097] 与空白组比较，大鼠主动回避时间缩短，电击次数也明显增加；与模型组相比，各 阳性对照组和中药组合物组，大鼠主动回避时间缩短明显延长，电击次数也显著减少，统计 上具有显著差异。中药组合物药效具有剂量依赖，且高剂量组效果优于石杉碱甲组，中、高 剂量组效果优于右归丸组、左归丸组和金纳多组。
[0098] 4 结论
[0099] 本发明中药可以明显改善东莨菪碱致记忆获得障碍模型记忆力，并且本发明中药 组合物效果与石杉碱甲效果相当，中、高剂量组明显优于右归丸、左归丸组以及金纳多组。
[0100] 效果例2 :中药组合物的急性毒性试验
[0101] 1试验目的：观察中药组合物对机体是否有急性毒性作用
[0102] 2实验材料
[0103] 2. 1药品与试剂
[0104] 中药组合物提取物
[0105] 2. 2仪器与设备
[0106] 金属灌胃针，注射器
[0107] 2. 3 动物
[0108] 昆明种小鼠，SPF级，体重18_22g，雌雄各半
[0109] 3实验方法
[0110] 动物购买后观察5天，给药前禁食（不限制饮水）16h，以中药组合物提取物的最大 浓度（4. 77g/ml)和最大给药体积（4.0ml/100g*Bw)灌胃给药，空白对照组给予相应体积 的生理盐水，连续观察14天，对死亡的小鼠和观察期满的小鼠进行解剖，观察各组织脏器 的变化。4结果分析与判定
[0111] 连续观察14天，如果动物不出现死亡，则认为中药组合物提取物对昆明种小鼠经 口急性毒性剂量大于受试剂量。
[0112] 5实验结果
[0113] 连续观察14天，结果无一只动物出现死亡，给药组小鼠采食、饮水、精神状态和活 动状况与空白对照组相比，无明显变化。
[0114] 对观察14天后小鼠，剖检发现，各组织脏器，如心、肝、脾、胃和肾等与空白组小鼠 的脏器物明显差异。
[0115] 6实验结论：
[0116] 中药组合物提取物昆明种小鼠灌胃给药的最大耐受剂量大于190g/kg ? Bw(折合 为生药量），相当于人用量的106倍，可判断中药组合物属无毒级。
[0117] 效果例3 :中药组合物的遗传毒性试验
[0118] 1试验目的：观察中药组合物对机体是否有遗传毒性作用
[0119] 2实验材料
[0120] 2.1药品与试剂
[0121] 中药组合物提取物
[0122] 1 %-2 %伊红染色液
[0123] 2. 2仪器与设备
[0124] 金属灌胃针，注射器
[0125] 生物显微镜
[0126] 2. 3 动物
[0127] 雄性昆明种小鼠，SPF级，体重18_22g
[0128] 3实验方法
[0129] 50只雄性昆明种小鼠，随机分为5组，中药组合物组设3个剂量组，以最大耐受量 为高剂量组，最大耐受量的1/2为中剂量组，最大耐受量的1/4为低剂量组，另设1个阳性 对照组和一个阴性（溶剂）对照组，每组10只。阳性对照组选用环磷酰胺，灌胃给药剂量 为40mg/kg ? BW。小鼠灌胃体积为0. 2ml/10g ? BW，每天1次，连续5天，每次间隔24h。在 首次灌胃给药后第35天以颈椎脱白法处死小鼠，摘取两侧附睾，放入有适量生理盐水（约 lmL)的小烧杯中或放入盛有2mL生理盐水的平皿中。用眼科剪将附睾纵向剪1-2刀，静止 3-5min，轻轻摇动。用四层擦镜纸或合成纤维血网袋过滤，吸滤液涂片。空气干燥后，用甲 醇固定5min以上干燥，用1% -2%伊红染色液lh，用水轻冲，干燥。
[0130] 4结果分析与判定
[0131] 精子畸形，主要表现在头部，其次为尾部。畸形的类型可分为无钩、香蕉形、胖头、 无定形、尾折叠、双头、双尾等。
[0132] 每个剂量组应分别于相应的阴性对照组进行比较，如用Wilcoson秩和检验法评 价精子畸形阳性标准是，畸形率至少为阴性对照组的倍量或经统计有显著意义，并有剂量 反应关系。
[0133] 一般阴性对照组精子异常率为0. 8% -3. 4%。
[0134] 5实验结果
[0135] 表1中药组合物提取物小鼠精子畸形试验结果
[0136]
[0137] 注：表中表示与阴性对照组比较具有显著差异（P < 0. 05) 表示与阴性 对照组比较具有显著差异（P < 0. 01)。
[0138] 6实验结论：
[0139] 中药组合物提取物在95. 24-381g/kg*BW剂量范围内小鼠精子畸形率与阴性对照 组比较无显著差异性，可判定中药组合物物遗传毒性。
[0140] 效果例4 :中药组合物的慢性毒性试验
[0141] 1试验目的：观察中药组合物对机体是否有慢性毒性作用
[0142] 2实验材料
[0143] 2. 1药品与试剂
[0144] 中药组合物提取物
[0145] 2. 2仪器与设备
[0146] 金属灌胃针，注射器
[0147] 2. 3 动物
[0148] SD大鼠，6-8周龄，SPF级，雌雄各半
[0149] 3实验方法
[0150] 3. 1动物分组及给药
[0151] 88只大鼠，经检疫观察后健康的试验动物随机分为4组，每组22只，雌雄各半。中 药组合物组设3个剂量组，以最大耐受量的1/4为高剂量组，最大耐受量的1/8为中剂量 组，最大耐受量的1/16为低剂量组，另设一个阴性（溶剂）对照组，每组10只。
[0152] 给药途径为经口，每天灌胃给药1次，连续90天。
[0153] 3. 2临床观察与检查
[0154] 3. 2.1临床观察
[0155] 试验期间每天观察1次所有试验组和对照组动物的外观体征、行为活动及粪便形 状等，记录动物出现异常变化的时间和状况等，如发现动物有死亡或濒临死亡的及时作大 体解剖观察，并留取器官组织样本备作病理组织学检查。每天观察和记录动物的进食量，每 周末称量动物体重1次。
[0156] 3. 2. 2临床检查
[0157] 1)血液学指标检查：试验结束时每组采取12只大鼠（雌雄各半）血样，用Sysmex pocH-100i型多项目自动血球计数仪进行检测。检查指标有红细胞计数（RBC)、白细胞 (WBC)计数及分类、血红蛋白（HGB)、血小板计数（PET)、红细胞比积（HCT)等。
[0158] 2)血液生化（肝脏功能）检查：试验结束时每组分别采集和分离12只大鼠（雌雄 各半）血清，用Rx-daytona全自动生化分析仪进行检测。检测天冬氨酸氨基转移酶（AST)、 丙氨酸氨基转移酶（ALT)、碱性磷酸酶（ALP)、尿素氮（BUN)、总蛋白（TP)、白蛋白（ALB)、血 糖（GLU)、总胆红素（T ? BIL)、总胆固醇（cHo)、胆碱酯酶（ChE)等指标。
[0159] 3)尿液（肾功能）检查：试验结束前2d每组取12只大鼠（雌雄各半）分别放人 代谢笼内饲养，收集24h尿液，用Clinitek Status全自动尿液分析仪进行检测。检测指标 有外观、酸碱度（pH)、隐血（BLD)、蛋白（PRo)、尿糖（U.GLU)及沉淀物镜检等。
[0160] 4)脏器重量测定：试验结束时处死所有试验组和对照组的动物，分别称量每只动 物的体重以及心、肝、脾、肺、肾、脑、胃、子宫，睾丸等主要组织脏器。
[0161] 5)病理学检查：对试验期间死亡及试验结束时处死的所有动物，均进行解剖观察 并留取器官组织样本备作病理学检查。
[0162] 4结果分析与判定
[0163] 用SPSS(11. 0)软件进行数据转化和统计分析。分析时，先对数据进行方差齐性检 验，如发差齐，采用单因素方差分析进行总体比较，发现异常再用Dunnett法进行多剂量组 与一个对照组均数间的两两比较。若方差不齐，则对原始数据进行适当的数量转换，满足方 差齐性检验后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到方差齐的目的，改用秩和 检验进行统计，发现总体比较有差异，则采用不要求方差齐性的Tamhanes T2检验进行两两 比较。
[0164] 5实验结果
[0165] 5. 1中药组合物对血液学指标的影响
[0166] 对RBC、WBC、L、M、N、HGB、PLT、HCT等血液学指标的观测结果见表1，雌雄大鼠各剂 量组的各项指标与对照组比较均无显著差异（P > 0. 05)。表明中药组合物剂量达62. 5g/ kg ? BW时对所测各项血液学指标均未产生明显影响。
[0167] 表1中药组合物对大鼠血液学指标的影响
[0168]
[0169] 注：表中表示与阴性对照组比较具有显著差异（P < 0. 05)林"表示与阴性 对照组比较具有显著差异（P < 0. 01)。
[0170] 5. 2对肝脏功能的影响
[0171] 以血清AST、ALT、ALP、TP、ALB、GLU、T-BIL、CHO、ChE等项目为观察指标，检测结果 见表2,雄性大鼠T-BIL和CH0、雌性大鼠AST和ChE与空白对照组相比有差异，但是差异没 有统计学意义，也不具剂量依赖特性。实验结果表明，中药组合物长期喂养对大鼠肝脏不会 产生重要影响。
[0172] 表2中药组合物