复方组合物抑制雄激素受体的转录活性和前列腺癌 细胞生长。
[0032] 本发明应用中，所提供的中药复方组合物抑制病人肿瘤组织源性原代分离的前列 腺癌细胞增殖。
[0033] 本发明应用中，所提供的中药复方组合物抑制前列腺癌细胞的克隆形成。
[0034] 本发明应用中，所提供的中药复方组合物诱导雄激素受体表达阳性的细胞株LNCaP及22RV1的凋亡。
[0035] 本发明应用中，所提供的中药复方组合物在小鼠体内模型中抑制去势抵抗性前列 腺癌细胞的生长和转移。
[0036] 本发明应用中，所提供的中药复方组合物抑制比卡鲁胺或MDV3100治疗无效的雄 激素受体突变细胞株22RV1细胞增殖。
[0037] 本发明应用中，所提供的中药复方组合物体外抑制前列腺癌细胞株PC-3和LNCaP 细胞的迀移及22RV1细胞的体内转移。
[0038] 本发明应用中，所提供的中药复方组合物抑制前列腺癌细胞株LNCaP、22RV1、PC-3 及病人肿瘤组织源性原代分离的前列腺癌细胞株的生长。
[0039] 本发明应用中，提供中药复方组合物对雄激素受体产生抑制作用的应用及方法。 所提供的中药复方组合物通过阻断雄激素受体的蛋白表达水平从而显著下调雄激素受体 的转录活性并抑制其下游基因表达。
[0040] 本发明应用中，所提供的中药复方组合物在体外抑制雄激素受体调控的荧光素酶 报告基因的活性，能够在体外和体内强烈抑制前列腺癌细胞的增殖和迀移，并且能够有效 阻断雄激素受体信号通路。
[0041] 本发明应用中，所提供的中药复方组合物不仅能高效抑制雄激素依赖性前列腺癌 细胞株LNCaP的增殖，而且能够抑制雄激素受体突变的前列腺癌细胞株22RV1 (该细胞株表 达持续激活的突变雄激素受体，且对临床药物雄激素受体拮抗剂，例如比卡鲁胺和MDV3100 等具有抗性）的增殖。此外，本发明从体外和体内证明了所提供的中药复方组合物抑制前 列腺癌的转移。进一步实验证明表达雄激素受体的前列腺癌细胞株对本发明所提供的中药 复方组合物具有较好的敏感性。该中药复方组合物抑制雄激素受体的蛋白表达水平进而抑 制了雄激素受体的转录活性和前列腺癌细胞的生长。本发明所提供的中药复方组合物不仅 可以治疗早期雄激素依赖性前列腺癌，也可以治疗晚期去势抵抗性前列腺癌。
[0042] 本发明提供的具有抗前列腺癌作用的中药复方组合物的应用，可以将中药复方组 合物的提取物和药学上可接受的载体制成可注射流体、气雾剂、乳膏、凝胶剂、丸剂、糖浆 剂、透皮贴剂、胶囊剂、微囊、片剂、颗粒剂或口服液剂型的药物。
[0043] 本发明提供的具有抗前列腺癌作用的中药复方组合物制成片剂时把具有抗前列 腺癌作用的中药复方组合物和载体乳糖或玉米淀粉，需要时加入润滑剂硬脂酸镁，混合均 匀，然后压制成片剂。本发明提供的具有抗前列腺癌作用的中药复方组合物制成胶囊剂时 把具有抗前列腺癌作用的中药复方组合物和载体乳糖或玉米淀粉混合均匀，整粒，然后装 胶囊制成胶囊剂。本发明提供的具有抗前列腺癌作用的复方制成颗粒剂时，把具有抗前列 腺癌作用的中药复方组合物和稀释剂乳糖或玉米淀粉混合均匀，整粒，干燥，制成颗粒剂。
[0044] 本发明还公开了所提供的具有抗前列腺癌作用的中药复方组合物或其药学上可 接受的药物制剂在制备治疗与雄激素受体突变和异常扩增相关的恶性肿瘤疾病的药物中 的应用。
[0045] 为了实现以上目的，本发明提供的具有抗前列腺癌作用的中药复方组合物，它是 由下列重量份数的原料制成：臭椿皮4~12份，白花蛇舌草12~30份，莪术3~15份，丹 参15~30份，夏枯草5~15份，甘草4~12份。
[0046] 作为优选方案，以上所述的一种具有抗前列腺癌作用的中药复方组合物，它是由 下列重量份数的原料制成：臭椿皮6~9份，白花蛇舌草15~24份，莪术4~12份，丹参 18~21份，夏枯草6~10份，甘草6~9份。
[0047] 本发明在中医理论的指导下，辩证施治，结合前列腺癌的发病机理和发病症状，以 中医治疗前列腺癌的益气养血、健肾排毒、散瘀止痛、活血止血、调节内分泌、利尿通淋、消 瘀散结的扶正抗癌整体治疗理念为治则进行配伍组方。基于以上治则，经过大量文献检索 和实验验证，筛选出本发明所述的一种具有抗前列腺癌作用的中药复方组合物，精选臭椿 皮，白花蛇舌草，莪术，丹参，夏枯草，甘草6味中药进行组方：方中臭椿皮，味苦、涩、性寒， 具清热燥湿、收涩止血之功，含有抗肿瘤成分。白花蛇舌草，味苦、甘，性寒，清热解毒，利湿 通淋，具有较强的清热解毒作用，常用于热毒等证，其含有的齐墩果酸、三萜酸、香豆素类及 多糖类等有效成分和有效部位均具有抗肿瘤作用，其中三萜类抗肿瘤效果最强。与臭椿皮 合用相得益彰，效高力宏，二者共为方中君药。莪术，味苦性温，活血化瘀、消肿止痛之功卓 著，行气活血，止痛祛瘀，有效成分莪术油是公认的抗癌良药。丹参，味苦，性微寒，活血化 瘀，养血安神，凉血消痈，主要含有脂溶性的二萜类成分和水溶性的酚酸成分。二萜类成分 丹参酮IIA是目前丹参中报道最多的抗肿瘤活性成分。莪术与丹参两者均具有散瘀止痛、 活血养血的功效，共为臣药。夏枯草，味苦、辛，性寒，为常用清热药，具有清肝明目、散结解 毒的功效；其在此方中软坚散结之功明显，奏辅佐君药进一步软化肿瘤部位并排除痈毒之 效，为佐药。甘草，味甘，性平，补脾益气、清热解毒、调和诸药，在该方中主要起到促进机体 免疫功能调整，恢复正气的作用，为使药。6味药按君臣佐使组方原则严格配伍，共奏益气养 血、健肾排毒、散瘀止痛、活血止血、调节内分泌、利尿通淋、消瘀散结之功效。
[0048] 本发明中药复方组合物制备方法：取上述重量份数的中药复方组合物每剂方药六 味中药材生药干品若干克，加入中药复方组合物药材量的10~15倍体积蒸馏水浸泡1~ 3小时；于中药自动煎药器煎煮，煎煮次数为1至3次，每次煎煮0. 5~1小时；制备得到的 中药粗提物于中药自动煎药器上开盖蒸发浓缩至终体积为初提物体积的5~10% ;将所得 到的中药浓缩液通过〇. 22微米微孔滤膜过滤除菌后得到中药水煎剂母液，于4摄氏度冰箱 保存备用。
[0049] 本发明提供的具有抗前列腺癌作用的中药复方组合物与现有技术相比具有以下 优势：
[0050] (1)本发明提供的具有抗前列腺癌作用的中药复方组合物，根据中医药理论和前 列腺癌发病机制选取原料配伍制成，各组分配比严谨，邪正兼顾，君臣佐使，升降沉浮，共奏 清热解毒、行气活血、利尿通淋、软坚散结、消淤止痛、益气养血之功，是可治疗湿热蕴积、瘀 血内结型前列腺癌的良方，不仅能明显抑制荷瘤小鼠的前列腺癌生长和转移，提高生存质 量和免疫机能，延长生存期，改善生化指标，缩小病灶范围，与化疗药物环磷酰胺联合用药 具有增效减毒的作用，且无不良反应，显示了很好的抗癌扶正的功效。
[0051] (2)本发明提供的具有抗前列腺癌作用的中药复方组合物，通过下调雄激素受体 的蛋白水平，抑制其下游基因的表达，阻断雄激素受体信号通路，从而实现抑制前列腺癌的 目的，药物疗效确切，作用机制清楚，在前列腺癌治疗方面取得新突破，可在一定程度上填 补我国目前前列腺癌治疗用药基本依赖进口而自主知识产权药物匮乏的领域空白。
[0052] (3)本发明提供的具有抗前列腺癌作用的中药复方组合物，制备方法成本低、环 保，可实现工业化大生产。
[0053] (4)本发明提供的具有抗前列腺癌作用的中药复方组合物，可以和药学上可接受 的载体制备成各种剂型，方便临床服用，有望开发成新的抗前列腺癌药物。
[0054] 术语和定义
[0055] 去势抵抗性前列腺癌（CRPC):前列腺癌病人经去势治疗（切除睾丸或化学去势降 低雄激素）后复发，去势治疗无效的前列腺癌称为去势抵抗性前列腺癌，这种前列腺癌是 威胁前列腺癌患者的最大杀手。
[0056] 前列腺癌细胞PC-3 :从人前列腺癌骨转移肿瘤中分离出来的分化程度低、雄激素 非依赖性的前列腺癌细胞，不表达内源性的雄激素受体，具有中等程度的转移潜能，表现出 显著的上皮细胞癌特征，被广泛用于雄激素抵抗性的前列腺癌的研究。
[0057] 前列腺癌细胞LNCaP:由Horoszewicz等在1980年从前列腺癌患者的淋巴结转移 灶标本中建立起来的，保留了前列腺癌肿瘤细胞学及其早期分化功能的特征，具有显著的 上皮细胞特性，表达雄激素受体，是典型的具有雄激素依赖性的前列腺癌细胞。
[0058] 前列腺癌细胞22RV1 :是由雄激素依赖性前列腺癌CWR22细胞异种移植到小鼠中 进行连续传代后而分离的人前列腺癌上皮细胞系。此细胞系表达前列腺特异抗原，依赖于 雄激素的刺激而生长，在裸鼠中具有很强的成瘤能力。
[0059] 细胞增殖：细胞以分裂的方式产生新的个体和后代的过程。单细胞生物，以细胞分 裂的方式产生新的个体。多细胞生物，以细胞分裂的方式产生新的细胞，用来补充体内衰老 和死亡的细胞；同时，多细胞生物可以由一个受精卵，经过细胞的分裂和分化，最终发育成 一个新的多细胞个体。通过细胞分裂，可以将复制的遗传物质，平均地分配到两个子细胞中 去。细胞增殖是生物体生长、发育、繁殖和遗传的基础，是生物体的重要生命特征。
[0060] 细胞凋亡：为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的、有序的、细胞程序化死 亡。细胞凋亡涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用，是为适应生存环境而主动争 取的一种细胞死亡过程。
[0061] 细胞迀移：也称为细胞爬行、细胞移动或细胞运动，是指细胞在接收到迀移信号或 感受到某些物质的梯度后而产生的移动。细胞迀移为细胞头部伪足的延伸、新的黏附建立、 细胞体尾部收缩在时空上的交替过程。细胞迀移是正常细胞的基本功能之一，是机体正常 生长发育的生理过程，也是活细胞普遍存在的一种运动形式。胚胎发育、血管生成、伤口愈 合、免疫反应、炎症反应、动脉粥样硬化、癌症转移等过程中都涉及细胞迀移。
[0062] 细胞侵袭：肿瘤细胞穿越基底膜游走至间质或其他组织进行远端转移的能力。基 底膜是一种特化的细胞外基质，是肿瘤细胞转移过程中必须穿越的物理屏障。基底膜的组 成成分通过和细胞表面受体整合素相互作用。肿瘤细胞通过分泌基质降解酶类破坏基底膜 的组织结构，同时调节细胞外基质受体整合素的表达，为穿过基底膜和在靶器官粘附、增殖 创造有利条件。
[0063] 肿瘤生长：肿瘤细胞因分裂增生而造成原位肿瘤体积增大并侵入周围组织间隙、 淋巴管或血管内，与邻近的正常组织紧密连接在一起而无明显界限。
[0064] 肿瘤转移：肿瘤细胞由其原发部位侵入淋巴管、血管或体腔部位，随血流、淋巴流 带到另一部位或器官继续生长形成与原发肿瘤同样类型肿瘤的过程。
[0065] 前列腺癌生长与转移：前列腺癌恶变的过程中，由于肿瘤细胞增殖及迀移、侵袭的 能力增强而引起肿瘤细胞群体动力学、肿瘤细胞的凋亡率、肿瘤血管生成、肿瘤演进和异质 性恶化的过程。前列腺癌在生长与转移的过程中变得越来越富有侵袭性，最终造成肿瘤生 长加快、产生周围组织的浸润和远端转移。
[0066] 雄激素受体（AR):雄激素受体属于核受体超家族中的类固醇受体。人类雄激素受 体是一个单拷贝基因，分子量约为110千道尔顿，一般由四个结构域组成：N端转录激活区 (N-terminaldomain，NTD)、DNA结合区（DNAbindingdomain，DBD)、较链区和配体结合区 (Ligandbindingdomain，LBD)。雄激素受体与前列腺癌的发生发展密切相关。雄激素如 双氢睾酮（Dihydrotestosterone，DH