞分析。
[0082] 图23A、23B和23C示出了图22A-2化中的化60细胞系的调亡。
[0083] 图24A和24B示出了化60和K562细胞系的调亡。
[0084] 图25A和25B示出了 KG1和KGla细胞系的调亡。
[0085] 图26A和26B示出了化rkat和RS4-11细胞系的调亡。
[00化]图27示出了T0M1细胞系的调亡。
[0087] 图28为从化rkat细胞系洗去药物后的调亡图。
[0088] 图29A和29B为从化60和K562细胞洗去药物后的调亡图。
[0089] 图30A和30B为从化rkat和RS4-11细胞洗去药物后的调亡图。
[0090] 图31A和31B示出了在Ξ种A化细胞系（Jurkat、RS 4-11、T0M-1)和四种AML细胞系 化 L60、Κ562、KG1 和 KGla)中的MTT 检验。
[0091] 图32A-32C示出了用化合物（1-1)处理后，AML患者的调亡情况。
[0092] 图33A-33G示出了 AML患者的调亡情况。
[0093] 图34A和34B示出了 AML患者的调亡情况。
[0094] 图35示出了用化合物（1 -1)处理后，在AML和ALL细胞系中的c-MYC动力学。
[0095] 图36示出了用化合物（1-1)处理后，在AML和A化细胞系中的BRD4动力学。
[0096] 图37示出了用化合物（1-1)处理后，在ML和A化细胞系中的服D2动力学。
[0097] 图38示出了用化合物（1-1)处理后，在ML和A化细胞系中的服D3动力学。
[009引图39A-39C示出了在AML和A化细胞系中，由不同剂量的化合物（1-1)诱导的调亡动 力学。用剂量增加的化合物（1-1)处理72小时后收获骨髓和淋己细胞系。调亡细胞定义为 annexin V+具有或不具有PI吸收。X轴示出化合物（1-1)的剂量，Y轴示出调亡细胞的百分比。 结果用平均± SD表示，其来自用化合物（1-1)处理AML和A化细胞系的Ξ个独立实验的重复。
[0099] 图40A-40H示出了在白血病细胞系中用化合物（1 -1) (0TX015)诱导的细胞周期改 变。用剂量升高的0TX015处理RS4-11细胞4她，其流式细胞图谱的代表性柱状图在图40A- 40F中示出。在细胞周期分析之前，将细胞与PI解育化。图40G示出在4她时分析得到的所有 AML和AUi田胞系的细胞周期改变。X轴示出细胞系，Y轴示出处于G1和S期的细胞百分比。结 果用来自Ξ个独立实验的重复的平均± SD表示。
[0100] 图41A和41B示出了在白血病细胞系中漠结构域的基因表达，W及由化合物（1-1) (0TX015)的调节。用RQ-PCR检测不同细胞系表达的异质水平的服D2、B畑3和服D4,其中bcr- aW驱动的细胞系BV-173和K562具有最低的基因表达水平（图41A)。
[0101] 图41C-41H示出了分别用250nM和500nM的0TX015处理4化时，BRD4、BRD2和B畑3的 cDNA水平的调节。检测到在KGUK562和化rkat中B畑3和服D2显著上调，在KG1和化60中服D2 增加。在图41A和41B中示出了白血病细胞系中BRD4、B畑2和B畑3的基线水平的基因表达水 平。暴露在250nM和500nM的0TX015 4化后的B畑4(图41C和41D)、B畑3(图41E和41F)和B畑2 (图41G和41H)的基因表达水平。X轴示出细胞系，Y轴示出cDNA相对于A化的量。结果用来自 两个独立实验的重复的平均±SD表示。
[0102] 图42A-42D示出了 0TX015在所有细胞系中诱导C-MYC下调。图42A和42B示出了不同 白血病细胞系中C-MYC的基础基因表达水平。图42C和42D示出了用250nM和500nM的0TX015 处理不同白血病细胞系，并在4她时用QT-PCR检测的C-MYC下调。
[0103] 图43A-4化示出了 0TX015对B畑4、B畑2和B畑3的蛋白质水平W及C-MYC的影响。在 暴露于500nM 0TX015 7化后，在选定的ML细胞系化60中服D4和B畑3保持未受影响，并且在 24h处理后观察到C-MYC瞬时下调（43A-43C)，而几乎抗性的AML细胞系K562在2地暴露后开 始显示出B畑4、B畑3和C-MYC下调（图43D-43F)。对于敏感性A化细胞系Jurkat在4化和72h 显示出c-MYC的下调（图43G-431)，而在RS4-11中，B畑4、B畑3和c-MYC保持未受影响（图4JD- 4化）。用500nM的0TX015处理AML细胞系HL60、K562(图43A-43C;图43D-43F)和A1X细胞系 化rkat和RS4-11(图43G-43I;图4JD-43U，并与暴露于相应浓度的DMS0的对照比较。在指定 时间点，提取蛋白质，电泳，并用BRD4、BRD3、BRD2或c-MYC抗体进行免疫印迹。用ODYSSEY (LiCor)技术显示服D4、B畑3、c-MYC和GAPDH的条带，其允许通过化学发光而示出的与GAPDH 或BRD2相关的蛋白质的精确定量。该技术不允许蛋白质定量。示出了Ξ个实验中的一个代 表性实验。
[0104] 图44A-44D示出了0TX015对原发性患者细胞(primaiT patient cell)的影响。用 0TX015活体外（ex vi VO)处理来自AML患者的5个样品、W及两个A化样品（包括1个ALL化+ 患者）。图44D示出了患者的特征。在原发性患者样品中，0TX015W35-85%的不同程度诱导 调亡（图6)。曲+A化患者似乎具有耐药性。0TX015在AML和A1X患者的原发性细胞中诱导调 亡。从来自AML和A化患者的骨髓（BM)和外周血（PB)获得单核细胞。细胞暴露于250nM和 5(K)nM的0TX015 72小时，并通过annexin V和PI染色来评价调亡。结果用来自一个试验的两 个重复的平均±SD表示。
[0105] 图45A-4祀示出了患者样品中的c-MYC在蛋白质水平的调节。在分别用250nM和 500nM的0TX015活体外处理之后，从患者5的骨髓(BM)细胞获得蛋白质提取物（图44D;图 45A-4加）。在暴露于0TX015 7化后BM细胞示出了c-MYC的下调。来自患者5的骨髓细胞用 250nM和500nM的0TX015处理，并与暴露于相应浓度的DMS0的对照比较。在72h后提取蛋白 质、电泳并用适当的c-MYC抗体进行免疫印迹。条带用ODYSSEY(LiCor)技术显示，其允许与 GAPDH相关的蛋白质的精确定量（图45A)。在Ξ个时间点24、48和72h，通过RQ-PCR示出cMYC 相对于A化的表达水平（图45B)。图45B的结果W重复实验的平均± SD表示。
[0106] 图46示出了 0TX015的生物学作用的总结。
[0107] 图47A-47D示出了通过RQ-PCR分析所评价的患者样品中的BRD2、BRD3和B畑4的基 础基因表达。在A化患者中，Ph+A化示出了较低的BRD表达水平（图47A和47B;图47E的患者3 至6)，而在AML患者中，B畑表达水平更加异质化(图47C和47D)
[0108] 图47E提供了患者的特征的总结，运些患者的样品经评价给出图47A-47D的结果。
[0109] 发明详述
[0110] 现在，下文将参照附图和实施例来更全面地描述本发明的主题，所述附图和实施 例示出了代表性的实施方案。但是，本发明的主题可不同的形式体现，并且不应该解释 成局限于本发明列出的实施方案。提供运些实施方案旨在描述并使本领域的技术人员能够 实施。除非另有说明，否则本发明所用的所有技术和科学术语都具有所述主题所属技术领 域的普通技术人员通常所理解的相同的含义。本发明中所提及的所有公开、专利申请、专利 和其他参考文献均W引用的方式全文并入本文中。
[0111] 本发明提供了治疗急性淋己细胞性白血病、急性骨髓性白血病、BCR-ABL阳性急性 淋己细胞性白血病和CD34阳性急性骨髓性白血病的方法。本文详细地描述了本公开的各个 部分：I.嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物；II.制剂；III.剂型；IV.剂量;V.工艺;和VI.例子。 本领域技术人员能够理解治疗方法的各个实施方案包括本文所述的嚷吩并Ξ挫并二氮杂 卓化合物、制剂、剂型、剂量和工艺的多个实施方案。
[0112] 在一个方面，本发明提供了一种治疗急性淋己细胞性白血病的方法，包括向患者 施用药学可接受的量的组合物的步骤，所述组合物包含本文所述的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓 化合物，其形成含有无定形嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物及其可药用的盐或其水合物；W 及可药用的聚合物的固体分散体。本文中描述了运样的固体分散体的多种实施方案并且可 W相应地应用。
[0113] 在一个方面，本发明提供了一种治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向患者施用 药学可接受的量的组合物的步骤，所述组合物包含本文所述的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合 物，其形成包含无定形嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物及其可药用的盐、或其水合物；W及可 药用的聚合物的固体分散体。本文中描述了运样的固体分散体的多种实施方案并且可W相 应地应用。
[0114] 在一个方面，本发明提供了一种治疗BCR-A化阳性急性淋己细胞性白血病的方法， 包括向患者施用药学可接受的量的包含本文各个实施方案所述的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓 化合物的组合物的步骤。在治疗BCR-A化阳性急性淋己细胞性白血病的方法的一些实施方 案中，本文所述的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物形成含有无定形嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化 合物及其可药用的盐、或其水合物W及可药用的聚合物的固体分散体。本文中描述了运样 的固体分散体的各种实施方案并且可W相应地应用。
[0115] 在一个方面，本发明提供了一种治疗CD34阳性急性骨髓性白血病的方法，包括向 患者施用药学可接受的量的包含本文各个实施方案所述的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物 的组合物的步骤。在治疗CD34阳性急性骨髓性白血病的方法的一些实施方案中，本文所述 的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物形成含有无定形嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物及其可药 用的盐、或其水合物W及可药用的聚合物的固体分散体。本文中描述了运样的固体分散体 的各种实施方案并且可W相应地应用。
[0116] I.嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物：
[0117] 在一个实施方案中，在本发明的制剂中使用的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物由式 (1)表示(包括其任意的盐、异构体、对映异构体、消旋物、水合物、溶剂化物、代谢物和多型 变体）：
[011 引
[0119] 其中Ri为具有1至4个碳的烷基;R2为氨原子、面素原子、或任选地被面素原子或径 基取代的具有1至4个碳的烷基;R3为面素原子;任选地被面素原子、具有1至4个碳的烷基、 具有1至4个碳的烷氧基、或氯基取代的苯基;一NR5--(CH2)m-R6,其中R5为氨原子、或具有1 至4个碳的烷基，m为0至4的整数，并且R6为任选地被面素原子取代的苯基或化晚基；或-- NR7--C0--(CH2)n--R8,其中R7为氨原子或具有语4个碳的烷基，η为0至2的整数，并且R 8为任 选地被面素原子取代的苯基或化晚基;并且R4为一(C出)a-C0-NH-R9,其中a为1至4的整 数，并且R9为具有1至4个碳的烷基;具有1至4个碳的径烷基;具有1至4个碳的烷氧基;或任 选地被具有1至4个碳的烷基、具有1至4个碳的烷氧基、氨基或径基取代的苯基或化晚基； 或--(CH2)b--C00RW，其中b为语4的整数，并且Ri嘴具有1至4个碳的烷基。
[0120] 在一个实施方案中，合适的烷基包括含有1个碳原子至4个碳原子的线性或支链烧 基基团。在一个实施方案中，合适的烷基包括含有1个碳原子至3个碳原子的线性或支链烧 基基团。在一个实施方案中，合适的烷基包括含有1个碳原子至2个碳原子的线性或支链烧 基基团。在一个实施方案中，示例性的烷基基团包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、正 下基、异下基、仲下基、叔下基。在一个实施方案中，示例性的烷基基团包括但不限于甲基、 乙基、丙基、异丙基、2-甲基-1-丙基和2-甲基-2-丙基。
[0121] 在一些实施方案中，本发明提供了本发明所述的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物的 可药用的的盐、溶剂化物(包括水合物)和同位素标记的形式。在一个实施方案中，嚷吩并Ξ 挫并二氮杂卓化合物的可药用的盐包括与无机酸形成的酸加成盐。在一个实施方案中，嚷 吩并Ξ挫并二氮杂卓的可药用的无机酸加成盐包括盐酸、氨漠酸、氨舰酸、憐酸、偏憐酸、硝 酸和硫酸的盐。在一个实施方案中，嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物的可药用的盐包括与有 机酸形成的酸加成盐。在一个实施方案中，嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化的可药用的有机酸加 成盐包括W下酸的盐:酒石酸、乙酸、Ξ氣乙酸、巧樣酸、苹果酸、乳酸、富马酸、苯甲酸、甲 酸、丙酸、乙醇酸、葡萄糖酸、马来酸、班巧酸、精脑硫酸、异硫幾酸（isothionic acid)、粘 酸、龙胆酸、异烟酸、糖二酸、葡萄糖醒酸、慷酸、谷氨酸、抗坏血酸、邻氨基苯甲酸、水杨酸、 苯乙酸、扁桃酸、扑酸(帕莫酸）、甲烧横酸、乙烧横酸、泛酸、硬脂酸、横胺酸、褐藻酸、半乳糖 醒酸和芳基横酸(例如苯横酸和4-甲基苯横酸）。
[0122] 式（1)表示的典型嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物包括但不限于嚷吩并Ξ挫并二氮 杂卓化合物（1-1)至（1-18)，其列于下表A中。
[0123] 本文将表A的化合物（1-1)称为0TX-015或Y803。
[0125]
[0124] 表A:本发明的示例性化合物：
[0126]
[0127]
[012 引
[0129] 在一些实施方案中，式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物包括：（i)(S)-2- [4-(4-氯代苯基)-2,3,9-Ξ 甲基-6H-嚷吩并[3,2-f][l，2,4]S 挫并-[4,3-a][l，4]二氮杂 卓-6-基]-N-(4-^苯基）乙酷胺或其二水合物；（ii)(S)-{4-(3'-氯基联苯-4-基)-2,3,9- Ξ甲基-6H-嚷吩并[3,2-f][l，2,4]S挫并[4,3-a][l，4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲醋；（iii) (S)-{2,3,9-S 甲基-4-(4-苯基氨基苯基)-6H-嚷吩并[3,2-f][l，2,4]S 挫并[4,3-a][l， 4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲醋；W及（iv)(S)-{2,3,9-S甲基-4-[4-(3-苯基丙酷基氨基）苯 基]-6H-嚷吩并[3,2寸-][1，2,4]^挫并[4,3-曰][1，4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲醋。
[0130] 在一些实施方案中，式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物包括(S)-2-[4- (4-氯代苯基)-2,3,9-Ξ 甲基-6H-嚷吩并[3,2-f][l，2，-4]Ξ挫并[4,3-a][l，4]二氮杂卓- 6-基]-N-(4-?苯基）乙酷胺二水合物。
[0131] 在一些实施方案中，式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物包括(S)-2-[4- (4-氯代苯基)-2,3,9-Ξ 甲基-6H-嚷吩并[3,2-f][l，2，-4]Ξ挫并[4,3-a][l，4]二氮杂卓- 6-基]-N-(4-?苯基）乙酷胺。
[0132] II.制剂：
[0133] 式（1)所示的化合物在盖伦组合物的常规给药和制备方面表现出非常特有的困 难，特别包括药物生物利用度W及患者间和患者内的剂量应答的可变性的特定问题，由此 需要针对几乎水不溶性的所述化合物开发非常规的剂型。
[0134] 之前，已经发现可W利用载体丙締酸乙醋-甲基丙締酸甲醋甲基锭乙基甲基丙 締酸醋氯化物共聚物巧udragit RS，由Rohm公司制造)将式（1)所示的化合物配置成固体分 散体，从而提供在下肠道中优先释放药物组分W用于治疗炎性肠病(例如溃瘍性结肠炎和 克罗恩病）的口服制剂(2009年1月8日公开的美国专利申请20090012064A1)。通过多个实验 (包括动物试验），发现就炎性肠病而言，药物在病变部位的释放及其对炎性病变的直接作 用比其由胃肠道吸收至循环中更为重要。
[0135] 目前，意外地发现根据式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物、其可药用的 盐、溶剂化物(包含水合物）、消旋物、对映异构体W及同位素标记的形式可W使用可药用的 聚合物而配制成固体分散体，从而提供口服制剂，该口服制剂能够使药物组分由胃肠道高 度吸收至循环中，从而治疗炎性肠病W及其他疾病。在狗和人类中的研究证明，与之前研发 的用于治疗炎性肠病的化化agit固体分散体制剂相比，所述运些固体分散体具有高的口服 生物利用度。
[0136] 固体分散体为改善水溶性差的药物的口服生物利用度的一种手段。
[0137] 如本文所用，术语"固体分散体"是指一组固体产物，其包含至少巧巾不同的成分， 通常为亲水性载体和疏水性药物(根据式（1)的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物）。基于药物 在分散体内的分子排布，可W区分为6种不同类型的固体分散体。通常，固体分散体分为:简 单低共烙混合物、固溶体、玻璃溶液和悬浮液、W及结晶载体中的无定形沉淀。此外，可存在 一些组合，例如在同一样品中，一些分子可W成簇存在，而一些分子W分子形式分散。
[0138] 在一个实施方案中，根据式（1)的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物可分子形式 分散于无定形颗粒(簇）中。在另一个实施方案中，根据式（1)的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合 物可结晶颗粒形式分散。在一个实施方案中，载体可W是结晶的。在另一个实施方案 中，载体可W是无定形的。
[0139] 在一个实施方案中，本发明提供了包含固体分散体的药物组合物，其中所述固体 分散体由W下形成:根据式（1)的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物或其可药用的盐、溶剂化物 (包括水合物）、消旋物、对映异构体、异构体或其同位素标记形式；W及可药用的聚合物。在 一个实施方案中，可药用的聚合物为醋酸径丙甲纤维素班巧酸醋（也称为醋酸径丙基甲基 纤维素班巧酸醋或HPMCAS)。在一个实施方案中，分散体中嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物与 醋酸径丙基甲基纤维素班巧酸醋化PMCAS)的重量比为1:3至1:1。在一个实施方案中，至少 一部分嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在另一个实施方案 中，嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在一些实施方案中，固 体分散体表现出单一拐点的玻璃化转变溫度(Tg)。在一些实施方案中，单一的Tg在13(TC至 14(TC之间出现。在其他运样的实施方案中，单一的Tg在约135Γ出现。在一些运样的实施方 案中，固体分散体在40°C、相对湿度为75%的环境下暴露至少1个月。在一些实施方案中，在 固体分散体的X射线粉末衍射图案中，基本上不存在与结晶的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二 氮杂卓化合物有关的衍射线。就本申请的目的而言，"基本上不存在"是指在约21°2Θ下，在 无定形晕(amorphous halo)上不存在与结晶的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物 有关的衍射线。在一些实施方案中，醋酸径丙基甲基纤维素班巧酸醋化PMCAS)可包括:具有 9 %乙酷基/11 %班巧酷基的Μ级(例如，平均粒径为如m的HPMCAS(即，HPMCAS-MF，细粉级)或 平均粒径为1mm的HPMCAS (即，HPMCAS-MG，颗粒级））；具有12 %乙酷基/6 %班巧酷基的Η级 (例如，平均粒径为扣m的HPMCAS(即，HPMCAS-HF，细粉级）或平均粒径为1mm的HPMCAS(即， HPMCAS-HG，颗粒级））；W及具有8 %乙酷基/15 %班巧酷基的L级（例如，平均粒径为扣m的 HPMCAS(即，HPMCAS-LF，细粉级)或平均粒径为1mm的HPMCAS(即，HPMCAS-LG，颗粒级））。
[0140] 在一个实施方案中，本发明提供了一种药物组合物，其包含式（1)所示的嚷吩并Ξ 挫并二氮杂卓化合物或其可药用的盐、溶剂化物(包括水合物）、消旋物、对映异构体、异构 体或同位素标记形式在可药用的聚合物中的固体分散体。在一个实施方案中，可药用的聚 合物为聚乙締化咯烧酬(也称为聚维酬或PVP)。在一个实施方案中，分散体中嚷吩并Ξ挫并 二氮杂卓化合物与PVP的重量比为1:3至1:1。在一个实施方案中，至少一部分嚷吩并Ξ挫并 二氮杂卓化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在另一个实施方案中，嚷吩并Ξ挫并二 氮杂卓化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在一些实施方案中，固体分散体表现出单 一拐点的玻璃化转变溫度(Tg)。在一些实施方案中，单一的Tg在175°C至约185 °C之间出现。 在其他此类的实施方案中，单一的Tg在约17%~出现。在一些此类的实施方案中，固体分散 体在40°C、相对湿度为75%的环境下暴露至少1个月。在一些实施方案中，在固体分散体的X 射线粉末衍射图案中，基本上不存在与结晶的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物 有关的衍射线。就本申请的目的而言，"基本上不存在"是指在约21° 2Θ下，在无定形晕 (amorphous halo)上不存在与结晶的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物有关的衍 射线。在一些实施方案中，聚乙締化咯烧酬的分子量可为约2,500(Kollidon饭12PF，重均 分子量在2,000至3,000之间）、约9,000(}<〇川加11必17?。，重均分子量在7,000至11，000之 间）、约25，000 ( Kollido打唆25，重均分子量在28，000至34，000之间）、约50，000 ( Kollidon坂30,重均分子量在44,000至54,000之间）和约1，250,000(賠)化过〇11愈90或 Kol lidoiv友:90F，重均分子量在1，000，000至1，500，000之间）。
[0141] 在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含无定形形式的式（1)所示的嚷吩并 Ξ挫并二氮杂卓化合物或其可药用的盐、溶剂化物(包括水合物）、消旋物、对映异构体、异 构体或同位素标记形式与可药用的聚合物的固体分散体。在一个实施方案中，可药用的聚 合物为醋酸径丙甲纤维素班巧酸醋。在一个实施方案中，式(1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂 卓化合物与醋酸径丙甲纤维素班巧酸醋的重量比为1:3至1:1。在一个实施方案中，至少一 部分嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在另一个实施方案 中，嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在一些实施方案中，固 体分散体表现出单一拐点的玻璃化转变溫度(Tg)。在一些实施方案中，单一的Tg在130°C至 140°C之间出现。在其他此类的实施方案中，单一的Tg在约135°C出现。在一些此类的实施方 案中，固体分散体在40°C、相对湿度为75%的环境下暴露至少1个月。在一些实施方案中，在 固体分散体的X射线粉末衍射图案中，基本上不存在与结晶的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二 氮杂卓化合物有关的衍射线。就本申请的目的而言，"基本上不存在"是指在约21° 2Θ下，在 无定形晕上不存在与结晶的式(1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物有关的衍射线。
[0142] 在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含无定形形式的式（1)所示的嚷吩并 Ξ挫并二氮杂卓化合物或其可药用的盐、溶剂化物(包括水合物）、消旋物、对映异构体、异 构体或同位素标记形式与可药用的聚合物的固体分散体。在一个实施方案中，可药用的聚 合物为聚乙締化咯烧酬。在一个实施方案中，式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物与 聚乙締化咯烧酬的重量比为1:3至1:1。在一个实施方案中，至少一部分嚷吩并Ξ挫并二氮 杂卓化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在另一个实施方案中，嚷吩并Ξ挫并二氮杂 卓化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在一些实施方案中，固体分散体表现出单一拐 点的玻璃化转变溫度(Tg)。在一些实施方案中，单一的Tg在175 °C至约185°C之间出现。在其 他此类的实施方案中，单一的Tg在约17%~下出现。在一些此类的实施方案中，固体分散体 在40°C、相对湿度为75%的环境下暴露至少1个月。在一些实施方案中，在固体分散体的X射 线粉末衍射图案中，基本上不存在与结晶的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物有 关的衍射线。就本申请的目的而言，"基本上不存在"是指在约21°2Θ下，在无定形晕上不存 在与结晶的式(1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物有关的衍射线。
[0143] 在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含结晶形式的式（1)所示的嚷吩并Ξ 挫并二氮杂卓化合物或其可药用的盐、溶剂化物(包括水合物）、消旋物、对映异构体、异构 体或同位素标记形式与可药用的聚合物的固体分散体。在一个实施方案中，可药用的聚合 物为醋酸径丙基甲基纤维素班巧酸醋。在一个实施方案中，式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮 杂卓化合物与醋酸径丙基甲基纤维素班巧酸醋的重量比为1:3至1:1。
[0144] 在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含结晶形式的式（1)所示的嚷吩并Ξ 挫并二氮杂卓化合物或其可药用的盐、溶剂化物(包括水合物）、消旋物、对映异构体、异构 体或同位素标记形式与可药用的聚合物的固体分散体。在一个实施方案中，可药用的聚合 物为聚乙締化咯烧酬。在一个实施方案中，式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物与聚 乙締化咯烧酬的重量比为1:3至1:1。
[0145] 在一些实施方案中，通过喷雾干燥来制备包含固体分散体的药物组合物。
[0146] 在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含喷雾干燥的固体分散体，该固体分 散体由W下形成：式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物或其可药用的盐、溶剂化物 (包括水合物）、消旋物、对映异构体、异构体或同位素标记形式，和可药用的聚合物。在一个 实施方案中，可药用的聚合物为醋酸径丙基甲基纤维素班巧酸醋。在一个实施方案中，化合 物（1)与醋酸径丙基甲基纤维素班巧酸醋的重量比为1:3至1:1。在一个实施方案中，至少一 部分嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在另一个实施方案 中，嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在一些实施方案中，固 体分散体表现出单一拐点的玻璃化转变溫度(Tg)。在一些实施方案中，单一的Tg在13(TC至 14(TC之间出现。在其他此类的实施方案中，单一的Tg在约135Γ出现。在一些此类的实施方 案中，固体分散体在40°C、相对湿度为75%的环境下暴露至少1个月。在一些实施方案中，在 固体分散体的X射线粉末衍射图案中，基本上不存在与结晶的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二 氮杂卓化合物有关的衍射线。就本申请的目的而言，"基本上不存在"是指在约21°2Θ下，在 无定形晕上不存在与结晶的式(1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物有关的衍射线。
[0147] 在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含喷雾干燥的固体分散体，该固体分 散体由W下形成：式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物或其可药用的盐、溶剂化物 (包括水合物）、消旋物、对映异构体、异构体或同位素标记形式和可药用的聚合物。在一个 实施方案中，可药用的聚合物为聚乙締化咯烧酬。在一个实施方案中，化合物（1)与聚乙締 化咯烧酬的重量比为1:3至1:1。在一个实施方案中，至少一部分嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化 合物均匀地分散于整个固体分散体中。在另一个实施方案中，嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合 物均匀地分散于整个固体分散体中。在一些实施方案中，固体分散体表现出单一拐点的玻 璃化转变溫度(Tg)。在一些实施方案中，单一的Tg在175°C至185°C之间出现。在其他此类的 实施方案中，单一的Tg在约179°C出现。在一些此类的实施方案中，固体分散体在40°C、相对 湿度为75%的环境下暴露至少1个月。在一些实施方案中，在固体分散体的X射线粉末衍射 图案中，基本上不存在与结晶的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物有关的衍射线。 就本申请的目的而言，"基本上不存在"是指在约21° 2Θ下，在无定形晕上不存在与结晶的式 (1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物有关的衍射线。
[0148] 在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含喷雾干燥的固体分散体，该固体分 散体由W下形成:无定形的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物或其可药用的盐、溶 剂化物(包括水合物）、消旋物、对映异构体、异构体或同位素标记形式和可药用的聚合物。 在一个实施方案中，可药用的聚合物为醋酸径丙基甲基纤维素班巧酸醋。在一个实施方案 中，式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物与醋酸径丙基甲基纤维素班巧酸醋的重量 比为1:3至1:1。在一个实施方案中，至少一部分嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物均匀地分散 于整个固体分散体中。在另一个实施方案中，嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物均匀地分散于 整个固体分散体中。在一些实施方案中，固体分散体表现出单一拐点的玻璃化转变溫度 (Tg)。在一些实施方案中，单一的Tg在130°C至140°C之间出现。在一些此类的实施方案中， 固体分散体在40°C、相对湿度为75%的环境下暴露至少1个月。在其他此类的实施方案中， 单一的Tg在约135Γ出现。在一些实施方案中，在固体分散体的X射线粉末衍射图案中，基本 上不存在与结晶的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物有关的衍射线。就本申请的 目的而言，"基本上不存在"是指在约21° 2Θ下，在无定形晕上不存在与结晶的式（1)所示的 嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物有关的衍射线。
[0149] 在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含喷雾干燥的固体分散体，该固体分 散体由W下形成:无定形的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物或其可药用的盐、溶 剂化物(包括水合物）、消旋物、对映异构体、异构体或同位素标记形式和可药用的聚合物。 在一个实施方案中，可药用的聚合物为聚乙締化咯烧酬。在一个实施方案中，式（1)所示的 嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物与聚乙締化咯烧酬的重量比为1:3至1:1。在一个实施方案 中，至少一部分嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在另一个 实施方案中，嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在一些实施 方案中，固体分散体表现出单一拐点的玻璃化转变溫度(Tg)。在一些实施方案中，单一的Tg 在175°C至185°C之间出现。在一些此类的实施方案中，固体分散体在40°C、相对湿度为75% 的环境下暴露至少1个月。在其他此类的实施方案中，单一的Tg在约179°C出现。在一些实施 方案中，在固体分散体的X射线粉末衍射图案中，基本上不存在与结晶的式（1)所示的嚷吩 并=挫并二氮杂卓化合物有关的衍射线。就本申请的目的而言，"基本上不存在"是指在约 21° 2Θ下，在无定形晕上不存在与结晶的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物有关的 衍射线。
[0150] 在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含喷雾干燥的固体分散体，该固体分 散体由W下形成:结晶形式的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物或其可药用的盐、 溶剂化物(包括水合物）、消旋物、对映异构体、异构体或同位素标记形式和可药用的聚合 物。在一个实施方案中，可药用的聚合物为醋酸径丙基甲基纤维素班巧酸醋。在一个实施方 案中，式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物与醋酸径丙基甲基纤维素班巧酸醋的重 量比为1:3至1:1。
[0151] 在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含喷雾干燥的固体分散体，该固体分 散体由W下形成:结晶形式的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物或其可药用的盐、 溶剂化物(包括水合物）、消旋物、对映异构体、异构体或同位素标记形式和可药用的聚合 物。在一个实施方案中，可药用的聚合物为聚乙締化咯烧酬。在一个实施方案中，式(1)所示 的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物与聚乙締化咯烧酬的重量比为1:3至1:1。
[0152] 在一个优选的实施方案中，本发明提供了一种药物组合物，其包含固体分散体，该 固体分散体由W下形成:2-[(6S)-4-(4-氯代苯基)-2,3,9-Ξ甲基-6H-嚷吩并[3,2-門-[1， 2,4]Ξ挫并[4,3-a][l，4]二氮杂卓-6-基]-N-(4-?苯基）乙酷胺二水合物(化合物α-l)) 或其可药用的盐、溶剂化物(包括水合物）、消旋物、对映异构体、异构体或同位素标记形式； W及可药用的聚合物，其中所述化合物(1-1)如下：
[0153]
[0154] 在一个实施方案中，可药用的聚合物为HPMCAS。在一个实施方案中，分散体中化合 物（1-1)和HPMCAS的重量比为1:3至1:1。在一个实施方案中，至少一部分嚷吩并Ξ挫并二氮 杂卓化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在另一个实施方案中，嚷吩并Ξ挫并二氮杂 卓化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在一个实施方案中，固体分散体是喷雾干燥的。 在一些实施方案中，固体分散体表现出单一拐点的玻璃化转变溫度(Tg)。在一些实施方案 中，单一的Tg在130°C至140°C之间出现。在其他此类的实施方案中，单一的Tg在约135°C出 现。在一些此类的实施方案中，固体分散体在40°C、相对湿度为75%的环境下暴露至少1个 月。在一些实施方案中，在固体分散体的X射线粉末衍射图案中，基本上不存在与结晶的式 (1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物有关的衍射线。就本申请的目的而言，"基本上不 存在"是指在约21° 2Θ下，在无定形晕上不存在与结晶的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物（1- 1)有关的衍射线。
[0155] 在另一个实施方案中，所述药物组合物包含化合物（1-1)或其可药用的盐、溶剂化 物(包括水合物）、消旋物、对映异构体、异构体或同位素标记形式；W及可药用的聚合物的 固体分散体。在一个实施方案中，可药用的聚合物为PVP。在一个实施方案中，分散体中化合 物（1-1)和PVP的重量比为1: 3至1: 1。在一个实施方案中，至少一部分嚷吩并Ξ挫并二氮杂 卓化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在另一个实施方案中，嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓 化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在一个实施方案中，固体分散体是喷雾干燥的。在 一些实施方案中，固体分散体表现出单一拐点的玻璃玻璃化转变溫度(Tg)。在一些实施方 案中，单一的Tg在175°C至185°C之间出现。在其他此类的实施方案中，单一的Tg在约179°C 出现。在一些此类的实施方案中，固体分散体在40°C、相对湿度为75%的环境下暴露至少1 个月。在一些实施方案中，在固体分散体的X射线粉末衍射图案中，基本上不存在与结晶的 式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物有关的衍射线。就本申请的目的而言，"基本上 不存在"是指在约21° 2Θ下，在无定形晕上不存在与结晶的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物 (1-1)有关的衍射线。
[0156] 在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含无定形形式的嚷吩并Ξ挫并二氮杂 卓化合物（1-1)或其可药用的盐、溶剂化物(包括水合物）、消旋物、对映异构体、异构体或同 位素标记形式；W及可药用的聚合物。在一个实施方案中，可药用的聚合物为HPMCAS。在一 个实施方案中，分散体中化合物（1-1)与HPMCAS的重量比为1:3至1:1。在一个实施方案中， 至少一部分嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在另一个实施 方案中，嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在一个实施方案 中，固体分散体是喷雾干燥的。在一些实施方案中，固体分散体表现出单一拐点的玻璃化转 变溫度(Tg)。在一些实施方案中，单一的Tg在130°C至140°C之间出现。在其他此类的实施方 案中，单一的Tg在约135°C出现。在一些此类的实施方案中，固体分散体在40°C、相对湿度为 75%的环境下暴露至少1个月。在一些实施方案中，在固体分散体的X射线粉末衍射图案中， 基本上不存在与结晶的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物有关的衍射线。就本申 请的目的而言，"基本上不存在"是指在约21°2Θ下，在无定形晕上不存在与结晶的嚷吩并Ξ 挫并二氮杂卓化合物(1-1)有关的衍射线。
[0157] 在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含无定形形式的嚷吩并Ξ挫并二氮杂 卓化合物（1-1)或其可药用的盐、溶剂化物(包括水合物）、消旋物、对映异构体、异构体或同 位素标记形式与可药用的聚合物的固体分散体。在一个实施方案中，可药用的聚合物为 PVP。在一个实施方案中，分散体中化合物（1-1)与PVP的重量比为1:3至1:1。在一个实施方 案中，至少一部分嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在另一 个实施方案中，嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在一个实 施方案中，固体分散体是喷雾干燥的。在一些实施方案中，固体分散体表现出单一拐点的玻 璃化转变溫度(Tg)。在一些实施方案中，单一的Tg在175°C至185°C之间出现。在其他此类的 实施方案中，单一的Tg在约189 °C出现。在一些此类的实施方案中，固体分散体在40°C、相对 湿度为75%的环境下暴露至少1个月。在一些实施方案中，在固体分散体的X射线粉末衍射 图案中，基本上不存在与结晶的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物有关的衍射线。 就本申请的目的而言，"基本上不存在"是指在约21° 2Θ下，在无定形晕上不存在与结晶的嚷 吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物(1-1)有关的衍射线。
[0158] 在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含结晶形式的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓 化合物(1-1)或其可药用的盐、溶剂化物(包括水合物）、消旋物、对映异构体、异构体或同位 素标记形式与可药用的聚合物的固体分散体。在一个实施方案中，可药用的聚合物为 HPMCAS。在一个实施方案中，分散体中化合物（1 -1)与HPMCAS的重量比为1: 3至1:1。在一个 实施方案中，固体分散体是喷雾干燥的。
[0159] 在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含结晶形式的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓 化合物(1-1)或其可药用的盐、溶剂化物(包括水合物）、消旋物、对映异构体、异构体或同位 素标记形式与可药用的聚合物的固体分散体。在一个实施方案中，可药用的聚合物为PVP。 在一个实施方案中，分散体中化合物（1-1)与PVP的重量比为1:3至1:1。在一个实施方案中， 固体分散体是喷雾干燥的。
[0160] 当经口施用本发明所述的固体分散体时，其表现出特别有利的性质。当在动物或 人类的标准生物利用度试验中施用时，所述固体分散体的有利性质的例子包括但不限于一 致的且高水平的生物利用度。本发明的固体分散体可W包括含有式（1)所示的嚷吩并Ξ挫 并二氮杂卓化合物、聚合物W及添加剂的固体分散体。在一些实施方案中，固体分散体可W 实现使式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物吸收入血流中，而运是不可能通过仅仅 将式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物与添加剂混合而获得的，运是因为式(1)所示 的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物药物在水和大多数水性介质中的溶解度可忽略不计。可W 使用多种体外和/或体内研究来测量式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物或者嚷吩 并=挫并二氮杂卓化合物（1-1)的生物利用度。体内研究可W使用例如大鼠、狗或人类来进 行。
[0161] 可W通过沿着相对于横坐标(X轴）的时间的纵坐标(Y轴），绘制式（1)所示的嚷吩 并=挫并二氮杂卓化合物或者嚷吩并=挫并二氮杂卓化合物（1-1)的血清或血浆浓度，从 而获得曲线下面积(AUC)值，由此测量生物利用度。然后，将所述固体分散体中的式（1)所示 的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物或者嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物（1-1)的AUC值与等价 浓度的不包含聚合物的结晶的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物或结晶性的嚷吩 并S挫并二氮杂卓化合物（1-1)的AUC值比较。在一些实施方案中，当将所述固体分散体经 口施用给狗时，该固体分散体的曲线下面积(AUC)值选自：由静脉施用给狗的对照组合物的 相应AUC值的至少0.4倍、0.5倍、0.6倍、0.8倍、1.0倍，其中所述对照组合物包含等价量的结 晶的式(1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物。
[0162] 可W通过模拟胃环境和肠环境的pH值的体外测试来测量生物利用度。可W通过W 下方法进行测量:将式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物或嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓 化合物（1-1)的固体分散体悬浮在pH为1.0至2.0之间的水性体外测试介质中，随后将对照 体外测试介质的pH值调节为5.0至7.0。可W在抑值调节后的最初2个小时中的任何时间来 测量无定形的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物或无定形嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓 化合物（1-1)的浓度。在一些实施方案中，在pH值为5.0至7.0之间的水性体外测试介质中， 与不包含聚合物的结晶的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物或者结晶的嚷吩并Ξ 挫并二氮杂卓化合物（1-1)的浓度相比，固体分散体使无定形的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并 二氮杂卓化合物或者无定形的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物（1-1)的浓度高至少5倍、至少 6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍或者至少10倍。
[0163] 在其他的实施方案中，在抑值为1.0至2.0的水性体外测试介质中，与不包含聚合 物的结晶的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物的浓度相比，固体分散体中无定形 的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物或无定形嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物（1- 1)的浓度高至少40 %、至少50 %、至少60 %、至少70 %、至少80 %。在一些此类的实施方案 中，固体分散体的聚合物为HPMCAS。在一些此类的实施方案中，固体分散体的聚合物为PVP。
[0164] 在其他的实施方案中，所述固体分散体中的无定形的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并 二氮杂卓化合物或者无定形嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物（1-1)的浓度是式（1)所示的嚷 吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物和可药用的聚合物的固体分散体中的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫 并二氮杂卓化合物的浓度的至少40%、至少50% W上、至少60%、至少70%、至少80%，其中 所述可药用的聚合物选自W下物质组成的组中：径丙基甲基纤维素邻苯二甲酸醋和丙締酸 乙醋-甲基丙締酸甲醋-Ξ甲基锭乙基甲基丙締酸醋氯化物共聚物，其中各固体分散体被放 置在抑值为1.0至2.0的水性体外测试介质中。在一些此类的实施方案中，固体分散体的聚 合物为HPMCAS。在一些此类的实施方案中，固体分散体的聚合物为PVP。
[0165] 在一些实施方案中，当在一定的湿度和溫度下暴露一段时间时，本发明所述的固 体分散体表现出抵抗式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物或嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓 化合物（1-1)的重结晶的稳定性。在一个实施方案中，无定形的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并 二氮杂卓化合物或嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物（1-1)的保持无定形的浓度选自：至少 90 %、至少91 %、至少92 %、至少93 %、至少94%、至少95 %、至少96 %、至少97 %、至少98 % 和至少99 %。
[0166] III.剂型：
[0167] 可W用于本发明的固体分散体的合适的剂型包括但不限于胶囊、片剂、小型片剂、 珠、微囊剂(beadlet)、丸剂、小颗粒（granule)、粒剂（granulate)和粉末。可W使用例如肠 溶包衣来包裹合适的剂型。合适的包衣可W包括但不限于邻苯二甲酸乙酸纤维素、径丙基 甲基纤维素化PMC)、径丙基甲基纤维素邻苯二甲酸醋、聚甲基丙締酸共聚物、或醋酸径丙基 甲基纤维素班巧酸醋化PMCAS)。在一些实施方案中，可存在某些组合，例如，在同一样品中， 本发明的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓的一些分子可W成簇存在，而一些分子则W分子形式分散 于载体中。
[0168] 在一些实施方案中，本发明的固体分散体可W配制成片剂、囊片或胶囊。在一些实 施方案中，本发明的固体分散体可W配制成小型片剂或倒入口中（pour-into-mouth)的小 颗粒、或者成分(constitution)的口服粉末。在一些实施方案中，本发明的固体分散体与其 他的赋形剂（例如，抑制重结晶/沉淀的聚合物、掩味成分等）组合并分散于合适的稀释剂 中，从而提供即用型的悬浮制剂。在一些实施方案中，本发明的固体分散体可W配制用于儿 科治疗。
[0169] 在一个实施方案中，本发明的药物组合物被配制用于口服给药。在一个实施方案 中，所述的药物组合物包含根据本发明所述的多个实施方案的固体分散体，其包含:式（1) 所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物、或其可药用的盐、溶剂化物(包括水合物）、消旋物、 对映异构体、异构体或同位素标记的形式；W及聚合物载体。在一个实施方案中，所述的药 物组合物还包含一种或多种添加剂，例如崩解剂、润滑剂、助流剂、粘结剂和填料。
[0170] 用于所述的药物组合物含义合适的可药用的润滑剂和可药用的助流剂的实例包 括但不限于胶态氧化娃、Ξ娃酸儀、淀粉、滑石、Ξ碱式憐酸巧、硬脂酸儀、硬脂酸侣、硬脂酸 巧、碳酸儀、氧化儀、聚乙二醇、粉末状纤维素、甘油二十二烧酸醋、硬脂酸、氨化藍麻油、单 硬脂酸甘油醋和硬脂酷富马酸钢。
[0171] 用于所述的药物组合物的合适的可药用的粘结剂的实例包括但不限于:淀粉、纤 维素及其衍生物，例如微晶纤维素（例如AVICEL PH，得自FMC公司）、径丙基纤维素、径乙基 纤维素和径丙基甲基纤维素化PMC，例如MET册CEL，得自Dow化emical公司）；薦糖、右旋糖、 玉米糖浆;多糖和明胶。
[0172] 用于所述的药物组合物的合适的可药用的填料和可药用的稀释剂的实例包括但 不限于:糖果制造商的糖、可压缩糖、葡萄糖结合剂、糊精、右旋糖、乳糖、甘露醇、微晶纤维 素(MCC)、粉末状纤维素、山梨醇、薦糖和滑石。
[0173] 在一些实施方案中，在所述的药物组合物中，赋形剂可W发挥多于一种的功能。例 如，填料或粘结剂还可W为崩解剂、助流剂、抗粘附剂、润滑剂、甜味剂等。
[0174] 在一些实施方案中，本发明的药物组合物可W还包含添加剂或配料，例如抗氧化 剂(例如抗坏血酸栋桐酸醋、下基化径基茵香酸(BHA )、二下基化径基甲苯(册T )、α-生育酪、 丙基没食子酸盐和富马酸）、抗微生物剂、酶抑制剂、稳定剂(例如丙二酸)和/或防腐剂。
[0175] 通常，本发明的药物组合物可W配制成任何合适的固体剂型。在一些实施方案中， 本发明的固体分散体混合在单位剂型中，例如作为胶囊或片剂、或者多微粒系统(例如小颗 粒或粒剂、或者粉末），W用于给药。
[0176] 在一个实施方案中，药物组合物包含:根据本发明所述的固体分散体的多个实施 方案的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物和醋酸径丙基甲基纤维素班巧酸醋 化PMCAS)的固体分散体，其中所述嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物在固体分散体中是无定形 的，并且嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物与醋酸径丙基甲基纤维素班巧酸醋化PMCAS)的重量 比为1:3至1:1 ;45重量％至50重量％的乳糖一水合物;35重量％至40重量％的微晶纤维素； 4重量％至6重量％的交联簇甲基纤维素钢;0.8重量％至1.5重量％的胶体二氧化娃;和0.8 重量％至1.5重量％硬脂酸儀。
[0177] IV.剂量：
[0178] 在一个实施方案中，本发明提供了可W配制成任何合适的固体剂型的药物组合 物。在一个实施方案中，根据本发明的药物组合物包含本发明所述式（1)所示的嚷吩并Ξ挫 并二氮杂卓化合物的多种实施方案中的一种或多种，其中所述式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并 二氮杂卓的剂量为约lOmg至约lOOmg。在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含本发明 所述式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓的多种实施方案中的一种或多种，其中所述式（1) 所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓的剂量选自由如下剂量组成的组:约1 Omg至约10 Omg、约1 Omg 至约90mg、约1 Omg至约80mg、约1 Omg至约70mg、约1 Omg至约60mg、约1 Omg至约50mg、约1 Omg至 约40mg、约lOmg至约30mg和约lOmg至约20mg。在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含 本发明所述式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓的多种实施方案中的一种或多种，其中所 述式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓的剂量选自由约1 Omg、约5 Omg、约7 5mg、约10 Omg构成 的组。
[0179] 在一些实施方案中，本发明的方法包括向有需要的受试者施用本发明所述多种实 施方案中的一种或多种的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓，其剂量选自由如下剂量组 成的组：约 Img、约 2mg、约 2.5mg、约 3mg、约 4mg、约 5mg、约 7.5mg、约 lOmg、约 15mg、约 20mg、约 25mg、约 30mg、约 35mg、约40mg、约45mg、约 50mg、约 5 5mg、约 60mg、约 65mg、约 70mg、约 75mg、约 80mg、约 85mg、约 90mg、约95mg、约 1 OOmg、约 11 Omg、约 120mg、约 130mg、约 140mg和约 150mg;其 剂型选自由W下组成的组:每周一次、每六天一次、每五天一次、每四天一次、每Ξ天一次、 每隔一天一次、每天一次、每天两次、每天Ξ次、每天四次、每天五次。在另一个实施方案中， 任意前述剂量或剂型可W定期减少或增加。
[0180] 在一些实施方案中，本发明的方法包括向有需要的受试者施用选自由W下化合物 构成的组中的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓:化合物（1-1)、（1-2)、（1-3)、（1-4)、（1-5)、（1-6)、 (1-7)、（1-8)、（1-9)、（1-10)、（1-11)、（1-12)、（1-13)、（1-14)、（1-15)、（1-16)、（1-17)和 (1-18);所述嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓的施用剂量选自由W下剂量构成的组：约Img、约2mg、 约 2.5mg、约 3mg、约 4mg、约 5mg、约 7.5mg、约1Omg、约15mg、约 20mg、约 25mg、约 30mg、约 35mg、 约40mg、约45mg、约50mg、约55mg、约60mg、约65mg、约70mg、约 75mg、约80mg、约85mg、约90mg、 约95mg、约1 OOmg、约11 Omg、约120mg、约130mg、约140mg和约150mg;其剂型选自由W下组成 的组:每周一次、每六天一次、每五天一次、每四天一次、每Ξ天一次、每隔一天一次、每天一 次、每天两次、每天Ξ次、每天四次W及每天五次。在另一个实施方案中，任意前述剂量或剂 型可W定期减少或增加。
[0181] 根据特定的治疗目的、治疗阶段等，所述单位剂型适合每日给药1至5次。在一个实 施方案中，有需要的受试者可W至少连续两天每日至少1次施用该剂型。在一个实施方案 中，有需要的受试者可W至少隔日并每日至少1次施用该剂型。在一个实施方案中，有需要 的受试者可W至少每周施用该剂型，并且将该剂型分成相等的和/或不等的剂量。在一个实 施方案中，有需要的受试者可W每周施用该剂型，每隔3天和/或每周6次施用。在一个实施 方案中，有需要的受试者可W每隔1天、每3天、每4天、每5天、每6天和/或每周W分剂量施用 该剂型。在一个实施方案中，有需要的受试者可W每个月服用该剂型的2个或多个等分剂量 或非等分剂量。
[0182] 可W使用例如肠溶包衣来包裹所用的剂型（例如胶囊、片剂、小型片剂、珠、微囊 剂、丸剂、小颗粒、粒剂或粉末）。合适的包衣可W包括但不限于邻苯二甲酸乙酸纤维素、径 丙基甲基纤维素化PMC)、径丙基甲基纤维素邻苯二甲酸醋、聚甲基丙締酸共聚物、或醋酸径 丙基甲基纤维素班巧酸醋化PMCAS)。
[0183] V.工艺：
[0184] 本发明所公开的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物可游离碱或酸加成盐的形式 存在，其可W根据美国专利申请公开No. 2010/0286127(其全部内容W引用方式并入本文或 本申请中）中所述的工序来获得。本发明的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓化合物的各对映异构体 和非对映异构体可W由包含不对称中屯、或立体异构中屯、的市售可得的起始材料W合成方 式制备，或者通过制备外消旋的混合物、然后通过本领域普通技术人员公知的拆分方法来 制备。
[0185] 在一些实施方案中，通过溶剂蒸发法来制备所述多种实施方案中的一种或多种的 根据式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓的制剂。在一个实施方案中，溶剂蒸发法包括使根 据式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓和载体溶解于挥发性溶剂中，然后使挥发性溶剂蒸 发。在一个实施方案中，挥发性溶剂可W为一种或多种赋形剂。在一个实施方案中，一种或 多种赋形剂包括但不限于抗粘剂、惰性填料、表面活性剂润湿剂、P的周节剂和添加剂。在一 个实施方案中，赋形剂可W溶解于挥发性溶剂中，或者在挥发性溶剂中呈悬浮或溶胀状态。
[0186] 在一个实施方案中，根据本发明的固体分散体的制备包括使悬浮于挥发性溶剂中 的一种或多种赋形剂干燥。在一个实施方案中，所述的干燥包括真空干燥、使挥发性溶剂在 低溫下缓慢蒸发、使用旋转蒸发器、喷雾干燥、喷雾制粒、冷冻干燥或使用超临界流体。
[0187] 在一个实施方案中，使用喷雾干燥制备根据式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓 组合物的制剂，其包括使所述的组合物的悬液或溶液雾化形成小滴，然后快速从制剂中除 去溶剂。在一个实施方案中，根据本发明的制剂的制备设及喷雾制粒，其中将溶剂中的组合 物的溶液或悬液喷雾至合适的化学惰性和/或物理惰性填料(例如乳糖或甘露醇)上。在一 个实施方案中，通过双向或Ξ向喷嘴实现所述的组合物的溶液或悬液的喷雾制粒。
[018引通过W下非限定性实施例来说明本发明。
[0189] VI.实施例：
[0190] 在W下非限定性的实施例中说明本发明。
[0191] 实施例1:化合物(1 -1)的固体分散体的体外筛选
[0192] 使用化合物（1-1) W及5种聚合物中的一种来制备十种固体分散体，其中所述聚合 物包括醋酸径丙基甲基纤维素班巧酸醋化PMCAS-M)、径丙基甲基纤维素邻苯二甲酸醋 化PMCP-HP55)、聚乙締化咯烧酬(PVP)、PVP-乙酸乙締醋(PVP-VA)和Euragit L100-55,并且 对于每种聚合物，化合物（1-1)的载量为25%和50%。使用喷雾干燥，然后在低溫对流烘箱 中进行二次干燥，从而通过溶剂蒸发法来制备固体分散体。通过非沉降溶解性能测试(non? sink dissolution performance test) 来评估各固体分散体的性能 ，所述测试测量药物的 总量和随着时间溶液中所存在的游离药物的量。选择非沉降溶解是由于其能够最好地代表 低溶解度化合物在体内的情况。该测试包括在分散体被引入至测试介质后约30分钟至40分 钟，分散体由胃抑(0.1N化Cl，pH1.0)至肠抑(FaFSSIF，pH6.5)的"胃转移"，从而模拟了 体内的情况。[化FSSIF为禁食状态的人工肠液，其由3mM的牛黄胆酸钢、0.75mM的卵憐脂、 0.174g化細颗粒、1.977g Na出Ρ04·出0、3.093g化α和适量纯净水500血组成]。使用高效 液相色谱化PLC)法和Agi 1 ent 1100串联HPLC来定量溶解药物的量。制剂的溶解情况（图1A- U)表明：相对于在相同介质中的未经配制的化合物而言，在所有的分散体候选物中，药物 的溶解度均大幅升高。在所有的固体分散体中，基于在肠抑下释放的游离药物的水平较高 运一发现可知，与未经配制的化合物相比，25 %化合物（1-1)在PVP中的分散体、25 %化合物 (1 -1)在HPMCAS-M中的分散体、W及50 %化合物（1 -1)在HPMCAS-M中的分散体对于增强的经 口吸收而言是最有前景的候选物。
[019引实施例2:化合物(1 -1)的固体分散体的体内筛选
[0194] W更大的规模制备Ξ种最有前景的化合物（1-1)的固体分散体，即25%化合物（1- 1)在PVP中的分散体、25 %化合物（1 -1)在HPMCAS-MG中的分散体、W及50 %化合物（1 -1)在 HPMCAS-M中的分散体，W用于体内研究。各制剂均经过了实施例1所述的体外溶解测试的评 估。为了确保运些分散体是无定形且均质的，通过X射线粉末衍射法(PXRD)和修正的差示扫 描量热法(mDSC)来评估各分散体。另外，为了了解水对各种分散体的玻璃化转变溫度(Tg) 的影响，对首先在设定的相对湿度（即，25%、50%和75%畑)下平衡至少18小时的样品进行 mDSC。[水可W用作固体分散体的增塑剂，并且由活性化合物或聚合物导致的体系的吸湿性 可W影响被运些体系吸收的水的量]。
[01M]非沉降溶解结果（图2A-2C)与实施例1中分散体的结果相当。PXRD结果（图3)显示 没有证据表明任意一种分散体中存在结晶化合物，并且mDSC结果（图4A-4C)显示各分散体 均存在单一的玻璃化转变溫度(Tg)，运表明各分散体是均匀的。X射线衍射计为化uker D- 2Phaser。对于各分散体，观察到Tg与相对湿度之间逆相关（图5)。值得注意的是，对于在 75%畑下平衡的25%化合物（1-1)在PVP中的固体分散体，出现了两个Tg，运表明发生了相 分离，并且该分散体还显示出在75%畑下发生了烙化，运表明在RH平衡过程中发生了结晶 (图6)。该发现表明25%化合物(1-1)在PVP中的分散体的稳定性弱于HPMCAS-M分散体。
[0196] 为了评估运Ξ种分散体的生物利用度，向多组雄性猎兔犬(每组3只）给予剂量为 3mg/kg的化合物（1-1)的固体分散体的水性悬液(通过口服填喂法给药），或者给予剂量为 3mg/kg的溶解于水：乙醇:聚乙二醇(PEG) 400 (60: 20: 20)中的化合物（1 -1)(并W静脉推注 给药至头静脉中）。在静脉给药后的0分钟(服药之前）、5分钟、15分钟和30分钟、和1小时、2 小时、4小时、8小时、12小时和24小时，W及在口服填喂给药后的0分钟(服药之前）、15分钟 和30分钟、和1小时、2小时、4小时、8小时、12小时和24小时由各动物的颈静脉收集血液样 品。使用合格的LC-MS/MS法检测各样品中存在的化合物（1-1)的量，并且量化下限为0.5ng/ mL。通过使用线性梯形法则(直至最终可测的浓度，而未将终末消除相外推至无穷大)来测 定血浆浓度-时间曲线的曲线下面积(AUC)。通过对对数浓度-时间曲线的终末线性部分进 行最小二乘回归分析来计算消除半衰期（tl/2)。由血浆浓度数据直接得到最大血浆浓度 (Cmax)和达到Cmax的时间（tmax)。通过用口服给药后的剂量归一化的AUC除W静脉给药后的剂 量归一化的AUC来计算口服生物利用度(F)，并W百分数（％)形式报告。下表1中总结的结果 给出了 25 %化合物（1-1)在PVP中的固体分散体、25 %化合物（1-1)在HPMCAS-M中的固体分 散体和50%化合物（1 -1)在HPMCAS-M中的固体分散体的平均口服生物利用度，分别为58%、 49 % 和 74 %。
[0197] 表1:狗口服(PO)和静脉(iv)给药后的化合物（1-1)的药物动力学参数(数值为3只 狗的平均值）
[019 引
[0199] AUC:血浆浓度-时间曲线下的面积;Cmax:最大血浆浓度;F:生物利用度;HPMCAS:醋 酸径丙基甲基纤维素钢；IV:静脉内；PEG:聚乙二醇;P0:经口，口服;PVP:聚乙締化咯烧酬； tmax :达到Cmax的时间；tl/2 :血浆消除半衰期
[0200] 实施例3:包含化合物(1-1)的固体分散体的胶囊的制备和临床应用
[0201 ]制备lOmg强度的明胶胶囊，在患有恶性血液病的患者中进行初步的临床研究。基 于实施例1和2中所述的化合物（1-1)的固体分散体的体外和体内测试结果，选择50%化合 物（1-1)在HPMCAS-M中的固体分散体用于胶囊的研发。W3号尺寸的硬明胶胶囊，190mg的填 充量为目标来开始胶囊的研发，因为运样的构造可W通过填充更大尺寸的胶囊而潜在地增 加胶囊的强度，同时保持药物组合物。根据经验，设计了 4种胶囊制剂，其中具有不同量的崩 解剂并且具有或不具有润湿剂。由于所有4种制剂都显示出相似的崩解测试和溶解测试结 果，所W选择最简单的制剂(不具有润湿剂，并具有最少量的崩解剂)用于制造。进行制造工 艺的研发和规模扩大的研究，W确定固体分散体的喷雾干燥工艺和干燥后的时间；共混的 参数;为获得约0.60g/cc的目标堆密度的共混物的漉压和研磨；W及胶囊填充的条件。
[0202] 将结晶化合物（1-1)和聚合物醋酸径丙基甲基纤维素班巧酸醋化PMCAS-M)溶解于 丙酬中，并喷雾干燥，从而生产包含50 %化合物(1-1)载量的固体分散体中间体(SDI)颗粒。 PXRD分析显示SDI是无定形的，mDSC分析显示SDI是均匀的（即在环境条件下具有单一的 Tg)。在V型揽拌机的多个段中将50%化合物（1-1)在HPMCAS-M中的固体分散体(lOOOg)和赋 形剂(包括微晶纤维素填料-粘结剂(4428g)、交联簇甲基纤维素钢崩解剂(636g)、胶体二氧 化娃分散剂/润滑剂（156g)、硬脂酸儀分散剂/润滑剂（156g)和乳糖一水合物填料巧364g)) 共混。然后将混合物压制并制粒，从而得到约〇.6g/mL的堆密度。使用自动化的填充机将混 合物分配至3号尺寸的硬明胶胶囊（目标填充量：190mg)中，并使用胶囊抛光机将制得的胶 囊抛光。
[0203] 在口服给药lOmg胶囊(包含50 %化合物（1-1)在HPMCAS中的固体分散体)后进行药 物动力学的评估，并将结果与对健康志愿者口服给药4x lOmg胶囊(其包含化合物（1-1)的 化化agit固体分散体)后进行的药物动力学评估加 W对比。
[0204] 在下表2A和2B中提供了运两种药物组合物的比较。之前的EiKlragit制剂在2009年 1月8日公开的美国专利申请2009/0012064 A1中的实施例5中有所描述。该申请记载:通过 在水和乙醇的混合物中溶解和/或分散式(A)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮杂卓和包裹用赋形 剂（包含氨溶甲基丙締酸醋共聚物B型化udragit RS)、甲基丙締酸共聚物C型化udragit L100-55)、滑石和娃酸侣儀)来制备EiKlragit固体分散体制剂。然后，使用离心流化床制粒 机将上述的非均匀混合物施加在微晶纤维素球(Nonpareil 101，Freund)上，从而生产分配 至2号尺寸的径丙基甲基纤维素胶囊中的颗粒。
[0205] 在运两个临床研究中，使用经验证的LC-MS/MS方法来测定化合物（1-1)的血液水 平，并根据在胶囊给药后24小时内各时间点测量的化合物（1-1)的血浆浓度来进行药物动 力学分析。下表3中总结的结果显示，根据AUC(924*4/1140,由于给药剂量的差异而改变）， HPMCAS-M固体分散体制剂在人中的生物利用度比EiKlragit固体分散体制剂高3倍W上。此 夕h根据观察到的Tmax，HPMCAS制剂的吸收速度快于Eudragit制剂（Tmax为1小时VS 4-6小 时）"HPMCAS-M固体分散体制剂的在系统暴露方面的明显改善是意料之外的。
[020y 表2A:用于临床应用的化合物(1-1)的固体分散体胶囊
[0207]包含化合物（1 -1)的50 % HPMCAS固体分散体的药物组合物：1 Omg强度，3号尺寸的 硬明胶胶囊
[020引
[0209] 表2B:包含化合物（1-1)的Eudragit LlOO-55固体分散体的药物组合物：lOmg强 度，2号尺寸的硬明胶胶囊
[0210]
[0^1] *为无水形式
[0212] 表3:在将化合物(1-1)的固体分散体经口施用给人后的药物动力学参数
[0213]
[0214] AUCo-24h: 24小时内0TX015血浆浓度对时间曲线下的面积
[0215] Cmax:最大血浆浓度
[0216] 虹:小时
[0217] HPMCAS:醋酸径丙基甲基纤维素班巧酸醋 [021引 ni:毫升
[0219] ng:纳克
[0。0] P0:经口，口服
[0221 ] Tmax ： 达到Cmax的时间
[0222] 实施例4:在大鼠中的口服暴露
[0223] 在大鼠中测定化合物（1-1)的固体分散体的3种制剂的口服生物利用度。所选的3 种分散体为25 %化合物（1 -1)在PVP中的分散体、25 %化合物（1 -1)在HPMCAS-MG中的分散体 和50 %化合物（1 -1)在HPMCAS-MG中的分散体。在该研究中使用的动物为得自±尔库大学 (芬兰）的中央动物实验室（Central Animal Laboratory)的无特定病体（SPF)的Hsd: Sprague Dawl巧大鼠。大鼠最初购自位于荷兰的化rlan。大鼠为雌性，并且为10周龄，12只 大鼠用于该研究中。在聚碳酸醋Makrolon II笼中饲养动物(每个笼中3只），动物室溫为21 +/-3°C，动物室内的相对湿度为55+/-15%，并且动物室内照明为人工照明，而且为12小时 明暗周期的循环(暗周期为18:00至06:00之间）。白杨木屑（了曰口￥61〇7,631:〇]11曰)用于垫料， 并且每周至少更换1次垫料。在对动物定量给药之前提供食物和水，但是在定量给药后最初 的2个小时中移除食物和水。
[0224] 将预先计算的量的注射用无菌水加入至装有采用合适的量的分散体的容器中，获 得化合物（1-1)的浓度为0.75mg/mL，由此制备包含25 %化合物（1-1)在PVP中的分散体的口 服定量给药溶液、包含25 %化合物（1-1)在HPMCAS-MG中的分散体的口服定量给药溶液和包 含50 %化合物（1-1)在HPMCAS-MG中的分散体的口服定量给药溶液。在每次给药之前，将口 服定量给药溶液进行满旋混合20秒。用于静脉给药的定量给药溶液包含0.25mg/mL的化合 物（1-1)，该定量给药溶液是通过将5mg的化合物（1-1)溶解于运样的混合物中来制备的，所 述混合物包含4mL的平均分子量为400Da的聚乙二醇（PEG400)、4mL的乙醇（96%纯度）和 12mL的注射用无菌水。在加入水后的30分钟之内使用含有25%化合物(1-1化PVP中的分散 体的定量给药溶液。在加入水后的60分钟之内使用含有25 %化合物（1-1)在HPMCAS-MG中的 分散体的定量给药溶液和含有50%化合物（1-1)在HPMCAS-MG中的分散体的定量给药溶液。 使用4mL/kg定量给药量，从而使化合物（1-1)的静脉给药的给药水平为Img/kg，口服给药的 给药水平为3mg/kg。定量给药方案在表4中给出。
[0225] 表4.用于大鼠口服暴露研究的定量给药方案
[0226]

[0227] 在定量给药后的0.25小时、0.5小时、1小时、2小时、4小时、8小时、12小时和24小时 的时间点，将约50化的血液样品收集至包含化L乙二胺四乙酸化DTA)溶液的Eppendorf管 中，并且每个样品都是在距所述时间点5分钟时间窗内收集的。由各样品获得SOiiL血浆并储 存在干冰溫度下W用于分析。使用经验证的液相色谱串联质谱化C-MS/MS)法对各样品中化 合物(1-1)的浓度进行分析，其定量下限为0.5ng/mL。
[02巧]使用化oenix WinNonlin软件包（6.2.1 版，Pharsi曲t Co;rp公司，CA,USA)，采用标 准的非房室模型方法来计算药物动力学参数。通过对对数浓度-时间曲线的终末线性部分 进行最小二乘回归分析来计算消除半衰期（tl/2)。通过使用线性梯形法则直至最终可测的 浓度，此后将终末消除相外推至无穷大来测定血浆浓度-时间曲线的曲线下面积(AUC)。通 过将药物浓度曲线外推至无穷大来计算平均保留时间(MRT)，其代表了化合物在房室或系 统中保留的平均时间量。由血浆浓度数据直接得到最大血浆浓度(Cmax)和达到Cmax的时间 (tmax )。通过用口服给药后的剂量归一化的AU邱余W静脉给药后的剂量归一化的AUC来计算 试验性口服生物利用度(F)，目阳=(AUC(口服)/剂量（口服））/(AUC(静脉)/剂量(静脉））]， 并W百分数（％ )形式报告。
[0229] 药物动力学参数在表5中给出，血浆浓度对时间的图示于图7和8中。
[0230] 表5. 口服和静脉给药后的化合物（1-1)的药物动力学参数。值为得自3只动物的平 均值。
[0231]
[0232] 实施例5.喷雾干燥分散体的制备
[0233] 使用5种所选的聚合物来制备化合物（1-1)的喷雾干燥的分散体，运5种聚合物为： HPMCAS-MG(Shin Etsu Chemical公司）、HPMCP-HP55(Shin Etsu Chemical公司）、PVP(ISP， Ashland 公司的部口）、PVP-VA(BASF公司）和 化 agit LlOO-55 化 vonik Industries AG)。 使用每种聚合物W 25 %和50 %制备所有的喷雾干燥溶液。除了 PVP溶液W外，所有的溶液都 是在丙酬中制备的，PVP溶液是在乙醇中制备的。对于各溶液而旨，在lOg溶剂中制备1. Og固 体(聚合物和化合物（1-1))。使用具有1.5mm喷嘴的BiicM B-290，PE-024喷雾干燥器和Β? chi Β-295，Ρ-002冷凝器将溶液喷雾干燥。将喷雾干燥器的喷嘴压力设定为80psi，目标出口 溫度设定为40°C，冷却器的溫度设定至-20°C，累速设定为100%，并且抽吸器设定为100%。 在喷雾干燥后，收集固体分散体，并在低溫对流烘箱中过夜干燥，从而除去残余的溶剂。
[0234] 实施例6:湿度和溫度的稳定性
[0235] 'VO 船'
[0236] 通过在高溫下暴露于水分来评估化合物（1-1)在HPMCAS-MG中的喷雾干燥分散体 的稳定性。通过在75%相对湿度和40°C下放置1、2和3个月，来测定作为相对湿度的函数的 玻璃化转变溫度(Tg)。在HDPE瓶中将喷雾干燥的分散体储存在LDPE袋内，从而模拟散装物 品包装。结果总结于表6中。在时间0时，Tg为134°C，在1个月时Tg为134°C，在2个月时Tg为 135°C，在3个月时Tg为134°C，并且在各测量中仅观测到单一的拐点。对每种样品还获得了 X 射线衍射图谱。图9示出了在稳定性测试的时间0时，化合物（1-1化HPMCAS-MG中的固体分 散体的X射线粉末衍射图谱。图1〇、11和12示出了在暴露于40°C和75%相对湿度分另ijl个月、 2个月和3个月后，化合物(1-1化HPMCAS-MG中的固体分散体的X射线粉末衍射图谱。
[0237] 图案未显示与化合物(1-1)有关的任何衍射线。
[0238] 实施例7:细胞系和原发性细胞的选择
[0239] A1X的不同代表性细胞系包括：Jurkat细胞（T-A1X)、RS 4-ll(MlX-AF4B-前体 ALL)、T0-M-1、BV173(均为化+A化）；W及ML的不同代表性细胞系包括:Κ562(处于急性转换 期的Ph+CML)、化-60 (NRAS驱动的AML2)、ΝΟΜΟ 1 (Μ化-AF9驱动的AML)、KG1 (BMP-FGRF+AML6) 及其更不成熟的亚型KGla;在添加有10%或20%热灭活胎牛血清(分别）、2mM k谷氨酷胺、 lOOIU/mL青霉素和lOOg/mL链霉素的RPMI 1640(Gibco Invitrogen公司，瑞±己塞尔市）中 培养上述细胞。
[0240] 利用Ficoll-Paque化US密度梯度仪(Amersham Biosciences，美国森尼维耳市） 从骨髓(BM)中分离单核细胞(MNC)。将患者细胞保持在不含生长因子的添加有10%热灭活 胎牛血清、2mM k谷氨酷胺、lOOIU/mL青霉素和lOOg/mL链霉素的IMDM(Gibco)中。
[0241] 实施例8:MTT检验、调亡评价和细胞周期分析
[0242] MTT检验:W每孔106的密度将细胞首先接种在24孔板中，W避免在较小体积中发 生浓度改变，用不同剂量的由ImM DMS0储存液新鲜制备的0TX015处理。将细胞转移到96孔 板中用于MTT检验。未处理的细胞和用相等量的用于稀释0TX015的DMS0(0.2-1%)处理的细 胞作为对照。制备5mg/ml的3- (4，5-二甲基嚷挫-2-基)-2，5-二苯基四挫漠化物(MTT)(分子 探针，Eugene，USA)的PBS储存液。然后在每孔中加入0.5mg/mL的MTT溶液，并在暗中在37°C 下解育4h。然后用25 % SDS裂解缓冲液裂解细胞，并在570nm处读取吸光度。每种细胞系进行 两次独立试验。用Prism v5软件(Gra地化d公司，La Jolla,USA)计算GI50值。
[0243] 调亡评价:将来自患者或细胞系的共计IxlO6个细胞重悬于ImL的培养液中，并与 指定剂量的由ImM DMS0储存液新鲜制备的0TX015解育。对照细胞与相当量的二甲基亚讽 (DMS0 0.2-1 % )解育 W排除赋形剂的毒性。使用FACScan(Becton Dickinson,Mountain View，USA)通过流式细胞分析检测调亡细胞。细胞用舰化丙晚（PI; 5yg/mL ; Becton Dickinson)染色，并根据制造商说明在室溫下与annexin-V-FITC(Becton Dickinson)共同 放置15分钟，从而确定外膜憐脂酷丝氨酸暴露。数据用Flow jo (Tree Star公司，Ashland, USA)流式细胞仪软件分析。
[0244] 细胞周期分析：对于常规的细胞周期分析，收获IxlO6个细胞，用PBS洗涂，并用 70%冰乙醇固定。细胞与10化邑/1111^1?酷36(51邑1]1曰，5曰;[]11：-〇116]11:;[]1化11曰￥161',法国）共解 育，并用PI(2扣g/血，Becton Dickinson)染色，然后在37°C下解育30分钟。随后，通过流式 细胞分析来确定细胞周期分布。数据用Flow jo (Tree Star公司，Ashland, USA)流式细胞仪 软件分析。
[0245] 通过外膜憐脂酷丝氨酸暴露和在不同时间点渗入舰化丙晚进行检测，化合物（1- 1)诱导了用不同剂量的药物处理的Ξ种A1X细胞系(Jurkat、RS 4-11、TOM-1)和四种AML细 胞系化L60、K562、KG1和KGla)的调亡（图13A-13C和图14A-14D)。化合物（1-1)在所有检测的 细胞系中诱导调亡，但是在K562和KGla细胞中程度较轻（图14B、D)。在所有其它细胞系中， 在用lOOnM的化合物（1-1)处理后的12小时至24小时内，50%的细胞开始调亡。
[0246] 此外，化合物（1-1)在所有细胞系中诱导细胞周期停滞（图15A-15C)。调亡数据显 示，K562、KGla和T0M-1在暴露于化合物（1-1)后在细胞周期退化方面敏感性差。注意到，较 低剂量的式2(l〇nM)在时间延长的解育后（即72小时）诱导调亡（如在KG1细胞中所检测的， 如图16所示）。
[0247] 表7:在72小时的MTT检验和GI50值。
[0248] _
[0249] AML和A化细胞系暴露于浓度增加的化合物（1-1) (0.1 ηΜ-10μΜ)。通过在72小时的 ΜΤΤ检验确定增殖细胞的百分比，并用Prism软件由五个重复的平均±50计算GI50值。GI50 值W3个独立实验的平均值来表示。
[0250] 如表7所示，当用不同剂量的化合物（1-1)处理AML细胞系（参见KGla和ΝΟΜΟΙ )W及 A化细胞系(参见RS4-1UBV-173、化rkat和TOM-1)时，通过外膜憐脂酷丝氨酸暴露和在72小 时渗入舰化丙晚进行检测(如图39A-39C所示），化合物（1-1)在运些细胞中W增强的剂量依 赖的方式诱导调亡。在AML细胞系中，2种化G1和ΝΟΜΟ 1)似乎是敏感的，G150值分别为198.3 ηΜ和229.1 ηΜ。巧巾细胞系化L60和KGla)似乎是敏感性较差的，GI值均为1.3μΜ，而Κ562被认 为是具有抗性的，其GI50值为11.3μΜη0ΤΧ015在所有A化细胞系中引起细胞存活率的剂量依 赖性降低，GI50在34.2nM至249.7 nM之间。
[0251] 通常，化合物的最大半抑制浓度（IC-50值)是该化合物抑制生物学或生化功能的 有效性的度量。因此，可W认为IC-50值是显示抑制给定生物学过程一半(50%)时需要多少 特定药物或任意化学物质的定量度量。然而，有时使用GI-50来表征导致50%生长抑制的浓 度值。使用GI-50表明已经校正了时间为0时的细胞计数。作为用于计算GI-50值的一个式子 的例子，将GI-50定义为100x(T-T〇)/(C-T〇) = 50时的测试化合物的浓度，其中例如T为暴露 于测试药物48小时后的测试孔的光密度，To为时间为0时测试孔的光密度。
[0252] 此外，在几乎所有细胞系中化合物（1-1)降低了 S期部分（图40A-40H)。该效果在 A化细胞系RS4-11和BV-173中更为显著，运些细胞系出现G1期累积。
[0253] 实施例9:漠结构域的表达
[0254] 使用实时定量聚合酶链式反应(QT-PCR)分析在不同细胞系和患者样品中研究漠 结构域的表达。在用苯酪和异硫氯酸脈的试剂溶液（TRlzo峨商标试剂，Invitrogen， GrandIsland，NY)提取后获得总RNA，滴定至化gA^L并储存在-80°C。由化gRNA合成互补 DNA(cDNA)。在热循环仪ABI 7900HT中W标准模式用十分之一的cDNA(相当于lOOng的RNA) W 25化的体积进行QT-PCR反应(50°C下2分钟-95 °C下10分钟，1个循环;然后95 °C 15秒-6 °C 1 分钟，50个循环）。
[0巧5] 通过QT-PCR检测不同细胞系W不同水平表达的B畑2、B畑3和B畑4(图17A-17C)。研 究了Ξ种不同类型的BRD4:保守型(BRD4C)、中间型和短型(BRD4S)。在不同的细胞系中，所 述不同形式的表达没有差异。在调亡和BRD表达之间没有明显的相关性。AML细胞系K562具 有最低的表达水平，并且对化合物（1-1)处理的敏感性较低。与乳腺癌细胞系MCF-7相比， BRD的表达水平之间没有差异。在所选的来自厮血的CD34+细胞中观察到非常高水平的BRD。 在患者样品中研究服D2、B畑3和服D4的表达。患者特征总结在表8中。在所有A化患者中，陆+ A化示出了较低的B畑表达水平，而在AML患者中，B畑表达水平差异较大（图17A-17C)。
[0256] 表8: ALL和ML患者特征
[0 巧 7]
[ο巧引研究用化合物（1-1)进行处理W确定其是否诱导服D2、B畑3、Β畑4和c-MYC的下调。 致癌基因 C-MYC是BRD4的下游伴侣W维持白血病（DelmoreJ.E等，〔611.2011;146:904- 917)。诸如JQ1的其他小抑制剂诱导BRD4下调W及随后的C-MYC下调。不同的白血病细胞系 用lOOnM式2处理，在3小时内在蛋白质水平观察到与C-MYC下调相关的B畑2、BRD3和B畑4的 快速下调（图18A和18B)。与T0M-1细胞相比，在3小时内，在KG1和KGla中蛋白质下调不与 cDNA降低相关（图18A和18B)。在化rkat和RS 4-11细胞中，B畑2-4的cDNA起初下调，但是在 3小时之前升高（图19A-19D)。结果示出了式2诱导了服D2、B畑3、B畑4和C-MYC的快速下调。
[0259] 此外，如图41A-41H所示，通过RQ-PCR检测到不同细胞系W不同水平表达BRD2、 BRD3和BRD4,并且bcr-abl驱动细胞系BV-173和K562具有最低的基因表达水平（图41八- 41B)。在包括MTT、调亡或细胞周期停滞W及BRD基因表达在内的生物学效应之间没有明显 相关性。我们研究了分别用250nM和500nM的0TX015处理，在48小时时在cDNA水平上的B畑2、 B畑3和B畑4的调节。我们不能检测到由化合物（1-1)处理导致的B畑4、B畑2或服D3的一致性 下调（图41C-41H)，而在KGUK562和化rkat细胞中检测到B畑3和B畑2显著上调，W及在KG1 和化60细胞中B畑2增加。
[0260] 实施例10:化合物（1-1)诱导CD34+和CD34-细胞调亡的有效性
[0261] 研究了化合物（1-1)在原发性细胞中诱导调亡的有效性。通过CD34+微珠阳性选择 从厮血(健康对照）和一个AML患者中获得CD34+和CD34-细胞。常规免疫表型分型显示30% 的母细胞(blast cell)是CD34+阳性的。CD34+和CD34-厮血细胞的处理证明在500nM剂量水 平时对未成熟CD34+细胞有毒性，而成熟的细胞未受影响（图20)dCD34+和CD34-AML细胞的处 理显示出W剂量依赖的方式在体外诱导调亡。
[0262] 图32A-32C示出了 W不同浓度的化合物（1-1)处理CD34-24小时后的调亡情况。
[0263] 实施例11:短暂暴露于化合物(1-1)后的调亡
[0264] 图21A-21T示出了短暂暴露于化合物（1-1)之后96小时时的调亡。分别用lOnM和 lOOnM 的化合物（1-1)处理 HL60、KS62、化 rkat 和 RS4-11 细胞。在化时（lOnM 和 100nM)W 及 24h (lOnM)时洗涂细胞，丢弃上清，将细胞再次接种在新鲜培养基中。在9加时（24h至72h未示 出），通过FACS分析评价调亡细胞，并定义为Annexin V+具有或不具有PI吸收。图21A-21T示 出了两个实验中的一个代表性试验。
[0265] 实施例12:暴露于不同浓度的化合物（1-1)之后的调亡
[0%6] 图22A-2化示出了当暴露于化M、InM和lOnM的化合物（1-1)后，对AML细胞系化60进 行流式细胞分析的调亡数据。图23A、23B和23C示出了图22A-2化中化60细胞系的调亡。
[0267] 用化合物（1-1)进行处理在化60和K562细胞中显著地诱导调亡（分别为图24A和 24B)。在 KG1 和 KGla 细胞（图 25A 和 25B)、Jurkat 和 RS4-11 细胞（图 26A 和 26B)W 及 T0M1 细胞 (图27)中也观察到显著的调亡。K562对化合物（1-1)的处理敏感性较差，在24h时观察到 20%的调亡细胞。在InM和lOnM浓度延长暴露时间得到不同的应答情况:仅在lOnM暴露96h 后，HL60、KG1和化rkat细胞示出了 >90%的调亡并且TOM-1细胞示出了 70%的调亡；与此相 比，KGla、MlX-融合RS4-11和K562细胞示出了较低的调亡（分别为45%、30%和20%)，而在 对照中观察到15 %至20 %水平的调亡。
[0268] 实施例13:洗去药物后的调亡
[0269] 在敏感性化60和化rkat细胞系中，短暂暴露于药物化后洗去药物也与在96小时的 显著延后的调亡有关(分别为图28和29A、29B)，但在较不敏感的K562和RS4-11细胞系中并 非如此(图30A和30B)。
[0270] 图31A和31B中示出了 Ξ种A化细胞系的MTT检验数据。
[0271] 实施例14:血液和骨髓的调亡
[0272] 图33A-33G和34A-34B示出了不同浓度的化合物（1-1)对血液和骨髓细胞的浓度。
[0273] 实施例15:c-MYC动力学
[0274] 在用化合物（1-1)处理后对AML和A化细胞测量C-MYC动力学，在图35中示出。在用 化合物（1 -1)处理AML和A1X细胞系后还测量BRD4动力学，在图36中示出。图37示出了在用化 合物（1-1)处理AML和A化细胞系后的B畑2动力学。图38示出了在用化合物（1-1)处理AML和 A化细胞系后的BRD3动力学。
[02巧]认为致癌基因 C-MYC受到BRD4的激活，并且对白血病的维持至关重要。其他小BRD 抑制剂（即JQ1)在不同设置下诱导服D4下调W及随后的C-MYC下调。我们在不同白血病细胞 系中确定了 C-MYC的基础基因表达水平，其示出了有差异的结果，并且与化合物（1-1)针对 MTT、调亡或细胞周期影响的生物学效果没有明确的相关性（图42A和42B)。运些细胞系用 250nM和500nM的化合物（1-1)处理，在4她时通过QT-PCR检测，在所有细胞系中观察到C-MYC 下调（图42C和42D)。
[0276] 由于通过RQ-PCR检测到B畑和C-MYC基础基因表达与化合物（1-1)调节之间不存在 明显的相关性，我们接着研究了化合物（1-1)在蛋白质水平上对BRD 4、BRD2和BRD 3W及C- MYC的潜在影响。
[0277] 在所选的AML细胞系化60中，在暴露于500nM的化合物（1-1)7化后，B畑4和B畑3保 持不受影响，而在24h-处理后观察到C-MYC的暂时下调（图43A-43C);而几乎耐受的AML细胞 系K562显示出BRD4、B畑3和C-MYC在2地暴露后开始下调（图43D-43F)。对于敏感性ALL细胞 系，Jurkat示出了在4她和72h时C-MYC下调（图43G-43I)，而在RS4-11中服D4、BRD3和C-MYC 保持未受影响（图43J-43L)。
[027引实施例16:免疫印迹
[0279] 由7xl06个细胞制备蛋白质提取物;在十二烷基硫酸钢(SDS)-聚丙締酷胺凝胶上 利用4-15%梯度凝胶(8;[0-1?曰(1，]/[曰11163-1曰-(：091161:16，法国）分离304邑的蛋白质提取物，并 利用小型Trans-Blot Electro地oretic Transfer cell (Bio-Rad)转移至硝酸纤维素膜 上。所述膜用LiCor封闭缓冲液化iCor，Lincoln，肥，USA)封闭，并用相应的第一抗体解育： 抗BRD4化pitomics 5716-1，8肥11叫日1116，邮4)、抗81?03(日656342,46〔日111，1]1〇、抗8尺02 (ab37633，AbCam，UK)、抗c-MYC(sc-764(N262)、SantaCruz，USA)和抗GAPDH(Invitrogen 3986〇〇,6阿11(1131曰11(1，1]54)。所得条带用羊抗兔111打曰1^加70 68〇畑或羊抗鼠 1址脚1^邮70 800CW第二抗体化iCor)染色。利用LiCor Odyss巧扫描仪对膜进行成像。手动将框置于各目 的条带周围，其通过Odyssey 3.0分析软件化iCor)报告已经减去泳道内背景的原始强度的 近红外巧光值。
[0280] BRD2的条带用羊(BRD2)抗兔过氧化物酶或羊抗鼠（GAPDH)过氧化物酶标记的第二 抗体（Biorad，Hercules，USA)染色，并且利用增强的化学发光检测系统化化andE化 plus，GE Healthcare Buckinghamshire，UK)显示。
[0281] 实施例17:实时定量聚合酶链式反应(RQ-PCR)
[0282] 将用TRIZOL(Invitrogen，Grand 131日11(1，1]54)提取后获得的总1?酷滴定至化旨/化 并储存在-80°C下。由lyg RNA合成互补DNA(cDNA)。在热循环仪ABI 7900HT中W标准模式 (50 °C 2分钟-95 °C 10分钟，1个循环;然后是95 °C 15秒-60 °C 1分钟，50个循环）用十分之一的 cDNA(相当于1 OOng的RNA) W 25化体积进行QT-PCR反应(B畑2、B畑3、B畑4、C-MYC和ABL)。
[0283] 表9:PCR所用的引物
[0284]
[0285] 实施例18:化合物(1-1)对原发性细胞的影响
[0286] 我们进一步研究了化合物（1-1)对原发性患者细胞的影响。我们对来自AML患者的 5个活体外样品和2个A1X患者(包括1个A化化+)进行了处理。患者特征在图44D中示出。化合 物（1-1)在原发性AML患者样品中W不同程度(35-85 % )诱导调亡（图44A-44C)。化+A化患者 似乎具有耐受性。
[0287] 通过RQ-PCR分析评价患者样品中B畑2、B畑3和BRD4的基础基因表达。患者特征总 结在表10中。在A化患者中，化+A化显示出较低的B畑表达水平（图47A和47B;患者3至6)，而 在AML患者中BRD表达水平差异较大（图47C和47D)。
[028引表10:研究B畑表达的不同A化和ML患者的特征
[0289]
[0290] 蛋白质提取物可W得自分别用250nM和500nM的0TX015活体外处理的患者5(表10; 图44)的BM细胞。运些细胞在暴露于0TX015 7化后示出C-MYC的下调(45A-45C)。
[0291] 本领域技术人员应该理解的是，在不脱离本发明的宽泛的发明构思的条件下可W 对上文所示的并描述的示例性实施方案进行修改。因此，应该理解的是本发明不限于所示 的并描述的示例性实施方案，其旨在涵盖在权利要求书所限定的本发明的精神和范围内的 修改。例如，示例性实施方案的特定特征可W为所要求保护的发明的一部分或不是其一部 分，并且所公开的实施方案的特征可W结合。除非本发明作出具体说明，术语"一个"、"一 种"和"所述"不限于一个元素，而是应该理解为"至少一个"。
[0292] 应该理解的是，本发明的至少一些特征和描述被简化为集中于与清楚地理解本发 明有关的元素，同时为了清晰起见，除去了本领域普通技术人员将理解的其他元素(也可W 包含本发明的一部分）。但是由于此类元素是本领域公知的，并且由于它们不一定会更有利 于更好地理解本发明，所w在本发明中未提供此类元素的描述。
[0293]此外，所述的方法并非依赖于本发明列出的步骤的特定顺序，就此而言，步骤的特 定顺序不应该解释为对权利要求的限定。设及本发明的方法的权利要求不应该限于书写顺 序的步骤的性能，并且本领域的技术人员可W容易理解运些步骤可W改变，并且仍然保持 在本发明的精神和范围内。
【主权项】
1. 一种治疗急性淋巴细胞性白血病的方法，包括向患者施用药学可接受的量的组合 物，该组合物包含噻吩并三唑并二氮杂卓化合物、或其可药用的盐、或其水合物或溶剂化 物，所述噻吩并三唑并二氮杂卓化合物由下式(1)表示：其中R1为具有1至4个碳的烷基;办为氢原子、卤素原子、或任选地被卤素原子或羟基取 代的具有1至4个碳的烷基;R3为卤素原子;任选地被卤素原子、具有1至4个碳的烷基、具有1 至4个碳的烷氧基、或氰基取代的苯基;一NR 5--(CH2)m-R6,其中抱为氢原子、或具有1至4个 碳的烷基，m为O至4的整数，并且R 6为任选地被卤素原子取代的苯基或吡啶基；或--NR7-CO--(CH2)n--R 8,其中R7为氢原子或具有1至4个碳的烷基，η为O至2的整数，并且R8为任选地 被卤素原子取代的苯基或吡啶基;并且R 4为--(CH2)a-CO--NH-R9,其中a为1至4的整数，并 且R 9为具有1至4个碳的烷基;具有1至4个碳的羟烷基;具有1至4个碳的烷氧基;或任选地被 具有1至4个碳的烷基、具有1至4个碳的烷氧基、氨基或羟基取代的苯基或吡啶基；或--(CH 2)b-C00R1Q，其中b为1至4的整数，并且Riq为具有1至4个碳的烷基;其中所述噻吩并三唑 并二氮杂卓化合物形成含有无定形噻吩并三唑并二氮杂卓化合物和可药用的聚合物的固 体分散体，其中所述固体分散体展现出基本上不存在与结晶的式（1)所示的噻吩并三唑并 二氮杂卓化合物有关的衍射线的X射线粉末衍射图案。2. 根据权利要求1所述的方法，其中所述由式（1)表示的噻吩并三唑并二氮杂卓化合物 独立地选自由以下化合物构成的组： (i)(S)-2-[4-(4-氯代苯基)-2,3,9_ 三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][l，2,4]三唑并-[4,3_ &][1，4]二氮杂卓-6-基]4-(4-羟苯基）乙酰胺或其二水合物；（11)(5)-{4-(3'-氰基联苯-4-基)-2,3,9_三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][l，2,4]三唑并[4,3-a][l，4]二氮杂卓_6_基}乙 酸甲酯；（iii)(S)-{2,3,9-三甲基-4-(4-苯基氨基苯基)-6H-噻吩并[3,2-f][l，2,4]三唑 并[4,3-a][l，4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲酯；以及（iv)(S)-{2,3,9-三甲基-4-[4-(3-苯基丙 酰基氨基)苯基]-6H-噻吩并[3,2-f-][l，2,4]三唑并[4,3-a][l，4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲 酯。3. 根据权利要求2所述的方法，其中所述噻吩并三唑并二氮杂卓化合物为（S)-2-(4-(4-氯代苯基)-2,3,9_三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][l，2,4]三唑并[4,3-a][l，4]二氮杂卓-6-基)-N-(4-羟苯基）乙酰胺二水合物。4. 根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述可药用的聚合物为醋酸羟丙基甲 基纤维素琥珀酸酯，其中噻吩并三唑并二氮杂卓化合物与醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯 (HPMCAS)的重量比为1:3至1:1。5. 根据权利要求4所述的方法，其中所述固体分散体表现出约130Γ至约140Γ的单一 的玻璃化转变温度(Tg)拐点。6. -种治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向患者施用药学可接受的量的组合物，该 组合物包含噻吩并三唑并二氮杂卓化合物、或其可药用的盐、或其水合物或溶剂化物，所述 噻吩并三唑并二氮杂卓化合物由下式(1)表示：其中R1为具有1至4个碳的烷基;办为氢原子、卤素原子、或任选地被卤素原子或羟基取 代的具有1至4个碳的烷基;R3为卤素原子;任选地被卤素原子、具有1至4个碳的烷基、具有1 至4个碳的烷氧基、或氰基取代的苯基;一NR 5--(CH2)m-R6,其中抱为氢原子、或具有1至4个 碳的烷基，m为O至4的整数，并且R 6为任选地被卤素原子取代的苯基或吡啶基；或--NR7-CO--(CH2)n--R 8,其中R7为氢原子或具有1至4个碳的烷基，η为O至2的整数，并且R8为任选地 被卤素原子取代的苯基或吡啶基;并且R 4为--(CH2)a-CO--NH-R9,其中a为1至4的整数，并 且R 9为具有1至4个碳的烷基;具有1至4个碳的羟烷基;具有1至4个碳的烷氧基;或任选地被 具有1至4个碳的烷基、具有1至4个碳的烷氧基、氨基或羟基取代的苯基或吡啶基；或--(CH 2)b-C00R1Q，其中b为1至4的整数，并且Riq为具有1至4个碳的烷基;其中所述噻吩并三唑 并二氮杂卓化合物形成含有无定形噻吩并三唑并二氮杂卓化合物和可药用的聚合物的固 体分散体，其中所述固体分散体展现出基本上不存在与结晶的式（1)所示的噻吩并三唑并 二氮杂卓化合物有关的衍射线的X射线粉末衍射图案。7. 根据权利要求6所述的方法，其中所述由式（1)表示的噻吩并三唑并二氮杂卓化合物 独立地选自由以下化合物构成的组： (i)(S)-2-[4-(4-氯代苯基)-2,3,9_ 三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][l，2,4]三唑并-[4,3_ &][1，4]二氮杂卓-6-基]4-(4-羟苯基）乙酰胺或其二水合物；（11)(5)-{4-(3'-氰基联苯-4-基)-2,3,9_三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][l，2,4]三唑并[4,3-a][l，4]二氮杂卓_6_基}乙 酸甲酯；（iii)(S)-{2,3,9-三甲基-4-(4-苯基氨基苯基)-6H-噻吩并[3,2-f][l，2,4]三唑 并[4,3-a][l，4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲酯；以及（iv)(S)-{2,3,9-三甲基-4-[4-(3-苯基丙 酰基氨基)苯基]-6H-噻吩并[3,2-f-][l，2,4]三唑并[4,3-a][l，4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲 酯。8. 根据权利要求6所述的方法，其中所述噻吩并三唑并二氮杂卓化合物为（S)-2-(4- (4-氯代苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][l，2,4]三唑并[4,3-a][l，4]二氮杂卓-6-基)-N-(4-羟苯基）乙酰胺二水合物。9. 根据权利要求6至8中任一项所述的方法，其中所述可药用的聚合物为醋酸羟丙基甲 基纤维素琥珀酸酯，其中噻吩并三唑并二氮杂卓化合物与醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯 (HPMCAS)的重量比为1:3至1:1。10. 根据权利要求9所述的方法，其中所述固体分散体表现出约130°C至约140°C的单一 的玻璃化转变温度(Tg)拐点。11. 一种治疗BCR-ABL阳性急性淋巴细胞性白血病的方法，包括向患者施用药学可接受 的量的组合物，该组合物包含噻吩并三唑并二氮杂卓化合物、或其可药用的盐、或其水合物 或溶剂化物，所述噻吩并三唑并二氮杂卓化合物由下式(1)表示：其中R1为具有1至4个碳的烷基;办为氢原子、卤素原子、或任选地被卤素原子或羟基取 代的具有1至4个碳的烷基;R3为卤素原子;任选地被卤素原子、具有1至4个碳的烷基、具有1 至4个碳的烷氧基、或氰基取代的苯基;一NR 5--(CH2)m-R6,其中抱为氢原子、或具有1至4个 碳的烷基，m为0至4的整数，并且R 6为任选地被卤素原子取代的苯基或吡啶基；或--NR7-CO--(CH2)n--R 8,其中R7为氢原子或具有1至4个碳的烷基，η为0至2的整数，并且R8为任选地 被卤素原子取代的苯基或吡啶基;并且R 4为--(CH2)a-CO--NH-R9,其中a为1至4的整数，并 且R 9为具有1至4个碳的烷基;具有1至4个碳的羟烷基;具有1至4个碳的烷氧基;或任选地被 具有1至4个碳的烷基、具有1至4个碳的烷氧基、氨基或羟基取代的苯基或吡啶基；或一 (CH 2) b-C00R1Q，其中b为1至4的整数，并且Riq为具有1至4个碳的烷基。12. 根据权利要求11所述的方法，其中所述由式（1)表示的噻吩并三唑并二氮杂卓化合 物独立地选自由以下化合物构成的组： (i)(S)-2-[4-(4-氯代苯基)-2,3,9_ 三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][l，2,4]三唑并-[4,3_ &][1，4]二氮杂卓-6-基]4-(4-羟苯基）乙酰胺或其二水合物；（11)(5)-{4-(3'-氰基联苯-4-基)-2,3,9_三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][l，2,4]三唑并[4,3-a][l，4]二氮杂卓_6_基}乙 酸甲酯；（iii)(S)-{2,3,9-三甲基-4-(4-苯基氨基苯基)-6H-噻吩并[3,2-f][l，2,4]三唑 并[4,3-a][l，4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲酯；以及（iv)(S)-{2,3,9-三甲基-4-[4-(3-苯基丙 酰基氨基)苯基]-6H-噻吩并[3,2-f-][l，2,4]三唑并[4,3-a][l，4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲 酯。13. 根据权利要求12所述的方法，其中所述噻吩并三唑并二氮杂卓化合物为(S)-2-(4- (4-氯代苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][l，2,4]三唑并[4,3-a][l，4]二氮杂卓-6-基)-N-(4-羟苯基）乙酰胺二水合物。14. 根据权利要求11至13中任一项所述的方法，其中所述噻吩并三唑并二氮杂卓化合 物形成固体分散体，其中所述固体分散体包含无定形的式（1)所示的噻吩并三唑并二氮杂 卓化合物、和其可药用的盐、或其水合物；以及可药用的聚合物。15. 根据权利要求14所述的方法，其中所述固体分散体展现出基本上不存在与结晶的 式(1)所示的噻吩并三唑并二氮杂卓化合物有关的衍射线的X射线粉末衍射图案。16. 根据权利要求15所述的方法，其中所述可药用的聚合物为醋酸羟丙基甲基纤维素 琥珀酸酯，其中噻吩并三唑并二氮杂卓化合物与醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯(HPMCAS) 的重量比为1:3至1:1。17. 根据权利要求16所述的方法，其中所述固体分散体表现出约130°C至约140°C的单 一的玻璃化转变温度(Tg)拐点。18. -种治疗CD34阳性急性骨髓性白血病的方法，包括向患者施用药学可接受的量的 组合物，该组合物包含噻吩并三唑并二氮杂卓化合物、或其可药用的盐、或其水合物或溶剂 化物，所述噻吩并三唑并二氮杂卓化合物由下式(1)表示：其中R1为具有1至4个碳的烷基;办为氢原子、卤素原子、或任选地被卤素原子或羟基取 代的具有1至4个碳的烷基;R3为卤素原子;任选地被卤素原子、具有1至4个碳的烷基、具有1 至4个碳的烷氧基、或氰基取代的苯基;一NR 5--(CH2)m-R6,其中抱为氢原子、或具有1至4个 碳的烷基，m为O至4的整数，并且R 6为任选地被卤素原子取代的苯基或吡啶基；或--NR7-CO--(CH2)n--R 8,其中R7为氢原子或具有1至4个碳的烷基，η为O至2的整数，并且R8为任选地 被卤素原子取代的苯基或吡啶基;并且R 4为--(CH2)a-CO--NH-R9,其中a为1至4的整数，并 且R 9为具有1至4个碳的烷基;具有1至4个碳的羟烷基;具有1至4个碳的烷氧基;或任选地被 具有1至4个碳的烷基、具有1至4个碳的烷氧基、氨基或羟基取代的苯基或吡啶基；或一 (CH 2) b-C00R1Q，其中b为1至4的整数，并且Riq为具有1至4个碳的烷基。19. 根据权利要求18所述的方法，其中所述由式（1)表示的噻吩并三唑并二氮杂卓化合 物独立地选自由以下化合物构成的组： (i)(S)-2-[4-(4-氯代苯基)-2,3,9_ 三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][l，2,4]三唑并-[4,3_ &][1，4]二氮杂卓-6-基]4-(4-羟苯基）乙酰胺或其二水合物；（11)(5)-{4-(3'-氰基联苯-4-基)-2,3,9_三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][l，2,4]三唑并[4,3-a][l，4]二氮杂卓_6_基}乙 酸甲酯；（iii)(S)-{2,3,9-三甲基-4-(4-苯基氨基苯基)-6H-噻吩并[3,2-f][l，2,4]三唑 并[4,3-a][l，4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲酯；以及（iv)(S)-{2,3,9-三甲基-4-[4-(3-苯基丙 酰基氨基)苯基]-6H-噻吩并[3,2-f-][l，2,4]三唑并[4,3-a][l，4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲 酯。20. 根据权利要求18所述的方法，其中所述噻吩并三唑并二氮杂卓化合物为(S)-2-(4-(4-氯代苯基)-2,3,9_三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][l，2,4]三唑并[4,3-a][l，4]二氮杂卓-6-基)-N-(4-羟苯基）乙酰胺二水合物。21. 根据权利要求18至20中任一项所述的方法，其中所述噻吩并三唑并二氮杂卓化合 物形成固体分散体，其中所述固体分散体包含无定形的式（1)所示的噻吩并三唑并二氮杂 卓化合物、和其可药用的盐、或其水合物；以及可药用的聚合物。22. 根据权利要求21所述的方法，其中所述固体分散体展现出基本上不存在与结晶的 式(1)所示的噻吩并三唑并二氮杂卓化合物有关的衍射线的X射线粉末衍射图案。23. 根据权利要求22所述的方法，其中所述可药用的聚合物为醋酸羟丙基甲基纤维素 琥珀酸酯，其中噻吩并三唑并二氮杂卓化合物与醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯(HPMCAS) 的重量比为1:3至1:1。24. 根据权利要求23所述的方法，其中所述固体分散体表现出约130°C至约140°C的单 一的玻璃化转变温度(Tg)拐点。
【文档编号】A61P35/02GK106029077SQ201480052842
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2014年8月1日
【发明人】埃尔韦·东布雷
【申请人】翁科埃斯克斯有限公司