量（0. 2g/ kg)的贵州产（切面红色）土茯苓总黄酮对AA大鼠原发性期的急性足肿胀抑制效果略优 于另两个剂量。各供试药组能够显著降低血液中的N0含量，其中以中剂量（0.2g/kg)的贵 州产（切面红色）土茯苓总黄酮和贵州产（切面红色）土茯苓醇提物抑制效果最好，说明 了贵州产（切面红色）土茯苓总黄酮和贵州产（切面红色）土茯苓醇提物发挥抗炎作用， 可能是通过抑制机体中N0的释放，降低局部细小血管的通透性，来发挥抗炎作用的。本实 验证实了贵州产（切面红色）土茯苓总黄酮对于大鼠佐剂性关节炎原发性炎症具有良好的 抑制作用。但其是否对那么大鼠佐剂性关节炎继发性炎症具有预防作用？接下来，将进一 步探讨贵州产（切面红色）土茯苓总黄酮对于大鼠佐剂性关节炎继发性炎症的预防作用效 果。结果见表7~8及图8~9。
[0191] 表7对AA大鼠原发性足肿胀度的影响[0192]
[0193] 注：与模型对照组比较*P〈0. 05, **P〈0. 01 (下同）
[0194] 表8对AA大鼠原发性炎症血清NO动态含量的影响（n=10)
[0195]
[0196] 二、大鼠佐剂性关节炎预防性给药实验。
[0197] 1.研究目的
[0198] 观察贵州产（切面红色）土茯苓总黄酮部位对大鼠佐剂性关节炎的影响，评价供 试药对RA的预防作用及其机制。
[0199] 2.实验动物
[0200] 雄性 SD 大鼠，160 ~180g。
[0201] 3.实验分组及给药
[0202] 分为空白对照组、模型对照组、药材醇提物组、3个有效部位剂量组、醋酸泼尼松 组，每组8只大鼠。药材醇提物用0. 5 % CMC-Na配制0. 7g/ml (生药计终浓度），3个有效部 位剂量组供试药用0. 5% CMC-Na配制成相应浓度，将醋酸泼尼松，加入0. 5% CMC-Na溶液， 配制成相当于0. 7mg/ml。均以lml/100g进行给药，模型对照组给予等量0. 5% CMC-Na。均 为灌胃给药。实验当天开始进行给药，共给药18天。
[0203] 4.实验原理
[0204] 弗氏完全佐剂（FCA)诱导的大鼠佐剂性关节炎是一种免疫性关节炎症病变，与人 的类风湿性关节炎相似。经历急性局部炎症（造模后1~4天）和急性炎症缓解，多发性关 节炎和全身炎症（10~28天）。造模采用大鼠尾根部内注射法：于大鼠尾根部内注射FCA 致炎。原发病变主要表现为致炎局部的炎症反应，继发病变（对侧足）一般在致炎后8~ 18天左右出现，16~28天左右达到高峰。
[0205] 5?实验方法
[0206] (1)模型建立
[0207] 第一次免疫刺激：取卡介苗冻干粉，80°C灭活lh后，与液体石蜡于研钵内研 磨混勾，制备成含卡介苗浓度3mg/ml的混悬液，即弗氏完全佐剂（complete freund' s adjuvant，CFA)，备用。将大鼠使用乙醚麻醉后，以75%酒精常规消毒，然后在右足足趾皮 下注射CFA (0. lml/只），达到刺激机体免疫的目的。
[0208] 正式造模：第一次免疫刺激7天后，取卡介苗冻干粉，80°C灭活lh后，与液体石蜡 于研钵内研磨混勾，制备成含卡介苗浓度15mg/ml的混悬液，即弗氏完全佐剂（complete freund's adjuvant，CFA)，备用。将大鼠使用乙醚麻醉后，剔掉尾根部的毛发，以75% 酒精消毒，然后在尾根部经皮内注射CFA(0. lml/只），以诱导大鼠佐剂性关节炎模型 (adjuvant-induced arthritis，AA)〇
[0209] (2)指标测定
[0210] 1)每日测定体重及观察全身性炎症的情况，并于造模后第7、9、11、13、15、17天分 别测量大鼠后足足跖厚度并进行关节炎指数评分（arthritis index，AI)。
[0211] 注：关节指数按5级评分法评价，根据4只肢体的病变程度累计积分，计算出AI。 0分：无红肿；1分：足小趾关节红肿；2分：趾关节和足跖均肿胀；3分：踝关节以下的足爪 均肿胀；4分：包括踝关节在内的全部足爪红肿。把各个关节的积分累计起来，即为每只大 鼠的AI。
[0212] 足肿胀度=(致炎后右足跖体积-造模前右足跖体积+致炎后左足跖体积-造模 前左足跖体积）/2
[0213] 2)第18天称重并给药lh后于大鼠股动脉取血，脱颈处死动物，摘取称定脾脏、 胸腺、肾上腺称重，摘除一侧滑膜用于实时荧光PCR实验（滑膜及脾脏用于测定IL-6、 TNF- a mRNA的表达情况）。滑膜及脾脏，需立即放入干冰盒中保存，并于实验结束后，将血 清、脾脏、滑膜样本均置于-80°C冰箱中保存。注：脏器指数=脏器重量（mg)/体重（g)
[0214] 最后数据采用SPSS20. 0统计分析软件分析处理，所有数据均以政j表示，两组间 的比较采用独立样本T检验，P〈0. 05认为差异有统计学意义。
[0215] 6.实验小结
[0216] 实验结果表明，AA大鼠模型对照组继发性足肿胀非常明显，贵州产（切面红色）土 茯苓总黄酮能明显抑制AA太鼠继发性足跖肿胀程度的发展并下调关节炎指数，并能维持 大鼠体质量正常增长，对大鼠AA有明显预防作用，同时不同于糖皮质激素，不影响动物的 体内物质代谢，而能显著改善AA大鼠的状态。同时，该有效部位还能下调胸腺、脾脏及肾上 腺指数，并且能够抑制关节滑膜TNF- a及脾脏中IL-6的表达。结果见表9~17及图10~ 20〇
[0217] 实验结果表明，贵州产（切面红色）土茯苓总黄酮的低剂量（0. lg/kg)和中剂量 (0.2g/kg)对于大鼠佐剂性关节炎的发生具有较为明显的预防作用。下一步将通过大鼠佐 剂性关节炎预防性给药重复实验，验证贵州产（切面红色）土茯苓总黄酮的低剂量（〇.lg/ kg)的预防作用是否可靠。
[0218] 表9对AA大鼠体质量的影响（1 i s，_n=8)
[0219]
[0220]
[0221J
[0222] 注：与模型对照组相比较#P〈0. 01，*P〈0. 05 (下同）
[0223] 表10对AA大鼠足肿胀度的影响Gb，1^8):
[0224]
[0225] 表11对AA大鼠AI的影响（.v，n=8)
[0226]
[0227]
[0228] 表12对AA大鼠肾上腺、胸腺及脾脏指数的影响11=8)
[0229]
[0230]
[0231]
[0232] 表13对AA大鼠滑膜TNF-及脾脏IL_6mRNA表达量的影响（n = 5)
[0233]
[0234]
[0235] 三、大鼠佐剂性关节炎预防性给药重复实验。
[0236] 1.研究目的
[0237] 观察贵州产（切面红色）土茯苓总黄酮部位对大鼠佐剂性关节炎预防作用的影 响，考察该部位对RA的预防作用及剂量是否具有重复性。
[0238] 2.实验动物
[0239] 同前
[0240] 3.实验分组及给药
[0241] 分为空白对照组、模型对照组、有效部位剂量（0. lg/kg)组、醋酸泼尼松组，每组 10只大鼠。药材醇提物用0. 5 % CMC-Na配制0. 7g/ml (生药计终浓度），有效部位剂量组供 试药用0. 5% CMC-Na配制成0. 01g/ml浓度，将醋酸泼尼松，加入0. 5% CMC-Na溶液，配制 成相当于0. 7mg/ml。均以lml/100g进行给药，模型对照组给予等量0. 5% CMC-Na。均为灌 胃给药。实验当天开始进行给药，共给药18天。
[0242] 4.实验原理
[0243] 同前
[0244] 5?实验方法
[0245] (1)模型建立
[0246] 同前
[0247] (2)指标测定
[0248] 1)每日测定体重及观察全身性炎症的情况，并于造模后第7、10、13、16、19天分别 测量大鼠后足足跖厚度并进行关节炎指数评分。足肿胀度计算及评分方法同前。
[0249] 2)第19天称重并给药lh后于大鼠股动脉取血，脱颈处死动物，摘取称定脾脏、胸 腺、肾上腺称重。脏器指数=脏器重量（mg)/体重（g)。
[0250] 最后数据采用SPSS20. 0统计分析软件分析处理，所有数据均以姓j表示，两组间 的比较采用独立样本T检验，P〈0. 05认为差异有统计学意义。
[0251] 6.实验小结
[0252] 实验结果表明贵州产（切面红色）土茯苓总黄酮对AA大鼠佐剂性关节炎的发生 具有显著的抑制作用，经预防给药后，大鼠的关节肿胀程度降低，脏器指数下调，关节炎指 数提示贵州产（切面红色）土茯苓总黄酮抑AA大鼠关节炎症及进程，实验结果的趋势与上 一次实验接近。同时也验证了上一次实验做得到预防性给药贵州产（切面红色）土茯苓总 黄酮剂量（〇. lg/kg)具有重复性。下一步实验将考察该有效部位AA大鼠佐剂性关节炎是 否具有治疗作用。对于结果见表14~17及图15~20。
[0253] 表14贵州产（切面红色）土茯苓对AA大鼠体质量的影响（s )
[0254]
[0255] 注：与模型对照组比较*P〈0. 05, #P〈0. 01 (下同）
[0256] 表15贵州产（切面红色）土茯苓对AA大鼠足肿胀度的影响
[0257]
[0258]
[0263]
[0264] 四、大鼠佐剂性关节炎治疗性给药实验。
[0265] 1.研究目的
[0266] 观察贵州产（切面红色）土茯苓总黄酮部位对大鼠佐剂性关节炎的的影响，初步 评价该部位对RA的治疗作用及其部分作用机制。
[0267] 2.实验动物
[0268]雄性 SD 大鼠，160 ~180g。
[0269] 3.实验分组及给药
[0270] 分为空白对照组、将模型成功大鼠分为模型对照组、药材醇提物组、3个有效部位 剂量组、来氟米特组，雷公藤多苷组，每组10~12只大鼠。药材醇提物用0. 5% CMC-Na配 制0. 7g/ml (生药计终浓度），3个有效部位剂量组供试药用0. 5 % CMC-Na配制成相应浓度， 将雷公藤多苷，加入0. 5% CMC-Na溶液，配制成相当于lmg/ml。均以lml/100g进行给药， 均为灌胃给药。于造模后第7天开始进行给药，来氟米特组（前3天剂量为5. 8mg/kg，其后 以2. 3mg/kg剂量维持给药），空白对照组及模型对照组给予等体积0. 5% CMC-Na溶液，共 计给药21天。
[0271] 4.实验原理
[0272] 同前
[0273] 5.实验方法
[0274] (1)模型建立
[0275] 同前<