0. 1%新洁尔灭去脂30 分钟，再用PBS液洗涤3次； (2) 分离表皮和真皮 将步骤⑴得到的断层皮片用0. 15% (质量体积比g/100ml)的胰蛋白酶的PBS液，在 4°C下，浸泡30h，40%乙醇洗涤10小时，3%双氧水洗涤15分钟，然后用PBS洗涤3次，然后 再用纯化水洗涤24次，隔1小时换液； (3) 脱细胞处理 将骤⑵处理后的材料用0. 1% (质量体积比g/l〇〇ml)SDS水溶液洗涤6小时，2%乙醇 洗涤6小时，继续用纯化水洗涤12次，每隔1小时换液，最后PBS液洗涤24次，每隔两小时 换液； (4) 交联 将步骤（3)处理后的材料用0. 03mol/L交联液交联，按每片脱细胞猪皮干重(经实验证 明，0. 6mm厚5*7cm大小的皮片干重约为0. 47g)对应215ml交联液反应，于25 °C条件下交联 4小时，80转/分；反应结束后，用0. lmol/L磷酸氢二钠震荡洗涤，120转/分，洗涤4次， 每隔30分钟换液，然后纯化水洗涤4次，120转/分，每隔30分钟换液； 所述的交联液的配制方法如下：以浓度为〇. 〇5mol/L的2-(N-吗啡啉）乙磺酸（MES) 水溶液IOlml为交联液溶剂，先向其中加入EDC. HCLO. 4704g，然后再加入N-羟基琥珀酰亚 胺（NHS) 0. 242g，所述EDC. HCL和N-羟基琥珀酰亚胺（NHS)的质量比为2 :1。
[0031] (5)病毒灭活 将步骤（4)处理后的材料在4°C条件下，用0. 5mol/L氢氧化钠溶液浸泡60分钟，纯化 水洗涤至中性； (6) 精制 将步骤（5)处理后的材料先用20%的乙醇洗涤12次，每次间隔一小时，然后用纯化水 充分洗涤； (7) Co-60辐照灭菌 用双层铝箱袋包装将步骤（6)处理后的材料密封在生理盐水中，经Co-60所产生的 射线辐照消毒灭菌，即得成品。
[0032] 实施例3 (1) 制备断层皮片 取0? 6mm厚的动物断层皮片，裁成5*7cm，PBS液洗涤3次，0? 1%新洁尔灭去脂30分钟， 再用PBS液洗涤3次； (2) 分离表皮和真皮 将步骤（1)得到的断层皮片用0. 25% (质量体积比g/100ml)的胰蛋白酶的PBS液，在 l〇°C下，浸泡24h，75%乙醇洗涤6小时，3%双氧水洗涤15分钟，然后用PBS洗涤3次，然后 再用纯化水洗涤24次，隔1小时换液； (3) 脱细胞处理 将步骤⑵处理后的材料用0. 5% (质量体积比g/lOOml) SDS水溶液洗涤3小时，10% 乙醇洗涤2小时，继续用纯化水洗涤12次，每隔1小时换液，最后PBS液洗涤24次，每隔两 小时换液； (4)交联 将步骤（3)处理后的材料用0. lmol/L交联液交联，按每片脱细胞猪皮干重(经实验证 明，0. 6mm厚5*7cm大小的皮片干重约为0. 47g)对应215ml交联液反应，于25 °C条件下交联 4小时，80转/分；反应结束后，用0. lmol/L磷酸氢二钠震荡洗涤，120转/分，洗涤4次， 每隔30分钟换液，然后纯化水洗涤4次，120转/分，每隔30分钟换液； 所述的交联液的配制方法如下：以浓度为〇. 〇5mol/L的2-(N-吗啡啉）乙磺酸（MES) 水溶液IOlml为交联液溶剂，先向其中加入EDC. HCLL 936g，然后再加入N-羟基琥珀酰亚胺 (NHS) 0. 242g，所述EDC. HCL和N-羟基琥珀酰亚胺（NHS)的质量比为8 :1。
[0033] (5)病毒灭活 将步骤（4)处理后的材料在4°C条件下，用lmol/L氢氧化钠浸泡30分钟，纯化水洗涤 至中性； (6) 精制 将步骤（5)处理后的材料先用50%的乙醇洗涤12次，每次间隔一小时，然后用纯化水 充分洗涤； (7) Co-60辐照灭菌 用双层铝箱袋包装将步骤（6)处理后的材料密封在生理盐水中，经Co-60所产生的 射线辐照消毒灭菌，即得成品。
[0034] 对比例1 (1) 制备断层皮片 取0. 6mm厚的动物断层皮片，裁成5*7cm大小，PBS液洗涤三次，0. 1%新洁尔灭去脂30 分钟，再用PBS液洗涤3次； (2) 分离表皮和真皮 将步骤（1)得到的断层皮片用0. 2%(质量体积比g/100ml)的胰蛋白酶的PBS液在20°C 下，浸泡16h，然后用PBS洗涤3次，然后再用纯化水洗涤24次，隔1小时换液； (3) 脱细胞处理 将骤（2)处理后的材料用0. 3% (质量体积比g/100ml)SDS水溶液洗涤4小时，用纯化 水洗涤12次，每隔1小时换液，最后PBS液洗涤24次，每隔两小时换液； (4) 交联 将步骤（3)处理后的材料用0.05mol/L的交联液交联，按每片脱细胞猪皮干重对应 215ml交联液反应，于25°C条件下交联4小时，80转/分；反应结束后，用0. lmol/L磷酸氢 二钠震荡洗涤，120转/分，洗涤4次，每隔30分钟换液，然后纯化水洗涤4次，120转/分， 每隔30分钟换液； (5) 病毒灭活 将步骤（4)处理后的材料在4°C条件下，lmol/L氢氧化钠浸泡60分钟，纯化水洗涤至 中性； (6) Co-60辐照灭菌 用双层铝箱袋包装将步骤（5)处理后的材料密封在生理盐水中，经Co-60所产生的:r 射线辐照消毒灭菌，即得成品。
[0035] 对比例2 (1) 制备断层皮片 取0. 6mm厚的动物断层皮片，裁成5*7cm大小，PBS液洗涤三次，0. 1%新洁尔灭去脂30 分钟，再用PBS液洗涤3次； (2) 分离表皮和真皮 将步骤（1)得到的断层皮片用0. 2%(质量体积比g/100ml)的胰蛋白酶的PBS液在20°C 下，浸泡16h，70%乙醇洗涤8小时，3%双氧水洗涤15分钟，然后用PBS洗涤，3次，然后再用 纯化水洗涤24次，隔1小时换液； (3) 脱细胞处理 将骤⑵处理后的材料用0. 3% (质量体积比g/100ml)SDS水溶液洗涤4小时，4%乙醇 洗涤4小时，继续用纯化水洗涤12次，每隔1小时换液，最后PBS液洗涤24次，每隔两小时 换液； (4) 交联 将步骤⑶处理后的材料，按4ml/cm2比例用0. 25%戊二醛一PBS溶液交联，于25°C条 件下静止交联24小时，然后纯化水洗涤7天，120转/分，每隔30分钟换液； (5) 病毒灭活 将步骤（4)处理后的材料在4°C条件下，lmol/L氢氧化钠浸泡30分钟，纯化水洗涤至 中性； (6) 精制 将步骤（5)处理后的材料先用40%的乙醇洗涤12次，每次间隔一小时，然后用纯化水 充分洗涤； (7) Co-60辐照灭菌 用双层铝箱袋包装将步骤（6)处理后的材料密封在生理盐水中，经Co-60所产生的 射线辐照消毒灭菌，即得成品。
[0036] 对比例3 (1) 制备断层皮片 取0. 6mm厚的动物断层皮片，裁成5*7cm大小，PBS液洗涤三次，0. 1%新洁尔灭去脂30 分钟，再用PBS液洗涤3次； (2) 分离表皮和真皮 将步骤（1)得到的断层皮片用0. 2%(质量体积比g/100ml)的胰蛋白酶的PBS液在20°C 下，浸泡16h，然后用PBS洗涤，3次，然后再用纯化水洗涤24次，隔1小时换液； (3) 脱细胞处理 将骤（2)处理后的材料用0. 3%(质量体积比g/100ml)SDS水溶液洗涤4小时，最后PBS 液洗涤24次，每隔两小时换液； (4) 交联 将步骤（3)处理后的材料用0. 05mol/L交联液交联，按每片脱细胞猪皮干重(经实验证 明，0. 6mm厚5*7cm大小的皮片干重约为0. 47g)对应21