二氢丹参酮i在制备抗肝纤维化药物中的应用
【技术领域】：
[0001] 本发明属于医药领域，设及一种丹参有效成分二氨丹参酬I在制备抗肝纤维化药 物中的应用。
【背景技术】：
[0002] 肝纤维化是继发于各种病因引起肝损伤之后的组织修复代偿反应。肝纤维化发生 时肝星状细胞化SC)异常活化增殖，导致细胞外基质成分巧CM)大量合成及分泌，ECM合成 和降解失衡，破坏肝脏的正常结构与功能。肝纤维化化巧aticfibrosis,H巧是慢性肝病 发展为肝硬化甚至是原发性肝癌的必经病理过程。因此，所有导致肝硬化损伤的因素同样 是肝纤维化的病因。临床上最常见的病因有病毒感染、乙醇过量摄人、肝内脂肪沉积、毒物 等。而在我国，乙型肝炎是导致肝纤维化的主要原因（全国约1.3亿人是皿V携带者，慢性 肝炎患者2300万）。传统观点认为，肝纤维化运一疾病是不可逆转的，但是近年来研究发 现，无论是消除病因或是应用有效的抗纤维化药物，都可能部分或完全逆转患者及模型动 物中的肝纤维化，即肝纤维化在一定程度上是可逆的。运对人类能够有效控制肝脏疾病由 肝炎、肝损伤向肝硬化、肝癌的恶性进展具有重大意义。迄今为止，虽然已经发现多种药物 具有治疗肝纤维化的作用，但由于运些药物仅针对肝纤维化的病因，且多数不良反应较为 严重，因此临床上尚未得到推广及认可，如丫-干扰素能逆转免疫素乱引起的肝纤维化，但 因其具有恶屯、呕吐、头晕头痛，骨髓抑制等副作用，使得其在临床上应用治疗肝纤维化受到 极大的限制。中药作为我国文化瑰宝在治疗肝纤维化上展示出了极大的潜力。我国临床使 用的抗肝纤维化药物主要有中药及中成药组成，如扶正化疲胶囊、复方整甲软肝片、整甲煎 丸、小柴胡汤丸等，上述药物均为中药复方制剂，目前暂无中药单方药物上市。
[0003] 丹参（Salviamiltiorrhiza)为唇形科植物丹参的干燥根和根茎，是一味 常见的中草药，《本草纲目》中记载其具有活血桂疲、通经止痛、凉血消痴之功效。临 床多用于治疗胸搏屯、痛，腕腹胁痛，屯、烦不眠，月经不调，疮瘍肿痛等症。二氨丹参酬 I0ihy化otanshinoneI)为丹参的单体组分之一，CAS号：87205-99-0,分子式。化4〇3,分 子量278. 3,分子结构式为：
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[0005] 二氨丹参酬I的药理作用尚未明确阐述，仅有少量文献报道其具有降血脂和放射 增敏作用。近年来，本实验室通过对二氨丹参酬I研究发现：作为单药组分，其在体外实验 具有良好抗肝纤维化的活性，继而进行了后续的体内研究工作。本实验研究所述二氨丹参 酬I的抗肝纤维化作用，迄今尚未见有国内外的相关报道。
【发明内容】
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[0006] 本发明提供了二氨丹参酬I在制备抗肝纤维化药物中的应用。
[0007] 本发明还提供了二氨丹参酬I为有效成分与药学上可接受的载体组成的组合物 在制备抗肝纤维化药物中的应用。
[0008] 本发明利用人肝星状细胞LX-2作为体外研究对象，Wreal-timePCR、Western Blot为研究方法，验证了二氨丹参酬I对TGFP1诱导LX-2细胞中肝纤维化主要标志物的 mRNA和蛋白水平均具有显著抑制作用。为进一步确定二氨丹参酬I的抗肝纤维化作用，本 发明利用胆总管结扎的SD大鼠模型，并对大鼠肝功能、肝组织病理改变、肝组织纤维化程 度、胶原纤维含量及肝纤维化相关标志物进行检测，结果显示，二氨丹参酬I能够有效缓解 肝纤维化，改善肝脏功能。
[0009] 本发明用于抗肝纤维化治疗时，二氨丹参酬I腹腔注射给药安全有效，可为日后 制备注射剂提供依据。
[0010] 本发明临床用药可W制成二氨丹参酬I口服剂型和非口服剂型；口服剂型包括片 剂、胶囊、散剂、颗粒等，非口服剂型可W是注射液针剂等。
[0011] 本发明所述二氨丹参酬I给药剂量可根据患者具体病情、年龄及肝肾功能等因素 进行调整。
[0012] 本发明用于制备抗肝纤维化药物时，其辅料及制备方法可选用药学上可接受的任 何形式。
【附图说明】： 阳01引 图1-Real-timePCR检测二氨丹参酬I对TGFP1诱导LX-2细胞中肝纤维化主要 标志物mRNA水平的影响
[0014] 其中：**p<0. 01与TGFP1诱导组（给药浓度为零）相比。
[0015] 图2-WesternBlot检测二氨丹参酬I对TGFP1诱导LX-2细胞中肝纤维化主要 标志物蛋白水平的影响。
[0016] 图3-二氨丹参酬I对大鼠肝脏组织病理结构的影响
[0017] 其中：A为假手术组大鼠肝脏组织肥染色切片结果；B为模型组大鼠肝脏组织肥 染色切片结果；C为给药二氨丹参酬I组大鼠肝脏组织肥染色切片结果；D为对所有动物 肝脏组织胆管增生情况的统计图；E为对所有动物肝脏组织坏死情况的统计图；*p<0. 05与 B化组相比沾邮<0. 01与假手术组相比。图4-二氨丹参酬I对大鼠肝纤维化程度的影响
[0018] 其中：A为假手术组大鼠肝脏组织天狼星红染色切片结果巧为模型组大鼠肝脏组 织天狼星红染色切片结果；C为给药二氨丹参酬I组大鼠肝脏组织天狼星红染色切片结果； D为对所有动物组织天狼星红染色阳性面积的统计图；卸<0. 05与抓L组相比；#邮<0. 01与 假手术组相比。
[0019] 图5-二氨丹参酬I对大鼠肝脏组织径脯氨酸含量的影响
[0020] 其中：卸<0. 05与抓L组相比沖邮<0. 01与假手术组相比。
[0021] 图6-rea^timePCR检测二氨丹参酬I对大鼠肝脏组织中肝纤维化主要标志物 mRNA水平的影响
[0022] 其中：卸<0. 05与抓L组相比沖邮<0. 01与假手术组相比。
[0023] 图7-WesternBlot检测二氨丹参酬I对大鼠肝脏组织中肝纤维化主要标志物蛋 白水平的影响
【具体实施方式】：
[0024] 下面结合附图和实施例对本发明进行详细描述，但所述内容是对本发明的解释而 不是限定。 W25]《实施例1》二氨丹参酬I在mRNA及蛋白水平上抑制TGFP1诱导LX-2细胞中肝 纤维化主要标志物试验
[0026] 1.口6。6 1诱导1^(-2细胞，在含10%胎牛血清的016]\1佑比(3〇)培养基，37°(：， 5%C02条件下培养LX2细胞。按照每孔1X1〇5个细胞铺于6孔板，培养24小时后，使用 真空累去除6孔板内原有的培养基并加入不含10%胎牛血清的DMEM(Gibco)培养基。饥 饿培养24h后，加入TGF-Pl(2ng/ml)诱导，同时加入浓度梯度的二氨丹参酬I(CAS号： 87205-99-0)，浓度分别为1ymmol/l、5ymmol/l、10ymmol/l，并且设置对照组（不加入 TGF-M诱导）和TGF-M诱导组（仅加入TGF-M诱导）。 W27] 1. 2继续培养24小时后，弃去培养基，按照AZ化esh?总RNA小量/微量提 取试剂盒说明书操作步骤提取LX-2细胞总RNA。按照RocheTranscriptorFirst StrandcDNASynthesisKit说明书操作步骤，将LX-2总RNA逆转录为cDNA。将所 得的cDNA、无菌水、R