腹腔开口解剖，暴露前列腺， 将50万个22RV1-1UC细胞用基质胶混匀后注射到小鼠前列腺背侧叶，从第0天开始通过活 体成像系统检测荧光值并将小鼠随机分组及给药，给药方式与前一个动物实验相同，每隔3 天检测一次并统计荧光强度随天数增大的生长曲线图，每隔2天量取一次小鼠体重。在实 验进行到第15天时结束实验，处死小鼠，剥离小鼠脏器统计转移结节数。
[0151] 实验结果：
[0152] 结果如图6所示，在裸鼠前列腺癌皮下荷瘤生长模型中，8个组别的小鼠皮下肿瘤 大小明显有差异（图6A)。图6B显示通过肿瘤体积随着实验天数增长的测定表明，模型组 与对照组肿瘤体积最大，且这两组之间没有显著差异，说明造模成功。中药复方（不含臭椿 皮）组的肿瘤终体积相对于对照组来说有轻微的减少，说明有一定的效果，但是效果不太 明显；中药复方低剂量组的效果较不含臭椿皮的实验组效果好，但仍然不太显著；中药复 方高剂量组效果较显著，说明本发明的中药复方能有效抑制前列腺癌肿瘤的生长；复方苦 参注射液组作为一个已经成药的中药复方阳性对照，在本实验中也显示出了很好的抑制肿 瘤的效果，但从实验结果来看，抑制效果不及本发明的中药复方的抑制效果强；CTX组作为 传统化疗药物的阳性对照，对肿瘤有明显的抑制效果；CTX+中药复方高剂量组对肿瘤抑制 的效果最明显，是所有实验组中肿瘤体积最小的组，说明本发明的中药复方组合物能增强 传统化疗药物的抑瘤效果。对剥离肿瘤的重量统计也说明了类似的实验结果（图6C)。
[0153] 此外，如图7所示，在裸鼠前列腺癌原位荷瘤生长转移模型中，图7A为用药14天 后对小鼠前列腺原位肿瘤的治疗效果图（n多5)，通过动物活体成像系统拍照图片，图中彩 色区域代表荧光信号，表明该区域有肿瘤细胞聚集，荧光强度越深表明肿瘤越大。实验结果 与前一个动物实验的结果类似，中药复方高剂量组效果较显著，说明本发明的中药复方组 合物能有效抑制前列腺癌肿瘤的生长（图7C)和转移（图7B)，且这种抑制效果较阳性中药 复方一一复方苦参注射液要强，与传统化疗药物CTX的抑制效果相当；以上各组的中药复 方组合物处理对小鼠体重均没有明显影响（图7D)，初步说明本发明的中药复方组合物在 有效剂量下对机体的毒副作用较小；CTX处理下小鼠体重有所下降。结合小鼠体重的实验 结果来看，CTX作为一个化疗药物对机体存在一定的毒性，造成了小鼠体重的轻微下降，且 与CTX组的小鼠体重相比，本发明的中药复方组合物与CTX联合用药时，对肿瘤生长与转移 的抑制效果是所有组别中最显著的，且小鼠体重得以恢复（图7D)，说明本发明的中药复方 组合物不仅能增强传统化疗药物的抑瘤效果，还能改善因传统化疗药物的毒性而造成的对 机体的损伤，从而证明本发明的中药复方组合物具有对传统化疗药物增效减毒的效果。
[0154] 实施例7 :本发明中药复方组合物对荷瘤裸鼠肿瘤抑制的增效减毒作用及免疫功 能指标的影响
[0155] 技术方法：
[0156] 1.本发明中药复方组合物对裸鼠脾脏指数的影响
[0157] 在观察到模型组、对照组与给药组的裸鼠生存质量及生活状态的不同后，尤其是 化疗药物CTX组荷瘤小鼠出现不同程度皮肤粗糙，精神萎靡，懒散怠动，反应迟钝体重减轻 等状态，而本发明的中药复方联合用药组小鼠则皮肤顺滑，精神良好，活动灵敏，体重正常， 原位肿瘤块较小，因此推测本发明的中药复方组合物对化疗药物的增效减毒效果有可能是 通过改善小鼠免疫功能、提高各项免疫指标而实现的。因此，将实施例6中原位肿瘤生长转 移模型的裸鼠在实验结束处死后，称量脾脏重量及体重，计算脾脏指数。
[0158]
[0159] 2.本发明中药复方组合物对裸鼠血清白细胞数目的影响
[0160] 将实施例6中原位肿瘤生长转移模型的裸鼠在实验结束处死后，眼眶取血，用枪 吸管准确吸血20微升，枪头外壁无血，迅速将血轻轻放入盛有380微升白细胞稀释液中，摇 匀。按红细胞计数的方法，将白细胞混悬液滴入计数池内，静置2至3分钟，待白细胞下沉 后计数。在低倍镜下，白细胞呈圆形，浆透亮，核呈紫黑色，稍有折光，借此特点可与杂质相 区别。白细胞数目=5个大格的总数X500,计数后统计各组间差异。
[0161] 3.本发明中药复方组合物对刀豆素A(ConcanamycinA，ConA)诱导的T细胞增生 反应的影响
[0162] 将实施例6中原位肿瘤生长转移模型的裸鼠在实验结束处死后，取脾脏称重后放 入预先准备的装有预冷PBS的试管中，将试管中的脾脏和洗液倒入平皿中，把脾脏放入细 胞滤器中用镊子挤压脾脏，得到细胞悬液。之后将细胞悬液收集到试管中，1500转/分钟， 离心6分钟，倒掉洗液，加红细胞裂解液裂解3分钟，待观察到液体颜色变浅后再加洗液 PBS，用滤膜过滤到另一个试管中，再次1500转/分钟，离心6分钟，倒掉洗液与细胞培养 液，加ConA(工作浓度5微克/毫升）刺激T淋巴细胞增生，置于37摄氏度恒温培养箱 (湿度95 %，CO2浓度5 % )培养72小时。SRB法在酶标仪上测定T细胞的吸光度值（A值） 从而检测其增殖情况。
[0163] 实验结果：
[0164] 结果如表1所示，本发明中药复方组合物对荷瘤裸鼠肿瘤抑制的增效减毒 作用及对荷瘤裸鼠免疫功能的三个代表性指标一一脾脏指数、白细胞数目及刀豆素 A(ConcanamycinA，ConA)诱导的T细胞增生反应的影响均具有显著性差异。
[0165] 表1显示小鼠免疫功能的三个典型指标的统计结果。中药复方组合物的各个给药 组与模型组对照组相比，三个指标均无显著性差异。CTX组的三个指标较模型组对照组相 比，均出现显著差异，再次验证了化疗药物CTX对机体的毒性，对免疫系统有一定的损伤， 而本发明的中药复方组合物与之联合用药后，能明显恢复其对小鼠造成的毒性作用，显著 改善荷瘤小鼠的生存质量。实验结果证明，与CTX相比，本发明的中药复方组合物毒副作用 小，不会造成免疫器官萎缩，且与CTX联用具有明显的增效减毒效果，提示本发明中药复方 组合物的抗肿瘤活性与免疫调节作用具有直接的相关性。综上所述，本发明的中药复方组 合物不仅具有抑制前列腺癌生长与转移的功能，还能增强传统化疗药物的抑瘤效果，改善 因传统化疗药物的毒性而造成的对机体的损伤，从而证明本发明的中药复方组合物具有对 传统化疗药物增效减毒的效果。
[0166] 表1本发明中药复方组合物对荷瘤裸鼠肿瘤抑制的增效减毒作用及免疫功能指 标的影响
[0167]
[0168] 注：与模型组对照组比较，*P< 0. 05,**P< 0. 01
[0169] 与CTX组比较，一P<0.01
[0170] 实施例8 :本发明中药复方组合物优选方案的验证
[0171] 为了验证本发明中药复方组合物各组分配比的优选效果，称取如表2所示不同配 比组合的六味中药材干品，按照实施例1中的方法制成中药水煎剂并与实施例1中的中药 复方组合物进行实施例2-7的平行实验，发现本实施例中不同的中药复方组合物8a-8g药 效与实施例1中的中药复方组合物一样，均能达到实施例2-7同样的技术效果，因此验证了 本发明中药复方组合物中各组分配比的优选方案。
[0172] 表2不同配比的中药复方组合物
[0173]
上述实施例仅为了说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让本领域技术人员能够 了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡是根据本
【发明内容】
的实质所作出的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明保护范围内。
【主权项】
1. 一种中药复方组合物，其特征在于，包括下列重量份数的中药材：臭椿皮4~12份， 白花蛇舌草12~30份，莪术3~15份，丹参15~30份，夏枯草5~15份，甘草4~12 份。2. 根据权利要求1所述的中药复方组合物，其特征在于，包括下列重量份数的中药材： 臭椿皮6~9份，白花蛇舌草15~24份，莪术4~12份，丹参18~21份，夏枯草6~10 份，甘草6~9份。3. 如权利要求1或2的中药复方组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： (1) 浸泡：取权利要求1或2所述六味中药材，加入蒸馏水浸泡，得到生药蒸馏水混合 物； (2) 煎煮：将步骤（1)所述的生药蒸馏水混合物进行煎煮，得到中药粗提物； (3) 浓缩：将步骤（2)制备得到的中药粗提物浓缩，得到中药浓缩液； (4) 除菌：取步骤（3)制备得到的中药浓缩液通过微孔滤膜过滤除菌，即得到所述中药 复方组合物。4. 将权利要求1所述的中药复方组合物应用于制备治疗恶性肿瘤药物的应用。5. 根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述恶性肿瘤包括前列腺癌、乳腺癌、肺 癌、结肠癌、脑癌、皮肤癌、膀胱癌、肾癌。6. 将权利要求1所述的中药复方组合物应用于制备治疗由雄激素受体异常扩增和突 变导致的恶性肿瘤细胞的增殖、生长、迀移和浸润的药物的应用。7. 如权利要求1所述的中药复方组合物应用于制备治疗前列腺癌药物的用途。8. 将权利要求1所述的中药复方组合物应用于抑制前列腺癌细胞的生长、增殖、转移、 迀移、侵袭和促进前列腺癌细胞的凋亡的用途。9. 如权利要求7所述的用途，其特征在于，所述前列腺癌为去势抵抗性前列腺癌或雄 激素依赖性前列腺癌。10. 将权利要求1所述的中药复方组合物应用于体外抑制双氢睾酮诱导的雄激素受体 的转录活性以及缺失配体结构域的雄激素受体的转录活性的用途，或用于体外抑制雄激素 受体活性。11. 将权利要求1所述的中药复方组合物应用于体外抑制雄激素受体突变的前列腺癌 细胞株22RV1的增殖、抑制雄激素依赖性前列腺癌细胞株LNCaP的增殖的用途。12. 将权利要求1所述的中药复方组合物应用于体外抑制前列腺癌细胞PC-3和LNCaP 以及22RV1的迀移的用途，或体外抑制比卡鲁胺或MDV3100治疗无效的雄激素受体突变细 胞株22RV1细胞增殖的用途。13. 将权利要求1所述的中药复方组合物应用于体内抑制前列腺癌细胞的转移，或体 内抑制去势抵抗性前列腺癌的生长和转移，或在小鼠体内抑制前列腺癌细胞22RV1的生长 或转移。14. 如权利要求4-13所述的用途，其特征在于，将所述中药复方组合物和药学上可接 受的载体制成可注射流体、气雾剂、乳膏、凝胶剂、丸剂、糖浆剂、透皮贴剂、胶囊剂、微囊、片 剂、颗粒剂或口服液剂型的药物。15. 根据权利要求4-13所述的应用，其特征在于，将所述中药复方组合物单独使用或 与其他药物联合使用。
【专利摘要】本发明公开了一种具有抗前列腺癌作用的中药复方组合物及其应用，该中药复方组合物包括下列重量份数的中药原料：臭椿皮4～12份，白花蛇舌草12～30份，莪术3～15份，丹参15～30份，夏枯草5～15份，甘草4～12份。本发明提供的具有抗前列腺癌作用的中药复方组合物，根据中医药理论和前列腺癌的发病机制选取原料配伍组方，各组份配比科学合理，药理实验和临床前实验结果表明本发明提供的中药复方组合物具有良好的抗前列腺癌的作用，不仅能显著抑制前列腺癌的增殖和生长，更能抑制前列腺癌的迁移、侵袭和转移，明显提高荷瘤小鼠的生存质量，改善荷瘤小鼠的各项免疫指标，且给药途径方便简捷，无明显不良反应，可被开发成新一代抗前列腺癌的药物，有望成为治疗前列腺癌的良方。
【IPC分类】A61P35/00, A61K36/9066
【公开号】CN105194550
【申请号】CN201510664970
【发明人】易正芳, 胡美纯, 刘明耀
【申请人】华东师范大学
【公开日】2015年12月30日
【申请日】2015年10月15日